siRNA干扰半乳凝集素-3对恶性胶质瘤细胞株U87MG细胞凋亡及增殖的影响

目的研究抑制半乳凝集素-3(Gal3)的表达对恶性胶质瘤细胞株U87MG细胞凋亡及增殖的影响。方法构建Gal3siRNA表达载体,转染U87MG细胞,并筛选出单克隆细胞株U87MG/Gal3 RNAi;用RT-PCR方法检测该稳定细胞株中Gal3的mRNA表达,用Western blot检测其蛋白表达;通过流式细胞技术和MTT法检测Gal3对肿瘤细胞凋亡及增殖的影响。结果 U87MG野生型细胞株、U87MG/空载体稳定细胞株和U87MG/Gal3 RNAi稳定细胞株的Gal3 mRNA表达值分别为1.28±0.0431,1.31±0.0278和0.38±0.0506;Gal3蛋白表达值分别为0.56±0.0479,0.54±0.0351和0.12±0.0418,U87MG/Gal3 RNAi稳定细胞株的Gal3 mRNA及蛋白表达显著低于对照组细胞(P<0.05);三种细胞株对凋亡诱导剂CDDP所诱导的细胞凋亡率分别为(30.83±0.13)%、(30.82±0.159)%和(54.56±0.12)%,U87MG/Gal3 RNAi稳定细胞株凋亡率显著高于对照组细胞(P<0.05);U87MG/Gal3 RNAi稳定细胞株细胞增殖率在不同时间点均显著低于对照组细胞(P<0.05)。结论抑制Gal3基因的表达能够促进该肿瘤细胞的凋亡,并抑制细胞的增殖。Gal3可以成为治疗恶性胶质瘤的有效的靶基因。     

免疫球蛋白G促进胶质瘤细胞系U87MG中PCNAP-ERK及P-SRC的表达

目的了解在体外培养条件下人源性免疫球蛋白G(IgG)刺激人胶质瘤细胞系U87MG后,对增殖细胞核抗原(PCNA)、激活的细胞外信号调节激酶(P-ERK)及激活的非受体酪氨酸激酶(P-SRC)表达的影响。方法用不同浓度的IgG(0.01、0.1、1μg/mL)刺激U87MG,24h后采用Western blot方法检测PCNA、ERK及P-ERK、SRC及P-SRC的表达变化情况。结果 IgG直接作用于体外培养的胶质瘤U87MG后,相对于对照组而言PCNA、P-ERK及P-SRC表达有明显的升高,并且表达呈现出一定的剂量依赖性。结论 IgG可能与神经系统癌症有关联。     

血清剥夺法分离U87细胞系中的胶质瘤干细胞

背景:细胞周期分析已证实,90%以上的干细胞处于G0静止状态,因此采用不含任何生长因子和其他相关营养添加剂的血清剥夺培养基更适合筛选分离肿瘤干细胞.目的:应用血清剥夺法培养胶质瘤U87细胞,并筛选鉴定该细胞系中的胶质瘤干细胞.方法:将U87细胞培养在只含有DMEM和L-谷氨酰胺的培养基中培养6 d,筛选出胶质瘤干细胞,接着更换为神经干细胞培养基,观察细胞肿瘤球的形成过程;将肿瘤球接种于血清培养基,观察其在体外的分化特点;免疫荧光鉴定血清剥夺后尚存的细胞、增殖形成的肿瘤球细胞和分化细胞.结果与结论:应用血清剥夺的方法成功地筛选出了表达CD133的肿瘤干细胞,并能增殖形成肿瘤球;肿瘤球可多向分化,子代细胞表达胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶.说明U87细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的胶质瘤干细胞.     

