转化生长因子β3诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞

背景：转化生长因子β是一族多肽类生长因子，胚胎形成期可诱导原始的间充质干细胞分化形成软骨组织，有研究报道转化生长因子β3和碱性成纤维细胞生长因子可促进软骨细胞的代谢和增殖。 目的：验证转化生长因子β3体外诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的可行性。 方法：骨髓来源于髋关节手术时的松质骨碎片或于下肢骨开放性手术时收集，分离培养骨髓间充质干细胞，鉴定其表面抗原，用含体积分数10%胎牛血清以及10 μg/L转化生长因子β3的条件培养基诱导，诱导后细胞通过软骨细胞特征性染色，即甲苯氨蓝染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定。 结果与结论：骨髓间充质干细胞表面抗原CD73，CD90，CD105阳性，CD14，CD34，CD45，CD106以及HLA-DR阴性。诱导后细胞形态明显改变，甲苯氨蓝以及Ⅱ型胶原染色结果阳性。提示骨髓间充质干细胞在转化生长因子β3作用下，体外可分化为软骨细胞，可以作为组织工程种子细胞的一种有效来源。     

兔骨髓间充质干细胞培养及向成软骨细胞的诱导分化

背景：骨髓间充质干细胞没有理想的特异性表面标志物，对其鉴定尚无统一标准，大多数鉴定依赖于其形态水平、功能特征及培养过程中出现的分化表型来协助鉴定。 目的：体外培养扩增、鉴定兔骨髓间充质干细胞，观察其诱导分化为成软骨细胞的可行性。 方法：密度梯度离心法提取兔骨髓间充质干细胞，采用倒置显微镜进行形态学观察；用含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液培养细胞，每日定时进行细胞计数，观察细胞生长速度；采用流式细胞学方法分别检测原代及第3代细胞CD44、CD45、CD29的表达情况；取第3代生长良好的兔骨髓间充质干细胞，以特定培养液诱导(含体积分数为10%胎牛血清、转化生长因子1 10 μg/L、胰岛素样生长因子Ⅰ110 μg/L、转铁蛋白6.25 mg/L、地塞米松10 mmol/L、维生素C 0.05 mmol/L)，倒置显微镜下观察形态变化，免疫组织化学检测软骨特异性Ⅱ型胶原的表达。 结果与结论：培养的细胞长梭形，呈成纤维细胞样生长，传代细胞生长迅速。流式结果表明，原代细胞有62.4%的细胞表达CD29，有60.3%的细胞表达CD44，有2.79%的细胞表达CD45，第3代有99.9%的细胞表达CD29，有99.6%的细胞表达CD44，有2.62%的细胞表达CD45。骨髓间充质干细胞诱导后体外扩增能力明显降低，诱导21 d后形态变化比较显著，Ⅱ型胶原阳性细胞较多。结果显示应用密度梯度离心法可成功分离并扩增骨髓间充质干细胞，第3代细胞纯度较高，在适当的条件下，具有分化为成软骨细胞的潜能。     

骨髓间充质干细胞成骨方向诱导过程中的基因表达

背景：目前骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化演变中的基因表达模式尚不明确。 目的：观察骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中碱性磷酸酶、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、碱性成纤维细胞生长因子和骨钙素基因的表达情况,验证骨髓间充质干细胞是否向成骨细胞成熟分化。 方法：抽取2月龄新西兰大白兔股骨骨髓,全骨髓贴壁法培养获得骨髓间充质干细胞,用矿化诱导培养基(DMEM/F12、地塞米松1×10-8 mmol/L、β-磷酸甘油钠0.01 mol/L、维生素C 0.05 g/L)进行成骨诱导培养,用反转录-聚合酶链反应方法检测诱导培养后第一二代骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、碱性成纤维细胞生长因子和骨钙素基因的表达情况,并对该骨髓间充质干细胞表面抗原CD44进行鉴定。 结果与结论：经矿化诱导培养基诱导培养后,第一二代骨髓间充质干细胞阶段性表达碱性磷酸酶、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、碱性成纤维细胞生长因子和骨钙素基因;第1代骨髓间充质干细胞抗原CD44阳性率达44.4%。提示兔骨髓间充质干细胞在体外矿化诱导培养中逐渐向成骨细胞分化,分别于诱导后第一二代细胞中阶段性顺序表达成骨细胞特异性基因碱性磷酸酶、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、碱性成纤维细胞生长因子和骨钙素,该细胞已具备成骨细胞特征,为揭示骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中基因表达机制提供了实验依据。     

