雷公藤甲素对大鼠垂体促肾上腺皮质激素含量的影响

目的了解较长期使用雷公藤甲素对正常大鼠血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）含量的影响。方法雄性SD大鼠20只随机分为2组,连续灌胃7周,其中空白对照组10只：2％丙二醇2ml／kg,bid;雷公藤甲素组10只：2％丙二醇雷公藤甲素混溶液20μg／kg,bid。用放射免疫分析法检测两组大鼠血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）含量,用免疫细胞化学染色法观察ACTH在两组大鼠垂体中的表达。结果雷公藤甲素组血浆ACTH含量与空白对照组有显著差异;ACTH在雷公藤甲素组大鼠垂体中的表达高于空白对照组。结论雷公藤甲素对下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPAA）可能作用机制之一是兴奋垂体ACTH神经细胞,使垂体分泌、释放ACTH增加。     

雷公藤甲素对关节炎大鼠心功能的影响及其作用机制探讨

  目的  观察关节炎大鼠心功能的变化及雷公藤甲素的干预作用,探讨其可能的作用机制。  方法  将40只大鼠随机分为正常对照（NC）组、模型对照（MC）组、来氟米特（LEF）组和雷公藤甲素（TP）组。除NC组外,其余各组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备关节炎模型,制模第12天开始给药干预,TP组、LEF组大鼠分别灌胃其混悬液（TP 0.1 mg/mL,LEF 0.5 mg/mL）1 mL/100 g （体质量）,NC组、MC组大鼠相应时间灌胃等量的生理盐水,给药30 d。末次用药24 h后,采用左心室插管术检测大鼠心功能;应用酶联免疫吸附实验法测定血清超氧化物歧化酶(SOD）、丙二醛(MDA）、活性氧(ROS）、总抗氧化能力(T-AOC）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。采用荧光定量PCR法检测心组织Keap样蛋白1（Keap1）、肌腱膜纤维肉瘤(maf）、核因子-E2相关因子2(Nrf2）mRNA表达;采用Western blot法检测心组织Keap1、maf、Nrf2蛋白表达。  结果  ① 与NC组比较,MC组大鼠的心功能指标中心率（HR）、心脏指数（HI）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）升高,左心室压力上升和下降最大变化率（±dp/dtmax）降低(P均<0.01)。SOD、MDA、ROS、T-AOC、TNF-α升高,IL-10降低 (P均<0.01)。心组织Keap1、maf、Nrf2 mRNA和蛋白表达均升高（P<0.01）。② 与MC组比较,TP组大鼠HR、LVSP、HI、LVEDP降低,±dp/dtmax升高(P<0.01)。TNF-α、T-AOC、MDA、SOD、ROS下降,IL-10升高(P <0.05或 P <0.01)。TP组大鼠心组织Keap1、maf、Nrf2 mRNA和蛋白表达降低（P<0.01）。  结论  TP可改善关节炎大鼠心功能,其机制可能与提高心肌细胞抗氧化能力、减轻氧化应激损伤、抑制异常免疫炎症反应有关。     

黄芩素对雷公藤甲素诱导的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用

目的:探讨黄芩素对雷公藤甲素诱导的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用。方法:收集大鼠卵巢颗粒细胞,经原代培养24 h后,用雷公藤甲素损伤大鼠卵巢颗粒细胞;干预组添加终浓度分别为50、100、200μmol/L的黄芩素,对照组添加相同体积的二甲基亚砜(DMSO)溶液,继续培养24 h(或以上)。采用MTT法测定卵巢颗粒细胞活力,流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡,Western blot法检测与细胞凋亡相关蛋白的表达情况;测定各组卵巢颗粒细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量,评价抗氧化能力。结果:雷公藤甲素可显著降低大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导细胞凋亡,并使SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量增加;雷公藤甲素处理细胞的同时添加黄芩素干预后,卵巢颗粒细胞相对活力增加,细胞凋亡减弱,胞内SOD和GSH-Px活性升高,MDA含量降低。Western blot结果显示,经过雷公藤甲素处理,卵巢颗粒细胞中促凋亡蛋白Bax表达量显著上升,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显降低;黄芩素干预后可以显著下调Bax表达量,上调Bcl-2表达量。结论:黄芩素可明显改变卵巢颗粒细胞的抗凋亡及抗氧化能力,对雷公藤甲素诱导的细胞凋亡起保护作用。     

