~3H-ΤdR掺入法测定T细胞功能成败因素分析

T细胞功能测定,常用T细胞增殖试验,其原理是:T细胞表面含有有丝分裂原受体,能接受植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(C anA)和美州商陆(PWM)等有丝分裂原的刺激,转化成为淋巴母细胞。其中3H-T dR掺入法的原理是:在淋巴细胞接受有丝分裂素刺激发生转化过程中,将氚胸腺嘧啶核苷(3H-T dR     

抗CD28抗体协同刺激增强抗CD3抗体体外激活T淋巴细胞并降低TGF-β的表达

为了探讨体外激活T淋巴细胞的方法及活化后T淋巴细胞的免疫学特征,利用抗CD3、抗CD28抗体在体外刺激健康人外周血单个核细胞PBMNC,检测淋巴细胞转化,CD8^＋CD25^＋细胞比例和肿瘤生长因子β（TGF-β）表达等相关免疫学指标.结果表明,在抗CD28抗体的协同作用下,抗CD3抗体的刺激活性明显提高,CD8^＋CD25^＋细胞比例明显增加,TGF-β的表达下调.结论：抗CD28抗体协同刺激可以提供第二信号,使T淋巴细胞充分活化,TGF-β表达水平明显下降.     

LMP2混合肽负载树突状细胞与EB病毒感染患者外周血单个核细胞共培养产生识别EB病毒抗原的T细胞

LMF2是EB病毒感染细胞后表达的一种蛋白。本研究探讨应用适于不同HLA分型的EB病毒-LMF2抗原混合肽（MIX—LMF2）体外刺激EB病毒感染患者外周血单个核细胞，诱导产生EB病毒抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。取EB病毒相关噬血细胞综合症患者的外周血，分离并诱导培养树突状细胞，在培养过程中用EB病毒MIX—LMF2混合肽刺激，促成熟后在体外激活自体T淋巴细胞，每周刺激1次，共刺激2次；同时对部分分离的淋巴细胞在培养过程中不予以刺激作为对照。用基因扫描T细胞受体（TCR）B基因图谱的方法观察培养前后的T细胞克隆分布变化；用流式细胞术检测T淋巴细胞的表型变化；将培养的细胞和靶细胞共培养检测IFN—γ的分泌以研究CTL细胞抗原特异性的细胞毒作用。研究结果表明，基因扫描TCRβ基因结果显示体外培养改变了患者的TCRβ基因图谱，培养前为寡克隆的TCRβ基因家族在培养后出现与正常人相似的多峰分布，提示淋巴细胞亚群分布恢复正常；流式细胞分析显示培养前的淋巴细胞CD3^＋、CD3^＋ CD8^＋、CD^＋ CD45RA^- CD45RO^＋比例分别为70．73％、42．99％、27．56％。用负载EB病毒LMF2肽2次刺激体外培养后，上述的淋巴细胞表型分别升高为95．17％、52．54％、81、41％。NK细胞（CD3^- CD56^＋）、调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋）比例变化不大，分别从培养前的2.12％，0．03％变化为2.35％．0．02％。CD3^＋ CD45RA^- CD45RO^＋细胞增长比例较大，表明2次刺激后大部分的初始型T淋巴细胞被激活。IFN—γ分泌检测结果显示。当负载LMF2肽的DC细胞作为靶细胞时，刺激1次的细胞分泌IFN—γ量和刺激2次的细胞分泌IFN-γ量明显高于同期未刺激细胞分泌IFN-γ量（P〈0．05）。而对于未负载LMP2的DC细胞作为靶细胞时，IFN-γ检测结果则显示无统计学意义（P〉0.05）。结论：用负载EB病毒MIX—LMF2肽的树突状细胞（De）刺激T淋巴细胞的培养方法。可以改变患者T淋巴细胞克隆分布，产生识别EB病毒的特异性T淋巴细胞。     

