苯并（a）芘对细胞周期、细胞增殖的影响及相关信号传导途径的作用

以苯并（a）芘及其代谢物为模式化学物，围绕着DNA损伤修复、细胞信号传导途径、细胞周期检测点调控等方面，从化学致癌物对细胞周期的影响角度来阐明化学致癌物的致癌机制已成为当前环境毒理学的热点问题与研究前沿。本文就苯并（a）芘对细胞周期分布与细胞周期调节因子的影响、以及相关信号传导途径在苯并（a）芘对细胞周期与细胞增殖影响中的作用等方面，对苯并（a）芘对细胞周期的影响进行了综述。     

牛磺酸对苯并(a)芘致人胚肝细胞损伤拮抗作用

目的探讨牛磺酸对苯并（a）芘致肝细胞DNA损伤的作用和机制。方法以人胚肝细胞为靶细胞体外培养,按完全随机实验设计分成5个组：（1）空白对照组;（2）溶剂对照组;（3）苯并（a）芘组：25μmol/L苯并（a）芘加入细胞培养体系后培养2 h;（4）牛磺酸组：设0.5,1.0,2.0,4.0μmol/L 4个浓度,加入培养体系后培养24 h;（5）牛磺酸预防组：先以4个不同浓度的牛磺酸预处理24 h,再加入25μmol/L的苯并（a）芘,培养2 h。各组培养结束后用单细胞凝胶电泳技术（SCGE）检测细胞DNA损伤,用分光光度法测定细胞培养液中丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）、天门冬酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）含量。结果（1）微量苯并（a）芘可致人胚肝细胞NDA明显损伤,同时使MDA、ALT、AST水平升高、GSH含量降低,牛磺酸的作用则相反;（2）牛磺酸预处理可明显减轻苯并（a）芘引起的人胚肝细胞DNA损伤,抑制MDA、AST、ALT含量升高和GSH含量下降,其作用呈剂量-效应关系;（3）人胚肝细胞DNA损伤的Oliver尾矩值与细胞培养液中MDA、AST、ALT含量呈明显正相关,与GSH含量呈明显负相关。结论苯并（a）芘致人胚肝细胞DNA损伤可能与氧化损伤有关,而牛磺酸具有拮抗苯并（a）芘致人胚肝细胞DNA损伤的良好作用。     

反式二羟环氧苯并(a)芘-DNA加合物在肺癌发病中的作用

[目的]反式二羟环氧苯并 (a)芘 (BPDE)为苯并 (a)芘在体内的代谢产物 ,是一种直接的致癌物 ,可攻击DNA形成BPDE_DNA加合物 ,本研究目的为探明该加合物在人群肺癌发生中的作用及其分子机制。[方法]使用针对BPDE_DNA加合物的单克隆抗体 ,通过免疫学方法检测150例肺癌、120例癌旁肺组织、40例肺良性病变和40例正常肺组织中BPDE_DNA加合物的含量 ,同时检测相应肺组织中P53、C_MYC、K_ras、BCL_2、hTERT等癌变相关基因的表达 ,分析BPDE_DNA加合物与上述基因的关系。并在BPDE诱导的体外人气管上皮细胞癌变模型上检测癌变过程中BPDE_DNA加合物的变化。[结果]82.0 % (123/150)的肺癌组织 ,37.5 % (45/120)的癌旁肺组织 ,15.0% (6/40)的肺良性病变和2.5% (1/40)的正常肺组织可检出BPDE_DNA加合物 ,肺癌组织中加合物的含量显著高于其他肺组织 ,P<0.01。分层分析发现男性肺癌病例加合物检出率为89.9% (107/119)高于女性的检出率51.6 % (16/31) ,P<0.05。有吸烟史的肺癌患者加合物检出率为99.1% (113/114)高于非吸烟肺癌患者的27.8% (10/36),P<0.01。肺癌组织P53、K_ras、BCL_2基因的阳性表达与BPDE_DNA加合物有关联 ,而C_MYC、hTERT基因的表达与BPDE_DNA加合物无关联。在体外用BPDE作用于人气管上皮细胞系 ,可诱导     

ERCC1反义RNA降低肺癌细胞对苯并(a)芘所致DNA损伤的修复能力

目的 探讨核苷酸切除修复基因ERCCl在肺癌细胞修复苯并(a)芘所致DNA损伤中的作用。方法 构建表达ERCCl反义RNA的重组质粒,Lipofectin转染肺癌A549细胞,潮霉素筛选出稳定转染的细胞克隆;噻唑蓝法检测24h细胞生存力;Northern Blot分析细胞ERCCl基因mRNA表达水平;单细胞凝胶电泳技术检测DNA损伤程度,每组计算50个细胞损伤情况。结果 筛选出表达ERCCl反义RNA的7个阳性克隆,其生长特性与亲本细胞差别无显著性;内源性mRNA表达水平不同程度降低,为亲本细胞的12％-86％;DNA损伤修复速度减慢,10μmol/L苯并(a)芘作用24h后再孵育24h,修复程度为亲本细胞的29％-71％;相关分析表明DNA损伤修复程度与ERCClmRNA水平显著相关。结论 ERCCl反义RNA降低肺癌细胞对苯并(a)芘所致DNA损伤的修复能力。     

