白念珠菌生物膜对卡泊芬净的敏感性研究

目的探讨新生白念珠菌生物膜对卡泊芬净的敏感性。方法建立白念珠菌生物膜模型,采用标准化念珠菌生物膜抗真菌药物敏感实验法测定白念珠菌生物膜对卡泊芬净和两性霉素B的敏感性。结果30株白念珠菌生物膜中,6株对两性霉素B敏感（SMIC80≤1μg/ml）,24株对两性霉素B耐药（SMIC80〉1μg/ml）;28株对卡泊芬净敏感（SMIC80〈16μg/ml）,2株对卡泊芬净耐药（SMIC80≥16μg/ml）。经统计学分析,就白念珠菌生物膜的对抗真菌药物的敏感性而言,卡泊芬净和两性霉素B之间有统计学意义（χ^2=32.86,P〈0.05）。结论白念珠菌生物膜对两性霉素B耐药明显,而对卡泊芬净敏感。     

两种中药复方体外对白假丝酵母菌生物膜形成的影响

目的：观察两种中药复方体外对白假丝酵母菌生物膜形成的影响。方法：采用结晶紫染色法和MTT法评价白假丝酵母菌生物膜的体外生长动力学,微量稀释法检测两种中药复方对白假丝酵母菌悬浮菌及其生物膜的抑制作用以及药物包被对白假丝酵母菌生物膜形成作用。结果：生物膜内白假丝酵母菌数量随培养时间延长而增加。两种中药复方对白假丝酵母菌悬浮菌的最低抑菌浓度50%（MIC50）分别为3.725、3.925mg/mL,对生物膜的SMIC50与SMIC80分别是3.725和7.725mg/mL,3.925和7.85mg/mL。两种中药复方包被浓度分别在3.322、2.269mg/mL以上时对其生物膜形成的抑制作用有显著性。结论：两种中药复方对体外白假丝酵母菌生物膜具有明显的抑制作用。     

微量稀释法检测酵母菌最低抑菌浓度

目的：了解临床常见酵母菌对抗真菌剂的体外药敏试验，以指导临床医生合理使用抗生素。方法：收集2001年2－3月临床分离酵母菌共54株，应用微量稀释法测定54株酵母菌对两性霉素、酮康唑和氟康唑的最低抑菌浓度（MIC）。结果：酵母菌对两性霉素的MIC值在0.25-1.0μg/ml之间，氟康唑的MIC值在2．0－8．0μg/ml之间，酮康唑的MIC值＞16μg/ml。结论：酵母菌对两性霉素的耐药率最低（0％），其次为氟康唑（18．5％），酮康唑耐药率最高（79．6％），微量稀释法方法简便，结果较可靠，可用于常规检测酵母菌的药敏试验。     

肉豆蔻挥发油体外抗病原微生物活性研究

目的 探讨肉豆蔻挥发油体外抗病原微生物活性。方法 采用琼脂平板2倍稀释法测定肉豆蔻挥发油对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌等16种67株临床分离菌和白假丝酵母菌14株、非白假丝酵母菌1株临床分离真菌的最低抑菌浓度（MIC）;单因素方差分析法比较肉豆蔻挥发油对金黄色葡萄球菌、白假丝酵母菌、大肠埃希菌、洛菲不动杆菌与肺炎克雷伯菌等不同种属真菌和细菌的抑菌活性。结果 肉豆蔻挥发油除对铜绿假单胞菌抑菌活性相对较低（MIC为4.25~8.50 mg/mL）外,对其余受试细菌有较强的抑菌活性（MIC为0.07~1.06 mg/mL）;肉豆蔻挥发油对白假丝酵母菌和非白假丝酵母菌均有较强的抗真菌活性,MIC分别为0.07~0.53mg/mL和0.07mg/mL。统计分析表明,肉豆蔻挥发油对白假丝酵母菌的MIC明显低于对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的MIC（P〈0.01）,对肺炎克雷伯菌的抑菌活性明显强于对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌活性（P〈0.01,P〈0.05）,对其它种属细菌之间的抑菌活性差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 肉豆蔻挥发油具有较强的抗细菌和抗真菌活性,可用于新型抗菌药物的开发,运用前景广阔。     