重组人粒细胞集落刺激因子动员对淋巴细胞功能相关抗原1／细胞间黏附分子1信号途径诱导CD4^＋T淋巴细胞活化及增殖的影响

目的：观察在异基因外周血造血干，祖细胞移植中重组人粒细胞集落刺激因子动员对淋巴功能相关抗原1/细胞间黏附分子1信号途径诱导的外周血CD4＋T淋巴细胞的影响，验证重组人粒细胞集落刺激因子动员对淋巴细胞功能相关抗原1/细胞间黏附分子1信号通路的抑制作用。 方法：选择2006—06/2007—06在解放军总医院血液科异基因外周血造血干细胞移植前进行重组人粒细胞集落刺激因子动员的10例健康供者，对治疗方案均知情同意，且得到医院伦理道德委员会批准。给予重组人粒细胞集落刺激因子10μg，（kg·d）进行动员，在动员前1天和动员后第5天取供者外周静脉血，用miniMACS磁珠分选系统分离纯化CD4＋T淋巴细胞，分别用CD3单克隆抗体OKT3＋细胞间黏附分子1、佛波酯＋离子霉素刺激活化CD4^＋T淋巴细胞，用双色荧光标记检测动员前后CD4^＋T淋巴细胞激活后活化标记CD69，CD25的表达；用四甲基偶氮唑盐法检测动员前后OKT3＋细胞间粘黏附分子1、佛波酯＋离子霉素刺激CD4^＋T淋巴细胞增殖能力变化。 结果：①纯化后CD4^＋T淋巴细胞纯度均在90％以上。②动员后OKT3＋细胞间黏附分子1组、佛波酯＋离子霉素组CD4^＋T淋巴细胞活化标记CD69和CD25的表达均明显低于动员前（P〈0．01）。②动员后OKT3＋细胞间黏附分子1组、佛波酯＋离子霉素组CD4^＋T淋巴细胞增殖率均明显低于动员前（P〈0．05）。 结论：重组人粒细胞集落刺激因子动员可能抑制了淋巴功能相关抗原1/细胞间黏附分子1协同刺激信号，从而使CD4^＋T淋巴细胞活化、增殖能力下降。     

CMVpp65基因修饰的树突状细胞刺激自身T细胞活化

巨细胞病毒（CMV）感染易发生于慢性移植物抗宿主病（cGVHD）患者，其特异性免疫依赖于T细胞活性。本研究探讨CMVpp65基因修饰的树突状细胞（DC）对自身T细胞的活化作用。采用具有高效转染非分裂细胞的慢病毒系统将CMV全长pp65基因导入鼠源性DC；采用CpG—DNA诱导DC细胞成熟；采用流式细胞术及免疫荧光方法测定T淋巴细胞抗原及IFNγ表达。结果表明：慢病毒感染DC的感染复数（multiplicity of infection，MOI）为50，最佳感染效率可达30％-40％；表达pp65基因的成熟DC能刺激自身naiveT细胞表达CD69；表达PP65蛋白的成熟DC能够刺激自身CD4^＋或CD8^＋T细胞分泌IFNγ。结论：pp65基因修饰、CpG—DNA诱导成熟的DC能体外激活CMV特异性T淋巴细胞。     

体外rhG-CSF刺激对健康人外周血CD4^＋T细胞黏附和极化的影响

T淋巴细胞黏附和极化过程的完成需要依赖细胞表面的淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）与其配体细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的结合。本研究旨在探讨体外重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对健康人外周血CD4^＋T细胞的黏附和极化的影响。采集12例健康志愿者的外周血,使用免疫磁珠分选法纯化CD4^＋T细胞,加入rhG-CSF体外培养24 h,检测CD4^＋T细胞接受基质细胞衍生因子1α（SDF-1α）和ICAM-1信号刺激后细胞的黏附和极化的能力。结果显示,实验组（体外rh G-CSF作用后的健康志愿者）CD4^＋T细胞的黏附比例为（61.9±5.9）%,对照组（健康志愿者）为（68.3±7.3）%,差异有统计学意义（P〈0.05）;实验组（体外rh G-CSF作用后的健康志愿者）CD4^＋T细胞的极化比例为（24.3±4.3）%,对照组（健康志愿者）为（47.1±5.1）%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：体外rh G-CSF能抑制健康者外周血CD4^＋T细胞黏附和极化的能力。     

