白藜芦醇诱导人胶质瘤细胞U251增殖抑制与凋亡的作用研究

目的:探讨白藜芦醇对人胶质瘤细胞株U251的增殖抑制与凋亡的作用。方法:用不同浓度的白藜芦醇0、25、50、100、200μm/L处理对数生长期的U251细胞72 h,利用MTT比色法检测U251细胞增殖;流式细胞术检测U251细胞凋亡,采用逆转录聚合酶链反应法检测Wnt、β-catenin、p53、p21、Bcl-2和Bax mRNA水平。采用Western blotting检测Wnt、β-catenin、p53、p21、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果:白藜芦醇抑制U251细胞的增殖和Wnt、β-catenin、p53、p21和Bcl-2的表达,且呈浓度依赖性;促进U251细胞凋亡和Bax的表达。结论:白藜芦醇诱导U251细胞增殖抑制和凋亡与抑制Wnt/β-actin/p53信号通路激活相关。     

人参皂苷Rd抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖机制研究

目的:体外研究人参皂苷Rd(GS-Rd)抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖机制。方法:采用MTT法检测GS-Rd对U251细胞增殖情况的影响;采用流式细胞仪观察GS-Rd对U251细胞周期及凋亡影响;通过实时荧光定量PCR检测GS-Rd对U251细胞相关凋亡基因表达的影响。结果:1)GS-Rd在浓度为20~80μmol/L范围内对U251细胞均有一定的抑制作用,并且抑制强度随药物浓度的增加而增大,呈剂量依赖性;2)GS-Rd各剂量组均可诱导U251细胞凋亡。细胞周期分析显示随着给药浓度增加,越多的U251细胞被阻滞在G1/G0期,使进入S和G2/M期的细胞减少;3)与空白对照组相比,GS-Rd各剂量组Bcl-2 mRNA表达显著降低(P0.05),同时Caspase-3 mRNA表达显著提高(P0.05)。结论:人参皂苷Rd能抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,同时能诱导细胞凋亡,其抑瘤机制可能与下调Bcl-2 mRNA表达和上调Caspase-3 mRNA表达有关。     

重楼皂苷Ⅰ对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨重楼皂苷Ⅰ对胶质瘤U373和U251细胞的增殖活力和迁移能力的影响。方法 采用重楼皂苷Ⅰ不同浓度分别作用于胶质瘤U373和U251细胞24小时后,使用细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖;以不同剂量重楼皂苷Ⅰ(0、3、6μM)处理细胞24小时后收集细胞,使用流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕实验用不同剂量的重楼皂苷I(0、1.5、3μM)处理细胞24小时后,观察划痕愈合程度;Transwell小室检测给药重楼皂苷I后胶质瘤U373和U251细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)检测重楼皂苷I对胶质瘤U373和U251细胞凋亡和迁移相关蛋白表达。结果 CCK-8结果表明重楼皂苷Ⅰ呈剂量依赖性抑制胶质瘤U373和U251细胞增殖,半抑制浓度(50%inhibitory concentration, IC₅₀)值分别为3.47和2.52μM;流式细胞术表明重楼皂苷Ⅰ诱导胶质瘤细胞凋亡;细胞划痕观察到加药后划痕创口愈合程度小于对照组;Transwell实验观察到药物处理24小时后,迁移的细胞...     

五味子多糖对人脑胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的探讨五味子多糖对人脑胶质瘤U251细胞体外生长的抑制作用及诱导细胞凋亡的作用机制。方法实验分为4组,对照组常规培养(不加任何药物)人脑胶质瘤U251细胞,五味子多糖250μg/mL、500μg/mL、800μg/mL组分别加入相应浓度的五味子多糖培养人脑胶质瘤U251细胞。采用MTT法检测各组细胞培养12,24,48 h后生长抑制率;Transwell细胞体外侵袭实验法使细胞穿过小室透膜数量,检测各组细胞迁移能力;流式细胞实验结合AnnexinV-FITC/PI双染色法检测各组细胞培养12,24,48 h后早期凋亡百分比。RT-PCR技术检测500μg/mL五味子多糖作用U251细胞12,24,48 h后bcl-2、bax、caspase-3基因表达水平。结果与对照组比较,不同浓度五味子多糖对U251细胞有显著增殖抑制作用(P均0.05),且抑制作用呈现剂量与时间效应关系;与对照组比较,五味子多糖各组细胞迁移抑制率、细胞早期凋亡率、细胞晚期凋亡率均明显增高(P均0.05),且细胞迁移抑制率和细胞凋亡率随五味子多糖浓度增高而增高(P均0.05)。500μg/mL五味子多糖作用U251细胞12,24,48 h后,Bax、Caspase-3基因表达水平及Bax/Bcl-2比值逐渐增高,Bcl-2基因表达水平逐渐降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论五味子多糖能显著抑制人脑胶质瘤U251细胞生长,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力,其促进凋亡作用机制可能与上调Bax、Caspase-3基因表达水平,下调Bcl-2基因表达水平相关。     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的研究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响,采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影响,用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生长有抑制作用,且具时间及剂量依赖性;白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡,且具时间及剂量依赖性。结论白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。     