长期高盐刺激诱导白假丝酵母菌耐受氧化应激

目的观察长期高浓度氯化钠刺激对白假丝酵母菌耐受氧化应激能力的影响。方法选用2株白假丝酵母菌国际标准株SC5314和ATCC76615,用含有1mol/L氯化钠的YEPD培养液连续培养24d,考察子代与亲本菌对氧化应激的耐受能力。采用real-time RT-PCR考察白假丝酵母菌抗氧化酶的转录水平,并测定其抗氧化酶的活性,利用丙二醛(MDA)测定试剂盒衡量白假丝酵母菌脂质过氧化损伤,并测量白假丝酵母菌菌体细胞内活性氧水平。结果长期用高浓度氯化钠刺激能增加白假丝酵母菌对过氧化氢(12mmol/L)和咪康唑(4μg/ml)的耐受性,促进其抗氧化酶的转录,使抗氧化酶SOD1、CAT1、谷胱甘肽还原酶(GR,转录基因为TTR1)的转录水平升高2～5倍,增强抗氧化酶的活性(P<0.05),降低脂质过氧化损伤(P<0.01),减少菌体细胞内活性氧水平(P<0.001)。结论长期高浓度氯化钠刺激能够增强白假丝酵母菌耐受氧化应激的能力。     

微量稀释法检测酵母菌最低抑菌浓度

目的了解临床常见酵母菌对抗真菌剂的体外药敏试验,以指导临床医生合理使用抗生素.方法收集2001年2～3月临床分离酵母菌共54株,应用微量稀释法测定54株酵母菌对两性霉素、酮康唑和氟康唑的最低抑菌浓度(MIC).结果酵母菌对两性霉素的MIC值在0.25～1.0μg/ml之间,氟康唑的MIC值在2.0~8.0μg/ml之间.酮康唑的MIC值>16μg/ml.结论酵母菌对两性霉素的耐药率最低(0%),其次为氟康唑(18.5%),酮康唑耐药率最高(79.6%).微量稀释法方法简便,结果较可靠,可用于常规检测酵母菌的药敏试验.     

白念珠菌生物膜形成不同时期对氟康唑的敏感性

目的研究白念珠菌生物膜生长动力学特征，其不同时期对氟康唑敏感性的差异及经氟康唑预处理的生物材料表面对生物膜形成的影响。方法采用96孔微量培养皿进行白念珠菌生物膜的培养，用MTT法检测生物膜不同时期的活性及对氟康唑的敏感性。结果白念珠菌生物膜形成早期（8h）生长较快，当成熟生物膜形成后，生物膜活性则维持在一个较高的代谢水平，不再增加；早期（2h）的生物膜对氟康唑MIC50为2～4μg／m｜，中晚期（12～72h）生物膜MIC50均〉128μg／ml。与对照组比较，低浓度氟康唑（0．5～8μg／ml）处理的生物材料上生物膜活性差异无显著性意义（P〉0．05），高浓度氟康唑（32～64μg／ml）处理的生物材料差异有显著性意义（P〈0．05）。结论早期生物膜对氟康唑敏感性较高，中晚期则产生明显耐药。经抗菌性处理的生物材料对预防生物膜的形成有一定作用。     

54株白假丝酵母菌感染及药敏分析

目的 了解海南省人民医院白假丝酵母菌的感染情况,分析该医院临床分离的白假丝酵母菌对抗常见真菌药物氟胞嘧啶、两性霉素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的体外敏感性,为控制该菌感染和指导临床合理使用抗真菌药物提供参考.方法 收集、分离、鉴定临床送检标本,用微量稀释法测定临床分离白假丝酵母菌对5种抗真菌药物的敏感性,结果用各个药物的最低抑菌浓度(MIC)表示,并对这些白假丝酵母菌感染患者的病历进行统计分析.结果 共检出54株白假丝酵母菌,其对氟胞嘧啶、两性霉素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的敏感性分别为85.2％,98.1％,33.3％,22.2％,31.5％.结论 白假丝酵母菌对两性霉素敏感性最高.     