传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响

目的探索不同传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响及其分子机制。方法以两种不同传代次数的U87（I）、U87（II）为研究对象,使用MTT细胞增殖实验、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验分别检测U87细胞的增殖、迁移和侵袭能力;使用Western Blot技术检测U87（Ⅰ）及U87（Ⅱ）的CTHRC1, FOXM1, PLOD2, MMP9, TGF-β, E-cadherin, Slug, Snail, Vimentin, PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt的表达量差异。结果U87（Ⅰ）较U87（Ⅱ）更容易形成网状结构,有更强的侵袭能力,但在增殖和迁移能力上二者无明显差异。在EMT相关蛋白表达水平上,U87（Ⅰ）中的Snail、Vimentin的表达量较U87（Ⅱ）的高,而E-Cadherin、Slug则较低;在PI3K/Akt通路蛋白表达水平上,U87（Ⅰ）的p-Akt,Akt的表达量均低于U87（II）,而p-PI3K的表达量却高于U87（II）,两者在PI3K的表达量上无明显差异;除此之外,U87（I）中PLOD2、CTHRC1及MMP9的表达量也明显高于U87（II）,而TGF-β的表达量则低于后者。结论随着传代次数的增加,U87细胞在侵袭能力以及多个促癌基因表达上发生了变化,这可能造成分子机制研究的前后结果不一致,降低结果的可信程度,因此研究人员在进行细胞系实验时,应尽可能在短时间内,使用同一批次细胞完成生物学特性、分子机制研究,以减少传代次数对肿瘤细胞系生物学特性以及基因表达的影响。     

SYUNZ-4诱导U937细胞凋亡及机制研究

目的探讨半合成紫草萘醌化合物SYUNZ-4对U937细胞的诱导凋亡作用及机制。方法锥虫蓝拒染实验和MTT法分析SYUNZ-4对U937细胞的生长抑制作用;DNA电泳、荧光显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果SYUNZ-4抑制U937细胞生长并呈时间和浓度依赖性,48 h的半数抑制浓度(IC50)为3．62μg／ml;经SYUNZ-4处理的U937细胞可见DNA梯形条带、细胞核浓缩和凋亡小体;6μg／ml SYUNZ-4处理U937细胞6,12,24 h,细胞凋亡率分别为(12．2±6．5)％、(25．3±11．4)％和(56．2±6．5)％,对照组凋亡率为(2．1±0．8)％(P<0．05);SYUNZ-4可活化U937细胞中的caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP,上调Bax、P21、P27、Fas和FasL的表达,下调Bcl-xL水平,对Bcl-2、BID和P53表达无影响。结论SYUNZ-4在体外可诱导U937细胞凋亡。caspase家族蛋白及其相关信号分子参与了凋亡的调节。     

塞来昔布对神经胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响

目的探讨非甾体类抗炎药(NSAIDs)对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法选用神经胶质瘤细胞U251,分别加入0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L的塞来昔布进行处理。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测U251细胞增殖水平及抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随塞来昔布浓度的增加,神经胶质瘤细胞U251增殖水平明显降低,增值抑制率升高。不同浓度和不同作用时间,塞来昔布对U251细胞增殖抑制率有显著性差异(P<0.05);流式细胞术细胞凋亡率检测显示,80μmol/L塞来昔布处理48 h的U251细胞凋亡率(17.86%)较0μmol/L(11.23%)增高(P<0.05)。结论塞来昔布可抑制人胶质瘤细胞U251的生长和增殖,促进U251的凋亡发生,以80μmol/L为佳。     

鸦胆子油乳诱导白血病U937细胞凋亡的实验研究

鸦胆子油乳是临床上广泛应用的抗肿瘤中药,为探讨其在白血病中的作用,我们观察了鸦胆子油乳对人白血病U937细胞的生长抑制和诱导细胞凋亡作用及相关基因的改变。材料和方法1　试剂　鸦胆子油乳,沈阳药科大学制药厂产品,每支10ml,含量为10 %。2　细胞培养　U937细胞为人单核细胞白血病细胞株,引自中国医学科学院血液学研究所,常规传代培养。实验时均用对数生长期细胞。3　MTT法检测鸦胆子油乳对U937细胞增殖的影响　实验方法根据文献[1]略加改进,设药物处理组、细胞对照组和空白对照组。每组设3个复孔,在终止培养前4h加入MTT(5mg/ml) ,置…     

