Duchenne肌营养不良症携带者的基因检测

对３个缺失型和１个非缺失型Ｄｕｃｈｅｎｎｅ假肥大肌营养不良家系缺失ＤＮＡ片段ＰＣＲ定量分析和ＳＲＲ－ＰＣＲ连锁分析，对４个家系１７名成员（患儿５名、女性亲属７名、男性亲属５名）进行了基因检测。检测结果发现了４名女性为致病基因携带者，肯定了７名女性为非携带者，为这些家系提供了可靠的遗传信息。以上检测方法简便易行，利于在临床实验室中开展。为了保证结果的可靠性，提出了实验操作中应注意的事项。     

Duchenne肌营养不良基因缺陷及基因治疗

Duchenne肌营养不良(DMD)是常见的神经肌肉遗传病之一,由于骨胳肌肌膜上的抗肌萎缩蛋白(dystrophin)完全或部分缺失引起.本文介绍了dystrophin的结构和功能,对DMD基因治疗的目的基因,基因治疗方式(包括病毒载体和非病毒载体),基因转染途径作了较为全面的介绍,指出腺相关病毒载体介导的基因治疗及干细胞移植是有希望的治疗方向,经全身途径使目的基因广泛转染骨胳肌并实现心肌和膈肌的转染,是基因治疗研究的难点.     

缺失型杜氏肌营养不良症缺失热区内含子断裂点分子结构特点的对比分析

目的 对比分析缺失型杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)缺失热区第46号和51号外显子缺失后形成的连接片段的断裂点的分子结构特点，以研究DMD基因外显子的缺失机理。方法 多重引物PCR法鉴定缺失型DMD患者，分别克隆第46、51号外显子缺失后形成的连接片段，测定断裂点侧翼的核苷酸序列。结果第46号外显子缺失后，5’端断裂点位于45号内含子的AT富含区内。3’端断裂点位于46号内含子的中等重复序列(medium reiteration repeats，MERl)内。连接片段有两个bp的连接同源序列ta，局部无小的缺失、插入和碱基的置换。第51号外显子缺失后，5’端断裂点位于50号内含子的人类类转座因子(transposon-like human elements，THEl)序列内。3’端短裂点位于51号内含子L2序列内。连接片段有3个bp的连接同源序列cta，局部无小的缺失、插入和碱基的置换。第46、51号外显子缺失后连接片段的断裂点的二级结构分析示断裂点均位于单链发夹环的非匹配区。结论 对比第46、51号外显子缺失后形成的连接片段，其断裂点的共同特征是均位于重复序列，这些重复序列形成的单链发夹结构，使DNA结构具有不稳定性，易于断裂并导致外显子缺失。     

Duchenne型肌营养不良症基因诊断进展

Duchenne dystrophies(DMD)是人类常见的X染色体连锁隐性遗传病,至今尚无有效的治疗方法。DMD由人类Dystrophin基因突变引起,其突变机制复杂,探索简便、准确的基因突变检测技术是DMD研究的热点之一。基因诊断已经被广泛应用到DMD的临床研究中,并且在确诊患者、筛查携带者、产前诊断以及指导基因治疗等方面取得了较大进展。     

外显子跳跃治疗Duchenne型肌营养不良症的研究进展

Duchenne型肌营养不良症是一种致死性肌肉疾病,抗肌萎缩蛋白基因缺陷是导致本病的原因,目前本病尚无特效的疗法.反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,AOs)诱导的外显子跳跃作为一种新的治疗手段具有良好的应用前景.本文主要从外显子跳跃治疗的原理、基础研究及临床研究进行综述.     

应用间期细胞原位PCR检测基因缺失型杜氏肌营养不良

目的：建立原位PCR技术,用于检测遗传性疾病。方法：应用抗肌萎缩蛋白（dystrophin)的基因48及51号外显子的引物,使用直接法原位PCR,检测正常人及Duchenne型肌营养不良症（DMD）患者。结果：正常男性96％间期淋巴细胞出现信号斑点,而DMD缺失型患者间期淋巴细胞均未出现信号斑点。结论：原位PCR技术不破坏细胞形态结构,能精确定位靶基因,兼有PCR及原位杂交技术两者优点。可作为检测缺失型DMD患者及产前诊断的手段。     

Duchenne型肌营养不良症的细胞治疗

Duchenne型肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy，DMD）表现为进行性肌肉萎缩，是一种致死性、遗传性神经肌肉疾病。尽管对肌肉萎缩的分子机理的研究取得了很大进展，但是仍然不能治愈，细胞治疗是很有前景的一种治疗方法。成肌细胞移植面临的主要限制是注射后细胞分布差，免疫排斥和细胞存活率低；骨髓干细胞移植需要解决横向分化的低效率问题；而肌源性干细胞看来能更有效地再生表达dystrophin的肌纤维。     