鱼腥草素钠诱导临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡

目的 观察鱼腥草素钠对临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡的影响。方法 利用DAPI染色观察耐药白假丝酵母菌生物膜细胞核的形态;利用FITC-VAD-FMK染色观察耐药白假丝酵母菌生物膜细胞metacaspase活性;分别在JC-1染色和DCFH-DA染色下,采用流式细胞仪检测耐药白假丝酵母菌生物膜细胞内线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;利用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色和流式细胞仪检测耐药白假丝酵母菌生物膜细胞的凋亡率。结果 一定浓度的鱼腥草素钠作用下,临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞内ROS水平、生物膜细胞凋亡率、metacaspase酶活性明显升高,MMP水平明显降低,生物膜细胞核出现碎裂和皱缩。结论 鱼腥草素钠能够诱导耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡。     

假丝酵母菌性外阴阴道病不同基因型致病菌株药物敏感性比较

目的 对妊娠与非妊娠假丝酵母菌性外阴阴道病（VVC）致病菌株进行基因分型,并初步探讨不同基因型菌株对抗真菌药物是否存在敏感性差异。方法 选取2011-2014年在昆明医科大学第一附属医院妇产科门诊就诊的VVC患者373例,其中非妊娠VVC患者197例,妊娠（10～40周）VVC患者176例。以科玛嘉显色培养基和VITEK 2系统鉴定致病菌菌种,采用改良的微量平板稀释法进行克霉唑、制霉菌素和咪康唑的体外药敏实验,特异引物PCR对致病白假丝酵母菌基因分型,并对不同基因型致病菌的体外药敏结果进行比较。结果 非妊娠VVC患者检出白假丝酵母菌166株（84.26%）,妊娠VVC患者检出白假丝酵母菌134株（76.14%）,妊娠VVC患者白假丝酵母菌检出率低于非妊娠VVC患者,差异有统计学意义（χ2=3.901,P=0.048）。妊娠与非妊娠VVC患者致病白假丝酵母菌克霉唑、咪康唑最小抑菌浓度（MIC）值均低于非白假丝酵母菌（妊娠：Z克霉唑=6.275,P＜0.001;Z咪康唑=5.102,P＜0.001;非妊娠：Z克霉唑=3.095,P=0.002;Z咪康唑=2.169,P=0.030）;妊娠VVC致病白假丝酵母菌咪康唑、制霉菌素MIC值低于非妊娠VVC患者（Z=3.074,P=0.002;Z=4.982,P＜0.001）。妊娠VVC致病白假丝酵母菌对克霉唑、咪康唑敏感率较高（≥91.04%）,少有耐药菌株;非妊娠VVC致病白假丝酵母菌菌株对克霉唑敏感率达96.38%。妊娠VVC患者A基因型菌株113株,B基因型菌株10株,C基因型菌株11株;非妊娠VVC患者分别为152、5、9株,两组患者不同基因型白假丝酵母菌菌株构成比比较,差异无统计学意义（χ2=4.189,P=0.114）。妊娠VVC患者A基因型菌株的咪康唑MIC值高于非妊娠VVC患者A基因型菌株（Z=2.804,P=0.005）,而制霉菌素MIC值低于非妊娠VVC患者A基因型菌株（Z=4.869,P＜0.001）。妊娠VVC致病白假丝酵母菌B、C基因型菌株全部对克霉唑、咪康唑敏感,而A基因型菌株敏感率分别为91.15%、89.38%;非妊娠VVC致病白假丝酵母菌B基因型菌株全部对克霉唑、制霉菌素敏感,C基因型菌株全部对克霉唑、咪康唑敏感,而A基因型对克霉唑、制霉菌素、咪康唑敏感率分别为94.74%、69.08%、80.30%。结论 非妊娠VVC患者可优先选择克霉唑治疗,妊娠VVC患者可优先选择咪康唑治疗。妊娠与非妊娠VVC患者白假丝酵母菌均以A基因型最为多见,且不同基因型白假丝酵母菌对抗白假丝酵母菌药物的敏感性存在差异。     