高能聚焦超声对恶性肿瘤细胞免疫功能的影响

目的：通过检测NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的变化，探讨高能聚焦超声（High intensity focused ultrasound,HIFU)治疗对人体细胞免疫功能的影响。方法：利用流式细胞仪检测23例恶性肿瘤患者HIFU治疗前后NK细胞活生及T淋巴细胞亚群的变化，结果：治疗后NK细胞活性显著增强（P＜0．05），CD3^ ,CD34^ ，CD4^ ／CD8^ 有不同程度的增加，同治疗前相比无显著差异（P＞0．05）。其中14例的发性恶性肿瘤且无明显远处转移的患者单纯行HIFU治疗后CD4^ ，CD4^ ／CD8^ 显著增多。HIFU同时联合应用化疗者经HIFU治疗后CD3^ 、CD4^ 轻度降低，CD4^ ／CD8^ 略有升高。结论：HIFU治疗可以显著增强NK细胞的活性，增加T淋巴细胞亚群数量，增强机体细胞免疫功能。     

免疫磁珠选择性清除人异基因反应性T细胞的实验研究

本研究用磁性细胞分离系统清除CD25^＋和CD69^＋人同种异体反应性T细胞，为减轻异基因骨髓移植后的移植物抗宿主病探索新的手段、对健康供者外周血单个核细胞与白血病缓解病人的骨髓单个核细胞进行单向混合淋巴细胞培养。3天后，通过磁性细胞分离系统清除CD25^＋和CD69^＋的同种异体反应性T细胞；通过^3H-TdR掺入实验，观察处理后的供者外周血单个核细胞对同一病人的骨髓单个核细胞及无关者外周血单个核细胞的反应性．结果表明：与未清除组相比，清除后供者细胞对同一病人抗原的反应性降低50％，但保留了大部分对无关者抗原的反应性。结论：在体外反应中清除同种异体反应性T细胞可降低对刺激抗原反应，同时保留大部分对无关者抗原的反应。     

人外周血单个核细胞化学发光的动力学及反应细胞类型

目的：研究各种有丝分裂原诱导的人外周血核细胞ＣＬ反应的动力学特征和参与ＣＬ反应的细胞类型。方法：从正常人外周血分离ＰＢＭＣ、淋巴细胞和单核细胞,经有丝分裂原诱导,测定和比较ＰＢＭＣ、淋巴细胞和单核细胞的ＣＬ反应强度及动力学。结果：ＣｏｎＡ、ＰＨＡ、ＳＰＡ、ＰＷＭ均能诱导ＰＢＭＣ产生Ｃ反应（ＰＢＭＣ－ＣＬ）,并呈明显的剂量－效应关系,其最适刺激浓度分别为：（μｇ／ｍＬ）ＣｏｎＡ１００、ＰＨＡ１００、     

干扰素-γ对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs)增殖的作用及干扰素-γ对其增殖的影响。方法 幼龄Wistar大鼠（4周龄）12只，分成对照组，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组，干扰素-γ组和干扰素-γ AngⅡ组，采用组织块贴壁法培养胸主动脉平滑肌细胞，分别测定^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR),^3H-亮氨酸（^3H-Leu)的掺入量和细胞周期中各期细胞构成比。结果 AngⅡ（0.1μmol/L）作用24h能使VSMCs的^3H-TdR与^3H-TdR与^3H-Leu的掺入量比对照组增多。且S期和G2/M期细胞增多，细胞增殖指数增大；干扰素-γ组无以上作用，与AngⅡ组相比，干扰素-γ（500U/mL) AngⅡ组^3H-TdR,^3H-Leu的掺入量明显减少，S期细胞构成比和细胞增殖指数亦明显减少。结论 AngⅡ对血管平滑肌细胞有促增殖作用。这种促增殖作用能被干扰素-γ所拮抗。     

