钙通道阻滞剂对环孢素A所致内皮细胞损伤的保护作用

目的：研究钙通道阻滞剂异搏定对环孢素Ａ（ＣｓＡ）所致内皮细胞（ＥＣ）所致内皮细胞（ＥＣ）损伤的保护作用。 方法：在培养的ＥＣ中加入ＣｓＡ１００μｇ／Ｌ的同时加入异搏定１００μｇ／Ｌ作用２４ｈ，以直接计数粘附细胞数观察细胞分离；光镜、电镜观察细胞形态；Ｈ＾３－ＴｄＲ掺入法及流式细胞仪观察ＤＮＡ抑制；Ｆｕｒａ－２ＡＭ荧光负载法检测细胞内游离钙（［Ｃａ＾２＋］ｉ）；放射免疫法检测细胞上清中内皮素（ＥＴ）     

环孢素A对血管内皮细胞的损伤和功能影响

环孢素Ａ对血管内皮细胞的损伤和功能影响范礼佩，高伟关键词环孢素Ａ；血管内皮细胞；损伤环孢素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅＡ，ＣｓＡ）是一个含有１１个氨基酸的环形多肽［１］。其活性部分是环形多肽，具有很强的免疫抑制作用，它能抑制辅助性Ｔ淋巴细胞，减少白细...     

红花黄色素A通过调控SIRT1基因表达对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究红花黄色素A对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及炎性因子分泌的影响及其机制.方法 通过ox-LDL诱导人脐静脉血管内皮细胞EAhy926损伤模型标记为ox-LDL组;红花黄色素A(50、100 mg/L)治疗损伤的EAhy926细胞标记为红花黄色素A-低组、红花黄色素A-高组;将ox-LDL+红花黄色素A+si-c...     

百令提取液对环孢素A导致肾小管损伤的防治作用

目的：从细胞水平观察百令提取液对环他素A(CsA)肾毒性的影响。方法：体外培养肾小管上皮细胞，通过^3H-TdR掺入、MTT比色法、PI染色法和细胞LDH释放等观察百令提取液对CsA引起的肾小管上皮细胞毒性的防治作用。结果：^3H-TdR掺入和MTT比色法显示在一定的剂量范围百令提取液可明显促进培养的肾小管上皮细胞增生，5mg／L以上的CsA抑制细胞增殖；细胞周期的石研究显示15mg／L以上的CsA使小管上皮细胞细胞周期5且滞在G2期；此外，更大剂量的CsA(25mg／L)对细胞有直接的毒性作用，使培养上清LDH值升高。百令提取液能部分逆转CsA引起的细胞增殖受抑和细胞周期阻滞，但足对CsA导致的细胞培养上清LDH的升高没有明显的影响。结论：本研究证实了百令提取液可以促进体外培养的肾小管上皮细胞增生，对CsA的肾小管细胞毒性具有一定的拈抗作用。     

血清低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞的损伤作用

将培养的人脐静脉内皮细胞(EC)分别暴露于正常或高脂血清低密度脂蛋白(N-LDL或H-LDL)。当胆固醇(Ch)量大于300μg/ml培液(N-LDL)或100μg/ml培液(H-LDL)时EC开始出现损伤。Ch量越大,孵育时间越长,细胞损伤越重。相同Ch量的H-LDL较N-LDL有更强的毒性作用。     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞作用的研究

目的 通过观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)对内皮细胞形态及增殖活力的影响,从内皮细胞角度评价As2O3防治经皮冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄的作用。方法 以不同浓度As2O3（0.01 μmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L和10 μmol/L）作用于传代培养的人静脉内皮细胞株（EVC-304）,分别培养24 h、48 h和72 h观察细胞形态、绘制细胞生长曲线,并行MTT比色法观察As2O3对内皮细胞增殖活力〔吸光度(A)值〕的影响。结果 10 μmol/L的As2O3使细胞皱缩变圆,甚至浮起、碎裂。≤1 μmol/L的As2O3作用于内皮细胞后,细胞形态无明显变化。细胞计数显示,As2O3浓度高于1 μmol/L时,内皮细胞数明显降低。MTT比色法显示:As2O3浓度低于1 μmol/L,A值与对照组比较无差异,在1~10 μmol/L浓度范围内,A值明显降低（P<0.05）,提示细胞增殖活力受到抑制。结论 高浓度As2O3对内皮细胞形态有破坏作用,并显著抑制内皮细胞增殖,且抑制作用具有时间及剂量依赖性。低浓度的As2O3则对内皮细胞形态及增殖活力无影响。     

