PI3K/Akt/mTOR信号通路与肿瘤

在近年来的肿瘤治疗中,靶向生物治疗逐渐成为研究的热点。该文就磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白[phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt)/the mammalian target of Rapamycin(mTOR),PI3K/Akt/mTOR]信号通路予以综述,重点包括PI3K/Akt/mTOR信号转导在肿瘤机制中作用以及肿瘤治疗过程中耐药性方面的关系等。     

LC/MS/MS法测定癫痫患儿血浆中拉莫三嗪的浓度

目的 建立一种快速、灵敏地测定癫痫患儿血浆中拉莫三嗪(1amotrigine,LTG)的LC/MS/MS方法.方法 采用高效液相色谱串联质谱电喷雾检测(LC/MS/MS)法,色谱柱为Welch Materials XB-C18柱,流动相甲醇-水(95:5,V/V,含5 mmol/L甲酸铵),流速0.3ml/min,柱温...     

Sm/Ag/TiO2无机纳米复合材料表征与抗菌性能研究

目的:初步研究无机纳米材料Sm/Ag/Ti O2的表征和抗菌活性。方法:通过XRD分析、TEM观察测量检测Sm/Ag/Ti O2的粒子分布情况;通过抑菌环实验和液体稀释实验,测定在摩尔比为2:2:100的Sm/Ag/Ti O2作用于金黄色葡萄球菌和白色念珠球菌的抗菌活性。结果:(1)XRD分析结果:Sm/Ag/Ti O2的平均粒径为14.62nm;Ag离子和Sm离子以一个高度分散和非晶形式分散在二氧化钛表面;(2)TEM图像表明,谢勒公式计算出粒子的大小是12nm;(3)抗菌活性结果:当摩尔比是2:2:100时,抑菌圈直径为16mm;最小抑菌浓度为200μg/m L;最小杀菌浓度为2×104μg/m L。结论:无机纳米材料Sm/Ag/Ti O2具有高比表面积、分散性和抗菌性良好的特点。     

洋甘菊总黄酮通过抑制ACC/FAS/DGAT2通路减少ApoE-/-小鼠三酰甘油合成

目的： 探究洋甘菊总黄酮通过调节ACC/FAS/DGAT2通路减少ApoE^-/-小鼠三酰甘油合成的药理作用机制。方法： 用乙醇回流提取和大孔树脂分离纯化法获得洋甘菊总黄酮;高脂饲料喂养法建立ApoE^-/-小鼠高脂模型;以C57BL/6J小鼠为空白对照组,ApoE^-/-小鼠分成模型组,非诺贝特组（30 mg·kg^-1）,洋甘菊总黄酮低、中、高剂量组（88,176,352 mg·kg^-1）;空白对照组和模型组分别用基础饲料和高脂饲料喂养,其余组小鼠高脂饲料喂养的同时灌胃给药干预8周。检测小鼠血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平;HE染色和油红O染色观察小鼠肝脏脂肪变性情况;免疫组化法检测二酰基甘油酰基转移酶2（DGAT2）蛋白表达水平;Western Blot法检测肝组织乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、DGAT2蛋白表达水平。结果： 与空白对照组相比,模型组小鼠TG、TC、LDL-C、ACC、FAS、DGAT2水平均明显升高,HDL-C水平明显降低;与模型组相比,非诺贝特组和洋甘菊总黄酮各剂量组脂肪变性情况明显减轻。与模型组相比,非诺贝特组、洋甘菊总黄酮各剂量组TG、TC、LDL-C、ACC、FAS水平均明显降低,HDL-C水平明显升高;非诺贝特组和洋甘菊总黄酮中、高剂量组DGAT2水平明显降低。结论： 洋甘菊总黄酮可以抑制ApoE^-/-小鼠三酰甘油合成,改善血脂水平,可能与其下调ACC/FAS/DGAT2通路表达有关。     

