纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸支架材料对人成骨细胞早期附着影响的实验研究

目的以人成骨细胞（MG-63细胞）复合纳米羟基磷灰石／胶原／聚乳酸[nano-hydroxyapatite/collagen/poly（L-lactic）acid，nHAC／PLA]支架材料进行体外培养，观察其早期附着生长情况。方法将MG-63细胞在nHAC／PLA支架材料上培养，通过倒置显微镜观察、HE染色、ALP染色、细胞增殖指数测定等方法对细胞在nHAC／PLA支架材料上的早期附着情况进行研究。结果细胞在nHAC／PLA上生长良好；ALP染色阳性度高，细胞增殖指数比空白对照组有显著提高。结论nHAC／PLA支架有利于MG-63细胞的早期黏附、生长，可以用作骨组织工程的支架材料。     

改性纳米羟基磷灰石表面性质及对成骨细胞贴壁生长的影响

背景：生物材料表面性质的改变能够影响其与细胞的相互作用,并进一步影响细胞黏附能力、基因表达等行为。 目的：评价改性纳米羟基磷灰石的表面性质及其对成骨细胞在材料表面黏附能力的影响。 方法：参考作者既往实验制备纳米羟基磷灰石和改性纳米羟基磷灰石,利用zeta电位仪测定改性纳米羟基磷灰石的zeta电位,通过测定水在改性羟基磷灰石表面的接触角,结合成骨细胞黏附试验,分析表面改性对材料的细胞黏附能力和生物相容性的影响。 结果与结论：改性纳米羟基磷灰石表面呈疏水性,接触角为93°,成骨细胞黏附实验表明,改性纳米羟基磷灰石表面比纳米羟基磷灰石表面黏附更多的成骨细胞,表明表面改性增强了纳米羟基磷灰石的生物相容性。     

多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料复合成骨细胞的异位成骨

目的评价多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖﹙nHA/CS﹚支架与成骨细胞复合植入大鼠股部肌袋模型内的异位成骨能力。方法采用共沉淀和粒子沥滤法制备多孔nHA/CS。分离培养培养SD大鼠成骨细胞,并将其与多孔nHA/CS共同培养来构建组织工程骨。将所构建的组织工程骨和空白nHA/CS支架材料分别植入SD大鼠股部肌袋模型内。分别在植入2、4、6、8周后,将植入的支架材料取出行苏木精-伊红染色观察新骨形成情况,并应用JEDA-801D形态学图象分析系统来计算新骨生成率。用SPSS13.0软件包对测定结果进行单因素方差分析。结果在各观察时间段内成骨细胞复合多孔nHA/CS组新骨生成量均多于nHA/CS。结论多孔nHA/CS复合成骨细胞支架材料具有异位成骨能力。     

纳米羟基磷灰石急性毒性试验研究

对纳米羟幕磷灰石(nano-HAP)进行急性毒性试验研究,为长期毒性试验和其他毒理学试验提供参考依据,并初步了解nano-HAP进入血液循环系统后,是否会迁移到其它器官和组织.实验选用清洁级的110～130g Wistar大鼠70只,分为7组,实验组各组剂量分别为21.66mg/kg、29.97 mg/kg、41.49 mg/kg、57.42 mg/kg、79.48 mg/kg、110.39 mg/kg,以生理盐水为对照组.单次尾静脉注射,14d内观察动物的毒性症状,记录动物死亡情况.将死亡动物解剖,对动物主要脏器进行病理组织学检查.结果显示nano-HAP在Wistar大鼠身上尾静脉注射时LD50为51.79 mg/kg,由病理结果推测实验动物的死亡原因是由血管栓塞所致.在一只最低剂量组死亡动物肝的汇管区及附近肝内有占位性蓝染无定型物,肝内灶性炎细胞浸润.说明nano-HAP颗粒在充分分散的情况下会通过血液循环进入到身体其它器官,因此有必要对nano-HAP的生物安全性进行进一步研究.     

