淫羊藿甙对HL－60细胞增殖与分化的影响

为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂，采用ＭＴＴ比色分析法和形态定量分析技术检测了淫羊藿甙对人急性早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）增殖与分化的影响。结果表明：淫羊藿甙可以抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，呈剂量依赖关系；选择６２．５、１２５、２５０ｍｇ·Ｌ－１进行动态观察，发现１２ｈ后即可发挥抑制作用。淫羊藿甙１００ｍｇ·Ｌ－１作用４８ｈ后ＨＬ－６０细胞ＮＢＴ还原能力明显增强（Ｐ＜０．０１），细胞核面积减小，平均光密度（ＭＯＤ）增加，积分光密度减小（ＩＯＤ）；光镜观察结果显示，淫羊藿甙作用后的ＨＬ－６０细胞发生明显变化，细胞核体积减小，细胞核呈杆状或分叶状。上述结果提示，淫羊藿甙对ＨＬ－６０细胞有诱导分化作用。     

十四酰佛波乙酸酯抑制三尖杉酯碱诱导的人白血病HL—60细胞凋亡

目的：研究十四酰佛波乙酸酯（ＴＡ）预处理后，三尖杉酯碱（Ｈａｒ）和喜树碱（Ｃａｍ）诱导人白血病ＨＬ－６０细胞凋亡的变化。方法：染色质凝集观察，流式细胞术，ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳和点杂交。结果：ＴＡ２００ｎｍｏｌ·Ｌ＾－１预处理ＨＬ－６０细胞６ｈ，明显抑制Ｈａｒ０．１ｍｇ·Ｌ＾－１作用３ｈ诱导的细胞凋亡，但只部分抑制Ｃａｍ０．２ｍｇ·Ｌ＾－作用３ｈ诱导的细胞凋亡。ＴＡ预处理ＨＬ－６０细胞明显降低ｃ－ｍ     

Inhibition of haringtonine-induced apoptosis by tetradecanoylphorbol acetate in human leukemia HL-60

目的：研究十四酰佛波乙酸酯（ＴＡ）预处理后，三尖杉酯碱（Ｈａｒ）和喜树碱（Ｃａｍ）诱导人白血病ＨＬ６０细胞凋亡的变化．方法：染色质凝集观察，流式细胞术，ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳和点杂交．结果：ＴＡ２００ｎｍｏｌ·Ｌ－１预处理ＨＬ６０细胞６ｈ，明显抑制Ｈａｒ０１ｍｇ·Ｌ－１作用３ｈ诱导的细胞凋亡，但只部分抑制Ｃａｍ０２ｍｇ·Ｌ－１作用３ｈ诱导的细胞凋亡．ＴＡ预处理ＨＬ６０细胞明显降低ｃｍｙｃ基因的表达．结论：ＴＡ明显抑制由Ｈａｒ和部分抑制由Ｃａｍ诱导的ＨＬ６０细胞凋亡，而且ＴＡ预处理的细胞中ｃｍｙｃ基因表达明显下降，这可能导致了对诱导细胞凋亡的抑制．     

花粉生物活性肽的免疫刺激作用

目的：黑麦花粉中提取的生物活性肽（ＢＰ）及合成类似活性肽对小鼠、人和ＨＬ－６０细胞的作用。方法：用ＭＴＴ法测定ＢＰ与ＨＬ－６０细胞共培养７２ｈ时ＨＬ－６０细胞的增殖反应，间接免疫荧光测定ＢＰ激活人淋马细胞产生ＣＤ２５阳笥细胞百分率，与ＢＰ共培养的上清液中可溶性白介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）的含量用ＥＬＩＳＡ测定。结果：结果：ＢＰ与ＨＬ－６０细胞共培养７２ｈ时ＨＬ－６０细胞的增殖反应，ＭＴＴ测定ＯＤ     