别嘌呤醇对高糖诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞的保护作用

目的探讨别嘌呤醇对高糖损伤后的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的保护作用及其机制。方法以HUVEC为研究对象,体外培养至第三代,分为：①20mmol／L高糖损伤对照组;②别嘌呤醇保护组（浓度分别为0．1mmol／L、0．2mmol／L、0．3mmol／L）;③维生素C阳性对照组（浓度为100mg／L）。不同浓度别嘌呤醇及维生素C先与HUVEC孵育24h,再加入20mmol／L高糖诱导损伤48h,测定各组细胞上清液中一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）含量及细胞凋亡率。结果别嘌呤醇（0．1mmol／L、0．2mmol／L、0．3mmol／L）药物保护组的细胞凋亡率低于20mmol／L高糖组,其中以0．3mmol／L更为明显（P〈0．01）;细胞培养液中SOD、NO的量均较20mmol／L高糖组增高,其中以0．3mmd／L别嘌呤醇组更为明显（P〈0．01）。药物保护组细胞培养液中合成MDA、ICAM-1较波动性高糖组降低,且在一定浓度范围内（0．05-49．30mmol／L）呈浓度依赖性（P〈0．05）。结论①别嘌呤醇对高糖体外诱导的HUVEC损伤有保护作用,呈浓度依赖性。②别嘌呤醇对高糖体外诱导HUVEC损伤保护作用的机制包括抑制氧化应激、炎症反应及细胞凋亡。     

环孢素A在心肌缺血再灌注损伤中的心脏保护作用研究进展

越来越多的证据显示线粒体通透性转换孔（mPTP）的开放在心肌缺血再灌注损伤中发挥着关键作用。尽管其结构仍不明确,但亲环素D却是其主要的组成成分之一。环孢素A是一种有效的免疫抑制剂,可结合于线粒体亲环素D,从而抑制mPTP的开放。许多动物实验及部分小规模临床研究表明,其可以通过抑制mPTP而减少心肌梗死面积。然而,也有研究提示环孢素A并没有心脏保护作用。现就环孢素A在心肌缺血再灌注损伤中可能的心脏保护作用机制、相关的动物实验模型及临床研究、可能的影响因素及进一步研究方向进行综述。     

牛主动脉蛋白聚糖对培养的人脐静脉内皮细胞生长的影响

为观察牛主动脉中蛋白聚糖对培养的人脐静脉内皮细胞生长的影响及其在动脉粥样硬化形成中的作用，用解聚提取，离子交换及凝胶过滤柱层析法从牛主动脉内，中膜分离出硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、硫酸软骨素蛋白聚糖和硫酸皮肤素－硫酸软骨素蛋白聚糖。     

氧化型高密度脂蛋白对内皮细胞的损伤作用

目的 探讨氧化高密度脂蛋白（ox-HDL）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的损伤作用.方法 体外培养HUVECs与不同浓度（50～200 mg/L）ox-HDL共孵育,用普通光镜和荧光显微镜分别观察HUVECs细胞形态及核形态的变化,用噻唑兰（MTT）比色法检测细胞存活状况.结果 ox-HDL使内皮细胞数目减少,形态改变;Hoechst 33258染色后可见大量的细胞核浓缩呈高亮度蓝色荧光的凋亡细胞.MTT结果显示,细胞存活率下降,且呈剂量依赖性.结论 ox-HDL可导致内皮细胞受损,从而促进动脉粥样硬化的发生、发展.     

