黄芪注射液对高糖或AGEs培养肾小球系膜细胞增殖和Na+-K+-ATP酶活性的影响

[目的]观察黄芪注射液对高糖或糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Na -K -ATP酶活性的影响。[方法]用含高糖或AGEs的培养液配制黄芪注射液、氨基胍,同时设对照。GMC培养48h后,四甲基氮唑盐(MTT)法考察GMC的增殖情况,试剂盒测试细胞悬液中细胞蛋白含量,再进行Na -K -ATP酶测定。[结果]葡萄糖或AGEs中GMC的吸收度值增大,Na -K -ATP酶活性显著降低,与正常培养液比较具有显著性差异。而加入黄芪注射液后,则表现为对抗高糖或AGEs对GMC的增殖作用,并能提高Na -K -ATP酶活性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖或AGEs对GMC的过度增殖,修复高糖或AGEs致GMC的Na -K -ATP酶活性降低,起到保护细胞的作用。     

黄芪注射液对AGEs培养肾小球系膜细胞的影响

目的:观察黄芪注射液对糖化终产物(AGEs)培养大鼠肾小球系膜细胞(GMC)形态学、细胞周期及氧化应激的影响。方法:用含AGEs的培养液配制黄芪注射液、氨基胍,同时设对照。GMC培养48 h后,加混合荧光染液进行染色,并立即进行荧光显微观察。另用流式细胞仪分析GMC的周期。试剂盒测定细胞上清液SOD、MDA和GSH-PX,流式细胞仪检测细胞内ROS含量。结果:形态学显示,正常GMC形态结构正常。而GMC在AGEs的刺激下,细胞数量明显增多,细胞结构不甚清晰,细胞S期延长,G0/G1缩短,细胞内SOD、GSH-PX下调,ROS、MDA上调。在系统中加入黄芪注射液后细胞异常增殖明显减少,细胞形态趋于正常,使S期细胞减少,SOD、GSH-PX活力提高,ROS、MDA含量降低。结论:黄芪注射液能对抗AGEs对GMC的损伤作用。其可能是通过抑制氧化应激来保护GMC免受AGEs的损害,从而达到防治糖尿病肾病的目的     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及TGF-β_1 mRNA和NF-κB表达的影响

目的:研究当归补血汤对培养在高糖条件下肾小球系膜细胞(GMC)增殖及GMC中转化生长因子-β1mRNA(TGF-β1mRNA)及核转录因子(NF-кB)蛋白的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:①利用噻唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况;②用荧光定量PCR的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中TGF-β1mRNA表达的情况;③用Western-blot的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中NF-кB蛋白的表达情况。结果:高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也增加(P0.05)。而当归补血汤能明显抑制GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应减少(P0.05或P0.01),并呈一定量效关系,即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应增加或减少。结论:高糖可促进GMC增殖及GMC中TGF-β1mRNA和NF-кB蛋白的表达增加,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖,抑制细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,说明当归补血汤能直接抑制GMC增殖、GMC中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,从而发挥预防和治疗肾小球硬化和间质纤维化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

川芎嗪对高脂高糖饮食与STZ诱致大鼠 肾损伤保护作用的抗氧化机制

目的:探讨川芎嗪对高脂高糖饮食与链脲佐菌素(STZ)诱致大鼠肾脏损伤保护作用的抗氧化机制。方法:SD大鼠70只。除正常组外,其余大鼠均给予高脂-高糖饲料喂养4周,再给予STZ(40 mg.kg-1,ip)造模,72 h后测定空腹血糖,将血糖>16.67 mmol.L-1的大鼠随机分为4组:模型组,二甲双胍组(250 mg.kg-1),川芎嗪低、高剂量组(80,160 mg.kg-1),ig,连续8周。末次给药后,收集24 h尿,测定尿量和尿蛋白量;测定血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)等变化;测定肾组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和Na+-K+-ATP酶活性;测定糖化血红蛋白(HbAlc)和糖基化产物(AGEs)的含量。结果:模型大鼠SCr,BUN含量明显升高(P<0.01);肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,Na+-K+-ATP酶活性减弱(P<0.01);HbAlc和AGEs明显升高(P<0.01)。川芎嗪高、低剂量治疗8周后,明显降低SCr和BUN含量(P<0.05);减低肾组织MDA含量,提高SOD和Na+-K+-ATP酶活性(P<0.01,P<0.05);明显降低HbAlc和AGEs的含量(P<0.01)。结论:川芎嗪对高糖高脂饮食与STZ诱致大鼠肾损伤具有保护作用,其机制可能与增强肾脏组织抗氧化作用有关。     