中药淫羊藿诱导HL—60

淫羊藿为传统补肾中药，近年来有文献报道其在免疫调节诱导ＨＬ－６０细胞分化方面的作用。本文利用ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞术等方法研究发现，淫羊藿对ＨＬ－６０细胞还具有诱导程序死亡作用。实验结果提示，淫羊藿为一潜在抗肿瘤药物，其诱导细胞程序死亡机制有待进一步探讨。     

Securinine induced apoptosis in human leukemia HL 60 cells 1

目的：研究一叶秋碱能否诱导ＨＬ６０细胞凋亡．方法：用ＭＴＴ法检测一叶秋碱对细胞增殖影响;应用流式细胞仪检测凋亡细胞数;采用琼脂糖凝胶电泳法观测ＤＮＡ碎片;透射电镜观察凋亡的形态改变．结果：一叶秋碱５－８０ｍｇ·Ｌ－１能诱导ＨＬ６０细胞凋亡．电镜观察到典型的凋亡形态学改变,电泳呈现出阶梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡率随剂量的增高而升高．ＭＴＴ法示一叶秋碱抑制ＨＬ６０细胞增殖,并且呈时间、剂量依赖性,药物作用１２ｈ的ＩＣ５０（９５％可信区间）分别为２７（１５－４７）ｍｇ·Ｌ－１．结论：一叶秋碱诱导ＨＬ６０细胞凋亡     

猪胆酸钠诱导分化的HL-60细胞的超微结构变化及其呼吸爆发功能

观察药用猪胆酸钠诱导体外培养的人早幼粒白血病细胞系ＨＬ－６０细胞分化过程中超微结构的变化及其细胞呼吸爆发功能特征．猪胆酸钠（４００ｍｇ·Ｌ－１终浓度）诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中，细胞超微结构发生明显改变，细胞核浆比例降低，细胞核变小，核仁减少，胞核出现深浅不等的凹陷；多数细胞出现不规则的表面突起，细胞表面伸出不规则大型钝形伪足，细胞浆内可见部分线粒体空泡化及内质网扩张，核内染色质凝聚成块并边集，核扭曲，断裂．同时，用电子自旋共振波谱仪直接检测到猪胆酸钠诱导分化的ＨＬ－６０细胞发生呼吸爆发时产生羟自由基，并消耗细胞外介质中的氧     

粉防己碱和蝙蝠葛碱对人白血病细胞株HL－60和K_（562）的生长抑制作用

研究粉防己碱（Ｔｅｔ）和蝙蝠葛碱（Ｄａｎ）对人早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０和人红白细胞白血病Ｋ５６２增长的影响，并与维拉帕米（Ｖｅｒ）和三氟拉嗪（ＴＦＰ）比较。结果Ｔｅｔ和Ｄａｕ对ＨＬ－６０和Ｋ５６２的增长有很强抑制作用，呈浓度依赖性，ＩＣ５０分别为３．０，４．４ｍｇ·Ｌ－１和３．３，５．６ｍｇ·Ｌ－１；Ｔｅｔ还抑制ＨＬ－６０细胞的分裂相。同样条件下Ｖｅｒ和ＴＦＰ对ＨＬ－６０和Ｋ５６２也有抑制作用，但较前两者为弱。Ｔｅｔ和Ｄａｎ为双苄基异喹啉生物碱，已被阐明有Ｃａ２＋拮抗剂和ＣａＭ抑制剂活性，提示其抑制肿瘤细胞生长与此有关，并有可能代替常用的Ｃａ２＋拮抗剂Ｖｅｒ与化疗药联合应用于肿瘤的治疗。     

乌苯美司对白血病细胞生长及P388淋巴结转移的抑制作用

目的：观察乌苯美司对白血病细胞生长及淋巴结转移的抑制作用。方法：将ＨＬ－６０，Ｋ５６２，ＭＴ－１，ＭＴ－２，ＭＯＬＴ－４和Ｒａｊｉ白血病细胞分别与乌苯美司培育，计数存活细胞，测定ＭＴ－１和ＭＴ－２的［＾３Ｈ］ＴｄＲ参入量及Ｐ３８８细胞淋巴结转移。结果：乌苯美司４５００ｍｇ／Ｌ使ＨＬ－６０，ＭＴ－１，ＭＴ－２和Ｒａｊｉ细胞存活数明显减少（Ｐ〈０．０１），０．１，１，１０，１００和１０００ｍｇ／Ｌ可明     