腺苷对人静脉内皮细胞增殖的影响

目的探讨腺苷对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）增殖的影响。方法MTT法观察腺苷的最佳作用浓度及最佳作用时问。结果4％FBS浓度下，腺苷具有明显的促HUVEC增殖作用，为最佳浓度。在10-^4 mol／L腺苷终浓度对细胞增殖有明显的促进作用，为最佳腺苷浓度。腺苷的促生艮作用在24h即出现，在48h已达到较高水平。结论在血供基本被阻断或血流基本正常的情况下，腺苷可能对细胞增殖尤影响；但在m流减少的情况下，腺苷的应用可以促进内皮细胞增殖，可能对血管新生有启动作用。     

血管内皮生长因子对培养内皮细胞合成一氧化氮的影响

目的 :探讨血管内皮生长因子 （VEGF） /血管渗透因子 （VPF）对内皮细胞 （EC）分泌一氧化氮 （NO）的影响。方法 :将培养的人脐静脉内皮细胞 （HUVEC）随机分为 6组 （n=6 /组 ） :1正常对照组 ;2 VEGF 1ng/ m l;3VEGF 10ng/ m l;4VEGF 10 0 ng/ m l;5低氧组 ;6低氧组 +VEGF 10 0 ng/ m l。采用硝酸还原酶法测定培养液中的 NO2 - ,NO3 -的含量以反映 NO水平。结果 :VEGF促进正常 EC分泌 NO,在一定浓度范围内呈剂量依赖性 ;低氧损伤 EC,使其分泌 NO减少 ;VEGF 10 0 ng/ ml预处理可保护 EC免受低氧损害 ,保持正常分泌 NO的功能。结论 :VEGF能够调节 EC的功能 ,为其促血管形成作用中 EC分裂、增殖、迁移奠定物质基础     

融合蛋白PEP-1-SOD1预处理对缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究

目的构建原核表达载体pET15b-PEP-1-SOD1,观察表达的融合蛋白PEP-1-SOD1能否转导入人脐静脉内皮细胞,以及转导的PEP-1-SOD1融合蛋白能否减轻人脐静脉内皮细胞的缺氧／复氧损伤。方法构建原核表达载体pET15b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,分别转化基因工程菌BL21（DE3）,表达出N端带有6个组氨酸“标签”的SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白。将纯化后的融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察这种融合蛋白的转导能力及其在细胞内的活性。采用体外培养的人脐静脉内皮细胞建立缺氧／复氧损伤模型,检测不同浓度的PEP-1-SOD1对氧化应激损伤的人脐静脉内皮细胞的生存率、乳酸脱氢酶和丙二醛含量的影响。结果PEP-1-SOD1融合蛋白能高效地转导人体外培养的人脐静脉内皮细胞,并表现出剂量依赖性和时间依赖性的特点,2μmol/L PEP-1-SOD1-30min组SOD1酶活性为（60．88±6．73）U／ml,显著高于对照组酶活性（41．06±4．19）U／ml,P〈0．01,转导入细胞内的PEP-1-SOD1融合蛋白的活性可以维持至24h。PEP-1-SOD1各浓度组均提高缺氧／复氧人脐静脉内皮细胞的生存率,减少乳酸脱氢酶的释放量,降低丙二醛含量。结论PEP-1-SOD1融合蛋白能直接以天然有活性的形式转导入人脐静脉内皮细胞内,且能明显减轻人脐静脉内皮细胞的缺氧／复氧损伤。这种蛋白转导方式,为用SOD1防止在体缺血／再灌注损伤的研究奠定了基础。     

血管内皮生长因子对培养内皮细胞增殖和移行的影响

目的　研究低氧培养心肌细胞分泌出的血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白对培养内皮细胞增殖和移行的影响。方法　将培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)分为 4组 :正常对照组 ,低氧培养组 ,含VEGF的低氧培养心肌细胞分泌液组 (分泌液组 ) ,分泌液 +低氧培养组。分别采用流式细胞仪、免疫组织化学等方法检测VEGF对HUVECs细胞周期、增殖细胞核抗原表达、氚一亮氨酸掺入量及HUVECs移行的影响。结果　VEGF增加正常培养和低氧培养HUVECs由静止期 DNA合成前期向DNA合成期的转换 ,使DNA合成期及DNA合成后期 分裂期细胞数增加 ,从而促进HUVECs增殖 ,并使常氧和低氧培养HUVECs增殖细胞核抗原的表达、氚一亮氨酸掺入量及移行细胞数目增加。低氧抑制HUVECs的增殖和移行 ,VEGF可拮抗低氧对HUVECs增殖、移行的抑制作用。结论　低氧培养心肌细胞分泌出的VEGF蛋白不仅增加常氧培养HUVECs增殖、移行 ,而且能够拮抗低氧的抑制作用     