类风湿性关节炎的发生发展与外周血T淋巴细胞亚群及CD4^＋TH1／TH2细胞功能亚型的关系

背景：类风湿性关节炎作为一种自身免疫病其免疫学发病机制目前尚未完全明确。T淋巴细胞、尤其是CD4^＋TH1／TH2细胞在类风湿性关节炎发生发展中可能有重要作用。 目的：探讨主要参与细胞免疫的CD4^＋TH1细胞和辅助体液免疫应答的TH2细胞在类风湿性关节炎发生发展过程中的作用。 设计：病例-对照，对比观察。 单位：武警医学院免疫学教研室。 对象：选择1999—03／2000—03在天津医科大学总医院内科就诊的类风湿性关节炎患者15例为患者组，男2例，女13例，其中12例受检者类风湿因子阳性，3例为阴性。同期选取健康体检者或本单位工作人员健康者30人为对照组，男4人，女26人。纳入对象均对实验目的知情同意。 方法：①采用酶联免疫斑点法对两组对象的外周血单个核细胞中CD3^＋T细胞（总T细胞）、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞进行检测，普通光学显微镜油镜下计数200～500个淋巴细胞，计算出阳性细胞的百分率。②采用酶联免疫斑点法检测活化的分泌细胞因子的TH细胞；细胞内有红色斑点的细胞为阳性细胞，分泌γ-干扰素的细胞为TH1细胞，分泌白细胞介素4的细胞为TH2细胞；普通光学显微镜油镜下计数200-500个淋巴细胞，计算出TH1细胞、TH2细胞的百分率及TH1／TH2细胞的比值。③采用t检验或χ^2检验比较数据间差异性。 主要观察指标：两组对象外周血T淋巴细胞亚群（包括CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞）及CD4^＋TH1/TH2细胞定量分析结果。 结果：类风湿性关节炎患者15例和健康者30人均进入结果分析。①两组外周血的总T细胞（即CD3^＋T细胞）、CD4^＋T细胞及CD8^＋T细胞的百分率差异不明显（P〉0．05）。②患者组外周血的TH1细胞的百分率明显高于对照组[（24．44&;#177;5．25）％，（14．93&;#177;3．82）％，P〈0．05]；而其外周血TH2细胞的百分率及TH1/TH2细胞的比值与对照组相近（P〉0．05）。 结论：TH1细胞介导的细胞免疫可能与类风湿性关节炎的发生发展有关。     

人源化CD25单克隆抗体对外周血T淋巴细胞活化和增殖的影响

本研究探讨人源化重组CD25单克隆抗体（rhCD25MAb）对外周血T淋巴细胞活化、增殖的影响。应用植物血凝素（PHA）刺激外周血单个核细胞，不加或同时加rhCD25MAb或环孢菌素A（CsA）进行体外培养，或先用PHA刺激T细胞活化后再加入rhCD25MAb继续进行培养。用MTT法检测淋巴细胞增殖率；流式细胞术检测T淋巴细胞表面抗原CD3、CD25的表达；ELISA方法检测细胞培养上清液中可溶性IL-2R（sIL-2R）水平。结果显示：rhCD25MAb和CsA均能有效抑制PHA活化的T细胞的增殖，且随浓度的升高而增强，总体比较，CsA对T细胞的增殖抑制作用更强。虽然CsA和rhCD25MAb均能降低细胞培养上清中的sIL-2R的水平及CD25^＋／CD3^＋的比例，但rhCD25MAb的作用明显强于CsA。rhCD25MAb无论是在T细胞活化前还是活化后均能抑制T细胞表达CD25抗原和分泌sIL-2R。结论：rhCD25MAb具有很强的免疫抑制作用，它能抑制T细胞活化及抑制活化的T细胞增殖，临床上它不仅可用于治疗急性移植物抗宿主病（aGVHD），还可用于预防aGVHD。     