黄芪对晚期糖基化终末产物作用下肾小球系膜细胞的影响

目的：研究黄芪对晚期糖基化终末产物（AGEs）作用下牛肾小球系膜细胞（GMC）增殖和损伤的影响。方法：采用MTT比色法,观察黄芪对体外AGEs培养的GMC增殖的影响。以GMC细胞膜与阿利新蓝（AB）结合量为指标,观察黄芪对AGEs导致的系膜细胞膜损伤的影响。利用AO/EB染料观察AGEs作用下GMC的凋亡,并用荧光显微镜观察黄芪对凋亡的抑制作用。结果：黄芪对GMC增殖有抑制作用,可对抗AGEs导致的细胞膜负电荷减少,并且对抗AGEs诱导凋亡的作用,对系膜细胞有保护作用。结论：黄芪可有效抑制AGEs作用下GMC增殖并有细胞保护作用,是治疗糖尿病肾病的有效药物。     

生姜挥发油对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究生姜挥发油对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用结扎小鼠双侧颈总动脉反复缺血再灌注模型,化学比色法测定脑组织Na ,K -ATP酶、Ca2 -ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果与假手术组比较,模型对照组小鼠脑组织Na ,K -ATP酶、Ca2 -ATP酶活性降低(P<0.01),SOD活性与MDA含量无明显变化。生姜挥发油能显著升高全脑缺血再灌注模型小鼠脑组织Na ,K -ATP酶、Ca2 -ATP酶和SOD活性(P<0.05或P<0.01),显著降低MDA含量(P<0.05)。结论生姜挥发油对缺血再灌注脑组织损伤的保护作用机制与增强ATP酶活性和抗氧化有关。     

参芪通络注射液对缺血再灌注损伤大鼠脑组织Na~+K~+Ca~(2+)Mg~(2+)及Na~+-K~+-ATP酶的影响

目的:探讨中药参芪通络注射液对缺血再灌注损伤大鼠脑组织Na+、K+、Ca2+、Mg2+及Na+-K+-ATP酶活性的影响。方法:采用4血管法造成缺血再灌注脑损伤动物模型,分别给予不同剂量参芪通络及复方丹参注射液,观察对脑组织Na+、K+、Ca2+、Mg2+及Na+-K+-ATP酶活性的影响。结果:高剂量参芪通络注射液可显著调节脑细胞内外离子分布,提高Na+-K+-ATP酶活性,部分指标与对照药物复方丹参注射液比较存在显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:参芪通络注射液具有显著调节脑细胞离子分布,提高Na+-K+-ATP酶活性作用,此可能系其脑保护作用机制之一。     

滋肾通络方含药血清对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的：从细胞水平观察滋肾通络方含药血清对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular Mesangial Cells,GMCs)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)防治中的可能机制。方法：体外培养培养大鼠肾小球系膜细胞株,利用噻唑蓝(3-［4,5-dimethylthylthiazol-2-yl］-2,5 diphenyltetrazolium broide,MTT)比色法动态观察各组含药血清作用下各组GMC不同时间点的增殖情况。结果：与正常组相比,高糖+LPS能明显刺激体外培养的GMC增殖,而与模型组相比,滋肾通络方含药血清能明显抑制GMC增殖。结论：高糖+LPS可促进GMC增殖,滋肾通络方含药血清能明显抑制高糖+LPS条件下GMC增殖,从而发挥预防和治疗肾小球硬化,进而延缓DN的进展。     