LC/MS/MS法测定癫痫患儿血浆中拉莫三嗪的浓度

目的建立一种快速、灵敏地测定癫痫患儿血浆中拉莫三嗪(lamotrigine,LTG)的LC/MS/MS方法。方法采用高效液相色谱串联质谱电喷雾检测(LC/MS/MS)法,色谱柱为Welch Materials XB-C18柱,流动相甲醇-水(95∶5,V/V,含5 mmol/L甲酸铵),流速0.3ml/min,柱温40℃,以碱化的醋酸乙酯:二氯甲烷(4∶1)为提取剂。提取的样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM)对LTG(m/z 256.0→145.0)和内标阿普唑仑(m/z 309.3→281.1)进行测定。结果 LTG血药浓度在0.05~25μg/ml范围内线性关系良好(r=0.998 9),分析方法的最低检测限为5 ng/ml,其高、中、低(12.5、1.25、0.125μg/ml)3个浓度的平均提取回收率分别为82.97%、80.68%和83.33%,日内(n=5)、日间(n=15)RSD均<15%。结论本方法简单快捷、灵敏、准确、重现性好,可用于癫痫患儿LTG的临床血药浓度监测和药动学研究。     

宫腹腔镜在宫内节育器嵌顿/断裂/异位诊治中的应用

目的 探讨宫腹腔镜应用于宫内节育器嵌顿/断裂/异位的诊断和治疗.方法 回顾分析26例宫内节育器嵌顿/断裂/异位的诊治过程.结果 16例嵌顿节育器经宫腔镜检查定位后直接取出;2例嵌顿于宫腔经宫腔镜电切后取出;5例嵌顿于浆肌层、2例断裂节育器经腹腔镜电切取出;1例异位于腹腔经腹腔镜检查取出.结论 采用宫、腹腔镜诊治宫内节...     

STING/TBK1/NF-κB信号通路调节PD-1/PD-L1对肺癌细胞免疫逃逸的影响

目的 探讨干扰素基因刺激因子(STING)/TANK结合激酶1(TBK1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路调节程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)对肺癌细胞免疫逃逸的影响。方法 分离培养小鼠脾脏淋巴细胞，以1∶1的比例与小鼠Lewis肺癌细胞共培养，随机分为对照组、diABZI(STING激活剂)组、BMS-1(PD-1/PD-L1信号抑制剂)组、diABZI+BMS-1组，以diABZI和BMS-1分组处理24 h,流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞中活化CD₈⁺T细胞比例；CCK-8实验检测脾脏淋巴细胞对Lewis细胞杀伤率；免疫印迹实验检测脾脏淋巴细胞和Lewis细胞PD-1、PD-L1和STING/TBK1/NF-κB通路蛋白表达。皮下注射Lewis细胞构建肺癌移植瘤小鼠模型48只，随机分为对照组、diABZI组、BMS-1组、diABZI+BMS-1组，每组12只，以diABZI和BMS-1分组处理后，测量小鼠肿瘤体积；检测肿瘤组织中浸润的CD₈⁺T细胞数；免...     

高效液相色谱/质谱/质谱联用仪检测氯氮平中毒1例

目的 检测一名疑似药物中毒患儿的体内毒物.方法 紧急抽取患儿的胃液和血浆,经乙腈沉淀蛋白后,采用高效液相色谱/质谱/质谱联用仪分析.结果 患儿胃液和血浆中有高浓度氯氮平.结论该患儿误服氯氮平中毒,借助高效液相色谱/质谱/质谱联用仪技术,实现了对中毒药物快速、准确的判定.     