槐耳浸膏对骨肉瘤 MG63细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨槐耳浸膏对体外骨肉瘤MG63细胞的凋亡、转移和侵袭的影响。方法不同浓度的槐耳浸膏（0、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml和4.0 mg/ml）作用于体外培养的骨肉瘤MG63细胞24 h、48 h和72 h。采用细胞增殖与毒性检测方法（ CCK-8法）,测定槐耳对细胞活力的影响;通过流式细胞仪检测槐耳对细胞周期及凋亡的影响;采用细胞划痕实验观察槐耳对细胞迁移能力的影响;通过Transwell实验检测槐耳对细胞侵袭能力的影响。结果和对照组相比,2.0 mg/ml和4.0 mg/ml浓度的槐耳作用于骨肉瘤MG63细胞24 h、48 h、72 h后可以抑制细胞的活力（ P均＜0.01）;流式细胞仪分析结果显示,槐耳可以将大鼠MG63细胞周期阻滞于G2期（ P均＜0.01）,可以促进大鼠MG63细胞凋亡（ P均＜0.01）;细胞划痕实验显示,槐耳可以抑制MG63细胞的迁移能力（ P均＜0.01）;Transwell实验结果显示,槐耳可以抑制MG63细胞的侵袭能力（ P均＜0.01）。结论槐耳可以促进骨肉瘤MG63细胞的凋亡,抑制细胞的迁移和侵袭能力。     

藤黄酸诱导骨髓瘤U266细胞凋亡及机制研究

目的探讨藤黄酸对人多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的影响及机制。方法不同浓度藤黄酸处理U266细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测对细胞增殖的影响,AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞的凋亡,JC-1染色法检测线粒体跨膜电位水平,流式细胞仪检测荧光素激活的Caspase3、Caspase8、Caspase9阳性细胞水平。结果藤黄酸呈浓度依赖性抑制U266细胞的生长,藤黄酸>0.5μg/ml才出现较明显的诱导凋亡的能力,藤黄酸降低U266细胞线粒体跨膜电位水平。藤黄酸作用U266细胞24h和48h时激活的Caspase3、Caspase8、Caspase9阳性细胞比例分别上升24.9%、31.7%、32.4%和57.0%、64.5%、63.5%。结论藤黄酸可抑制U266细胞的生长,机制与诱导U266细胞凋亡有关,线粒体跨膜电位途径和胞浆激活途径参与了凋亡的发生。     

手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937和HL-60细胞凋亡

目的 研究法尼酰基转移酶抑制剂手霉素（Manumycin）诱导白血病细胞凋亡的机制。方法 用2μmol／L手霉素处理白血病细胞系U937和HL-60细胞不同时间，用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、caspase9、caspase8、caspase3的表达。用荧光染料JC-1检测法测定线粒体膜电位（Δψm），并用caspase抑制剂Z—VAD—fmk阻断caspase的活化，探讨caspase在手霉素诱导白血病细胞凋亡中的作用。结果 2μmol／L手霉素处理U937和HL-60细胞16h，Δψm显著下降，相对值分别是0．51±0．07和0．41±0．06（P〈0．01）。手霉素诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质，激活caspase-9、caspase8和caspase-3。50μmol／L的Z—VAD—fmk可完全阻断caspase激活，但仅部分阻断手霉素诱导的U937和HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率分别减少51．69％和56．47％。结论 手霉素通过线粒体途径诱导U937和HL-60细胞凋亡。     

Diazepam enhances etoposide-induced cytotoxicity in U-87 MG human glioma cell line

Various approaches might be employed in an effort to increase efficacy of the chemotherapeutic treatment of cancer. Recently, various modulators of anticancer therapy effectiveness have been studied. Antiproliferative effects of peripheral benzodiazepine receptor (PBR) ligands might be exploited to enhance cytotoxic effect of a chemotherapeutic drug towards cancer cells. In this work, we sought to enhance cytotoxic effect of etoposide (VP-16) by a PBR ligand, diazepam (DZ) in U-87 MG human glioma cells. Cytotoxicity of VP-16, DZ and their combinations was assessed by using the microculture MTT assay. Cell survival, effective concentrations (EC) and the onset of cytotoxic effect were determined. After 72 h of cultivation, survival of U-87 MG cells was reduced to 57 +/- 7% in the presence of VP-16 at 12.5 microg/mL alone, whereas DZ at 10-4 mol/L alone caused 28 +/- 6% reduction in cell survival. Coincubation of VP-16 at 12.5 microg/mL with DZ at 10-4 mol/L led to a further decrease in cell survival to 45 +/- 6%. Furthermore, DZ at 10-4 mol/L significantly decreased effective concentrations, EC10, EC30 and EC50, of VP-16 and the dose-response curves were shifted to the left. Addition of DZ at 10-4 mol/L to VP-16 also facilitated the onset of its cytotoxic effect. The same decrease in survival was thus achieved approximately 30 h earlier in comparison with VP-16 alone. However, DZ at 10-9 mol/L failed both to exert any effect on glioma cells survival and enhance cytotoxic effect of VP-16. DZ at 10-4 mol/L was capable of both reducing U-87 MG glioma cells survival when applied alone and also enhancing the cytotoxic effect of VP-16. No such observation was made for the lower concentrations of DZ. Potential implementation of diazepam in the antiglioma/anticancer armamentarium awaits further experimentation but phase I and phase II clinical trials could be suggested.     