纳米羟基磷灰石和氢氧化钙对成牙本质细胞活性影响的比较

背景：将纳米羟基磷灰石与成牙本质细胞共同培养能更直观反映羟基磷灰石作为齿科盖髓材料的细胞相容性,但体外培养成牙本质细胞较困难。 目的：观察纳米羟基磷灰石和氢氧化钙对小鼠成牙本质细胞的活性的影响。 方法：取胎鼠下颌第一磨牙牙胚,采用组织块培养法对小鼠牙乳头细胞进行原代培养,倒置显微镜下挑选具有成牙本质样细胞形态的细胞观察细胞形态及生长情况。采用RT-PCR法对细胞牙本质涎磷蛋白的表达进行鉴定,确定为成牙本质样细胞。取对数生长期的第4代成牙本质样细胞,分别用含有100 mg/L纳米羟磷灰石和100 mg/L氢氧化钙的培养基培养1,3,5,7天,并设置空白对照组。 结果与结论：CCK-8法检测结果显示,培养1,3,5,7 d,纳米羟基磷灰石组的细胞生长良好。培养3,5,7 d,氢氧化钙组细胞活性低于空白对照组(P < 0.01)。碱性磷酸酶测定法检测结果显示,羟基磷灰石和氢氧化钙均对碱性磷酸酶活性无明显影响。结果证实,纳米羟基磷灰石对成牙本质细胞活性无影响,氢氧化钙对其细胞活性有抑制作用。     

羟基磷灰石/聚DL-乳酸复合内固定材料对成骨细胞活性影响的体外研究

目的 :与单纯聚DL 乳酸 (PDLLA)材料比较研究羟基磷灰石 /聚DL 乳酸 (HA/PDLLA)复合内固定材料的降解产物对成骨细胞增殖和分化的影响。方法 :检测HA/PDLLA材料和PDLLA材料体外降解过程中降解液 pH值、钙离子、无机磷浓度的变化 ;通过四甲基偶氮唑盐 (MTT)酶反应比色法检测成骨细胞在材料降解产物作用下的增殖情况 ,通过检测碱性磷酸酶 (ALP)活性了解其分化情况 ,扫描电镜 (SEM)观察成骨细胞在材料直接作用下的形态学表现。结果 :体外自然降解时 ,HA/PDLLA材料降解液 pH值下降较PDLLA材料慢 ,HA/PDLLA材料降解时有钙磷成分溶出。与对照组比较 ,HA/PDLLA材料所设全部七个浓度的浸提液及PDLLA材料从 1∶2 5 6到 1∶16这四个浓度的浸提液对成骨细胞增殖均无抑制 (P >0 .0 5 ) ,PDLLA材料 1∶4及 1∶1两个浓度的浸提液抑制了成骨细胞增殖 (P <0 .0 5及P <0 .0 1)。作用 1d和 4d后的成骨细胞ALP活性在HA/PDLLA材料组与同期对照组相比均无显著性差异(P >0 .0 5 ) ,在PDLLA材料组与同期对照组及HA/PDLLA材料组相比均有显著性升高 (P <0 .0 1)。HA/PDLLA材料表面的成骨细胞呈纺锤形及延展为多角状 ;PDLLA材料表面的成骨细胞呈球形及延展不充分 ,且数量较少 ;HA/PDL LA材料表面可见HA颗粒。结论 :HA/PDLLA材料降     

羟基磷灰石纳米粒子对卵巢癌作用的体外实验研究

目的 探讨羟基磷灰石（Hydroxyapatite,HAP）纳米粒子对卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用.方法 通过细胞毒性试验观察HAP纳米粒子对细胞生长的作用,测定HAP纳米粒子的量效曲线和时效曲线.通过丫啶橙/溴化乙啶染色荧光显微镜观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期来观察HAP粒子对细胞凋亡的作用.结果 HAP纳米粒子对SKOV3细胞生长具有抑制作用,当细胞的抑制率为30%、50%和70%时,该纳米粒子的浓度分别为8.53mg/L、26.52mg/L和61.99mg/L.形态学和定量的检测均证实HAP纳米粒子有诱导细胞凋亡的趋势,其凋亡率为（38.32±17.87）%,而对照组为（11.88±7.69）%,两组间差异显著,P＜0.05.并且HAP纳米粒子作用后,S期细胞明显少于对照组,而G0/G1期细胞明显多于对照组,两组间差异显著,P＜0.05.结论 HAP纳米粒子对卵巢癌细胞株SKOV3的生长具有明显的抑制作用,其作用机制可能是诱导肿瘤细胞凋亡.     