九味通窍汤对人脑胶质瘤的体外药效学研究及组方分析

目的:对九味通窍汤进行组方拆分,并对各组进行体外抗脑胶质瘤药效学分析,对其体外药效学可能的作用机制进行探索,为探究全方起效的物质基础提供实验依据。方法:根据君臣佐使组合原理将九味通窍汤拆分成7个组方,选用人源脑神经胶质瘤U251细胞进行体外药效筛选,采用噻唑蓝(MTT)法测定各个组方对细胞活力的影响;采用流式细胞术比较所得体外药效最佳组方Ⅳ与全方(10,4,1 g·L~(-1))作用U251细胞24 h对细胞的凋亡影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测全方及组方Ⅳ对凋亡蛋白p53和抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达影响;组方Ⅳ的醇提物用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯及水饱和正丁醇梯度萃取,采用MTT法测定各萃取部位对U251细胞增殖的抑制作用。结果:组方Ⅳ对细胞的抑制作用最为明显,且具有浓度依赖性;细胞经10,4,1 g·L~(-1)组方Ⅳ,全方处理24 h后凋亡率显著高于空白组(P0.01);细胞经4 g·L~(-1)组方Ⅳ,全方处理后Bcl-2蛋白表达水平较空白组显著降低(P0.01),p53蛋白表达较空白组显著提高(P0.01);组方Ⅳ梯度萃取后部位Ⅲ对细胞活力的抑制作用最为明显,且具有浓度依赖性。结论:组方Ⅳ细胞活力抑制作用明显,诱导细胞凋亡明显,并可以降低Bcl-2,并提高p53蛋白的表达;部位Ⅲ抑制脑胶质瘤细胞活力明显。     

Survivin在紫杉醇诱导人胶质瘤U251细胞凋亡中的作用

目的探讨紫杉醇诱导人胶质瘤U251细胞凋亡过程中Survivin的作用。方法以不同浓度紫杉醇(10,100,1 000,10 000 nmol/L)分别处理人胶质瘤U251细胞6h、12 h、24 h、48 h,实验同时设置空白对照组。通过显微镜观察、MTT法和蛋白质印迹法检测紫杉醇对U251细胞的生长抑制作用和Survivin蛋白表达水平的变化。结果紫杉醇可以抑制U251细胞的生长,且其抑制作用随着浓度的增高而增强;100 nmol/L紫杉醇处理人胶质瘤U251细胞后,Survivin的表达水平具有时间依赖性;不同浓度紫杉醇处理人胶质瘤U251细胞24 h后,10 nmol/L组Survivin表达水平最高。结论紫杉醇对人胶质瘤U251细胞具有明显的生长抑制作用;紫杉醇可以通过下调Survivin表达水平而诱导细胞凋亡,抑制肿瘤生长。     

龙葵碱对U251细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨龙葵碱对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法使用不同质量浓度的龙葵碱处理U251细胞,采用CCK-8法、划痕法、Transwell法、Hochest法、流式细胞术、免疫印迹法分别检测细胞增殖率、细胞迁移与侵袭、细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达。结果龙葵碱对U251细胞的48 h半数抑制浓度(IC_(50))为20.05μg/μL,其质量浓度在5～35μg/μL时,能够抑制细胞增殖(P0.05);与对照组相比,龙葵碱组抑制细胞迁移和侵袭的能力随药物质量浓度增高而增强(P0.05),同时细胞也出现明显凋亡特征,并均呈浓度依赖性;免疫印迹法显示龙葵碱可使凋亡相关蛋白Bax表达增加,Bcl-2表达降低,Bcl-2/Bax值降低。结论龙葵碱在有效剂量(5～35μg/μL)对U251细胞增殖生长具有抑制作用,并呈浓度依赖性;龙葵碱可抑制U251细胞的侵袭与迁移,可以影响凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达,使Bcl-2/Bax值降低,从而抑制U251细胞的增殖生长。     