Induction of Apoptosis in Glioblastoma Cell Line (U87-MG) by Caspian Cobra (Naja naja oxiana) Snake Venom

Proceedings of the National Academy of Sciences, India Section B: Biological Sciences - Due to drug resistance, efforts are ongoing to develop new anticancer agent especially from the screening of...     

硼替佐米联合阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡机制的深入研究

本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡的机制。通过细胞计数检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和活性氧（ROS）水平,Westernblot检测凋亡信号通路相关蛋白的表达。结果表明,10nmol／L硼替佐米联合50nmol／L阿糖胞苷对U937细胞有明显增殖抑制作用。两药联合协同诱导细胞凋亡。两药联合较单药处理能明显协同增加U937细胞ROS的水平,并能明显上调U937细胞中p-P38,p-JNK表达,下调p-ERK的表达。结论：硼替佐米联合阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡．其机制可能与R0s的损伤导致JNK、P38通路的激活和ERK的下调,从而影响细胞线粒体途径有关。     

大黄素对U937细胞凋亡及细胞周期相关基因的影响

本研究旨在观察中药大黄素（Emodin）诱导人髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡及凋亡时细胞周期相关基因的变化。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测60μmol/L大黄素作用前后U937细胞C-MYC、h-TERT、PIM-2、Survivin、野生型P53、P21、TG Fβ1、MCL-1等基因表达的变化。结果表明：随着大黄素作用时间的延长U937细胞C-MYC、h-TERT、PIM-2、Survivin基因表达逐渐减少,而野生型P53、P21、TGFβ1基因表达逐渐升高,MCL-1基因表达无明显改变。结论：大黄素诱导的U937细胞凋亡是多因素启动和网络调节的结果。     

甲氨蝶呤单核细胞样细胞系U937的生长影响及其促调亡作用

一般认为急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）是对甲氨蝶呤（ＭＴＸ）原发耐药的恶性肿瘤。ＡＭＬ细胞除急性单核细胞白血病（ＡＭＬ－Ｍ５）细胞与ＭＴＸ孵育时,由于不能象急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）细胞一样形成足够量的长链聚谷氨酸盐甲氨蝶呤（ＭＴＸＰＧ）,而被认为对ＭＴＸ不敏感。为了开发对ＡＭＬ－Ｍ５新的治疗,本实验采用了具有单核细胞特征的Ｕ９３７细胞系进行研究。细胞分别通过不同浓度（１ｎｍｏｌ／Ｌ－１００μｍｏｌ     

血清 MG7-Ag 对胃癌诊断的应用价值

目的测定血清MG7-Ag以探讨其对胃癌诊断的临床价值。方法采用ELISA法定量检测54例胃癌患者,51例胃癌前病变患者,94例胃炎患者及46例胃癌术病人的血清MG7-Ag,并对其结果进行比较。结果胃癌患者血清中MG7-Ag的阳性表达率为83.33%,胃癌前病变组阳性表达率为47.05%,胃炎病变组为4.25%。经统计学处理,胃癌组与其它组比较有非常显著性差异(P<0.01)。46例胃癌患者术后血清MG7-Ag阳性率比术前明显下降。胃癌患者血清MG7-Ag的敏感性比CEA,CA19-9高,且有统计学意义(P<0.05)。结论血清MG7-Ag对胃癌诊断有特异性,可作为胃癌早期诊断的有效指标,也可作为监测病情、判断疗效之用。     