东北淫羊藿活性成分研究

自东北淫羊藿（ＥｐｉｍｅｄｉｕｍｋｏｒｅａｎｕｍＭａｋａｉ）的地上部分，分离得到４个单体化合物，根据理化数据和光谱分析鉴定为：金丝桃甙（ｈｙｐｅｒｉｎ）（１），淫羊藿甙－Ⅱ（ｉｃａｒｉｓｉｄⅡ）（２）．淫羊藿甙－Ⅰ（ｉｃａｒｉｓｉｄⅠ）（３）和淫羊藿甙（ｉｃａｒｉｉｎ）（４）．其中，金丝桃甙在本种植物中首次分离得到，同时，我们又利用１Ｈ－１Ｈｃｏｓｙ和１３Ｃ－１Ｈｃｏｓｙ谱，对原文献中化合物２部分Ｃ信号的归属进行了修正，另外，药理实验结果表明：淫羊藿甙（ｉｃａｒｒｉｎ）对氢化可的松造成的小鼠阳虚有一定的拮抗作用．     

三萜皂苷混合物ardisiacrispin(A+B)对人白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及机制探讨

目的观察三萜皂苷混合物ardisiacrispin(A+B)对人白血病HL-60细胞增殖的抑制作用,并对其可能的作用机制进行探讨。方法应用MTT法测定增殖抑制作用,采用流式细胞术(FACS)分析阻断细胞周期及诱导凋亡作用,采用PI荧光染色观察凋亡小体的存在,以Western blot分析凋亡相关蛋白表达变化。结果ardisiacrispin(A+B)可明显抑制HL-60细胞的增殖,具有浓度依赖性,作用48h的IC50值为4.2mg·L-1。ardisiacrispin(A+B)可阻断HL-60细胞于S期,在1.0～5.0mg·L-1范围内具有浓度依赖性,3.5mg.L-1ardisiacrispin(A+B)作用6、24和48h时,给药组中S期细胞比例分别为对照组的1.26、1.46和1.71倍。ardisia-crispin(A+B)可诱导HL-60细胞凋亡,在1.0～7.5mg.L-1浓度范围内具有浓度依赖性;此外,ardisiacrispin(A+B)可浓度依赖性地诱导PARP蛋白的裂解,2.5mg.L-1ardisi-acrispin(A+B)作用24h使裂解比例达到27.1%。结论Ardisiacrispin(A+B)可通过阻断细胞于S期、诱导凋亡来抑制HL-60细胞的增殖。     

淫羊藿苷体外抑制SIV感染诱导的CEMx174细胞凋亡

目的探讨淫羊藿苷体外抑制猴免疫缺陷病毒(Simi-an immunodeficiency virus,SIV)复制作用和抑制SIV感染诱导的CEMx174细胞凋亡的信号转导机制。方法细胞病变和间接免疫荧光法测定了淫羊藿苷对SIV复制的抑制作用,Annexin V和Propidiumiodide(PI)双染法测定淫羊藿苷对SIV感染导致CEMx174细胞凋亡的作用,放免法测定了SIV感染CEMx174细胞内cAMP含量和依赖cAMP的蛋白激酶活性。Western blot法测定了PKA依赖的组蛋白磷酸化的水平。结果用不同浓度的淫羊藿苷处理细胞后结果表明,其半数毒性浓度为134mg·L-1,半数抑制浓度是26mg·L-1,治疗指数为5.15。淫羊藿苷对感染细胞凋亡的抑制要比正常细胞为高(P<0.05)。50mg·L-1淫羊藿苷作用病毒感染细胞15min后降低正常和感染细胞内的cAMP含量,但对感染细胞的cAMP含量影响更加明显。50mg·L-1淫羊藿苷可以显著下调感染和正常细胞的PKA活性(P<0.05)。病毒感染可以使磷酸化的组蛋白-H3升高,50 mg·L-1淫羊藿苷作用2h后,可以降低磷酸化组蛋白-H3的水平。结论淫羊藿苷体外对SIV复制有一定抑制作用,SIV-mac251感染导致的细胞凋亡是cAMP-PKA信号转导通路激活的结果,而短时间淫羊藿苷处理SIVmac251感染的CEMx174细胞可以暂时减缓SIVmac251诱导的细胞凋亡过程。     