PI3K/Akt/mTOR信号通路与结直肠恶性肿瘤

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是世界大多数地区最常见的恶性肿瘤之一。它的发展是一个多步骤过程,以改变正常细胞的分子信号为启动点,促进细胞发展,最终产生一种表型改变的恶性转化细胞。已有报道指出磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白[phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt)/the mammalian target of Rapamycin(mTOR),PI3K/Akt/mTOR]信号通路与结直肠恶性肿瘤产生有紧密的联系。也有报道证明约60%~70%的结直肠癌患者存在Akt信号的活化及PTEN的表达受损,进而说明PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制药可以作为恶性肿瘤治疗的潜在靶点。近年来,PI3K/Akt/mTOR信号通路受到越来越多的关注,在不同的实验模型中利用针对这条通路的天然及合成药物来降低恶性肿瘤负荷。将近年来PI3K/Akt/mTOR信号通路在结直肠恶性肿瘤中的研究做一综述,并就今后结直肠恶性肿瘤中该通路可能的研究方向进行展望。     

基于ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨玫瑰花甲醇提取物对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨玫瑰花甲醇提取物（RE）对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法：采用CCK8法检测不同浓度RE对PC-3细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞ROS水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Cyt-C、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达。结果：RE呈浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,24 h和48 h后的IC₅₀值分别为31.30 mg·mL^-1和16.76 mg·mL^-1;RE能显著诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,且呈现浓度依赖性;RE可显著提高PC-3细胞ROS水平（P<0.05,P<0.01）,且具有浓度依赖性;RE能显著上调PC-3细胞Bax、cleaved caspase-3、Cyt-C的蛋白表达及Bax/Bcl-2的比值（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以上均呈现浓度依赖性。结论：本研究表明RE在体外有明显抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖作用,并可能通过调控ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导其凋亡,研究结果可为玫瑰花及其组方临床治疗前列腺癌提供实验依据。     

山楂中化学成分的UPLC/ESI-TOF/MS分析

目的建立山楂中化学成分的超高液相/电喷雾–飞行时间/质谱(UPLC/ESI-TOF/MS)的分析方法。方法 Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相0.1%甲酸水溶液–乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min,柱温50℃,检测波长范围260~360 nm,进样量1μL。ESI离子源,飞行时间质谱检测器,对比对照品进行鉴别。结果共鉴定出13个化合物,分别为苹果酸(1)、枸橼酸(2)、绿原酸(3)、花青素B2(4)、表儿茶素(5)、花青素B3(6)、牡荆素葡萄糖苷(7)、芦丁(8)、金丝桃苷(9)、异槲皮苷(10)、槲皮素(11)、熊果酸(12)、熊果醇(13)。结论建立了一种简单、快速的UPLC/ESI-TOF/MS方法对山楂中化学成分进行了鉴定。     

DADS通过Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路诱导白血病HL-60细胞G_2/M期阻滞

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞周期阻滞及其分子机制。方法采用细胞计数、软琼脂克隆形成实验及流式细胞术观察DADS对HL-60细胞生长抑制与周期阻滞效应。Western blot检测DADS对HL-60细胞Chk1/2以及下游分子的影响。结果细胞计数显示,60、120μmol·L-1DADS处理后,其群体倍增时间从19.14 h增加到35.03、71.82 h(P<0.05)。软琼脂克隆形成实验表明,30、60、90、120μmol·L-1DADS对HL-60细胞克隆形成率的抑制率分别为35.06%、62.10%、93.79%、99.35%(P<0.05)。流式细胞术检测显示,60和120μmol·L-1DADS分别作用HL-60细胞24 h后,DADS可呈时间与浓度依赖性诱导HL-60细胞G2/M期阻滞(P<0.05)。60μmol·L-1DADS处理HL-60细胞后,p-Chk1可呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1与Chk2总蛋白和pChk2无改变(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB 1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但14-3-3蛋白表达没有改变(P>0.05)。结论 DADS能够抑制HL-60细胞增殖,并通过Chk1/Cdc25C/CyclinB 1/CDK1通路阻滞HL-60细胞于G2/M期。     

BMP-7/Smad1/5/8信号通路在肾缺血后处理减轻 大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用