转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化*

背景：转化生长因子β1是关节软骨组织工程研究的首选生长因子，适当浓度能刺激关节软骨细胞增殖、分裂和分化。 目的：建立含有转化生长因子β1的特殊诱导体系培养条件下骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的能力，观察诱导后的细胞形态及表型变化。 方法：于兔胫骨结节内侧抽取骨髓，采用贴壁培养法分离纯化兔骨髓间充质干细胞，取第3代骨髓间充质干细胞行流式细胞仪检测鉴定其表面抗原，以含有转化生长因子β1的特殊软骨诱导体系的培养条件下对第3代骨髓间充质干细胞诱导培养21 d，诱导后与人鼻中隔软骨细胞进行比较。采用免疫组织化学法对Ⅱ型胶原进行定性检测。 结果与结论：贴壁培养法可分离并纯化兔骨髓间充质干细胞，所得第3代骨髓间充质干细胞表面抗原CD44 阳性，CD34、CD45 阴性。经诱导培养21 d后细胞形态变为不规则，Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示可见阳性细胞。提示含有转化生长因子β1的特殊软骨诱导体系的培养条件下，骨髓间充质干细胞可以转化为软骨细胞，且与正常软骨细胞无明显差异。     

兔骨髓间充质干细胞体外培养定向诱导分化为软骨细胞

背景：骨髓间充质干细胞具有分化为骨、软骨、肌腱、脂肪等组织的多分化潜能。 目的：体外培养兔骨髓间充质干细胞并定向诱导分化为软骨细胞,探讨体外诱导分化为软骨的方法和条件。 方法：取兔股骨骨髓,全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,碱性成纤维生长因子体外培养后,取第3代细胞在培养基中添加不同质量浓度转化生长因子β1的软骨分化诱导剂,2周后倒置显微镜观察细胞形态,甲苯胺蓝染色,RT-PCR技术检测Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达。 结果与结论：可以从兔骨髓中培养出骨髓间充质干细胞,碱性成纤维生长因子能明显的促进骨髓间充质干细胞增殖。经软骨诱导分化后骨髓间充质干细胞呈软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达阳性。10 μg/L的转化生长因子β1诱导成软骨分化能力最强。     

与软骨细胞共培养和条件培养液诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的比较**

背景：骨髓间充质干细胞体外转化很大程度上依赖于合适的培养条件。 目的：比较与软骨细胞共培养和条件培养液2种不同的诱导方案诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的特点。 方法：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞和耳软骨细胞，采用骨髓间充质干细胞与软骨细胞共培养及条件培养液诱导成软骨的方法，诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。以MTT法及流式细胞仪检测细胞活性及周期，糖胺多糖、甲苯胺蓝以及免疫组化染色检测细胞生物学特性，以RT-PCR法检测诱导后的软骨细胞Ⅱ型胶原RNA表达情况。 结果与结论：采用共培养方式诱导的软骨细胞，其生物学特性与采用条件培养液诱导的软骨细胞相比，前者优于后者，如分泌糖胺多糖的能力以及基质分泌量均较高。提示共培养方式诱导的软骨细胞更接近正常软骨细胞，更有利于作为组织工程软骨的种子细胞。     

胰岛素样生长因子1对人脂肪来源的间充质干细胞向软骨细胞定向诱导分化的作用☆

背景：近年研究者发现胰岛素样生长因子1还可以诱导骨髓来源间充质干细胞向软骨细胞方向分化,但目前尚未见胰岛素样生长因子1诱导脂肪来源间充质干细胞向软骨细胞方向分化及在此过程中与转化生长因子β1相互作用的报道。 目的：观察胰岛素样生长因子1诱导脂肪来源间充质干细胞向软骨细胞定向分化的可能性及在诱导分化中和转化生长因子β1的相互作用。 方法：获取脂肪来源间充质干细胞,以2×105 cells/cm2的密度接种于培养瓶,使用含胰岛素样生长因子1或(和)转化生长因子β1的无胰岛素软骨诱导剂诱导脂肪来源间充质干细胞。2周后获取细胞,制备细胞爬片,进行甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,观察细胞内高硫酸化的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原着色情况。RT-PCR检测Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan及Sox9 mRNA的表达。 结果与结论：加入诱导剂后,甲苯胺蓝染色显示3个诱导组细胞呈多角形,胞浆及胞膜呈蓝色异染。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示3个诱导组细胞胞浆及胞膜呈棕黄色着色。RT-PCR检测显示胰岛素样生长因子+转化生长因子组Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan、Sox9 mRNA的表达均显著强于胰岛素样生长因子组和转化生长因子组,胰岛素样生长因子组和转化生长因子组显著强于对照组,而胰岛素样生长因子组与转化生长因子组差异无显著性意义。提示胰岛素样生长因子1可以单独诱导脂肪来源间充质干细胞向软骨细胞分化,表达软骨细胞特异性细胞表型,胰岛素样生长因子1与转化生长因子β1诱导脂肪来源间充质干细胞向软骨细胞分化有协同作用。     

