缺氧缺血性脑病新生大鼠海马EphA5受体mRNA表达与神经元凋亡的关系

目的:探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠海马EphA5受体mRNA表达与神经元凋亡的关系?方法:7日龄SD大鼠制备HIE经典模型?分为HIE组?HIE+ EphA5-Fc组和对照组?采用qRT-PCR法测定各组新生大鼠海马EphA5受体mRNA表达,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测其凋亡的神经元?结果:①HIE组海马EphA5受体mRNA表达上调,在12 h达高峰,48 h仍高于对照组(P < 0.05);与HIE组比较,HIE+ EphA5-Fc组海马EphA5受体mRNA表达下调(P < 0.05),已恢复至对照组水平(P > 0.05);②HIE组海马神经元凋亡6 h开始升高,24 h达高峰;HIE+EphA5-Fc组海马神经元凋亡较HIE组显著下降(P < 0.05)?结论:阻断EphA5受体可抑制HIE新生大鼠海马EphA5受体mRNA表达上调及海马神经元凋亡,表明EphA5受体活化是缺氧缺血致脑损伤的机制之一?     

孕酮对缺氧缺血性脑病新生鼠脑组织中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的影响

目的探讨孕酮对缺氧缺血性脑病(HIE)新生鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。方法40只7日龄新生Wistar大鼠随机分成5组。假手术组、缺氧缺血组、4 mg孕酮组、8 mg孕酮组和16 m孕酮组。动物先行左侧颈总动脉结扎术,再吸入8%O2和92%N2的混合气体2.5 h建立HIE动物模型。药物组于建立模型前30 min给予不同剂量孕酮溶液,24h后动物全部处死,观察各组新生鼠脑组织中SOD活性和MDA含量的变化。结果缺氧缺血组新生鼠脑组织中SOD活性明显低于假手术组(P<0.01),丙二醛含量明显高于假手术组(P<0.01),药物组SOD活性明显高于缺氧缺血组(P<0.05),丙二醛含量低于缺氧缺血组(P<0.05)。结论孕酮通过升高新生鼠缺氧缺血时脑组织中SOD活性和降低丙二醛含量发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

基于PKC/ERK通路探讨败酱总黄酮对缺氧缺血性脑病新生大鼠神经元凋亡的影响

目的：探究败酱总黄酮对缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE）新生大鼠海马神经元凋亡的影响及其作用机制。方法：72只新生大鼠分为假手术组、模型组、白屈菜红碱组（5 mg/kg）、败酱总黄酮低剂量组（50 mg/kg）、败酱总黄酮高剂量组（100 mg/kg）、败酱总黄酮+白屈菜红碱组（100 mg/kg败酱总黄酮+5 mg/kg白屈菜红碱）,每组12只。采用结扎右颈总动脉和低氧处理2.5 h的方法构建HIE模型。白屈菜红碱组大鼠腹腔注射白屈菜红碱,败酱总黄酮各剂量组灌胃相应剂量的败酱总黄酮,败酱总黄酮+白屈菜红碱组大鼠在灌胃败酱总黄酮的同时腹腔注射白屈菜红碱,1次/d,连续给药7 d。通过神经功能缺损评分检测大鼠神经功能;苏木精-伊红（hematoxylin-eosin staining,HE）染色观察脑组织海马区病理学变化;原位末端转移酶标记（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）/神经特异核蛋白（neuronal nuclei antigen,NeuN）荧光双染观察海马神经元凋亡;Western blot检测脑组织蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）/细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）通路及凋亡相关蛋白的表达。采用氧-葡萄糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）构建细胞模型,进行CCK-8实验和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）测定,以分析败酱总黄酮对原代海马神经元的神经保护作用,并采用流式细胞仪分析细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果：与假手术组相比,模型组大鼠出现不同程度的神经功能缺损现象,神经功能缺损评分和NeuN⁺ TUNEL⁺ 细胞数、脑组织Bax及Caspase-3表达显著增加,Bcl-2表达、p-PKC/ PKC、p-ERK_1/2/ERK_1/2的比值显著降低（P＜0.05）,海马CA1区神经元肿胀、数量减少;与模型组相比,败酱总黄酮低、高剂量组神经功能改善,神经功能缺损评分和 NeuN⁺ TUNEL⁺ 细胞数、脑组织 Bax 及 Caspase-3 表达显著降低,Bcl-2 表达、p-PKC/ PKC、p-ERK_1/2/ERK_1/2的比值显著增加（P＜0.05）,海马CA1区神经元密度增加;且在败酱总黄酮干预的基础上联用白屈菜红碱可显著削弱败酱总黄酮对HIE后海马神经元凋亡的抑制作用。体外细胞实验中,败酱总黄酮显著增加OGD/R损伤后的细胞活力,逆转神经元损伤并减少海马神经元细胞凋亡,同时增加了海马神经元p-PKC/PKC、p-ERK_1/2/ERK_1/2的比值（P＜0.05）,在 OGD/R诱导的原代海马神经元中验证了败酱总黄酮对PKC/ERK通路的激活。结论：败酱总黄酮可抑制HIE新生大鼠海马神经元凋亡,其作用机制可能与激活PKC/ERK通路有关。     