炼焦工人淋巴细胞微核率与血浆苯并(a)芘浓度相关性研究

目的探讨炼焦工人淋巴细胞微核率与血浆苯并（ａ）芘浓度的关系。方法分别抽取炼焦和非炼焦职工各１００名进行流行病学调查,对每一位对象进行微核检测计数和血浆苯并（ａ）芘浓度的检测,并检测空气中苯并（ａ）芘浓度。结果炼焦工人与非炼焦职工血浆苯并（ａ）芘的浓度差异有非常显著性,且人体苯并（ａ）芘浓度与空气中苯并（ａ）芘浓度有相关性。微核阳性率和微核细胞率：炼焦工人分别为６０％和１．７９‰,非炼焦职工分别为２９％和１．０１‰,两者差异有非常显著性。以不同血浆浓度为暴露指标分级,显示微核阳性率与血浆苯并（ａ）芘浓度存在剂量反应关系。多因素分析显示,对微核阳性率起作用的因素依次为血浆苯并（ａ）芘浓度、经济水平、生活是否规律和吸烟。结论血浆苯并（ａ）芘的蓄积是导致微核形成的主要因素。对炼焦工人进行微核检测,可反映炼焦作业对机体早期的危害。     

自来水中苯并（a）芘含量调查

自来水中苯并（ａ）芘含量调查广东省职业病防治院（广州市怡乐路），５１０２６０黄淑莲，梁丹涛，叶能权苯并（ａ）芘是一种有代表性的强致癌物质，它对人体有严重的危害，已引起了世界各国卫生和环境组织的重视。由于环境污染的影响，苯并（ａ）芘也存在于地面水中，所...     

寒区部队居室苯并（a）芘调查报告

本文调查了寒区部队三市六个营区冬、夏、两季室内外苯并(a)芘的含量。结果表明,冬季室内外苯并(a)芘浓度0.00001～0.1796μg/100m~3,检出率100％;夏季0～0.0085μg/100m~3,检出率27.％8。一日内从早到晚呈上升趋势,但未超过参考标准(0.1μg/100m~3);旧营房居室分别是新营房的3.2、46.0和43.3倍。燃煤取暖的旧营房冬季是夏季的200多倍,提示燃煤取暖是苯并(a)芘含量增高的主要原因。     

苯并（a）芘代谢产物诱发BALB／3T3细胞程序外DNA合成的研究

为了解苯并（ａ）芘（ＢａＰ）代谢产物对哺乳动物细胞ＤＮＡ的损伤作用，本实验采用单标记和双标记法，分别检测４种苯并（ａ）芘代谢产物（ａｎｔｉ－ＢＰＤＥ，ｓｙｎ－ＢＰＤＥ，３－ＯＨ－ＢＰ和９－ＯＨ－ＢＰ）对ＢＡＬＢ／３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成和程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）的影响。结果表明：ａｎｔｉ－ＢＰＤＥ、ｓｙｎ－ＢＰＤＥ、Ｅ－ＯＨ－ＢＰ和９－ＯＨ－ＢＰ均在不同程度上使ＢＡＬＢ／３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成增加；但     

高效液相色谱法测定植物油中苯并（a）芘

目的建立植物油中苯并（a）芘残留的高效液相色谱快速测定法。方法采用CleanertBaP固相萃取小柱对样品进行前处理,高效液相色谱荧光检测测定样品中苯并（a）芘。色谱条件：C18柱（250×4.6 mm,5μm）,柱温：35℃,流动相：乙腈-水（82∶18）,流速：1.0 ml/min,进样量：20μl,荧光检测器：发射波长406 nm,激发波长384 nm。保留时间定性,峰面积定量。结果方法检出浓度为0.30μg/kg,线性范围2.625μg/L~21.0μg/L,相关系数大于0.999,加标回收率88.7%~94.6%,相对标准偏差均小于5%。结论方法简便、快速、灵敏、重现性好,适于基层推广应用。     