全身炎症反应综合征患者抗炎因子对T淋巴细胞凋亡的影响

目的：探讨全身炎症反应综合征（SIRS）患者抗炎症细胞因子对T淋巴细胞（简称T细胞）凋亡的影响。方法：符合SIRS诊断42例，分别在入院当天和第2、4天清晨空腹抽肘静脉血3ml，测定转化细胞生长因子－β（TGF－β）、白介素－10（IL－10）和CD3^ T细胞、CD95^ T细胞，并设对照组。结果：TGF－β和IL－10入院第1天起持续升高，与对照组比较差异有显著性意义（P＜0．01）：CD3^ T细胞和CD95^ T细胞入院当天即降低，第2天后更低，与对照组比较差异有显著性意义（P＜0．05，P＜0．01）；TGF-β与CD3^ T细胞、CD95^ T细胞具有显著的相关性（γ=-0.715,-0.672)；IL-10与CD3^ T细胞、CD95^ T细胞呈显著的相关性（γ=-0.597,-0.604)。结论：抗炎因子诱导T淋巴细胞凋亡增加，总数减少和免疫功能紊乱；适度拮抗抗炎症细胞因子，使致炎因子与抗炎因子达到平衡，可能有利于SIRS的控制。     

人骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞的免疫调节作用

为了探讨人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）体外对T淋巴细胞的免疫调节作用，从人骨髓液中分离培养MSC，通过细胞形态、免疫组织化学及流式细胞术检测其表面标记进行鉴定；将植物血凝素（PHA）及从人脐血中分离培养的树突状细胞（dendritic cell，DC）作为刺激因素，经磁珠分选的人CD2^＋ T淋巴细胞作为反应细胞．用^3H—TdR标记β液体闪烁计数仪检测与MSC共培养前后T淋巴细胞增殖能力的变化；用流式细胞术检测与MSC共培养10天后的CD2^＋ T细胞内各亚群Th1、Th2、Tc1、Tc2比例的变化。结果表明：MSC能明显抑制由DC诱导的T淋巴细胞增殖（P=0．004），同时MSC抑制由PHA引起的T细胞增殖，但不具有显著性差异（P=0．26），MSC培养上清液单独并不具备抑制T细胞增殖的作用，与MSC共培养后的T细胞亚群中，Th2及Tc2亚群含量较共培养前明显增加（P〈0．05）。结论：MSC对由DC和PHA诱导的淋巴细胞增殖反应均具有抑制作用，并且这种作用可能与细胞间相互作用及诱导T细胞亚群的改变有关。     

人骨髓间充质干细胞对同种异体调节性T细胞的影响及可能机制实验研究

本研究探讨人骨髓间充质干细胞（human mesenchymalstem cells,hMSC）对同种异体CD4^＋CD25^＋调节T细胞的作用,进一步查明人骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞免疫调节作用的可能机制。从人骨髓中分离培养hMSC,通过免疫组织化学方法检测其表面标记并进行鉴定。从非亲缘供者健康人外周血中提取单个核细胞,在IL-2作用下体外培养,实验组加入不同数量级hMSC（1×10^3,1×10^4,1×10^5）共培养5天,对照组加入PBS。于结束培养前18小时经3H-TdR标记后用β液体闪烁计数仪检测T淋巴细胞增殖,流式细胞术检测各组CD4^＋CD25^＋T细胞的百分率,RT-PCR检测各组细胞Foxp3的相对表达量（Foxp3/β-actin）,ELISA分别测定上清中TGF-β、IL-10、IFN-γ和IL-12的表达。Pearson检验分析Foxp3相对表达量与CD4^＋CD25^＋T细胞百分率的相关性,以及Foxp3相对表达量、CD4^＋CD25^＋T细胞百分率与T淋巴细胞增殖程度（counts per minute,CPM值）,细胞因子TGF-β、IL-10、IFN-γ和IL-12表达量的相关性。结果表明：hMSC能明显抑制T淋巴细胞增殖,且抑制作用与hMSC呈剂量依赖性;实验组各组CD4^＋CD25^＋T细胞亚群含量以及Foxp3相对表达水平均较对照组明显增加（p〈0.05）,且实验组间比较差异仍具有统计学意义（p〈0.05）;Foxp3表达水平、CD4^＋CD25^＋T细胞百分率与T淋巴细胞增殖水平呈明显负相关（p〈0.05）,与TGF-β、IL-10表达量呈明显正相关,而与IFN-γ和IL-12的表达无明显相关性。结论：hMSC呈剂量依赖性抑制同种异体淋巴细胞增殖,其机制可能与hMSC通过分泌TGF-β、IL-10促进CD4^＋CD25^-T细胞向表达Foxp3的CD4^＋CD25^＋调节T细胞转化,进而发挥免疫抑制作用有关。     