骨髓间充质干细胞向纤维软骨细胞表型的诱导分化

背景：半月板损伤后自行修复能力有限，组织工程技术为半月板损伤后修复开辟了一条新的途径。骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，有可能成为半月板组织工程理想的种子细胞。 目的：观察体外培养的猪骨髓间充质干细胞在诱导培养液作用下向纤维软骨细胞表型分化的可行性。 方法：采用全骨髓培养法分离培养猪骨髓间充质干细胞。取第3代的骨髓间充质干细胞，实验组以2.0×104/cm2细胞密度接种于24孔板，在含有转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ、地塞米松及抗坏血酸的DMEM-LG完全培养液中诱导分化，对照组以2.0×104/cm2细胞密度接种于24孔板，加入不含诱导因子的DMEM-LG完全培养液。在诱导第7，14，21天分别行甲苯胺蓝染色、免疫细胞化学染色检测其分化结果。 结果与结论：①第2代骨髓间充质干细胞的群体倍增时间最短约为2 d，第4代以后相对延长，为5~9 d。②诱导后的骨髓间充质干细胞由梭形向多角形、多边形转变。③实验组可见胞浆呈明显的紫蓝色，尤其细胞密集生长的区域蓝染较深，染色强度随诱导时间延长而增强。对照组的骨髓间充质干细胞只有核蓝染。④实验组和对照组Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色均阳性，各期染色无明显差异。对照组未见Ⅱ型胶原表达，实验组诱导14 d后可见Ⅱ型胶原能稳定的表达。提示骨髓间充质干细胞在体外诱导培养下可分泌纤维软骨细胞特征性细胞外基质，作为半月板组织工程种子细胞来源可行。     

外源性透明质酸对兔骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞的影响*

摘要 背景：透明质酸是关节腔滑液最主要的成分,对细胞的形态发生起着非常重要的作用,但其用于软骨缺损修复时对骨髓间充质干细胞的影响如何呢？ 目的：通过分析外源性透明质酸对兔骨髓间充质干细胞体外增殖及定向分化为软骨细胞的影响,探讨关节腔内环境对骨髓间充质干细胞的作用。 方法：全骨髓法+贴壁培养法分离培养兔骨髓间充质干细胞,取第4代细胞用于实验,实验组细胞加入透明质酸诱导液,以转化生长因子β3诱导组作为阳性对照,阴性对照组加入常规培养液。分别于诱导后第7,14,21 d行甲苯胺蓝染色检测蛋白聚糖表达,免疫组化染色及RT-PCR检测细胞Ⅱ型胶原表达。 结果与结论：经透明质酸诱导后,细胞增殖速度减慢,由长梭形变为多角形、椭圆形,细胞外基质呈甲苯胺蓝异染性和Ⅱ型胶原免疫组化阳性,RT-PCR检测示Ⅱ型胶原mRNA表达阳性,表现出软骨细胞的分化特点,但表达均比阳性对照组弱。结果提示,外源性透明质酸具有诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的能力,但比转化生长因子β3的诱导能力弱,关节腔内环境对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化有正性促进作用,支持透明质酸作为软骨组织工程基质使用。 关键词：透明质酸;骨髓间充质干细胞;软骨细胞;分化;细胞外基质 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.03.001     