紫河车提取物对人胶质瘤细胞增殖凋亡的影响

目的:观察紫河车提取物对人脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法:把正常培养传代后的U251胶质瘤细胞按随机分配的方法分为四组,A组仅加普通培养液,B、C、D组各加浓度为100mg/ml、200mg/ml、400mg/ml的紫河车提取物5ml;观察显微镜下Trypan Blue染色后各组脑胶质瘤细胞的形态特点,MTT法观察测算U251细胞增殖情况,流式细胞仪检测U251细胞凋亡率。结果:B、C、D组细胞增殖指数逐渐下降,与A组进行比较,各组P均0.05;将各组培养24h后上机,测得A、B、C、D组细胞凋亡率分别为(0.2±0.2)%、(8.6±1.8)%、(17.9±3.3)%、(28.2±3.1)%。其中,B、C、D组和A组进行比较,P均0.05。结论:紫河车提取物可抑制人脑胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡。     

人参皂苷单体Rh_2促使人脑胶质瘤U251细胞凋亡的实验研究

目的:观察人参皂苷单体Rh2(GS-Rh2)诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡作用,进而探讨其对端粒酶活性的影响和人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的机制。方法:人脑胶质瘤U251细胞经GS-Rh2处理后,采用MTT法检测细胞抑制率,免疫荧光技术观察凋亡小体,流式细胞仪经Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性改变,通过RT-PCR技术检测hTERT基因的表达。结果:GS-Rh2对U251细胞具有抑制作用,呈明显的剂量依赖关系,免疫荧光技术观察到凋亡小体的出现,流式细胞仪检测GS-Rh2引起U251细胞凋亡并与药物浓度存在依赖关系,TRAP-ELISA法发现GS-Rh2可以降低端粒酶活性且呈剂量和时间依赖关系,RT-PCR证实GS-Rh2可降低hTERT基因的表达。结论:人参皂苷单体Rh2能够诱导人脑胶质瘤U25l细胞发生凋亡,并抑制和降低细胞端粒酶活性,经过RT-PCR证实GS-Rh2作用于胶质瘤的分子生物学机制可能与抑制胶质瘤细胞hTERT基因有关,进而诱导细胞发生凋亡。     

苦参碱抑制胶质瘤U251细胞增殖作用及其凋亡机制研究

目的:研究苦参碱对胶质瘤U251细胞增殖影响,并进一步探讨其作用潜在的分子机制。方法:MTT法检测苦参碱对U251细胞增殖抑制作用;TUNEL方法及流式细胞术检测苦参碱诱导U251细胞凋亡情况;采用Western blot方法检测U251细胞上凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果:苦参碱可以抑制U251细胞增殖,差异有显著性(P0.05),呈时间和浓度依赖性;而在同条件下对人正常视网膜色素上皮RPE细胞无抑制作用,差异无显著性(P0.05);其次苦参碱能诱导U251细胞凋亡,进一步研究发现苦参碱可以影响蛋白Bcl-2、Bax表达。结论:苦参碱能抑制U251细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与下调U251细胞上抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达,同时上调促细胞凋亡Bax蛋白表达有关。     

柴胡皂甙d上调CDKN1B抑制脑胶质瘤细胞增殖的机制研究

目的:探讨柴胡皂甙d(Saikosaponins-d,SSd)对脑胶质瘤细胞增殖的作用及调控机制。方法:体外培养脑胶质瘤Μ251细胞株,加入终浓度分别为0、5、10、20μg/m L的SSd,采用CCK-8法检测Μ251细胞的增殖率,通过流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的改变,RT-PCR法检测细胞CDKN1B mRNA的表达水平。通过CDKN1B siRNA复原转染实验,以10μg/m L的SSd为对照,检测CDKN1B在SSd影响胶质瘤增殖、细胞周期及凋亡中的作用。结果:SSd可抑制脑胶质瘤Μ251细胞的增殖水平,且随SSd浓度越高,抑制作用越明显。同时SSd阻滞细胞周期在G0/G1期,促进胶质瘤细胞凋亡。CDKN1B siRNA能明显促进胶质瘤的增殖,CDKN1B表达下调能明显恢复SSd抑制的胶质瘤细胞增殖能力,同时能恢复SSd阻滞的胶质瘤细胞周期,抑制胶质瘤细胞的凋亡水平。结论:柴胡皂甙d能够通过抑制增殖并促进凋亡对人脑胶质瘤Μ251细胞生长起到抑制作用,其机制可能与上调CDKN1B的表达有关。     