苯并(a)芘对肺癌细胞DNA损伤及修复基因表达水平的影响

目的 探讨苯并（a）芘（BaP)对肺癌细胞DNA损伤及核酸切除修复（NER）基因－着色性干皮病B、C、G基因（XPB、XPC、XPG）和切除修复交叉互补基因1（ERCC1）表达的影响。方法 以噻唑蓝（MIT）法检测BaP对细胞的毒作用，单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况，逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测基因表达水平。结果 BaP(0.625－20.000μmol/L）处理肺癌A549细胞24h，细胞生存力从95.0%降至70.0%。10μmol/L BaP处理12、24h，细胞生存力分别降至87.0%、73.0%，DNA损伤逐渐加重；BaP染毒24h后孵育12h，细胞生存力降至59.0%，DNA损伤最严重；继续孵育至24h，细胞生存力恢复至71.0%，DNA损伤逐渐修复。BaP处理引起XPB和XPC基因表达升高，在染毒24h和染毒后12h达峰值，分别为基底水平的4.5和11.2倍，随后逐渐下降；XPG和ERCC1基因在染毒期间表达下降，染毒结束后逐渐恢复。结论 BaP导致肺癌A549细胞DNA损伤，细胞在修复受损DNA时伴随NER基因表达水平改变。     

高效液相色谱法测定化妆品中8-甲氧基补骨脂素

[目的]建立测定化妆品中8-甲氧基补骨脂素含量的方法。[方法]采用高效液相色谱法,选用ZORBAX C18柱,流动相为35%甲醇∶乙腈=12∶88,二极管阵列检测器,波长296 nm。[结果]在0.035-0.620μg范围内,线性关系良好（r=0.999 6）,平均回收率为81.5%,RSD为4.79%。[结论]本法操作简便,结果准确,适用于测定化妆品中8-甲氧基补骨脂素的含量。     

叶绿酸对反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘抗细胞转化活性的影响

目的研究叶绿酸对反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(反式-BPDE)诱发的SV40 large T抗原永生化的人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化的抑制作用.方法在反式- BPDE诱导的细胞转化整个过程中,分别加入浓度为10、50和100 μmol/L的叶绿酸,应用刀豆凝集素(ConA)凝集实验、软琼脂集落形成实验和裸鼠成瘤实验进行细胞恶性度鉴定.结果细胞培养至25代,发现叶绿酸和反式-BPDE共处理组细胞与反式-BPDE单独处理组细胞相比,前者ConA凝集时间延长;叶绿酸和反式-BPDE共处理组细胞在软琼脂中集落形成率分别为7.4‰、11.4‰和14.4‰,明显低于反式-BPDE单独处理组(19.6‰),且有剂量反应关系;各处理组细胞均能在裸鼠体内成瘤,叶绿酸和BPDE共处理组在裸鼠体内生长的肿瘤体积分别为(0.43±0.13) cm3、(0.22±0.04) cm3、(0.10±0.06) cm3,明显小于BPDE单独处理组的(1.71±0.37)cm3,并有剂量依赖关系,肿瘤组织经病理学证实为低分化鳞状细胞癌.结论体外试验显示叶绿酸具有一定的抗细胞恶变能力.     

高效液相色谱法同时测定食品中的B族维生素

用HPLC法同时测定食品中的四种B族维生素(B_1,B_2,B_5,B_6)。实验用0.4mol/L盐酸,120℃、15psi水解样品。分析以μBondapakC18(300mm×3.9mm)为色谱柱,甲醇:重蒸水:庚烷磺酸(PIC-B_7)=30:68:2(V:V:V)为流动相,选择紫外254nm,对B_1、B_2和B_5以及荧光(EX295nm、EM395nm)对B_6的双通道检测,可得到很好的分离图形。B_1、B_2、B_5和B_6的线性范围与相关系数各为10～50ng(r=0.998),5～40ng(r=0.999),5～40ng(r=0.993),5～50ng(r=0.999),最小检出限各为5、5、2、2ng。回收率各为91.3％～102％,103％～105％,92％～100％和99％～100％。与参比实验相比,所得食物中B族维生素含量差异不大,并与食物成分表公布的数据十分接近。     

高效液相色谱法测定水中二甲戊乐灵

目的:建立水样中二甲戊乐灵的高效液相色谱测定法。方法:样品经二氯甲烷液-液萃取。旋转真空蒸发浓缩后,用高效液相色谱法分离测定。分析条件为:色谱柱为C18柱(ODS),250×4.6 mm,5μm;柱温;室温;流动相:85%甲醇-水;流速:1 ml/min:检测波长:238 nm。结果:本法线性范围上限至少为100 ng;平均回收率为95.6%;日内相对标准偏差为0.48%~3.65%,方法检出限为4.7×10-3μg/L。结论:本法具有前处理简单、灵敏度高、准确度好等优点,适合于水样中二甲戊乐灵的分析测定。     