急性髓细胞性白血病细胞培养上清对CD4+和CD8+T细胞增殖和凋亡的影响

为了研究不同的急性髓细胞性白血病（AML）细胞株培养上清对CD4^＋和CD8^＋T细胞增殖以及凋亡的影响,探讨AML的免疫抑制的形成机制,将3种AML细胞株（HL-60、NB4和U937）培养上清和普通培养液按不同比例混合,用于培养CFSE染色的淋巴细胞.抗CD3抗体和抗CD28抗体刺激3天后,标记7AAD和相应荧光抗体.利用流式细胞术检测不同T细胞亚群CFSE荧光强度和7AAD表达率的变化,分析其增殖和凋亡变化情况.结果表明：3种AML细胞株中有2种（HL-60和NB4）培养上清可显著抑制CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞的增殖,并随浓度增加而增强.同样,HL-60和NB4细胞株培养上清亦可抑制刺激后的CD4^＋T细胞的凋亡,但对刺激后的CD8^＋T细胞的凋亡并无明显影响.相反,HL-60和NB4细胞株培养上清可显著增加增殖的CD8^＋T细胞的凋亡.结论：AML细胞株培养上清液对CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞增殖的抑制以及对增殖的CD8^＋T细胞凋亡的诱导作用,可能是AML患者免疫功能缺陷的机制之一.     

负载肿瘤抗原的DC疫苗体外诱导的特异性抗膀胱癌效应研究

目的探讨负载膀胱癌抗原成分树突状细胞（dendritic cells,DC）疫苗的制备和体外诱导T淋巴细胞特异性杀伤膀胱癌细胞的作用。方法冻融法制备EJ细胞裂解物抗原成分,体外培养的人外周血单个核细胞（hu-PBMC）在rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α诱导下分化出DC,负载EJ细胞裂解物抗原后制备膀胱癌DC疫苗;免疫磁珠分离法从人免疫重建Balb/c裸小鼠脾脏组织中分离CD3＋T淋巴细胞,3H-TdR掺入试验测定DC疫苗刺激自体T淋巴细胞增殖的能力,51Cr释放试验检测DC疫苗诱导的T细胞对EJ细胞的杀伤作用。结果 Hu-PBMC在细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α的刺激下分化为成熟DC,负载EJ抗原的DC疫苗体外可使同源T淋巴细胞活化,增殖指数增加,活化的T淋巴细胞对EJ细胞的杀伤率为（62.58±6.13）%,和对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论负载膀胱癌冻融抗原的DC疫苗体外可诱导人T淋巴细胞活化增殖,对EJ细胞有明显的杀伤作用。     