纳米羟基磷灰石骨修复复合材料的研究进展

羟基磷灰石（Hydroxyapatite，HA）是一种性能良好的骨修复材料，但是由于脆性而限制了它在承力部位的应用。天然骨本身是纳米羟基磷灰石（Nanohydroxyapatite，n．HA）和胶原的复合材料，从仿生的角度看，n—HA与其它材料复合可以提高生物相容性和力学性能。目前研究的纳米羟基磷灰石复合材料可分为两类：非降解的纳米羟基磷灰石复合材料和可降解的纳米羟基磷灰石复合材料。前者包括n—HA/聚乙烯、n-HA／尼龙以及n—HA／聚丙烯酸。后者主要有n—HA与胶原、明胶、壳聚糖、聚乳酸和聚酸酐等的复合材料。本文详细综述了近年来纳米羟基磷灰石复合材料的制备、力学性能以及生物学性能的研究进展。     

纳米羟基磷灰石/壳聚糖(n-HA/CS)复合材料对SD大鼠代谢器官的影响

纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合材料(n-HA/CS)是目前骨修复替代领域使用广泛的一种生物材料.为探讨该材料在体内经代谢降解后,对大鼠体内代谢器官生理功能的影响,并分析其可能的作用机制.本研究用共沉淀法制备n-HA/CS复合材料,并采用红外光谱分析(IR)、X射线衍射(XRD)等手段表征该材料.通过细胞生长抑制实验,病理切片以及血清生化指标的检测,从体内体外两种方式观察该材料对MC3T3-E1细胞以及SD大鼠肝脏、肾脏等代谢器官的影响.结果显示,100 mg/kg含量n-HA/CS复合材料粉末在大鼠体内代谢8周,血清尿素氮(BUN)水平升高为29.6 mmol/L;肌酐(CR)水平升高为66.9 umol/L;总胆红素(T-B)及间接胆红素(I-B)水平也分别升高至1.79 umol/L和1.32 umol/L,均较对照组水平明显增高,有显著性差异(P≤0.05).且肝脏、肾脏组织中出现大量凋亡细胞,无组织坏死和炎症表现.n-HA/CS复合材料在体内代谢8周后,通过诱导细胞凋亡影响机体肝、肾等代谢器官的功能.     

纳米羟基磷灰石仿生骨材料的研究进展

纳米羟基磷灰石仿生骨材料因其与天然骨结构和成分相近,已成为组织工程领域研究的热点之一。介绍了纳米羟基磷灰石的各种制备方法及其复合材料的合成方法,并对纳米羟基磷灰石复合材料的特性进行了说明。通过将纳米羟基磷灰石表面修饰改性后,其复合材料有着广阔的应用前景,可用于修复骨缺损,也可以作为药物载体治疗肿瘤。对近年来纳米羟基磷灰石仿生骨材料的研究进展进行了综述。     

高分子量聚乙烯对成骨细胞活性及新骨形成的影响

研究高分子量聚乙烯（Highmolecular weight polyethylene，HMwP）材料对成骨细胞活性及其在骨折愈合过程中对新骨形成的影响。（1）体外实验：在HMWP浸提液和标准培养基中培养成人骨髓源成骨细胞，采用MTT法检测成骨细胞的活性、碱性磷酸酶试剂盒检测成骨细胞的生理功能。（2）体内实验：制作犬股骨远端粉碎性骨折模型，用HMWP板与钢板互锁组合固定，术后3、6、9、12周取材，分别进行HE染色组织学观察及扫描电镜观察HMWP板下骨折端的新骨生成情况。结果发现：（1）采用HMWP浸提液和标准培养基培养的2组成骨细胞，在第2、4、8、14d的增殖能力和碱性磷酸酶活性无统计学差异，P〉0．05；（2）术后不同时间点进行肉眼观察、HE染色组织学观察及扫描电镜观察均可见HMWP板与骨组织之间界面无吸收，HMWP下骨折端的新生骨组织随着时间延长不断成熟。提示：HMWP对成骨细胞的活性及新骨形成均无不良影响，可作为内固定材料应用于骨折的治疗。     