尿中s-羟乙基半胱氨酸的OPA自动柱前衍生高效液相色谱法测定

目的：建立尿中s-羟乙基半胱氨酸的OPA自动性前衍生高效液相色谱法测定方法。方法：尿液经Sep-Pak C18小柱富集和纯化，样液中s-羟乙基半胱氨酸在HP1050高效液相色谱仪自动进样器中使用邻苯二甲醛（OPA）自动衍生，经Lichrospher 100RP-18e色谱柱分离，用DAD检测器在338nm波长下测定吸收值。结果：s-羟乙基半胱氨酸浓度范围0.0mmol/L-0.5mmol/L的校准曲线相关系数为0．9999，方法检出限为0．002mmol/L；s-羟乙基半胱氨酸浓度0．05mmol/L,0.30mmol/L,0.50mmol/L组内相对标准偏差（RSD）分别为1．67％、1．02％和1．40％（n=6);不同日期测定组间相对标准偏差（RSD）分别为4．78％、3．82％和3．74％（n=6)。尿中加标0．10mmol/L,0.30mmol/L的回收率分别为90％、93％。结论：方法线性好，精密度和回收率高，操作简便，自动化程度高，可用于测定尿中s-羟乙基半胱氨酸。     

昆虫驱避剂驱蚊肤宁的高效液相色谱分析

目的 :建立紫外 -高效液相色谱法 ,测定驱蚊肤宁中N ,N -二乙基间甲苯甲酰胺(DEET)的含量。方法 :以YWGC18为反相柱 ,甲醇 -水 ( 2 - 1)为流动相 ,紫外检测波长为 2 5 4nm。结果 :驱蚊肤宁中DEET的回收率为 10 0 .10 % ,RSD为 0 .90 % (n =5 )。结论 :该法简便、快速、准确、可靠 ,适合于产品的质量控制。     

叶绿酸对恶性转化细胞周期及体外生长的影响

目的研究叶绿酸对反式7，8二羟9，10环氧苯并(a)芘(反式BPDE)恶性转化人支气管上皮细胞系(16HBE)体外生长及细胞周期影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(FCM)，同时观察正常人支气管上皮细胞(16HBE)、反式-BPDE恶性转化细胞系、叶绿酸抗反式-BPDE恶性转化细胞系生长曲线和生长周期的变化以及经叶绿酸处理后的影响。结果BPDE恶性转化细胞系增殖活性明显大于正常细胞系(16HBE)，经100μmol／L叶绿酸抗BPDE恶性转化细胞组增殖活性较转化组有一定降低。经同样浓度叶绿酸处理的正常细胞组，未见降低细胞增殖活性作用。反式-BPDE恶性转化细胞组G0／G1期细胞周期比例明显少于正常组细胞。但经叶绿酸抗转化组G0／G1期比例有所提高，而经同样浓度叶绿酸处理的正常细胞组G0／G1期细胞周期比例无明显改变。结论对正常细胞无影响的一定浓度叶绿酸有抑制反式-BPDE恶性转化人支气管上皮细胞增殖活性的作用，并通过提高恶性转化细胞G0／G1期细胞周期比例而影响细胞周期的进程，从而改变恶性细胞的增殖和分化。     

尿中4种多环芳烃代谢产物的高效液相色谱-荧光检测方法研究

[目的]建立同时测定尿样中4种多环芳烃代谢产物的反相高效液相色谱-荧光检测方法。[方法]样品经酶解,用C18固相萃取柱净化、氮吹浓缩后,采用高效液相色谱柱分离、荧光检测器检测,以外标法定量。[结果]4种多环芳烃代谢产物标准曲线的线性良好;方法检出限为0.015～0.086μg/L;尿样低、中、高3个水平的平均加标回收率为75.23%～127.5%,相对标准偏差为4.43%～9.87%。用所建立的方法成功测定了正常人群20份尿样中的4种多环芳烃代谢产物。[结论]本方法具有准确、灵敏、重现性好的特点,适合于尿样中4种多环芳烃代谢产物的同时测定。     

高效液相色谱法测定自制板蓝根免煎颗粒中靛玉红含量

目的建立自制板蓝根免煎颗粒中靛玉红含量测定方法。方法用高效液相色谱法,流动相:甲醇∶氯仿(85∶15)(加0.1%三乙氨,醋酸调至中性),流速:1ml/min,检测波长:290nm,柱温:25℃。结果方法学考察合格,准确测定出自制板蓝根免煎颗粒中靛玉红含量。结论本法快速准确,可行性高。     

采用高效液相色谱法测定薯片及饼干中丙烯酰胺的研究

[目的]建立测定薯片及饼干中丙烯酰胺含量的高效液相色谱方法。[方法]采用纯水作提取剂,样品经正己烷去脂、高速冷冻离心、过SPE小柱净化后,进行高效液相色谱分析。[结果]该方法标准曲线的相关系数为0.9995,平均加标回收率为98.2%,相对标准偏差(RSD)为7.8%,方法的检出限和定量检出限分别为10μg/kg和31μg/kg。[结论]该方法操作简便快捷、经济、灵敏度高,适用于一般实验室开展日常食品检测和监测。