TGF-β1对间歇性缺氧诱导海马神经元自噬的影响

目的 探讨TGF-β1对间歇性缺氧诱导海马神经元自噬的影响.方法 体内实验:将12只SD大鼠按完全随机分组方法分为对照组(N组)和间歇性缺氧组(IH组),Morris水迷宫评估大鼠认知功能;透射电镜、免疫组织化学观察神经元的自噬改变;Western blot检测LC3、P62及TGF-β1的表达.体外实验:将小鼠海马神...     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马CA1区NF-κB激活与神经元凋亡的关系

目的 探讨新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区核因子-κappaB (NF-κB)激活的动态变化及其与海马CA1区神经元凋亡的相关关系。方法 64只7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤组,每组32只,各组又均按时间点分为1、6、12、24 h四个亚组,每个亚组8只。经分离、结扎左颈总动脉和8%低氧暴露制备缺氧缺血性脑损伤模型。采用免疫组织化学检测左侧海马CA1区NF-κB P65核阳性表达以评价NF-κB活化情况和TUNEL法检测神经细胞凋亡情况。结果 缺氧缺血性脑损伤组各时间点海马CA1区NF-κB P65核阳性表达增强和神经细胞凋亡增多,与假手术组相应时间点比较差异有统计学意义（P<0.001);直线相关分析表明大鼠缺氧缺血后凋亡神经细胞数与NF-κB P65核阳性表达细胞数存在显著正相关（r=0.878,P<0.01）。结论 缺氧缺血诱导了海马CA1区NF-κB P65核移位即NF-κB激活;持续活化后的NF-κB可能与神经细胞的死亡机制有关。     

柴胡疏肝散对抑郁症大鼠行为学和海马神经元凋亡及自噬的影响

目的：观察柴胡疏肝散对抑郁症模型大鼠海马神经元凋亡和自噬的拮抗作用,探讨柴胡疏肝散抗抑郁症的作用机制。方法：60只雄性成年SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和给药组。通过给予慢性不可预见温和应激建立抑郁症模型;对照组和模型组给予同体积生理盐水,给药组在模型基础上给予柴胡疏肝散饮片溶液。采用糖水偏好实验、悬尾实验和Morris水迷宫实验进行行为学检测,流式细胞术检测大鼠海马神经元凋亡,Western blotting法检测自噬微管相关蛋白轻链3(LC-3)和自噬基因Beclin-1蛋白的表达。结果：与对照组比较,模型组和给药组大鼠糖水偏好百分比降低（P<0.05）,悬尾不动时间和逃避潜伏期延长（P<0.05）,细胞凋亡率、LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平升高（P<0.05）;与模型组比较,给药组大鼠糖水偏好百分比升高（P<0.05）,悬尾不动时间和逃避潜伏期缩短（P<0.05）,细胞凋亡率、LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：柴胡疏肝散具有显著的抗抑郁作用,可能与拮抗大鼠海马神经元凋亡和降低自噬有关。     

缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的影响

目的：研究缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及脑细胞凋亡的影响。方法：新生7日龄SD大鼠随机分为空白对照组(n=12)、假手术组(n=12)、缺氧缺血组(HIBD组，n=15)和缺氧预处理后缺氧缺血组(HPC组，n=21)，缺氧预处理组在行HIBD模型前24h吸8％浓度氧3h。各组大鼠均于14日龄处死。观察大鼠脑组织神经病理学变化；采用末端脱氧核苷酸介导的X-DUTP缺口末端标记法测定神经元凋亡的情况；采用定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法测定大鼠脑组织HIF-1αmRNA的表达。结果：HPC组脑皮层神经细胞变性坏死较HIBD组减轻，HPC组大鼠脑组织HIF-1α基因的表达较HIBD组下降，HPC组脑细胞凋亡数目较HIBD组减少。结论：缺氧预处理可保护新生大鼠缺氧缺血性脑损伤，减弱HIF-1α mRNA的表达，减少脑细胞凋亡。     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡的影响

目的:探讨神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡及FasL、Caspase-3表达的影响.方法:新生7 d龄Wistar大鼠54只随机分为3组:假手术组、生理盐水对照组(NS组)和NGF组,每组18只.NS组和NGF组动物制作新生大鼠缺氧缺血动物模型.假手术组只分离左侧颈总动脉后缝合切口,不进行动脉结扎和缺氧处理.NS组和NGF组术后分别腹腔注射生理盐水和NGF.各组分别于模型制作后1 d,3 d,6 d各处死6只动物,取脑组织切片行TUNEL染色检测神经细胞凋亡,同时行免疫组化检测FasL、Caspase-3的表达.结果:NGF组脑组织神经细胞凋亡和FasL、Caspase-3的表达明显低于NS组,但仍高于假手术组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:NGF可抑制新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞的凋亡,其机制可能与其减少FasL和Caspase-3的表达有关.     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤后自噬水平变化及其与细胞凋亡的关系

目的研究新生鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后自噬水平的变化规律,通过对Caspase-3的检测探讨自噬水平变化对细胞凋亡的影响。方法将实验动物分为假手术组、模型组、3．甲基腺嘌呤组及雷帕霉素组,采用Rice法建立HIBD模型-3．甲基腺嘌呤组及雷帕霉素组于造模后0．5h腹腔注射3．甲基腺嘌呤及雷帕霉素。应用免疫组织荧光化学法检测损伤侧大脑海马及皮层组织自噬相关蛋白Beclin1的表达,Western—blot法检测Beclin1表达变化规律,免疫组织化学法检测各组Caspase-3的表达。结果免疫组织荧光化学检测结果显示,缺氧缺血性脑损伤后能激活自噬现象发生。Western．blot检测结果显示,HIBD后2hBeclin1蛋白表达开始增加,24h达到高峰,持续到168h。免疫组织化学检测结果显示,3-甲基腺嘌呤组时间点Caspase-3阳性表达显著升高,雷帕霉素组Caspase-3阳性表达显著下降。结论新生大鼠HIBD模型能激活自噬现象发生,自噬水平增高可抑制细胞凋亡,自噬水平降低可增加细胞凋亡。     

亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤大脑皮质神经元一氧化 …

通过亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损在以质神经元一氧化氮合酶及血糖水平影响的研究,探讨亚低温对缺氧缺血性脑损 保护作用机制。建立新生鼠缺氧缺血性脑病标准化动物模型,将其随机分为对照组３１℃亚低温和３４℃亚低温干预组并设立假手术组,应用免疫组化染色观察大脑皮质区ＮＯＳ阳性神经元数目,并利用微量血糖监测仪测定血糖。     

缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的影响

目的 :研究缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA及脑细胞凋亡的影响。方法 :新生 7日龄SD大鼠随机分为空白对照组 (n =12 )、假手术组 (n =12 )、缺氧缺血组 (HIBD组 ,n =15 )和缺氧预处理后缺氧缺血组 (HPC组 ,n =2 1) ,缺氧预处理组在行HIBD模型前 2 4h吸 8%浓度氧 3h。各组大鼠均于 14日龄处死。观察大鼠脑组织神经病理学变化 ;采用末端脱氧核苷酸介导的X DUTP缺口末端标记法测定神经元凋亡的情况 ;采用定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法测定大鼠脑组织HIF 1αmRNA的表达。结果 :HPC组脑皮层神经细胞变性坏死较HIBD组减轻 ,HPC组大鼠脑组织HIF 1α基因的表达较HIBD组下降 ,HPC组脑细胞凋亡数目较HIBD组减少。结论 :缺氧预处理可保护新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 ,减弱HIF 1αmRNA的表达 ,减少脑细胞凋亡     