目的：观察肾缺血后处理后BMP-7/Smad1/5/8信号通路活性改变,探讨肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤(IRI)的机制。方法：雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组),缺血再灌注组(IR组),缺血后处理组(IPostC组)。各组又分成再灌注1.5 h、3 h、6 h、12 h和24 h 共五个时间点亚组,每组6只动物。IR组采用结扎左侧肾蒂60 min后松开动脉夹制备肾脏缺血再灌注损伤模型;IPostC组操作同IR组,恢复灌注前给予6个循环10s再灌注/10s缺血处理,然后恢复灌注。测定血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)浓度;免疫印迹法测定肾组织中BMP-7、USAG-1和p-Smad1/5/8蛋白的表达变化;TUNEL法分析肾小管上皮细胞凋亡情况。结果：与sham组相比,IR组各时间点SCr和BUN含量、USAG-1表达水平以及TUNEL凋亡指数(apoptotic index,AI)明显增高,而BMP-7和p-Smad1/5/8蛋白表达水平显著下调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与IR组各对应时间点相比,IPostC组SCr和BUN含量、USAG-1表达水平以及AI明显降低,而BMP-7和p-Smad1/5/8蛋白表达水平显著上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：肾IPostC对大鼠肾缺血再灌注损伤有一定的保护作用,其机制可能与上调BMP-7的表达、下调USAG-1的表达,继而激活BMP-7/Smad1/5/8信号通路以及抑制细胞凋亡有关。     

注射用丹参多酚酸对MCAO/R大鼠Nrf2/Keap1/HO-1信号通路的影响

目的 采用大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注（MCAO/R）模型考察注射用丹参多酚酸（SAFI）对脑缺血再灌注大鼠核因子E2相关因子2（Nrf2）/Kelch样ECH相关蛋白（Keap1）/血红素氧合酶-1（HO-1）信号通路的影响。方法 线栓法构建大鼠MCAO/R模型,于术后24 h进行神经功能评分,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丁苯酞（5 mL·kg^-1）组和SAFI低、中、高剂量（5.76、11.51、23.02 mg·kg^-1）组,尾iv给药,连续14 d。考察给药后各组大鼠神经功能缺损评分;ELISA法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、脑源性神经营养因子（BDNF）水平;TTC染色法检测脑梗死体积;HE染色观察脑组织病理变化;Western blotting法检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达。结果 与模型组比较,SAFI中、高剂量组和丁苯酞组大鼠的神经功能缺损评分显著降低（P＜0.05、0.01） ;SAFI各剂量组和丁苯酞组脑梗死体积显著减少（P＜0.01、0.001）,血清BDNF、SOD水平均显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,MDA水平显著降低（P＜0.05、0.01）,脑组织病理变化明显减轻,水肿减轻; SAFI高、中剂量组及丁苯酞组Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,SAFI低剂量组Keap1、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.01、0.001）。结论 SAFI可以减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,可能是通过促进Nrf2/Keap1/HO-1信号通路,抑制氧化损伤实现的。     

BMP-7/Smad1/5/8信号通路在肾缺血后处理减轻大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用

目的:观察肾缺血后处理后BMP-7/Smad1/5/8信号通路活性改变,探讨肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤(IRI)的机制.方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组),缺血再灌注组(IR组),缺血后处理组(IPostC组).各组又分成再灌注1.5、3、6、12、24h共五个时间点亚组,每组6只大鼠.IR组采用...     

HPLC/MS/MS法测定人血浆中内源性尿嘧啶及二氢尿嘧啶

目的　为评价人体内二氢嘧啶脱氢酶的活性,建立高效液相色谱 串联质谱联用的分析方法,测定该酶的底物以及催化产物在血浆中的基础浓度。方法　血浆样品液 液萃取后,以纯水为流动相,以DiscoveryAmideC₁₆ 色谱柱初步分离,经气动辅助电喷雾离子源负离子化,在三级四极杆质量分析器上以多反应离子监测(MRM)方式检测尿嘧啶(MRM m/z 111.0→41.9)和二氢尿嘧啶(MRM m/z 113.0→42.0 )。结果　尿嘧啶和二氢尿嘧啶的最低定量浓度分别为0.5ng·mL^-1 和5ng·mL^-1 ;线性范围分别为0.5 - 100ng·mL^-1 和5 - 1000ng·mL^-1 ,精密度和准确度符合生物样品分析要求。结论　此法专属、灵敏、准确,适用于测定生物样本中内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶的基础浓度。     