糖痹康对大鼠糖尿病周围神经病变氧化应激影响的实验研究

目的 探讨糖痹康对链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病周围神经病变(Diabetic penipheral neuropathy,DPN)大鼠抗氧化作用的影响.方法 腹腔注射STZ 55 mg/kg建立糖尿病大鼠模型,分为正常组,模型组,弥可保组,糖痹康低、中、高剂量组.各组每周测1次体重,8周后处死大鼠,测定血清中血糖(Glu)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合成酶(NOS)、一氧化氮(NO)和糖基化终产物(AGEs)含量及坐骨神经中醛糖还原酶(AR)和Na+-K+-ATP酶活性.结果 坐骨神经组织病理学检查显示,糖痹康组坐骨神经病理学改变较模型组轻.与模型组比较,糖痹康各剂量组大鼠体重第8周差异有统计学意义(P均＜0.01);血清SOD、NOS和NO含量增高(P均＜0.05),AGEs、MDA含量显著降低(P均＜0.01);坐骨神经AR浓度显著降低(P均＜0.01),Na+-K+-ATP酶表达显著增加(P均＜0.05).结论 糖痹康可改善STZ诱导的DPN过高的氧化应激状态,减轻氧化应激造成的周围神经结构和功能损害,对DPN有一定的神经保护作用.     

丹参酮ⅡA抗过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡作用及机制研究

目的:观察丹参酮ⅡA对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:采用差数贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以200μmol/L过氧化氢作用2h模拟心肌细胞氧化应激模型,分别以丹参酮ⅡA高、中、低剂量在造模前干预24h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内游离钙及心肌细胞线粒体膜电位的变化,检测心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果:模型组心肌细胞经200μmol/L过氧化氢作用2h后,凋亡率显著增高。与模型组比较,丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞凋亡率。过氧化氢可导致心肌细胞内游离钙显著增加,线粒体膜电位、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著降低。丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞内游离钙浓度,增加线粒体膜电位、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结论:丹参酮ⅡA可以抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡,这可能与其增强细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,降低细胞内钙超载有关。     

银杏叶提取物对运动大鼠肌膜Na+,K+-ATP酶活性的影响

 目的为研究银杏叶提取物(EGb761)对大鼠大强度跑台运动及其肌膜Na⁺,K⁺-ATP酶活性的影响。方法采用大强度上坡跑大鼠运动模型,测定运动力竭时间、Na⁺,K⁺-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性、谷胱甘肽含量、总抗氧化能力、丙二醛(MDA)水平。结果EGb761可以提高大鼠大强度运动至力竭的时间,并使单次定量运动后即刻白肌肌膜总抗氧化能力(TAOC)和谷胱甘肽含量(GSH)升高、MDA水平下降。结论EGb761可能通过直接和间接途径清除大强度常规训练时产生的自由基,保护肌膜Na⁺,K⁺-ATP酶,提高训练效果,延长运动时间;明显提高单次定量运动后即刻GSH,TAOC,降低肌膜MDA水平。     

人参二醇组皂甙对肾缺血再灌流性血清致伤的肾小管细胞膜稳定性的影响及机制研究

目的:用培养的人肾小管细胞,观察人参二醇组皂甙(PDS)对肾缺血再灌流性血清致伤的小管细胞膜稳定性的影响,并探讨其机制。方法:提取兔肾缺血再灌流后血清(SIR)及对照血清(SC),用不同的培养基(普通培养基、对照血清、缺血血清以及缺血血清加PDS)分别与肾小管细胞共培养96小时,生化法测定培养液或细胞中MDA含量以及SOD、LDH、Na -K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活力。结果:SIR可使培养液中提示细胞膜脂质过氧化程度的MDA含量和表示膜完整性的细胞外LDH活力均显著升高,同时胞内的SOD、Na -K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活力明显降低,而PDS则可抑制SIR的这些效应的发挥。结论:PDS具有增强急性肾缺血再灌流性兔血清致伤的培养人肾小管细胞膜稳定性的作用。其机制可能为增强SOD活力、减轻氧自由基对细胞膜的攻击,增强细胞膜上ATP酶的活性以维持细胞内外水、电解质平衡等作用有关。     