雷公藤甲素对大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素含量的影响

目的：了解较长期使用雷公藤甲素对正常大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）含量的影响。方法：雄性SD大鼠20只随机分为2组连续灌胃7周,其中空白对照组10只：2%丙二醇2mL·kg-1,日2次;雷公藤甲素组10只：2%丙二醇雷公藤甲素混溶液20μg·kg-1,日2次。用酶联免疫吸附实验检测各组大鼠血浆CRH含量。结果：雷公藤甲素组血浆CRH含量高于空白对照组。结论：雷公藤甲素对下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPAA）可能作用机理之一是兴奋下丘脑CRH神经细胞,使下丘脑合成、分泌CRH增加。     

雷公藤甲素对U251细胞自噬活性的影响及机制研究

目的 探讨雷公藤甲素对U251细胞自噬活性的影响及机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测雷公藤甲素对U251细胞的增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50);免疫荧光化学法测定细胞中LC3-Ⅱ表达,Western blot法测定LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、磷酸化P70、磷酸化Erk、磷酸化AKT蛋白的表达.结果 雷公藤甲素作用于U251细胞后,细胞增殖受抑制,24 h的IC50为0.73 μmol/L,48 h的IC50为0.27μmol/L.免疫荧光法测定6、12、24 h后LC3-Ⅱ水平增高;Western blot法测定LC3-Ⅱ水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值随时间增高;Beclin-1水平增高,磷酸化P70、磷酸化Erk表达降低、磷酸化AKT无明显变化.结论 雷公藤甲素可抑制U251细胞增殖并促进自噬,并可通过上调Beclin-1表达和抑制mTOR的活性来促进自噬.     

中药对线粒体自噬影响的研究进展

线粒体可通过自噬选择性清除受损线粒体,控制线粒体质量,保证线粒体功能,在细胞的正常生长中具有重要的意义.越来越多的研究显示,中药可以影响线粒体自噬,达到预防和治疗疾病的作用.近年来,中药在线粒体自噬方面的研究越来越多,本文分析汇总近年来国内外文献,通过对线粒体自噬主要通路的总结和中药对线粒体自噬影响在各个疾病的应用总结...     

雷公藤甲素对KA损伤大鼠星形胶质细胞的影响

目的:观察海人藻酸(Kainic acid,KA)海马内注射后星形胶质细胞的变化及雷公藤甲素(TRP)对其的影响。方法:90只SD大鼠(200～220g)随机分为3组:右侧海马注射生理盐水后生理盐水灌胃作为对照组(NS NS),右侧海马注射海人藻酸后生理盐水灌胃干预组(KA NS),右侧海马注射海人藻酸后雷公藤甲素灌胃干预组(KA TRP)。动物存活1天,3天,5天,7天,14天后免疫组织化学结合图像分析技术观察海马内星形胶质细胞形态和数目的变化。结果:(KA NS)组海马内星形胶质细胞数目明显增多,胞体明显增大,突起变短,变粗,与(NS NS)组相比差别具有显著性(p<0.05)(;KA TRP)组星形胶质细胞数量明显减少,胞体变小,突起变细长,与(KA NS)组相比差别具有显著性(P<0.05)。结论:KA注射后可导致大鼠海马内星形胶质细胞的激活,雷公藤甲素对KA诱导的星形胶质细胞的活化有抑制作用。     

多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬率的相关研究

目的了解多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠及正常大鼠颗粒细胞自噬的差异,从而探索PCOS发生的相关机制。方法 20只SD大鼠随机分为2组,10只建立来曲唑诱导PCOS大鼠动物模型(模型组),10只作为对照组,21d后抽取腹主动脉血,进行血清学指标测定,提取模型组与对照组大鼠卵巢颗粒细胞,MDC荧光染色及流式细胞术测定大鼠颗粒细胞自噬率,并比较其差异。结果模型组大鼠体质量高于对照组,血清睾酮、卵泡刺激素水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),模型组大鼠卵巢颗粒细胞自噬率(18.6%)明显高于对照组(3.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞的减少与颗粒细胞的自噬相关。     