七氟醚预处理对老年大鼠认知功能及海马区Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达影响

目的 探讨常用吸入麻醉药物七氟醚对老年大鼠相关认知功能影响及其对海马区Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达影响.方法 30只20月龄的老年雄性wister大鼠,随机分为3组:对照组(C组n=10),七氟醚1组(S1组n=10),和七氟醚2组(S2组n=10),老年雄性wister大鼠放置一密闭麻醉箱中,该麻醉箱放置于预设温度为35℃度的水浴箱中.麻醉箱进气口与装有七氟醚气体挥发罐的麻醉机连接,出气口接延长管置于通风厨,S1组大鼠用1.5％七氟醚麻醉2h,S2组大鼠用3.0％七氟醚麻醉2h,C组大鼠暴露于纯氧中2h.麻醉气体由纯氧通过麻醉机输送通过该麻醉箱,实验中使用麻醉气体监测仪监测麻醉箱出气口的麻醉气体浓度.在麻醉过程中每隔30 min监测大鼠肤色,并记录呼吸频率.对照组在手术后第一天处死,七氟醚组分别于处理后第2天各断头处死10只,冰盘上快速取海马,Western Blot法测定海马区BDNF、CREB及Erk1/2相关表达,并分别在处死前2小时进行水迷宫实验,并判断其记忆认知相关行为是否产生了改变.结果 试验组吸入低浓度1.5％七氟醚老年雄性wister大鼠试验后认知记忆功能不如对照组,试验组Western Blot法测定海马BDNF、CREB及Erk1/2相关表达均低于对照组,实验组组间比较浓度越高该信号通路表达活性越低.七氟醚预处理后吸入低浓度1.5％七氟醚后老年雄性wister大鼠认知功能减退,其机制可能与Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达有关,高浓度组(吸入低浓度3％七氟醚)影响情况较低浓度组显著.S1组、S2组麻醉后潜伏期均较麻醉前及C组麻醉后明显延长(P<0.05),S2组麻醉后潜伏期较S1组延长更为显著(P<0.05);S1及S2组大鼠120S内穿越原平台区域进入次数麻醉后显著低于麻醉前及C组,组间比较S2组相似文献   

LC/MS/MS法测定人血浆中头孢克肟含量

目的 建立人血浆中头孢克肟的LC/MS/MS法.方法 血浆样品经蛋白沉淀提取,采用C8色谱柱分析,以乙腈:水:甲酸(40:60:0.5,v/v/v)为流动相,三重四级杆质谱检测器,正离子多反应监测模式(MRM),监测离子分别为:m/z 454.3→m/z 285.2(头孢克肟),m/z 282.2→m/z 212.2(...     

PVC/PE/PVDC固体药用复合硬片PVDC涂布量测定

目的 建立一种测定聚氯乙烯/聚乙烯/聚偏二氯乙烯（PVC/PE/PVDC）固体药用复合硬片PVDC涂布量的方法。方法 裁取10 cm×10 cm的样品5片,将样品先在丙酮中浸泡,分离得到PVC层和PE/PVDC复合层。将PE/PVDC复合层于80℃中干燥2 h后,于23℃放置4 h,精密称定。再将PE/PVDC复合层在四氢呋喃中浸泡,使PVDC层溶解在四氢呋喃溶液中,得到PE膜层,于80℃中干燥2 h后,于23℃放置4 h,精密称定,前后2次差值即为PVDV质量（g）。最后计算PVDC涂布量（以g·m^-2表示）。结果 5批样品PVDC涂布量测定结果与标示涂布量均一致,且偏差均在±5%之内。结论 该方法准确、灵敏,适用于PVC/PE/PVDC固体药用复合硬片PVDC涂布量的测定。