宁神灵颗粒对抑郁模型大鼠海马神经元凋亡、自噬及氧化应激损伤的影响

目的:研究宁神灵颗粒对抑郁模型大鼠海马神经元凋亡、自噬及氧化应激损伤的影响。方法:清洁级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、宁神灵组、氟西汀组,后3组给予慢性不可预知性温和刺激建立抑郁模型,连续56 d,后28 d模型组给予生理盐水灌胃、宁神灵组给予宁神灵颗粒灌胃、氟西汀组给予氟西汀灌胃。采用行为学实验评价抑郁程度,检测海马中凋亡及自噬表达量、氧化应激指标含量。结果:与对照组比较,模型组糖水偏爱度明显降低,强迫游泳的不动时间明显延长,海马中Caspase-3、Bax、LC3-Ⅱ/LC3-I、Beclin-1的表达及ROS、MDA的含量明显增加,Bcl-xL、P62的表达及SOD、GSH的含量明显减少;与模型组比较,宁神灵组及氟西汀组大鼠的糖水偏爱度明显增加,强迫游泳的不动时间明显缩短,海马中Caspase-3、Bax、LC3-Ⅱ/LC3-I、Beclin-1的表达及ROS、MDA的含量明显减少,Bcl-xL、P62的表达及SOD、GSH的含量明显增多。结论:宁神灵颗粒能够改善抑郁模型大鼠的抑郁情绪,其机制可能与调节海马中凋亡、自噬及氧化应激有关。     

rhG-CSF对大鼠缺血缺氧神经元巨自噬水平的影响

目的:探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对缺血缺氧神经元巨自噬水平的影响及意义。方法:采取氧糖剥夺法制作细胞缺氧模型,Western blot法检测0、100、200μg/L rhG-CSF干预下细胞巨自噬标志微管相关蛋白轻链3膜型和胞质型比值(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)的变化,单丹磺酰戊二胺(MDC)法荧光观察巨自噬空泡变化,MTT法检测细胞活力。应用改良线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,rhG-CSF干预前及干预7 d后进行改良的神经功能缺损评分评定,Western blot法检测干预7 d后大鼠皮层神经元LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,免疫组化法检测LC3蛋白的表达。结果:随着rhG-CSF给药剂量的增加,细胞缺氧模型LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和巨自噬空泡数量逐渐增加(F=288.686,154.698,P<0.001),细胞活力也相应增强(F=74.456 P<0.001)。动物实验中,干预7 d后,rhG-CSF组大鼠缺血神经元LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(F=573.085,P<0.001)及LC3阳性细胞数(F=88.945,P<0.001)分别较假手术组及模型组上调,大鼠的神经功能缺损评分较干预前明显降低(F组间=20.403,F时间=19.193,F交互=33.415,P<0.001)。结论:局灶性脑缺血后rhG-CSF可能通过上调巨自噬水平参与神经元的保护。     

缺氧对自噬双重作用调节的研究进展

自噬是维持细胞内环境稳定的一个重要机制,与缺氧引起的细胞凋亡密切相关。一般来说,自噬能够阻碍细胞凋亡的诱导,抑制细胞凋亡相关蛋白酶的活化从而减少细胞损伤。然而,在缺氧条件下,自噬或自噬相关蛋白可能有助于诱导细胞凋亡,而这可能会加重细胞的损伤。此外,凋亡相关蛋白Caspase的活化可以降低自噬相关蛋白的表达,如Atg3、Beclin1蛋白,从而抑制自噬。尽管自噬和细胞凋亡之间的关系已被研究很多年,但潜在的调控机制还没有被清楚地理解。文章对自噬的双重作用和在缺氧条件下自噬和细胞凋亡之间的相互作用和分子调控机制进行综述。     