去卵巢山羊成骨细胞的体外培养

选用摘除双侧卵巢的百颅盖骨，体外分离培养成骨细胞，并对分离的成骨细胞做多方面生物学特性鉴定。结果表明：体外培养的去卵巢山百成骨细胞具有典型成骨细胞的形态特征、碱性磷酸酶活性以及在体外发生钙化的功能；证实了体外培养的去卵巢百成骨细胞具有体内成骨细胞的功能特性。为骨代谢的研究提供了新的实验手段。     

HA／TCP双相陶瓷与人成骨细胞生物相容性的体外实验研究

体外复合培养条件下,通过观察人成骨细胞与HA／TCP的复合生长及监测材料对细胞生理功能的影响来评价材料的生物相容性。研究发现,复合培养过程中成骨细胞首先贴附于材料的表面,进而攀附于材料边缘切刻处及材料表层微孔的边缘,以后逐渐长入孔中。最后,材料几乎为细胞所覆盖。复合培养的成骨细胞与正常培养的成骨细胞一样,具有分泌大量胶原纤维、表现强烈碱性磷酸酶活性和形成矿化胞外基质等成骨表型。细胞能够与材料很好地复合生长、材料对细胞生理功能又无明显的影响表明HA／TCP与人成骨细胞具有良好的生物相容性。     

Endosteal surfaces in hyperparathyroidism: An enzyme cytochemical study on low-temperature-processed,glycol-methacrylate-embedded bone biopsies

Summary Alkaline phosphatase (AIP) and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) activities have been studied comparatively in needle biopsies of the iliac crest of four cases of secondary hyperparathyroidism (renal osteodystrophy). AIP activity was associated with the plasma membrane of osteoblasts and their processes, of reticular cells of bone marrow and of young osteocytes of osteoid borders and woven bone. Moreover, it was detected in the fibroblast-like cells of the endosteal fibrosis. These cells were orderly in arrangement and were parallel to the endosteal surfaces near zones of bone formation. They were disorderly near zones of bone resorption. A strong TRAP-positive reaction was present in osteoclasts and mononuclear cells of endosteal fibrosis and in osteocytes located near active osteoclasts and in woven bone. These results suggest that the socalled fibrosis of hyperparathyroidism, rather than representing reparative, inert tissue, consists of osteoblastlike cells, probably precursors of osteoblasts derived by parathormone-stimulated proliferation of AIP-positive stromal cells of bone marrow, and of TRAP-positive, mononuclear cells, probably preosteoclasts. Moreover, they show that TRAP activity can be present in osteocytes, probably under stimulation by the same factors which stimulate osteoclast activity. The histochemical demonstration of AIP and TRAP facilitates the morphological diagnosis of metabolic bone disease and may improve knowledge of bone physiopathology.     

中药含药血清对体外成骨细胞增殖和分化影响的实验研究进展

近年来不少学者从细胞分子生物学角度开展了中医药对成骨细胞(OB)影响的实验研究,为中医药防治骨质疏松提供了分子生物学理论依据,其中运用体外成骨细胞培养和中药血清干预实验,研究骨质疏松的中药防治是常用的方法之一,也是中药防治骨质疏松症研究热点之一,本文主要回顾了含药血清对成骨细胞的增殖与分化方面的相关文献,这些研究对中药防治骨质疏松症奠定了基础。     

隔膜条件下骨再生成骨细胞来源的实验观察

目的:研究在隔膜条件下引导性骨再生过程中成骨细胞的来源,进一步认识引导性骨再生的机制.方法:以成年新西兰兔为研究对象,在双侧挠骨中段制作标准骨缺损不愈合模型,用硅胶膜成管状包裹一侧骨缺损,另一侧无特殊处理为对照.术后分别进行X线检查、常规HE染色以及SP方法BMP、BGP抗体的免疫组化染色.结果:硅胶膜在骨缺损处形成隔离密闭的腔室,将周围组织阻挡于骨缺损之外.早期骨端骨内膜、骨髓基质细胞大量增殖,形成肉芽组织占据骨缺损.骨再生过程中表现出明显的组织学特征:骨痂表面为2～3层成骨细胞,骨缺损中央为肉芽组织,两者之间为数层细胞形成的移行区,细胞排列疏松.早期骨端骨内膜、骨髓基质细胞BMP、BGP呈强阳性染色,骨痂生长过程中,移行区部分细胞呈阳性染色.结论:结果表明在隔膜条件下骨再生的成骨细胞在早期来源于髓内的骨内膜和骨髓基质细胞,骨痂形成后,成骨细胞则来源于骨内膜、骨髓、骨膜增殖细胞共同形成的肉芽组织中的间质细胞或成纤维细胞.     

