抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状态细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的：从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量法RT－PCR法和检测Ⅰ型胶原，间质胶原酶（MMPI）的mRNA表达。结果：抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组（P＜0．01）；能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达（P＜0．01），且能促进MMP1的mRNA表达（P＜0．01）。结论：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达，从而可达到抑制胶原合成，促进胶原降解，这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤Ⅰ号方药对实验性肝纤维化大鼠组织Ⅰ、Ⅲ型胶原基质金属蛋白酶及其抑制因子mRNA表达的影响

目的:从分子水平研究抗纤Ⅰ号方剂治疗肝纤维化的作用机理。方法:利用CCl4、高脂饮食和乙醇等综合因素制造大鼠肝纤维化模型。模型成功后将大鼠随机分为肝纤维化模型组、中药和西药治疗组。分别治疗42 d后,检测各组大鼠肝组织病理学变化、血清肝功能和肝纤维化指标、免疫组化检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化、半定量PCR检测肝组织MMP1、TIMP-1 mRNA表达量的变化。结果:中药组肝组织病理学变化明显优于模型组和西药治疗组;血清肝功能指标中药治疗组ALT和AST(108±24,142±23)显著低于模型组(242±34,248±20)和西药对照组(123±39,216±25,P<0.05);肝纤维化指标中药治疗组HA和LN(270±79,62±10)显著低于模型组(769±67,109±26)和西药对照组(346±62,79±13,P<0.05);中药治疗后能够明显减少肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原以及TIMP-1 mRNA的表达量,但MMP1的表达量无显著差异。结论:抗纤Ⅰ号通过下调TIMP-1mRNA减弱对MMP1的抑制作用,使Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解增强而使肝纤维化逆转。     

复方861抑制四氯化碳大鼠肝纤维化模型Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的研究

目的:观察复方861对四氯化碳大鼠肝纤维化模型Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法:实验分为对照组(20只)、四氯化碳模型组(20只)、复方861干预组(20只)3组,实验8周,处死大鼠,取肝组织,应用RT-PCR检测肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达和病理组织特殊染色.结果:表明与模型组(0.90±0.03、0.9±0.05)比较,复方861组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平分别为0.77±0.06、0.75±0.05,差异具有显著性(P＜0.01).结论:复方中药861能够抑制Ⅰ、Ⅱ型胶原的基因水平,减少细胞外基质的沉积,是其抗肝纤维化的作用机理之一.     

扶正化瘀复方药物血清对大鼠肝贮脂细胞增殖及胶原合成的影响

采用正常大鼠灌胃给药、分离血清而体外作用培养细胞的血清药理学方法，探讨扶正化瘀方对培养大鼠贮脂细胞功能的影响。结果表明该复方血清无明显细胞毒性，抑制细胞增殖及胶原合成，而且该作用与复方的体内给药方式、给药剂量、取血时间、药物血清作用浓度等有一定关系。     

抗纤复方对大鼠纤维化肝贮脂细胞自分泌转化生长因子β1的影响

本文采用血清药理学方法,以貂肺上皮细胞 (Mvllu)生长抑制MTT法,观察了抗纤复方对大鼠纤维化肝原代培养贮脂细胞自分泌产生TGFβ_1的影响,检测培养上清中TGFβ_1活性,并以小牛血清、正常鼠血清和秋水仙碱药物血清为对照。结果表明抗纤复方药物血清和秋水仙碱药物血清均能明显抑制贮脂细胞产生TGFβ_1,但抗纤复方的抑制作用更明显。提示抗纤复方能抑制贮脂细胞产生TGFβ_1,阻断肝纤维化时的贮脂细胞自分泌放大过程,从而减少胶原等ECM的合成。     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF—β1mRNA的影响

目的：探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达。结果：抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达。结论：抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-βmRNA的表达。     

复方991抗纤方对大鼠实验性肝纤维化的影响

目的观察复方991抗纤方对大鼠肝纤维化模型的生化酶学改变.方法对高脂饮食CCl4造模大鼠进行干预,分为模型组、预防组、秋水仙碱组、991治疗组,检测ALT、AST、ALB、GLB、TP、PCⅢ、HA,观察各组对肝纤维化的影响.结果复方991抗纤方可明显降低血清ALT、AST水平,升高白蛋白,降低球蛋白,预防组PCⅢ和HA水平低于其他组,991治疗组明显低于秋水仙碱组.结论复方991抗纤汤有预防和治疗肝纤维化的作用.     