雷公藤甲素对大鼠平滑肌细胞增殖和分泌细胞因子的影响

目的：观察雷公藤甲素（T10）对平滑肌细胞（SMCs)在肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素6（IL－6）和氧化低密度脂蛋白（ox-LDL)作用下增殖和分泌的影响。方法：体外主动脉SMCs培养，结晶紫染色法测定细胞数，细胞毒法测定TNF，依赖细胞株MTT比色测定IL－6。结果：T10浓度依赖性抑制TNF、IL－6和ox-LDL促SMCs增殖作用，对指数增殖期SMCs自分泌及在脂多糖（LPS）、ox-LDL刺激下分泌TNF、IL－6，TNF和IL－6的相互诱生亦有明显抑制（P＜0．01）。结论：T10可以抑制SMCs增殖和分泌TNF、IL－6。     

雷公藤甲素对生殖系统毒性的研究进展

雷公藤甲素为雷公藤的主要活性成分之一,也是雷公藤片、雷公藤多苷片等制剂的主要有效成分。它具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节等药理作用,是热点研究的天然活性化合物。但是,雷公藤甲素的副作用在很大程度上影响了其在临床上的应用,其中对生殖系统的毒性及抗生育作用尤为明显,特别是对雄性生殖系统的影响。综述了雷公藤甲素对男性睾丸、附睾和精子等,以及对女性生殖系统的损害及作用机制,并建议系统开展配伍减毒增效的研究,实现对配伍雷公藤甲素安全窗口的拓宽优化,为安全有效地应用于临床提供有力依据。     

雷公藤甲素对大鼠心肌毒性的实验病理学研究

目的阐明雷公藤甲素对大鼠心肌的毒性作用机制。方法雄性SD大鼠20只随机分为两组,包括正常对照组和雷公藤甲素组,连续灌胃7周后断头处死,用HE染色法和透射电镜法,从形态学方面探讨雷公藤甲素对大鼠心肌的病理损害和毒性机制。结果光镜下可见雷公藤甲素组大鼠左心室心肌间质扩张充血,有灶性出血;电镜下可见雷公藤甲素组心肌有水肿,少数线粒体肿胀,嵴突破坏,肌质网扩张。结论心肌对雷公藤甲素具有较高的敏感性,较长期服用雷公藤甲素对大鼠心肌具有毒性作用。     

雷公藤甲素对人体外周血淋巴细胞的影响

用健康人外周血淋巴细胞与雷公藤甲素(简称甲素)混合体外培养24 h,然后在光镜下和扫描电镜下观察甲素对淋巴细胞形态的影响。结果 0.5 mg％和 1 mg％甲素组淋巴细胞数分别为4.275×10~5±0.33/ml和2.950×10~5±0.19/ml;显微分光光度计测两组的淋巴细胞 DNA含量,其OD值分别为200.57±68.74和181.99±81.38,较对照组显著降低。培养后的淋巴细胞形态破坏。推测甲素通过干扰淋巴细胞DNA 合成抑制其免疫功能和损害其细胞结构。     

线粒体自噬与衰老

摘　要：线粒体是三羧酸循环的主要场所,几乎是所有真核细胞的能量供应站。衰 老伴随着线粒体功能的丧失和损伤线粒体的累积。线粒体自噬是细胞清除衰老损伤线 粒体的主要机制。细胞内的线粒体自噬不足,损伤线粒体的累积可以作为细胞衰老的 标志物。因此,研究线粒体自噬的机制、调控途径以及寻找干预线粒体自噬的策略,对于延缓衰老具有重要意义。该文阐 述了线粒体自噬与衰老相关的分子调控网络以及干预线粒体自噬延缓衰老的策略及研究方向,旨在推进靶向线粒体自 噬治疗衰老相关疾病的发展。     