VEGF对体外培养的脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）对体外培养的脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖和迁移能力的影响。方法以VEGF基因转染HUVECs和在培养液中加入VEGF蛋白后培养HUVEC,用RT-PCR法检测VEGF mRNA的表达鉴定转染的效果,用3H-TdR掺入法检测VEGF对HUVECs增殖的影响,用划痕实验观察VEGF对HUVECs迁移能力的影响。结果转染VEGF基因的HUVECs中VEGFmRNA的表达高于对照组,表明转染成功。3H-TdR掺入法和划痕实验显示,转染VEGF基因和在培养液中加入VEGF蛋白,都可促进体外培养的HUVECs增殖和迁移。结论VEGF能够促进体外培养的HUVECs增殖和迁移;将VEGF基因导入细胞与直接在培养基中加入VEGF蛋白具有相同的效果。     

回转器模拟失重对静脉内皮细胞形态、增殖和周期的影响

目的:探讨回转器模拟失重对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)形态、增殖和周期的影响。方法: 以HUVECs为研究对象,采用回转器模拟失重,在倒置显微镜下观察模拟失重后细胞形态的变化,用细胞计数法测定细胞的增殖情况,用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期。结果: 模拟失重后,HUVECs多呈圆形,可见细胞重叠或聚集生长。回转器模拟失重后12 h、24 h和36 h,细胞周期明显阻滞在G0+G1期（P<0.05）,而细胞计数则无明显改变。结论: 模拟失重可使HUVECs的形态发生一定改变,使HUVECs的细胞周期阻滞。     

ANGPTL4对LPS诱导的人肺微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨ANGPTL4对脂多糖(LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)损伤的保护作用。方法以体外培养的HPMVECs作为实验对象,将细胞随机分为四组:正常对照组(C组)、LPS诱导组(L组)、ANGPTL4表达组(A组)和ANGPTL4表达+LPS诱导组(A+L组)。各处理组细胞分别培养12、24、48、72 h后采用CCK-8法观察细胞增殖;细胞孵育12 h后,采用荧光定量PCR和Wester-blot检测ANGPTL4表达水平,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量。结果与C组相比,L组和A组细胞的ANGPTL4表达明显增高(P0.01);与L组相比,A+L组细胞的ANGPTL4表达明显增高(P0.01),LPS刺激可以抑制细胞增殖,而经过pc DNA3.1-ANGPTL4重组质粒转染后这种抑制作用又被削弱了;高表达ANGPTL4抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和MCP-1的生成。结论 ANGPTL4可以减弱LPS抑制HPMVECs细胞增殖的作用,降低细胞中TNF-α,IL-1β和MCP-1等炎症因子的生成,这些效应可能是ANGPTL4保护肺微血管内皮细胞的作用机制之一。     

胰淀素对血管内皮细胞屏障功能的影响

目的 :进一步观察amylin对血管内皮细胞屏障功能的影响。　 方法 :采用内皮细胞二室弥散系统观察amylin对人脐静脉内皮细胞系 (HUVEC)通透性的影响。通透性用生物素标记的白蛋白跨内皮细胞单层的通透率表示。用囊泡结构特异性探针FM1- 4 3标记内皮细胞囊泡结构 ,在激光共聚焦显微镜下观察并进行定量测定。　 结果 :内室单层内皮细胞在amylin浓度为 0、0 1、1,10和 10 0 (nmol/L)的处理 12h后 ,内皮细胞白蛋白通透率分别是 :(5 8± 0 80 )、(6 1± 0 4 2 )、(9 4± 0 35 )、(18 2± 1 72 )和 (2 2 7± 3 9) % ,随amylin浓度的增加白蛋白通透率相应增加。而amylin(10 0nmol/L)与内皮细胞共孵育在 0、0 2 5、0 5、1、3、6、12h白蛋白通透率分别是 :(5 4± 0 3)、(5 8±0 5 )、(6 3± 1 1)、(9 8± 0 6 )、(11 6± 0 3)、(16 9± 1 6 )、(2 0 2± 5 1) % ,随amylin作用时间的延长白蛋白通透率亦相应增加。内皮细胞胞浆内囊泡结构用特异分子探针染色后清晰可见。浓度为 0、0 1、1、10、10 0nmol/L的amylin与内皮细胞共孵育 2h后 ,囊泡吞噬结构染色的平均荧光强度分别是 :2 0 2± 2 6、2 30± 39、36 1± 4 1、4 5 6± 5 7和 72 0±84 /mm2 。随amylin剂量的增加荧光强度相应地增加。amyl     