抗纤Ⅰ号对实验性肝纤维化大鼠组织Ⅰ、Ⅲ型胶原及转移生长因子β1 mRNA表达的影响

目的:从分子水平研究抗纤Ⅰ号方剂治疗肝纤维化作用机理.方法:利用CCl4制造大鼠肝纤维化模型,设立正常对照组、肝纤维化模型组及中药治疗组,中药灌胃治疗42d,检测病理学指标、肝纤维化血清学指标、肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化,以及肝组织TGF β1mRNA表达量的变化.结果:肝组织病理学以及血清学指标同对照组统计学尚有显著差异,同时实验也表明治疗组能够明显减少肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原以及TGF β1mRNA的表达量.结论:抗纤Ⅰ号具有逆转肝纤维化的作用,其作用机理可能是通过下调TGF β1mRNA,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成而减轻肝纤维化.     

扶正化瘀方抗二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化作用及其对贮脂细胞的影响

扶正化瘀可有效地改善肝炎后肝硬化及慢性乙型肝炎患者的肝功能,同时具有降低其显著增高纤维化血清学指标的作用,并对四氯化碳大鼠肝纤维化有良好的防治效果。本文进一步以二甲基亚硝胺诱发的大鼠肝纤维化为模型,观察该方抗肝纤维化作用及其对贮脂细胞增殖和胶原生成的影响。1 材料和方法1.1 材料 Wistar大鼠48只,体重150～180g,购     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

我们既往的研究表明 [1,2 ] ,抗纤软肝冲剂对于肝硬变患者和实验性肝纤维化大鼠 ,都具有良好的治疗作用。本实验采用血清药理学方法 ,观察该方对肝星状细胞 ( HSC)增殖和胶原合成的影响 ,从细胞学水平探讨该方抗肝纤维化的作用机理。1　材料和方法1 .1　材料1 .1 .1　动物　 Wisitar大鼠 1 5只 ,体重 40 0 g～5 0 0 g,购自湖北医工所 ,普通饲料喂养。1 .1 .2　药物　抗纤软肝冲剂 (海藻 30 g,鳖甲 30 g,牡蛎 30 g,丹参 2 0 g,莪术 1 0 g) ,由湖北中医学院附院制剂科制成煎剂 ,每毫升含生药 2 .4g;秋水仙碱 ,由上海化学试剂站进口分装 ,批…     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞胶原降解相关基因表达的影响

目的 从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)胶原降解的影响。方法 抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA法测定细胞上清I型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量RT—PCR法检测间质胶原酶(MMN)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1）的mRNA表达。结果 抗纤软肝冲剂组细胞上清中的I型胶原含量明显低于其他两组(P＜0．05或P＜0．01)；明显促进细胞MMN的mRNA表达(P＜0．05或P＜0.01)，显著抑制细胞TIMP-1的mRNA表达(P＜0．05或P＜0．01)。结论 抗纤软肝冲剂能促进MMN基因表达，抑制TIMP-1基因表达，从而促进胶原降解，这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的 :从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法 :抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC ,以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原 ,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量 ;半定量法RT -PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP1)的mRNA表达。结果 :抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组 (P <0 .0 1) ;能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达 (P <0 .0 1) ,且能促进MMP1的mRNA表达 (P <0 .0 1)。结论 :抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达 ,从而可达到抑制胶原合成 ,促进胶原降解 ,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

中药复方“健肝”抗大鼠肝纤维化的实验研究

１材料和方法１．１肝纤维化模型的建立和实验分组ＳＤ大鼠６２只,雌雄各半,体重２１０～２３０ｇ,由第一军医大学动物实验中心提供。动物来源、随机分成５组,正常对照组按同样条件饲养,但不作任何处理,其余４组每组１２只,均从实验第１ｄ开始以０．６ｍｌ／１００ｇ皮下注射６０％ＣＣＬ４,以后按 ０．３ｍｌ／１００ｇ皮下注射６０％ ＣＣＬ４,共２２次。肝硬化模型组仅予以ＣＣＬ４,在造模的同时,中药预防组和中药治疗组分别于造模的第１ｄ、第３１ｄ给予以中药２ｍｌ灌胃,每ｄ１次,秋水仙碱预防组分别于造模的第１ｄ和第３…     