热休克对小白鼠肾中碱性磷酸酶的影响

本文用酶组织化学方法研究了热休克对不同发育时期小鼠肾组织中碱性磷酸酶（ALP）的影响。结果表明，热休克处理后ALP活性有明显增高．提示ALP活性的增强是提高细胞的热耐受力、维持细胞正常生理功能的重要途径。     

Nano-hydroxyapatite modulates osteoblast lineage commitment by stimulation of DNA methylation and regulation of gene expression

Hydroxyapatite (HA) is the primary structural component of the skeleton and dentition. Under biological conditions, HA does not occur spontaneously and therefore must be actively synthesized by mineralizing cells such as osteoblasts. The mechanism(s) by which HA is actively synthesized by cells and deposited to create a mineralized matrix are not fully understood and the consequences of mineralization on cell function are even less well understood. HA can be chemically synthesized (HAp) and is therefore currently being investigated as a promising therapeutic biomaterial for use as a functional scaffold and implant coating for skeletal repair and dental applications. Here we investigated the biological effects of nano-HAp (10 × 100 nm) on the lineage commitment and differentiation of bone forming osteoblasts. Exposure of early stage differentiating osteoblasts resulted in dramatic and sustained changes in gene expression, both increased and decreased, whereas later stage osteoblasts were much less responsive. Analysis of the promoter region one of the most responsive genes, alkaline phosphatase, identified the stimulation of DNA methylation following cell exposure to nano-HAp. Collectively, the results reveal the novel epigenetic regulation of cell function by nano-HAp which has significant implication on lineage determination as well as identifying a novel potential therapeutic use of nanomaterials.     

Effect of adriamycin on the RPC C2A cloned cell line from rat incisor pulp

Background and Methods: RPC C2A cells, cloned from Wistar rat incisor pulp, were grown in culture 2–7 days after exposure to adriamycin at a concentration of 0.1 mg/L for 2 hours. Morphological changes, labelled proline incorporation and alkaline phosphatase activity were studied in response to this treatment. Results: At the light microscopic level, colonies of enlarged cells appeared 2 days after adriamycin treatment. The size of these colonies increased during the course of this study. The control samples showed no apparent changes. At the electron microscopic level, the small cells in the adriamycin-treated cultures showed fewer vesicles than the controls, but more prominent rough endoplasmic reticulum. However, the enlarged cells contained an abundance of vesicles, and few profiles of rough endoplasmic reticulum. Radiolabelled proline incorporation in the control group was significantly higher than the experimental after 2 days in culture, but showed no significant difference after 7 days. Histological staining for alkaline phosphatase showed that there was a slightly higher intensity in the control samples than in the experimental cultures at this time. Conclusions: This study has shown that the RPC C2A cells will respond to adriamycin treatment in vitro, where the acute effects were quite different from the protracted effects with respect to labelled proline incorporation and alkaline phosphatase activity. © 1995 Wiley-Liss, Inc.     

孕产妇孕期锌缺乏对胎盘碱性磷酸酶的影响

目的探讨孕产妇孕期锌缺乏对胎盘碱性磷酸酶影响的组化特征.方法选择17例锌缺乏的孕妇与57名血清锌正常的孕妇做为对照,AKP的组化染色采用钙-钴显示法,血清锌用血浆蛋白-原子吸收分光度法,来检测锌及AKP的活性.结果锌缺乏(<90μg/dl)的孕妇分娩后胎盘碱性磷酸酶含量明显低于对照组.结论孕产妇孕期锌缺乏导致胎盘碱性磷酸酶的活性降低,从而影响胎盘的正常代谢.