二烯丙基二硫启动人白血病HL-60细胞凋亡模型的建立

目的寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型。方法实验设未处理组、处理组和撤药组,分别采用细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Western blot等方法,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3表达率以及DNALadder、凋亡相关蛋白的检测。结果3.6mg.L-1DADS作用HL-60细胞1d,与对照组相比,细胞数没有明显变化,而作用2～6d,细胞数分别减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%。DADS作用1、2d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与未处理组(3.0%)差异无显著性,而作用3～5d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于未处理组(P<0.05)。DADS作用2～5d撤药后再培养至d6,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于未处理组的3.3%(P<0.05)。处理2～5d后,活化的caspase-3的表达率分别为10.0%、10.4%、14.9%、17.3%,均高于未处理组5.4%(P<0.05)。处理组中DADS处理4d后DNA凝胶电泳出现梯状条带,而DADS作用2～5d撤药后再培养至d6均出现明显梯状条带。Westernblot结果表明,从作用2d起,caspase-3表达开始上调,而Bcl-2表达开始下调。结论3.6mg.L-1DADS诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点为处理2d。     

盐酸小檗碱对HL-60细胞增殖与分化的影响

目的　研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL 6 0细胞增殖与分化的影响。方法　应用生长曲线测定法、克隆形成实验检测药物对HL 6 0细胞生长抑制作用 ;细胞分化根据细胞形态、硝基蓝四氮唑 (NBT)还原能力、细胞表面标记的改变来决定 ;细胞周期变化用流式细胞仪测定。结果　HL 6 0细胞经小檗碱处理后生长明显受抑 ,呈时间和浓度依赖性。选择 1、2、4、8mg·L-1小檗碱作用于HL 6 0细胞 ,动态观察发现 ,HL 6 0细胞向成熟细胞分化 :细胞核变小 ,核浆比减少 ;NBT还原能力增强 ;CD11b表达升高。细胞周期分析发现 ,小檗碱处理后细胞阻滞于G0 /G1期 ,S期细胞明显减少。结论　盐酸小檗碱可抑制HL 6 0细胞的增殖 ,并诱导HL 6 0细胞向成熟细胞分化。     

淫羊藿苷对破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响

目的研究淫羊藿苷对破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响,评价淫羊藿苷对骨质疏松的预防及治疗作用。方法采用1,25-(OH)2D3诱导兔骨髓单核细胞形成破骨细胞样细胞以及原代分离的乳兔成熟破骨细胞与骨片共培养的方法,考察淫羊藿苷对破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响。结果浓度为100、50μmol.L-1的淫羊藿苷明显抑制1,25-(OH)2D3诱导兔骨髓单核细胞形成破骨细胞样细胞的数目,当其浓度为100、50、10μmol.L-1时,明显抑制破骨细胞的骨吸收功能,具体表现在吸收陷窝数目及表面积均明显减少。结论淫羊藿苷不仅可以明显抑制破骨细胞的分化,同时具有抑制破骨细胞的骨吸收功能的作用,提示淫羊藿苷具有改善骨吸收功能亢进的潜力。     