假丝酵母菌性阴道炎的病原菌分布及耐药性分析

目的分析湖北民族学院附属民大医院妇科假丝酵母菌性阴道炎的病原菌分布特点及耐药性。方法对湖北民族学院附属民大医院妇科门诊治疗的385例假丝酵母菌性阴道炎患者阴道分泌物进行接种培养并予以药敏（两性霉素B、制霉菌素、氟康唑、克霉唑、伊曲康唑等）试验。结果385例假丝酵母菌性阴道炎患者共检出白假丝酵母菌248株（64．4％）、热带假丝酵母菌75株（19．5％）、光滑假丝酵母菌35株（9．1％）、近平滑假丝酵母菌15株（3．9％）、克柔假丝酵母菌12株（3．1％）,白色假丝酵母菌仍是假丝酵母菌性阴道炎的主要致病菌,菌株对唑类药物的耐药牢明显高于两性霉素B和制霉菌素。结论针对假丝酵母菌性阴道炎患者应积极送检阴道分泌物标本,根据实验室结果选择敏感抗真菌药物,可有效治疗假丝酵母菌性阴道炎。     

葡萄籽原花青素对变形链球菌的体外抗菌活性研究

目的?研究葡萄籽原花青素（Grape seed procyanidins,GSPC）对变形链球菌的体外抗菌活性,探讨其防龋潜能。方法?采用微量肉汤法测定最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）、最低抑制生物膜浓度（MBIC）;采用结晶紫半定量法测定生物膜生成量;硫酸-蒽酮法测定产糖量,pH计测定产酸量。结果?葡萄籽原花青素的MIC值12.5?mg/mL;MBC值和MBIC值均为50?mg/mL;GSPC（≥12.5?mg/mL）降低变形链球菌生物膜的生成量,8倍MIC浓度（100?mg/mL）时抑制率达76%;GSPC在低于MIC浓度时仍具有抑制变形链球菌产糖、产酸能力。结论?葡萄籽原花青素具有对变形链球菌的体外抗菌活性,并能抑制变形链球菌的生物膜和致龋毒力因子。      

老年患者白假丝酵母菌基因分型与药敏试验分析

目的了解老年慢性阻塞性肺炎（COPD）患者白假丝酵母菌基因分型及药敏结果差异。方法对320株白假丝酵母菌进行25SrDNA基因分型,用ATB Fungus3进行药敏实验。结果320株白假丝酵母菌分成了A、B、C3型。A型对5-氟胞嘧啶耐药率高于B型和C型;C型对两性霉素全都敏感,敏感率高于A型和B型;C型对氟康唑、伊曲康唑的耐药率高于A型和B型;B型对伏立康唑耐药率高于A型和C型。结论白假丝酵母菌PCR分型法有较强的特异性,且快速简便;白假丝酵母菌基因型别对不同药物的敏感率有影响。     

月桂挥发油体外抗病原微生物活性研究

目的 探讨月桂挥发油对临床分离细菌和真菌的体外抗菌活性,为月桂在治疗感染性疾病中的开发与运用奠定基础.方法 采用琼脂平板二倍稀释法测定了月桂挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌共16种65株临床分离细菌、14株白假丝酵母和1株非白假丝酵母临床分离真菌的最低抑菌浓度.用SPSS 17.0软件中单因素方差分析法比较分析了月桂挥发油分别对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、洛菲不动杆菌和白假丝酵母菌共5个不同种属细菌和真菌抑菌活性的强弱.结果 月桂挥发油除对铜绿假单胞菌无明显抗菌活性外,对其余受试细菌均有较强的抗菌活性,MIC为0.27 mg/mL～2.15 mg/mL;月桂挥发油对白假丝酵母菌和非白假丝酵母菌均有较强的抗菌活性,MIC分别为0.07～0.54 mg/mL和0.03 mg/mL;月桂挥发油对白假丝酵母菌和洛菲不动杆菌的抑菌活性明显强于对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌活性（P＜0.01）,对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的抑菌活性比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 月桂挥发油有较强的抗细菌和抗真菌活性,具有用于防治感染性疾病-新型抗菌药物的开发和运用前景.     