腺病毒介导人转化生长因子β2基因转染诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向分化

背景：前人的工作已证实转化生长因子β1能促进骨髓间充质细胞的增殖,诱导其向软骨细胞分化。 目的：进一步验证人转化生长因子β2(human transforming growth factor-β2,hTGFβ2)基因转染诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化作用。 方法：取清洁级3周龄雄性Lewis大鼠16只,用于分离培养骨髓间充质干细胞。通过腺病毒重组载体Ad-hTGFβ2将外源性hTGFβ2基因转染到体外培养的第2代大鼠骨髓间充质干细胞中,48 h后采用免疫组织化学染色、RT-PCR和Western blotting的方法检测转染细胞中目的基因与软骨特异性蛋白——Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达的情况。 结果与结论：从成体大鼠骨髓组织中培养出骨髓间充质干细胞,体外培养呈成纤维细胞样,能大量稳定增殖传代。Ad-hTGFβ2转染骨髓间充质干细胞获得稳定表达,免疫组织化学染色和Western blotting检测到基因转染细胞中Ⅱ型胶原蛋白的合成表达,RT-PCR检测到Ⅱ型胶原和蛋白多糖aggrecan mRNA的表达。结果提示,从骨髓组织中可获得具有多分化潜能的间充质干细胞,并能在体外稳定增殖传代;Ad-hTGFβ2成功转染骨髓间充质干细胞,诱导其向软骨细胞分化。     

Mental illness in England,in Scotland and in Scots living in England

Summary Beginning from the observation that Scots living in England have much higher rates of mental hospital admission than do the English, several hypotheses are proposed to account for this. Much of the excess in rates of mental illness is accounted for by those diagnosed as having alcohol-related disorders and behaviour and personality problems. The results of an examination of offical statistics in the two countries enabled some explanations to be offered. It was found that rates of admissions to mental hospitals are higher in Scotland than in England but not as high as those found among Scots migrants who have a much higher rate of readmission to hospitals than either of the other groups. In fact, if first admissions only are considered the rates of admission in Scotland are not only higher than rates for English natives but also higher than for Scottish migrants. It seems that Scots living in England are somewhat less likely to become mental patients than Scots in Scotland but that once they do achieve this status they are very much more likely to be readmitted on subsequent occasions. It was concluded that there might be two fairly distinct groups of migrants from Scotland to England who have different backgrounds, different reasons for migrating and different psychological characteristics. On the one hand there are stable, economically motivated migrants who move south for definite employment related reasons and who show few psychological symptoms. While on the other hand there is a group of migrants who perhaps have psychological problems and who move more in hope than expectation without definite prospects and who account for the high rates of mental hospital admission found in Scottish migrants.     

Prostacyclin release in the coronary circulation during sustained stimulation in in vitro and in in vivo experimental systems

Prostacyclin release from rat isolated perfused hearts and from dog coronary circulation was studied by measuring immunoreactive 6-keto-PGF1 alpha (6-keto-PGF1a) in heart perfusate and in plasma obtained from the great cardiac vein respectively. Continuous infusion of arachidonic acid at constant concentration in isolated perfused hearts induced an increased prostacyclin release. This release showed a rapid peak within 10 min and a subsequent decrease. Low-flow ischemia induced an increased perfusate concentration of 6-keto-PGF1a but, considering the decreased flow, prostacyclin release was actually reduced. During the whole period of ischemia (60 min) prostacyclin release was constant. In open-chest anesthetized dogs 6-keto-PGF1a concentration in the great cardiac vein was increased after ligation of the left anterior descending coronary artery. A prolonged period of coronary occlusion (4.5 hours) resulted in a progressive rise of prostacyclin release. 6-keto-PGF1a determinations in the femoral vein and in the aorta did not show relevant variations during the observation period.     

癫痫与抑郁关系的研究进展

抑郁是癫痫患者中常见的精神障碍,严重地影响了患者的生活质量。传统的观点认为癫痫患者因为存在着诸多社会学问题易出现抑郁倾向,癫痫和抑郁是单向的联系,但大量的研究已经证明癫痫和抑郁之间存在双向的联系,一种异常状态的存在可能易转化为另一种异常状态的发展。癫痫和抑郁存在着共同的发病机制。本文主要就癫痫和抑郁的双向联系以及抗抑郁药物在癫痫患者中的应用进行阐述。     

神经介入：回眸2022

<正>2022年,国际上公布了多项大型神经介入领域的随机对照试验（randomized controlled trial,RCT）结果,在血管内治疗（endovascular treatment,EVT）急性大血管闭塞（large vessel occlusion,LVO）适应证的扩展、药物治疗、管理,症状性颅内动脉粥样硬化性狭窄（symptomatic intracranial atherosclerotic stenosis,sICAS）治疗,无症状性颈动脉狭窄治疗,     

Neuroimaging in epilepsy in tropics

Epilepsy is a major public health problem in many tropical countries. Also, some of the tropical diseases are major contributors to the higher prevalence of epilepsy in these countries. The etiologic factors responsible for epilepsy in these countries are quite different from those in the developed world. This article discusses the etiologic factors and neuroimaging of epilepsy in light of the conditions in these tropical countries.