乳腺癌病人淋巴细胞亚群治疗变化及临床意义

目的：探讨乳腺癌患者手术及化疗后淋巴细胞亚群数值变化及临床意义。方法选择2011年入住医院的25例病理确诊为乳腺癌且接受了手术及化疗的患者,用流式细胞仪测定其外周血 CD3^＋,CD4^＋,CD8^＋,CD4^＋／CD8＋及 NK细胞不同治疗时期的数值,统计学比较治疗前及治疗后不同期间 T细胞亚群及 NK细胞的变化,对结果进行对比分析。结果患者治疗1～3个月,CD8^＋显著性降低（t＝2.57）;治疗3～6月,NK 细胞显著性升高（t＝－2.23）;治疗6个月后CD3^＋（t＝－2.25）,CD4^＋（t＝－2.07）显著性降低,NK细胞显著性升高（t＝－3.56）。其余变化无统计学意义。结论乳腺癌患者T细胞亚群及 NK细胞能一定程度地反映患者治疗中的免疫状况,但治疗中具体数值的变化对治疗效果的评价以及预后判断的临床意义需进一步探讨。     

骨髓间充质干细胞通过上调CD8+CD28-T细胞抑制T细胞的增殖

本研究旨在探讨CD8^ CD28^-T细胞在间充质干细胞(MSC)抑制T细胞增殖中的作用。应用尼龙毛柱分离T淋巴细胞。再经CD8磁珠分选出CD8^ T淋巴细胞；用植物血凝素(PHA)刺激与或未与MSC共培养3天的CD8^ T细胞，应用MTT法测定T细胞的增殖；应用流式细胞术分别检测与或未与MSC共培养8天的CD8^ T细胞亚群的变化及用PHA刺激与或未与MSC共培养3天的CD8^ T细胞亚群的变化。结果表明，MSC抑制PHA刺激引起的CD8^ T细胞的增殖，且这种抑制作用是剂量依赖性的；流式细胞术结果显示，与未经MSC处理的CD8^ T细胞相比，MSC显著上调共培养8天的CD8^ T细胞中的CD8^ CD28^-亚群。及经PHA作用72小时后的CD8^ T细胞中的CD8^ CD28^-亚群。结论：MSC通过上调CD8^ CD28^-T细胞发挥抑制作用。     

rhG-CSF动员的外周血采集物与稳态骨髓中CD4^＋CD8^＋初始及记忆T细胞亚群的比较

本研究探讨重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员的外周血采集物（G—PB）与稳态骨髓（SS—BM）中CD4^＋、CD8^＋初始、记忆T细胞亚群的差异。依据细胞表面CIM5RA和CD62L的表达将CD4^＋、CD8^＋T细胞划分为初始T细胞（naive，CIM5RA^＋CD62L^＋）、中心记忆T细胞（centralmemory，TCM，CIM5RA—CD62L^＋）、效应记忆T细胞（effeetor memory，TEM，CIM5RA^-CD62L^-）、终末分化效应记忆T细胞（terminally difierentiated effeetor memory，TTTp，CIM5RA^＋CD62L^-）。用流式细胞仪测定G—PB与SS—BM中CD4^＋、CD8^＋初始和记忆T细胞的比例组成，并计算每微升采集物中各细胞亚群的绝对数量。结果表明：G—PB中CD4^＋、CD8^＋T细胞的比例组成及CD4^＋／CD8^＋比值均高于SS—BM（P〈0．05）；G—PB中CD4^＋初始T细胞的比例显著低于SS—BM（P〈0．001），而CD4^＋TEM比例显著高于SS—BM（P〈0．001）；G—PB中CD8^＋初始和记忆T细胞亚群的比例与SS—BM无显著差异（P〉0．05）；与SS—BM相比，G—PB中CD4^＋CD62L^＋T细胞的比例明显降低（P=0．001），每微升G—PB移植物中的各淋巴细胞亚群均明显高于SS—BM（P〈0.001）。结论：G—PB与SS—BM中CD4^＋、CD8^＋初始和记忆T细胞亚群在相对和绝对数量方面存在明显的差异，这种差异可能影响G—PB和SS—BM移植后急性、慢性移植物抗宿主病发生率及其程度的异同。