激光共聚焦显微镜观察阴道来源乳杆菌生物膜的形成

目的:采用激光共聚焦显微镜技术动态观察一株女性阴道来源卷曲乳杆菌生物膜的形成过程. 方法:使用体外盖玻片生物膜培养法,培养阴道来源卷曲乳杆菌的生物膜,在培养2、4、8、12、16、20、24、48、72、96、120 h后取出盖玻片,用异硫氰酸荧光素标记的刀豆蛋白A( fluorescein isothiocyanate-conjugatedconcanavalin A,FITC-conA)和碘化丙啶( andpropidium,PI)双重免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜( confocal laser scanning microscopy, CLSM)观察卷曲乳杆菌生物膜形成过程与特点. 结果:获得生物膜形成过程不同时间点的CLSM图像,观察到卷曲乳杆菌在4 h即开始有散在的细菌黏附于盖玻片上,为可逆吸附期;8~20 h细菌黏附量逐渐增加,进入不可逆吸附期,20 h细菌聚集成团,生物膜初步形成;24~48 h形成大片的生物膜菌落,细菌镶嵌在大量多糖基质中,结构紧密,形态稳定,生物膜成熟;72 h后生物膜菌落开始解聚. 培养20 h乳杆菌生物膜密度为42. 7 × 10 -3 ± 6. 83 × 10 -3 ,24 h上升为102.5 ×10 -3 ±23.14 ×10 -3,两者相比差异具有统计学意义(P<0.05),表明培养24 h乳杆菌生物膜形成. 结论:该株阴道来源卷曲乳杆菌在体外可形成生物膜,24 h可形成成熟的生物膜,72 h生物膜开始解聚再定植.     

氟康唑与两性霉素B抗白假丝酵母菌临床分离株的实验研究

目的评价白假丝酵母菌临床分离株对氟康唑(FCZ)与两性霉素B(AmB)的敏感性及两药相互作用的方式. 方法采用美国国家临床实验室标准化委员会M27-A推荐的棋盘微量稀释法,检测了22株白假丝酵母菌临床分离株对FCZ、AmB及两药联合的体外药物敏感性,同时对两药的作用方式进行了判定. 结果联合用药时,FCZ MIC值的几何均数从0.369 mg/L显著降低到0.227 mg/L,AmB MIC值的几何均数从0.223 mg/L显著降低到0.118 mg/L,22.73%受试菌表现为协同作用方式,63.14%的受试菌株表现为相加作用方式,13.64%受试菌株表现为无关作用方式,未观察到拮抗作用的出现.测定不同浓度下药物单独和联合作用的1株菌的菌落形成单位(cfu/ml),联合用药组都较单独用药组有明显减少,且对HF细胞和Hep-2细胞无毒性.结论 FCZ与AmB联合较任一药物单独使用体外抗白假丝酵母菌的活性高,且具有差异毒力.     

真菌性生殖道炎病原学及主要致病菌种最低抑菌浓度检测

目的鉴定引起真菌性生殖道炎症的假丝酵母菌,并对主要致病菌进行9种抗真菌药物最低抑菌浓度测定。方法常规培养并分离真菌,并鉴定到种,采用最低抑菌浓度法对白假丝酵母菌进行体外药物敏感试验。结果共分离53株菌,白假丝酵母菌占84.91%,白假丝酵母菌生物变种、光滑假丝酵母菌和近平滑假丝酵母菌各占3.77%,季也蒙假丝酵母菌和热带假丝酵母菌各占1.87%;47株白假丝酵母菌耐药率由高到低依次是氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、酮康唑、益康唑、克霉唑、5-氟胞嘧啶啶、两性霉素B和制霉菌素,其中6种药物耐药率〉50%。结论白假丝酵母菌仍是真菌性生殖道炎症最常见的致病菌,且其对多种药物同时耐药。临床上应根据实验室体外药敏试验结果合理用药。     