野木瓜果实总皂苷体外抗肿瘤作用研究

目的 研究野木瓜果实总皂苷对人肺癌细胞A549、人肝癌细胞BEL-7402和人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响.方法 将生长状态良好的A549细胞、BEL-7402细胞和SGC-7901细胞分为7组:阴性对照组,野木瓜果实总皂苷组(40、80、160、320、640 mg·L-1)组和丝裂霉素组(10 mg·L-1),药物作用12、24、48 h后,MTT法测定细胞增殖抑制率.结果 野木瓜果实总皂苷能显著抑制A549细胞、BEL-7402细胞和SGC-7901细胞的增殖,呈一定剂量和时间依赖关系,作用A549细胞12、24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为492.38、293.43、141.84 mg·L-1;作用BEL-7402细胞12、24、48 h的IC50分别为427.74、243.91、101.79 mg·L-1;作用SGC-7901细胞12、24、48 h的IC50分别为463.35、256.77、113.22 mg·L-1.结论 野木瓜果实总皂苷有明显抑制A549细胞、BEL-7402细胞和SGC-7901细胞体外增殖的作用,其中BEL-7402细胞对野木瓜果实总皂苷最为敏感.     

hTERT反义寡核苷酸增强DDP介导细胞凋亡作用

目的研究端粒酶催化亚基(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)对HeLa细胞端粒酶活性的抑制及其对顺铂(DDP)诱导细胞凋亡的影响。方法用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)定量端粒酶重复扩增法(TRAP)检测细胞的端粒酶活性。观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪对细胞凋亡进行定量分析。结果ASODN作用后,细胞的端粒酶活性明显降低,且这种作用具有明显的时间和剂量依赖性。0.05、0.1μmol.L-1和0.2μmol.L-1的硫代ASODN治疗后,HeLa细胞的端粒酶活性分别下降了21.8%、52.4%和71.1%。0.2μmol.L-1的硫代ASODN作用HeLa24、48h和72h后,细胞的端粒酶活性分别下降了12.48%、38.27%和71.10%。细胞转染0.2μmol.L-1浓度的ASODN24h后再与1.5、3.0mg.L-1浓度的顺铂联合作用,吖啶橙染色可见典型的凋亡形态,并且凋亡百分率(50.35%、29.67%)分别与RSODN联合顺铂组(19.33%、12.13%)、单用顺铂组(19.67%、11.38%)比较,差异有显著性(P<0.05)。结论hTERT反义寡核苷酸能有效抑制其端粒酶活性,并且促进DDP诱导HeLa细胞凋亡。     

大蒜素对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究大蒜素(Allitridi)对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 分别以不同浓度大蒜素(25、50、100 mg·L-1)和顺铂(1.8 mg·L-1)干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞,药物干预24 h后经Hoechst染色后利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用MTT比色法测定大蒜素对Hep-2细胞的增殖抑制作用,采用FCM测定细胞周期分布、检测细胞凋亡率;采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达水平,Western-blot检测caspase-3蛋白表达.结果 大蒜素各组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞较空白对照组出现不同程度损伤,以大蒜素100 mg·L-1组损伤最为严重;大蒜素(50、100 mg·L-1)组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡数量明显增多、凋亡率显著升高,凋亡相关基因bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,促凋亡蛋白caspase-3表达显著上调,上述均差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 大蒜素对人喉癌Hep-2细胞生长具有抑制作用,其机制可能与大蒜素能够阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程、抑制细胞增殖并促进其凋亡有关.     

金荞麦Fr4诱导HL-60细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的研究金荞麦有效部位Fr4能否诱导HL-60细胞凋亡及对端粒酶活性的影响。方法用MTT法检测Fr4对细胞增殖的影响;光学显微镜和透射电镜观察细胞形态改变;Annexin-V/PI双染法检测细胞膜介导的凋亡;琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片;TRAP-PCR-ELISA检测端粒酶活性。结果金荞麦Fr4 60~240 mg.L-1能诱导HL-60细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞,电泳呈现出阶梯状条带,流式细胞仪检测到早期凋亡细胞数随剂量的增加而升高。MTT法示金荞麦Fr4抑制HL-60细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势,药物作用24 h的IC50为115 mg.L-1,Fr4诱导HL-60细胞凋亡过程中,端粒酶活性下降。结论金荞麦Fr4可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能与端粒酶活力下降有关。