MTT法测定中药益气活血方KLW1对神经胶质瘤细胞U87-MG细胞增殖的抑制作用

目的观察中药KLW₁对神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用。方法采用MTT法在不同时间（24、48、72 h）检测系列浓度的KLW₁（2.5、5.0、10.0及20.0 mg/mL）及TMZ（50.0、100.0、200.0及400.0μmol/L）对人神经胶质瘤细胞U87-MG的抑制作用,同时进行空白对照比较。结果 KLW₁及TMZ与空白相比均能抑制人胶质瘤细胞U87-MG的增殖,且KLW₁对U87-MG增殖的抑制作用与给药浓度及时间成正相关。在72 h药物浓度20.0 mg.mL-1时,抑制率最高,为64%。结论中药KLW₁对人胶质瘤细胞U87-MG的增殖有抑制作用,其机理与抑制瘤细胞的增殖有关,且作用强度与作用时间、浓度相关。     

17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人脑胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响.方法:将U251细胞分为空白对照组,5-氟尿嘧啶组( 80μmol·L-1),HJB组(6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μmol· L-).用不同浓度的药物作用24h及药物半数抑制浓度(IC50)浓度作用不同时间(12,24,48,72 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的相对活性.结果:与空白对照组相比,HJB对U251细胞的增殖有显著抑制作用,并呈浓度依赖及时间依赖性(P＜0.05),作用24 h后IC50为62.236 11μmol·L-1.HJB可诱导U251细胞凋亡,浓度30,60,120μmol· L-1分别处理细胞24 h后,早期凋亡率明显升高(P＜0.05),且呈浓度依赖关系;Caspase-3及Caspase-9的相对活性均升高(P＜0.05),并呈浓度依赖关系.结论:HJB明显抑制体外U251细胞生长并诱导其凋亡,线粒体途径可能是诱导其凋亡的机制之一.     

没药挥发油对大鼠神经胶质瘤细胞体外增殖的抑制作用

目的 探讨没药挥发油(没药油)对大鼠神经胶质瘤细胞C6增殖抑制作用.方法 应用MTT法检测不同质量浓度没药油对C6细胞活性的作用,BrdU掺入试验检测细胞增殖的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 没药油对C6细胞活性有明显的抑制作用,其抑制率与质量浓度有关;没药油作用24 h后,c6细胞BrdU标记指数明显降低;而不同质量浓度没药油作用24 h后,C6细胞凋亡率与对照组相比无显著改变.结论 没药油对大鼠神经胶质瘤细胞株C6的增殖具有明显的抑制作用,但诱导细胞凋亡的作用不明显.     

α-常春藤皂苷抗肿瘤作用机制研究

目的探讨α-常春藤皂苷(BD)对人脑胶质母细胞瘤细胞U251抗肿瘤的作用机制。方法MTT法、集落形成、吉姆萨染色检测不同浓度BD对U251细胞增殖影响;Hochest33342观察细胞凋亡形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测Bcl-2、Caspase-3蛋白凋亡变化。结果BD可以明显抑制U251的增殖,其抑制作用呈明显的时间、剂量依赖关系。在给药24h后,呈强蓝色荧光,并且细胞在BD18.75,25.00μmol·L-1出现显著凋亡,下调Bcl-2,Caspase-3蛋白表达。结论BD能显著地抑制U251细胞的增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体凋亡有关。     

MTT法测定中药益气活血方KLW_1对神经胶质瘤细胞U87-MG细胞增殖的抑制作用

目的观察中药KLW_1对神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用。方法采用MTT法在不同时间(24、48、72 h)检测系列浓度的KLW_1(2.5、5.0、10.0及20.0 mg/mL)及TMZ(50.0、100.0、200.0及400.0μmol/L)对人神经胶质瘤细胞U87-MG的抑制作用,同时进行空白对照比较。结果 KLW_1及TMZ与空白相比均能抑制人胶质瘤细胞U87-MG的增殖,且KLW_1对U87-MG增殖的抑制作用与给药浓度及时间成正相关。在72 h药物浓度20.0 mg.mL-1时,抑制率最高,为64%。结论中药KLW_1对人胶质瘤细胞U87-MG的增殖有抑制作用,其机理与抑制瘤细胞的增殖有关,且作用强度与作用时间、浓度相关。     