Duchenne肌营养不良症的分子遗传学

分子生物学,特别是重组DNA技术的出现,使我们对人类遗传病有了更深入的认识。这一领域的进展是极其迅速的,其中最明显的例子就是对X-连锁遗传病Duchenne肌营养不良症(DMD)的研究。用基因组探针检测携带者和产前诊断已经证明XJ1.1和pERT基因组探针,及侧翼探针如C7、754和99.6对于发现DMD携带者和产前诊断具有不可估量的价值。受累患儿血清CK水平是正常儿童的100～200倍,但用于检测携带者却不可靠,因为有1/3的肯定携带者的CK水平在正常范围。而应用RFLP进行的连锁分析具有很高的可信     

Duchenne型肌营养不良的治疗进展

进行性肌营养不良是一组遗传性肌肉变性疾病,以Duchenne型肌营养（DMD）不良最常见,目前尚无有效的治疗方法,本文从药物疗法、成肌细胞移植疗法以及基因移植疗法3方面介绍了国外近几年关于DMD的治疗进展。     

联合应用MLPA技术和基因测序技术检测DMD基因单个外显子缺失突变

目的 提高检测DMD基因单个外显子缺突变失的准确率,为DMD家系成员的遗传咨询和产前基因诊断提供准确的依据.方法 收集2009-2010年送本实验室进行DMD基因检测的血样185例,提取外周血DNA,以美国病理学家协会提供的DNA质控品分别为阴性和阳性对照,联合应用MLPA技术、PCR技术和基因测序技术,分析其DMD...     

Replication errors may contribute to the generation of large deletions and duplications in the dystrophin gene.

Frequent recurrent mutations of the human dystrophin gene lead to Duchenne and Becker muscular dystrophies. Although the approximately 2.5 Mb size of the gene may form a large target for mutations it is not clear to date which mechanisms promote the observed high frequency of spontaneous mutants (1 in 10,000 X-chromosomes) of which a high percentage (> 70%) are gross structural aberrations (deletions/duplications). In order to gain insight into possible molecular mechanisms we have cloned and sequenced the deletion junction fragments from two unrelated Duchenne patients. Our data, together with a short review on other cases from the literature, present evidence that errors of DNA replication may contribute to the generation of submicroscopic chromosome rearrangements.     

在大肠杆菌中高效表达DMD cDNA 5－7蛋白

选择ＤＭＤ／ＢＭＤ缺失突变热点区基因片段ｃＤＮＡ５～７ｋｂ，经序列测定，逐步克隆，插入到原核表达载体ｐＳＭ４３，转化大肠杆菌ＴＡＰ１０６，获得了重组基因的高效表达菌株，成功地表达出分子量４９０００的ＤＭＤｃＤＮＡ５－７蛋白，表达量占菌体总蛋白的１２％。为进一步研究Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ结构与功能奠定了基础，并为临床开展蛋白诊断的应用研究制备了基因工程抗原。     

Sensitivity and frequencies of dystrophin gene mutations in Thai DMD/BMD patients as detected by multiplex PCR

Background: Duchenne muscular dystrophy (DMD), a lethal X-linked disease affecting 1 in 3500 male births, and its more benign variant, Becker muscular dystrophy (BMD), are caused by mutations in the dystrophin gene. Because of its large size, analysing the whole gene is impractical. Methods have been developed to detect the commonest mutations i.e. the deletions of the exons. Although these tests are highly specific, their sensitivity is inherently limited by the prevalence of deletions, which differs among different populations. Methods: We reviewed our database for the detection of Dystrophin gene mutation by means of 31-exon multiplex PCR in Thai males, diagnosed clinically and biochemically with DMD or BMD from July 1994 to November 2006. One index patient was chosen from each family for statistical analysis. The overall sensitivity of the test, the number of fragment deleted, and the deletion frequency of each fragment were calculated, along with their 95% confidence intervals (C.I.). Results: We found deletions in 99 out of the 202 index patients (49%; Bayesian 95% C.I. = 42%–56%). 51% of these had deletion in only one of the 31 exons tested, while the patient with the most extensive deletions had 14 exons deleted. The mean number of deleted exons were 2.84 (BC_a bootstrap 95% C.I. = 2.37–3.48), or 5.02 (3.81–6.85) if all the untested exons adjacent to the confirmed deleted exons were assumed to be deleted. The region spanning exons 44-52 was the most frequently deleted. These were similar to those reported in the Japanese. Conclusion: The multiplex PCR detected deletions only in about half of the Thai patients. The diseases therefore should not be excluded solely on the negative result if DMD/BMD is strongly suspected.     