抗纤软肝中剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的从细胞分子学水平探讨抗纤软肝中剂抗肝纤维化的作用机制.方法抗纤软肝中剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照.ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量法RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶(MMP1)的mRNA表达.结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组(P＜0.01);能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达(P＜0.01),且能促进MMP1的mRNA表达(P＜0.01).结论抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达,从而可达到抑制胶原合成,促进胶原降解,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

电针对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的 探讨电针对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分为4组(电针治疗组、药物治疗组、模型对照组和正常对照组),应用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,电针治疗组采用电针肝俞、足三里治疗,药物治疗组采用秋水仙碱治疗.应用Masson染色观察肝组织胶原纤维增生情况,采用实时荧光定量PCR技术检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的变化.结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝组织胶原增生,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均明显增加(均P<0.01);与模型对照组比较,电针治疗组大鼠肝组织胶原面积明显减少,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均明显降低(均P<0.01).结论 电针肝俞、足三里能够下调肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,该作用可能是其抗肝纤维化的重要分子机制.     

黄芪抑制大鼠肝星状细胞增殖及胶原分泌的研究

目的：观察黄芪抑制大鼠肝星状细胞增殖及胶原分泌。方法：分离培养大鼠肝星状细胞,传一代后加入不同浓度的黄芪48h后,以MTT比色法检测对细胞增殖的作用,传一代细胞以2mg/ml作用48h后,以ELISA法检测I,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白分泌的变化。结果：0．75－50mg/ml黄芪（经0．45um滤膜过滤）可使MTT转化率下降,细胞增殖受抑,呈明显的剂量依赖性,2mg/ml黄芪可使Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原分泌量下降,结论：黄芪抗纤维化的部分机理在于抑制了活化肝星状细胞的增殖及胶原蛋白的合成,从而减少了胶原纤维在肝脏内的沉积。     

加昧四逆散对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原mRNA影响的研究

目的观察加味四逆散对肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原mRNA影响，探讨其抗肝纤维化的药理机制和作用。方法采用二甲基亚硝胺腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型，加味四逆散灌胃给药，采用实时定量PCR技术检测各组大鼠肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原mRNA表达的水平。结果加味四逆散能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原的含量，与病理模型组比较有显著性差异（P〈0．05）。结论加味四逆散可有效的减少肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原的生成，对肝纤维化有肯定的治疗作用。     

肝复康对实验性大鼠肝纤维化肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响

目的研究肝复康对实验性大鼠肝纤维化的肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及其比值的影响.方法采用四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型,于造模60 d后给予肝复康治疗3个月,以秋水仙碱及肝脾康为对照药.检测肝组织羟脯氨酸含量,苦味酸天狼星红染色法偏振光显微镜显示肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原,并结合图像分析计算Ⅰ、Ⅲ型胶原面积及面积比.结果肝复康治疗后肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量较模型对照组明显减少,Ⅰ型胶原面积明显降低(P《0.01),Ⅲ型胶原面积明显降低(P《0.01),Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的比值明显降低(P《0.01).结论肝复康可明显降低肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,降低Ⅰ、Ⅲ型胶原含量比,使细胞外基质的成分趋于正常.     

姜黄素对肝纤维化模型肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA影响的研究

目的:观察姜黄素对肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:采用二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,姜黄素灌胃给药,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平。结果:姜黄素能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平,与病理模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:姜黄素能够抑制肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,从而发挥其抗纤维化的作用。     

抗纤I号对实验性肝纤维化大鼠组织I、Ⅲ型胶原及转移生长因子β1mRNA表达的影响

目的：从分子水平研究抗纤I号方剂治疗肝纤维化作用机理。方法：利用CCL4制造大鼠肝纤维化模型，设立正常对照组、肝纤维化模型组及中药治疗组，中药灌胃治疗42d，检测病理学指标、肝纤维化血清学指标、肝组织I、Ⅲ型胶原的免疫组化，以及肝组织TGFβ1mRNA表达量的变化。结果：肝组织病理学以及血清学指标同对照组统计学尚有显著差异，同时实验也表明治疗组能够明显减少肝组织I、Ⅲ型胶原以及TGFβ1mRNA的表达量。结论：抗纤I号具有逆转肝纤维化的作用，其作用机理可能是通过下调TGFβ1mRNA，抑制I、Ⅲ型胶原的合成而减轻肝纤维化。