白假丝酵母菌分离和鉴定方法的探讨

目的:建立一种白假丝酵母菌培养和鉴定的方法。方法:选用经改良沙氏培养基培养白假丝酵母菌,观察假菌丝、厚膜孢子,芽管形成,并结合糖发酵和其他生化试验给以初步鉴定,新法提取DNA作最后鉴定。结果:形态学观察和生化反应证实菌种为Candida albicans1型。DNA提取表明菌种与标准株DNA带型完全相同,提取DNA浓度(1.06±0.29)μg/μl,纯度好(OD260/OD280>1.7)。结论:本法制备的培养基适合白假丝酵母菌的生长和鉴定。     

ATB FUNGUS与微量法测定酵母菌体外抗真菌药物敏感性比较

目的　了解临床分离的酵母菌对 5 -氟胞嘧啶、两性霉素B、酮康唑及咪康唑的体外敏感性 ,评价ATBFUNGUS药敏试验与微量稀释法试验的符合性。方法　采用微量稀释法测定上述药物对临床分离的念珠菌的最低抑菌浓度(MIC) ,同时进行ATBFUNGUS试验。结果　 1 59株念珠菌的MIC范围 ,微量法分别为 :5 -氟胞嘧啶 0 .1 2 5～ 1 2 8μg/ml,中介度 6 .3 % ,耐药率 1 .9% ;两性霉素B 0 .0 1 5～ 4μg/ml,酮康唑 0 .0 1 5～ 8μg/ml,咪康唑 0 .0 1 5～ 4μg/ml。ATBFUNGUS试验 1 59株念珠菌对 5 -氟胞嘧啶的耐药率为 2 .5 % ,中介度 5 .7% ;两性霉素B、酮康唑及咪康唑未发现耐药株 ,中介度分别为 3 .4%、5 .7%和 4 .4%。两法对四种药物敏感性测定结果的总符合率为 94.3 %。结论　采用ATBFUNGUS进行酵母菌体外抗真菌药物敏感性测定与微量稀释法同样具有可重复性和结果的一致性 ,操作更简便     

曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物敏感性分析

目的 研究曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物的敏感性。方法 采用Internal Transcribed Spacer（ITS）及β-tubulin基因部分测序对临床分离的53株经形态学鉴定为曲霉的菌株进行分子鉴定,并按照美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的M38-A2微量液基稀释法测定唑类（伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑）,两性霉素B和棘白菌素类（米卡芬净、阿尼芬净和卡泊芬净）共7种抗真菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）或最低有效浓度（minimum effective concentration, MEC）。结果 53株曲霉菌包含烟曲霉复合体22株（烟曲霉21株和仑图卢斯曲霉1株）,黑曲霉复合体23株（塔宾曲霉16株、黑曲霉5株和百岁兰曲霉2株）及土曲霉和黄曲霉各4株;米卡芬净、阿尼芬净、卡泊芬净、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B对曲霉菌株的MIC90为0.031、0.031、0.25、0.5、0.5、1、2μg/mL。除1株烟曲霉对伊曲康唑（MIC≥16μg/mL）和伏立康唑（MIC为2μg/mL）耐药及1株仑图卢斯曲霉对两性霉素B耐药（MIC为8μg/mL）外,其余菌株对7种药物均敏感。4种曲霉复合体对7种抗真菌药物的敏感性差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 棘白菌素类药物体外抗曲霉菌活性最好,两性霉素B体外抗曲霉菌活性相对较差,唑类药物介于以上两者之间。不同种曲霉菌对不同抗真菌药物的敏感性存在差别。