An isolated case of Duchenne muscular dystrophy (DMD) in a female with a deletion of DMD cDNA

An isolated case of Duchenne muscular dystrophy (DMD) in a female who has a deletion of the DMD locus is described. This patient was a 26-year-old woman born to unrelated, healthy parents. She was initially examined at age 6 because of a waddling gait. At age 15, pseudohypertrophy of calves and pes equinus were observed along with proximal muscular weakness and wasting. Her serum creatine kinase level was high and histological evidence of muscular dystrophy was apparent on muscle biopsy. The patient was ambulant at age 15 and progression of motor disability has been slow. Chromosomal studies revealed a normal karyotype, and mental retardation is moderate. DNA analysis at age 26 revealed that she has a deletion of DMD cDNA 8 mapped within Xp21 and is heterozygous for the deletion. Since diagnosis of DMD is now dependent on the evidence of mutation or deletion at Xp21, this patient is thought to have a form of DMD. Expression of the DMD gene in the heterozygous state might be due to random but unequal lyonization.     

dystrophin基因第45～54外显子缺失连接片段的克隆和测序

目的通过对dystrophin基因第45-54外显子缺失后连接片段的克隆和测序分析，探讨dystrophin基因缺失的发生机理。方法先以外显子PCR反应检测证实1例杜氏肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy，DMD）患者第45～54外显子缺失，然后在第44和第54内含子上用PCR步移方法寻找断裂位点，最后用靠近断裂位点处设计的引物，以PCR法直接扩增dystrophin基因的缺失连接片段并测序，测序结果和正常内含子序列作对比分析。结果对扩增连接片段的PCR产物测序获得2716bp有效序列。本例基因缺失片段长达402kb。5’端断裂点位于第44内含子长散在元件（long interspersed elements，LINE）L1序列内，邻近基质附着区（matrix attachment region，MAR），3’端断裂位点在第54内含子较可能形成MAR的一个次级区域内，附近有拓扑异构酶Ⅱ识别位点，断裂点两旁存在6bp的回文序列。连接片段通过4bp的微小同源序列AGAG连接断裂点两端。结论由L1重复序列、断裂点附近拓扑异构酶Ⅱ酶切位点、MARs以及微小同源序列的非同源末端连接修复等综合因素引起的非同源基因重组可能是导致此一大片段基因缺失的重要原因。     

DMD基因内微卫星标记对女性携带者的诊断意义

目的对1临床诊断为Duchenne肌营养不良家系中两名女性个体进行连锁分析,以确定她们是否为Duchenne肌营养不良致病基因携带者。方法抽取家系成员外周血并提取基因组DNA,选取3个DMD基因内微卫星标记作引物进行PCR扩增,扩增产物经ABI PRISM377测序仪电泳后进行连锁分析。结果在我们所研究的Duchenne肌营养不良家系中,一女性个体为Duchenne肌营养不良致病基因携带者,而另一女性个体为正常基因型。结论基因内标记可以排除染色体交换,运用DMD基因内微卫星标记可以成功诊断Duchenne肌营养不良家系中女性个体是否为致病基因携带者。     

Duchenne肌营养不良的基因治疗研究进展

Duchenne肌营养不良（DMD）为X连锁常见的神经肌肉遗传病之一，由于骨骼肌肌膜上的抗肌萎缩蛋白完全或部分缺失引起。不幸的是，从发现这种疾病以来已经历经大约150年，但是还是不可治愈。然而，20年前DMD基因的发现却大大地改变了这种疾病的发展状况。最近，基因治疗的研究取得了较大的进展。本文就DMD的基因治疗的进展加以综述。     

18三体及假肥大型肌营养不良成纤维细胞系的建立

目的:建立18三体及假肥大型肌营养不良胎儿皮肤成纤维细胞系。方法:3名在我院进行羊水染色体诊断或基因诊断,诊断为异常的胎儿。获得知情同意后,取1小块皮肤,进行成纤维细胞培养及鉴定。结果:对皮肤进行分离、培养,成功建立了3株疾病皮肤成纤维细胞系,包括1株18三体、2株假肥大型肌营养不良,并进行了传代、冻存、复苏及鉴定。在传代培养过程中核型稳定,STR基因检测对这些细胞系进行个体识别。结论:本研究在体外建立了稳定的18三体及假肥大型肌营养不良胎儿皮肤成纤维细胞系,为进一步研究相关疾病提供充足的细胞来源。