RNA干扰靶向XIAP对人脑胶质瘤细胞U251的生物学行为影响

目的 采用RNA干扰技术（RNAi）抑制X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）,观察抑制前后人脑胶质瘤细胞U251的生物学行为.方法 DNA重组技术合成针对人脑胶质瘤U251细胞XIAP基因三条siRNA（siRNA1,siRNA2,siRNA3）,以脂质体2000作为载体进行转染,RT-PCR法检测XIAP的mRNA表达,选择特异性较高的siRNA,以此 siRNA为标准建立20 nmol/L、30 nmol/L、50 nmol/L3个浓度梯度,转染细胞,Western blot 检测XIAP基因的蛋白表达,选出最低有效浓度;流式细胞仪检测抑制前后细胞周期和凋亡率.结果 siRNA成功转染了人脑胶质瘤细胞U251,转染率达到80%以上;RT-PCR检测siRNA2特异性较高;Western-blot检测终浓度为30 nmol/L的siRNA抑制效率较高;流式细胞仪检测停滞在G0/G1期的细胞增多,在S期的细胞减少,并且细胞的凋亡率增加.结论 通过RNA干扰可以抑制人脑胶质瘤U251细胞XIAP的表达,促进人脑胶质瘤细胞凋亡,从而抑制细胞的生长.     

鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响

目的观察鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响,探讨鹿茸多肽抑制肿瘤细胞的增殖及调节细胞周期作用的机制。方法在体外传代的培养人胶质瘤细胞(U251)细胞株中加入不同浓度(50、100、200、400、800μg/mL)的鹿茸多肽,诱导培养48 h,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法检测鹿茸多肽对肿瘤细胞增殖情况,计算抑制率;流式细胞术(FCM)分析鹿茸多肽,诱导培养肿瘤细胞48 h后,细胞周期变化情况。结果形态学观察表明,与对照组相比,随着药物剂量的增加,实验组细胞密度逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,细胞体积逐渐缩小,细胞内颗粒逐渐增多。MTT法检测结果表明,鹿茸多肽对肿瘤细胞的增殖抑制作用明显,细胞生长抑制率随着剂量增加抑制率逐渐增加,呈现出良好的剂量依赖性。FCM检测表明,肿瘤细胞G0/G1期与S期所占百分比逐渐减少,G2/M期阻滞。48 h均出现凋亡峰,及凋亡细胞群。结论鹿茸多肽对体外培养的人胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,并具有量效关系。可使肿瘤细胞阻滞在细胞周期的G2/M期,继而引起的细胞周期阻滞和诱导其凋亡。     

广西虎纹捕鸟蛛毒诱导U251胶质瘤细胞凋亡 及Caspase-3的激活

目的:探讨虎纹捕鸟蛛毒抑制体外脑胶质瘤细胞系U251生长并诱导其凋亡,激活半胱天冬酶-3(Caspase-3)的作用。方法:将U251细胞分为3组:空白组、顺铂组、加药组(虎纹捕鸟蛛毒素浓度为37.5,50,75,100,150 mg·L-1),毒素作用24,48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性并与顺铂组、空白组做对比;流式细胞仪AnnexinV-FITC检测细胞凋亡率;Caspase-3分光光度法检测Caspase-3的相对活性。结果:虎纹捕鸟蛛毒素剂量为37.5,50,75,100,150 mg·L-1时,对U251细胞的增殖有显著性抑制作用(P<0.05或P<0.01),IC50为53.48 mg·L-1。虎纹捕鸟蛛毒素可诱导U251胶质瘤细胞凋亡并呈浓度依赖关系。在剂量为150 mg·L-1诱导48 h,细胞早期凋亡率84.1%,晚期凋亡率4.48%。用不同浓度分别处理细胞,Caspase-3活性于48 h,150 mg·L-1时达高峰,对细胞中的执行分子Caspase-3的激活速度快,活化程度为9.23,并存在剂量依赖关系和浓度依赖性的升高。结论:虎纹捕鸟蛛毒素明显抑制U251细胞生长并诱导其发生凋亡,凋亡过程中有Caspase-3的激活。