脑室内注射胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡的影响

目的 探讨胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIE)神经细胞凋亡的影响。方法 建立新生大鼠HIE模型 ,缺氧缺血后2h治疗组侧脑室注入胰岛素1IU/kg,对照组注入磷酸盐缓冲液5μl。缺氧缺血后3.5h监测血糖。缺氧缺血后24h利用透射电镜及末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记法检测大脑皮层和海马两部位的神经细胞凋亡情况和采用免疫印迹法检测脑组织半胱天冬酶 -3(Caspase-3)P20亚单位表达。 结果 透射电镜下 ,对照组大脑皮层和海马部位易观察到凋亡神经细胞 ,治疗组则很少观察到凋亡神经细胞。治疗组皮层部位和海马部位的凋亡细胞明显低于对照组 (t=6.940和5.855,均P<0.01)。治疗组血糖水平与对照组差别无显著性意义(t=0.733,P>0.05)。治疗组Caspase -3P20亚单位ID值明显低于对照组 (w=24.00,P<0.05)。结论胰岛素具有减少HIE新生大鼠神经细胞凋亡的作用 ,其抗凋亡作用可能通过抑制Caspase-3的活化来实现。     

地塞米松预防新生大鼠缺氧缺血性脑病的作用

目的研究地塞米松（Ｄｅｘ）预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）的预防作用及其机理。方法 ４ ｄ龄ＳＤ大鼠随机分为 ３组，分别给予生理盐水［１０ ｍｌ（ｋｇ·ｄ）］、低剂量 Ｄｅｘ［０．１ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）］、高剂量 Ｄｅｘ［０．５ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）］预处理４ ｄ，然后结扎左侧颈总动脉，放入 ３７℃恒温有机玻璃缺氧房中，暴露于 ９２％氮气和 ８％氧气的环境中 ３ ｈ。分别于生后１０ ｄ取全脑标本切片作 ＨＥ染色，观察梗死发生率、梗死面积、大脑皮层细胞超微结构变化。结果低剂量 Ｄｅｘ组、高剂量Ｄｅｘ组的梗死发生率和梗死面积均低于生理盐水组（Ｐ＜ ０．００１），Ｄｅｘ组间差异无显著性（ Ｐ＞ ０．０５）。 Ｄｅｘ可明显改善大脑神经细胞的超微病理学变化。结论地塞米松预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损害具有预防作用，其神经保护机制可能是通过延缓神经发育成熟实现的。     

心脉隆对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 研究心脉隆(Xinmailong,XML)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型新生大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 96只新生7日龄SD大鼠采用随机数字表法分为3组,每组32只:假手术对照组(Sham组)、HIBD模型对照组(HIBD组)、HIBD+XML组(XML组).结扎实验鼠左颈总动脉后吸入8%O2 2.5 h制成HIBD模型,XML组在模型建立后,空气复苏5 min并立即给予XML注射液5 mg·kg-1腹腔注射,其余2组接受同剂量的生理盐水.各组于缺氧缺血(HI)后24 h、48 h、72 h、7 d 4个时间点(每个时间点各8只)分批取心肌组织,HE染色后光镜下观察心肌组织病理形态学改变;Hoechst33258荧光染色及原位末端标记法(TUNEL)定性和定量检测心肌细胞凋亡.结果 Sham组死亡0只;HIBD组死亡4只;XML组死亡2只,各组间存活率差异无统计学意义(P＞0.05).Sham组各时间点心肌组织均仅见散在的凋亡细胞,而HIBD组及XML组心肌细胞凋亡指数均于HI后24 h即开始升高,72 h达到高峰,之后逐渐下降,持续至7 d仍显著高于Sham组(P＜0.05);XML组与HIBD组相比上述指标显著降低(P＜0.05).结论 新生大鼠HIBD后早期心肌细胞即可出现明显凋亡,以HI后72 h更明显;XML能够明显抑制HIBD模型新生大鼠心肌细胞凋亡的发生,发挥对缺氧损伤心肌细胞的保护作用.     

尼莫地平对新生大鼠缺氧缺血性脑病的防治作用

目的与方法：采用新生大鼠缺氧缺血性脑病（HIE）模型来探讨其发病机制及尼莫地平对HIE脑损伤的防治作用。选用7d Wistar大鼠18只，随机分为伪手术组、HIE组、HIE＋尼莫地平（NM）治疗组。各组动物于实验开始后24h断头取脑组织进行病理学检查，并测定脑组织中钙、丙二醛（MDA）及水含量。结果：HIE为伪手术组相比，上述各指标值均增高（P＜0．01），脑病理改变明显，且HIE组脑钙、MDA与水含量呈显著正相关关系。与HIE组相比，尼莫地平治疗组各指标明显降低，脑病理改变明显改善。结论：HIE病生理过程与细胞内钙超载密切相关，尼莫地平对新生大鼠HIE有明显的防治作用。