雷公藤甲素调节佐剂关节炎大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织细胞自噬的实验研究

目的观察雷公藤甲素（TP）对佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜脾脏胸腺自噬相关基因（Atg）/自噬标记蛋白（LC3-Ⅱ）、Beclin1表达和血清细胞因子水平的影响。方法将大鼠随机分为4组:正常对照 (NC) 组,模型对照 (MC) 组,来氟米特（LEF）组,雷公藤甲素（TP）组,每组12只,后3组复制成AA大鼠模型。致炎后第13 d开始给药。NC组、MC组给予生理盐水灌胃,每天1 次;LEF组按5 mg/kg的剂量灌胃,每天1次;TP组按50 μg/kg的剂量,每天1次。连续给药30 d。观察大鼠关节及其病理形态学变化,ELISA法检测血清细胞因子B淋巴细胞刺激因子（BAFF）、白介素（IL）-1、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL- 15、IL-10表达,RT-PCR法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织 Atg5、 Atg7、 Atg12 mRNA,Western blot法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达。结果 治疗后,TP组和LEP组大鼠足跖肿胀度（E）和关节炎指数较MC组降低。与NC组比较,MC组大鼠血清BAFF、IL-1、TNF-α升高,IL-15、IL-10降低,滑膜 Atg5、 Atg12mRNA降低,脾脏 Atg5mRNA降低,脾脏 Atg7、 Atg12mRNA及胸腺 Atg12mRNA升高,滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1下降（P<0.05或0.01）。与MC组比较,TP组滑膜 Atg7、 Atg12 mRNA降低,脾脏 Atg5、 Atg7、 Atg12 mRNA及胸腺中 Atg5、 Atg7 mRNA降低, Atg12 mRNA升高;滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin 1升高（P<0.05）。与LEF组比较,TP组TNF-α、BAFF降低,E、IL-15升高（P<0.05或0.01）。TP组滑膜 Atg7mRNA及胸腺 Atg5、 Atg7 mRNA表达降低,胸腺 Atg12mRNA及脾脏 Atg5、 Atg7、 Atg12mRNA表达升高。结论TP通过调节滑膜、胸腺、脾脏组织细胞自噬,改善关节滑膜炎症反应。     

线粒体自噬受体FUNDC1研究进展

线粒体是细胞内能量代谢的主要场所,线粒体自噬是通过选择性清除受损和功能障碍的线粒体来阻止过量活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的产生,从而防止细胞死亡的过程,是维持线粒体稳态的关键.FUNDC1是一种新型线粒体自噬受体蛋白,在介导线粒体自噬方面发挥重要调节作用.本文主要就近年来线粒体自噬中FUNDC1调控机制及其病理生理意义的研究进展做一综述.     

线粒体自噬在百草枯中毒大鼠模型肺纤维化中的作用研究

目的:建立百草枯(paraquat,PQ)中毒大鼠模型,观察不同阶段肺线粒体膜电位(JC-1染色)、调控线粒体自噬关键性蛋白PINK1、Parkin及活性氧(reactive oxygen species,ROS)的变化,探讨线粒体自噬是否参与PQ中毒肺纤维化的发生。方法:成年雄性SD大鼠42只,随机分为正常对照组(n=6)、模型组(n=36),模型组下设2 h、12 h、1 d、3 d、7 d和14 d共6个时间点,每个时间点各6只大鼠。使用20%PQ溶液50 mg/kg一次性灌胃大鼠建立PQ中毒模型。通过流式细胞仪检测血红细胞ROS浓度;HE染色和Masson染色观察PQ中毒后肺组织病理损害;JC-1染色检测肺组织线粒体膜电位变化;Western blot检测PINK1、Parkin蛋白变化。结果:与对照组相比,随着PQ中毒时间的延长,肺纤维化病理评分较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05);PQ组ROS荧光阳性强度率比值在中毒后2 h显著升高,中毒后12 h达高峰后逐渐下降(P<0.05),中毒后14 d与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);PQ组肺组织JC-1红绿荧光比均较对照组降低,Western blot提示随中毒时间延长,PINK1及Parkin蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。PQ组肺组织JC-1红绿荧光比与PINK1及Parkin、肺纤维化病理评分均呈负相关(r=-0.890,P<0.01;r=-0.845,P<0.01;r=-0.794,P<0.01)。在PQ中毒12 h内,血红细胞ROS荧光强度阳性率与JC-1红绿荧光比呈负相关(r=-0.712,P<0.01),与PINK1及Parkin、肺纤维化病理评分呈正相关(r=0.571,P<0.01;r=0.484,P<0.01;r=0.602,P<0.05)。结论:PQ中毒导致大鼠产生了明显氧化应激,诱发了线粒体自噬。ROS的产生与线粒体自噬的发生密切相关,共同参与了PQ大鼠肺纤维化的发生发展。