Effects of antioxidants on homocysteine thiolactone-induced apoptosis in human umbilical vein endothelial cells

Background and objectives Hyperhomocysteinemia is an independent risk factor for cardiovascular disease. Homocysteine thiolactone (HcyT), one of the homocysteine metabolites in vivo, is toxic both in vivo and in vitro. The aim of this study was to investigate the effect of HcyT on apoptotic damage in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and the role of antioxidants in the reduction of HcyT-induced apoptosis. Methods HUVECs were cultured in DMEM supplemented with 20% heat inactivated fetal bovine serum cell cultures were maintained in a humidified 5% CO2 atmosphere at 37℃. Cytotoxicity was determined by MTT assay, which consists of hypodiploid cells with propidium iodide labeling and intracellular reactive oxygen species levels using 2',7'-dichlorofluorescein diacetate as the probe by flow cytometry. Results HcyT (250-2000μM) induced HUVECs apoptosis in a time- and concentration-dependent manner. Reactive oxygen species levels rose in response to increasing HcyT concentrations at 24-h incubation. The reduction of cell apoptosis by N-acetylcysteine, vitamin E, or pyrrolidine dithiocarbamate, occurred simultaneously with a significant decrease in intracellular reactive oxygen species levels. Conclusion HcyT exerts its cytotoxic effects on endothelial cells through an apoptotic mechanism involving cellular reactive oxygen species production. The capacity of N-acetylcysteine, vitamin E, and pyrrolidine dithiocarbamate to scavenge HcyT-induced cellular reactive oxygen species correlates well with their efficiency to protect against HcyT-promoted apoptotic damage. The protective effect of pyrrolidine dithiocarbamate on cell apoptosis indicates HcyT-generated hydrogen peroxide may provoke cell apoptosis via activating nuclear factor-kappa binding protein.     

卡托普利对不同压力培养的血管内皮细胞增殖的影响

目的　观察 0mmHg、12 0mmHg、180mmHg三种压力培养对离体人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcells ,HUVECs)增殖的影响 ,及血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利 (Captopril,Cap)干预后对HUVECs有否保护作用。方法　采用改良的Jaffe s法 ,取 4～ 6代HUVECs制成单细胞悬液。采用 0mmHg、12 0mmHg、180mmHg三种条件培养 ,同一培养条件分为三组 :对照组、药物组 1[卡托普利 (Cap) ,1× 10 -6mol/L ,Cap1]、药物组 2 (Cap ,1× 10 -5mol/L ,Cap2 ) ,共九组。分别用MTT法、形态学方法观察并测定不同压力培养条件 16h、2 4h、4 8hHUVECs增殖情况。结果　与 0mmHg比较 ,12 0mmHg培养在 16h、2 4h、4 8h促进细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,180mmHg培养 16h对细胞生长有促进作用 (P <0 0 5 ) ,而 2 4h、4 8h则对细胞生长呈现抑制 (P <0 0 5 )。用Cap干预后 ,在 1× 10 -5mmol/L、1× 10 -6mmol/L两种浓度范围 ,随着浓度的升高 ,180mmHg对HUVECs增殖的抑制作用得到控制 (P <0 0 1)。结论　 12 0mmHg可促进HUVECs增殖 ;180mmHg 16h促进HUVECs增殖 ,2 4h、4 8h对HUVECs生长呈抑制作用 ,而Cap能改善 180mmHg对HUVECs生长的抑制作用。