不同年龄组重症肌无力患者胸腺MRI表现

目的 探讨不同年龄组重症肌无力(myasthenia gravisMG)患者胸腺MR表现并分析两者之间的相互关系。方法 根据临床症状表现确诊并正在门诊接受治疗MG患者90例进行了胸腺MR扫描，其中14／90例静脉注射Cad—DTPA增强扫描。依据胸腺发育的不同年龄阶段分为A、B、C、D4组。A组(儿童期)：10岁以下33例(男18，女15)；B组(青春发育期)：11～25岁27例(男12，女15)；C组：26—50岁17例(男6，女11)；D组：51岁以上13例(男7，女6)。分析不同年龄段：MG患者胸腺MR表现。对照组采用：随机检测无重症肌无力患者(Non—MG)胸部CT扫描30例，年龄8—75岁，重点观察胸腺前后径(即：厚径)、胸腺脂肪化以及胸腺萎缩变化。并以此作为正常年龄组胸腺参考因素。结果 ①胸腺区域未发现异常44／90例，占48．88％。②发现胸腺增大42．／90例，占46．66％，当中，无结节性增大34例，有结节性增大8例。各组所占比例分别为：A组27／33例(81．8l％)，B组12／27例(44．44％)，C组3例，D组未发现胸腺增大；含有结节灶的增大胸腺8例分别见于A组4例，B组3例，C组1例。③胸腺肿块4／90例(4．44％)。仅见于B组1例，C组2例，D组1例。均未发现对邻近组织侵袭信号。对照组Non—MG患者无一例胸腺增大者。此外，胸腺脂肪化可见于MG组各年龄段和对照组。结论 胸腺变化与MG两者之间的关系密切见于儿童期与青春期患者，中老年MG患者与胸腺之间的关系尚须进一步探索。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导髓系白血病细胞HL-60细胞凋亡机制的研究

本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞的凋亡、凋亡途径及其对混合淋巴细胞反应的作用。流式细胞术检测MG132诱导HL-60细胞凋亡、阻断caspase-8和caspase-9通路、MG132诱导HL-60细胞凋亡的变化;Western blot检测MG132作用于HL-60细胞后P21、P27和P53蛋白的表达;应用75 Gy照射经MG132作用的HL-60细胞,然后用CCK-8检测HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果表明:大剂量MG132可诱导HL-60细胞凋亡;阻断caspase-8和caspase-9通路后MG132诱导HL-60细胞的凋亡无明显变化,P21蛋白、P27蛋白在MG132作用于HL-60细胞后表达升高,小剂量MG132诱导的HL-60细胞对健康人单个核细胞有增殖作用。结论:大剂量MG132诱导HL-60细胞凋亡,对HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导的HL-60细胞凋亡不通过caqspase-8和caspase-9途径,P21和P27蛋白可能参与了MG132诱导的HL-60细胞凋亡,小剂量MG132促进健康人单个核细胞的增殖作用,提高机体的免疫性。     

NLK,a novel target of miR-199a-3p,functions as a tumor suppressor in colorectal cancer

We previously reported that miR-199a-3p is a newly biomarker for diagnosis and novel prognostic indicator in colorectal cancer. However, the miR-199a-3p regulatory mechanism and its target genes are still unclear. In our present study, we demonstrated miR-199a-3p could directly target 3′-UTR of NLK gene by luciferase reporter assay and western blot analysis. We detected NLK expressions in 92 colorectal cancer cases to evaluate its clinicopathologic characteristics in colorectal cancer. Our results showed that NLK expression was significantly downregulated in cancer tissues than NATs, and NLK low-expression was associated with lymph node metastasis, venous invasion, liver metastasis and the TNM stage (P < 0.05). Moreover, Kaplan–Meier analysis showed that low expression of NLK correlated with a shorter overall survival rates of patients with CRC (P < 0.05). In vitro, we also found that NLK suppressed the biological behaviors of colorectal cancer cells, including the abilities of cell proliferation, clone formation, wound healing, migration and invasion (P < 0.05), while overexpression of NLK increased the apoptotic rate of colorectal cancer cells. All these results suggested that NLK was an identified miR-199a-3p target gene and functioned as a tumor suppressor gene in colorectal cancer. NLK could be a novel direction for developing diagnostic and therapeutic approaches in colorectal cancer.