桂竹糖芥强心苷G对Na+,K+-ATP酶的抑制作用

对照哇巴因观察糖芥强心苷Ｇ对大鼠心肌ＡＴＰ酶活性的影响。结果表明糖芥苷Ｇ体外显著抑制心肌Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶,并呈浓度依赖性,而ＡＴＰ对糖芥苷Ｇ的作用几无影响。     

复方血尿停经肝微粒体代谢后对肾小球系膜细胞的影响

目的探讨复方血尿停治疗以系膜增生为主要病理改变的肾小球疾病的作用机制。方法将复方血尿停与大鼠肝微粒体共同孵育后加入到肾小球系膜细胞(GMC)体外培养体系中,MTT法观察细胞增殖情况,放射免疫法测定白细胞介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)水平,速率法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果经肝微粒体代谢后,复方血尿停2、4、8mg/mL均抑制GMC的增殖及IL-6、ET-1的产生,且呈剂量依赖方式。结论复方血尿停能抑制IL-6、ET-1的分泌和GMC的增殖,此作用可能是其治疗系膜增生性肾小球疾病的作用机制之一。     

人参皂甙对内毒素性休克大白鼠肝跨膜电位及细胞内Na~ 、K~ 离子活度的影响

应用细胞内微电极及离子选择性微电极(ISM)技术观察人参皂甙对内毒素性休克大白鼠肝跨膜电位及细胞内Na~ 、K~ 离子活度的影响,结果表明休克时肝跨膜电位振幅降低,细胞内Na~ 活度升高及伴有K~ 活度的下降;而人参皂甙能够防止休克时的肝跨膜电位的降低,纠正细胞内Na~ 活度升高及K~ 活度的下降。提示人参皂甙能够改善休克时膜对离子的运转功能。     

冠心舒通胶囊含药血清对AGEs诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨冠心舒通胶囊含药血清对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法:分别以0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊内容物对大鼠灌胃给药28d制备冠心舒通胶囊含药血清;以各剂量含药血清单独或联合体外制备的AGE-牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理原代培养大鼠VSMCs,MTT法检测各处理组细胞增殖水平、RT-PCR检测细胞血小板源性生长因子-B(PDGF-B)mRNA表达水平、酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清PDGF-B浓度。结果:40mg/L终浓度AGE-BSA显著增强VSMCs增殖水平(P<0.05),0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清对正常VSMCs生长未见显著影响(P>0.05),但显著抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖(P<0.05),作用具有明显的剂量依赖性。AGE-BSA诱导VSMCs PDGF-B表达与分泌显著增强(P<0.05),1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清可有效抑制AGE-BSA这一作用(P<0.05),0.5g/kg剂量血清对AGE-BSA这一作用则未见明显影响(P>0.05)。结论:冠心舒通胶囊可剂量依赖性抑制AGEs诱导的VSMCs增殖,作用机制与抑制AGE诱导的PDGF-B表达与分泌有关。     

中风后遗症气虚血瘀大鼠模型脑组织和血清钠、钾、钙、镁离子含量及脑组织和红细胞膜ATP酶活性的研究

目的对中风后遗症气虚血瘀大鼠模型脑组织和血清钠、钾、钙、镁离子含量及脑组织和红细胞膜上钠、钾、钙、镁、钙镁 ATP 酶活性进行研究。方法建立中风后遗症气虚血瘀大鼠模型,采用原子分光光度计法测定大鼠模型脑组织和血清钠、钾、钙、镁离子含量,采用定磷法测定脑组织和红细胞膜上钠钾、钙、镁、钙镁 ATP 酶活性。结果刺激组符合中医“气虚血瘀”证候。刺激组脑组织钠离子显著高于正常组和非刺激组(P<0.01);而血钠显著低于正常组、非刺激组(P<0.05,P<0.01),血钾显著低于非刺激组(P<0.01),血钙、血镁显著低于正常组(P<0.05,P<0.01);脑组织镁 ATP 酶显著高于正常组(P<0.05),红细胞钙 ATP 酶显著低于正常组和非刺激组(P<0.05),红细胞镁、钙镁 ATP 酶显著低于正常组(P<0.05)。结论能量代谢障碍和血液中离子紊乱可能是中风后遗症“气虚血瘀”大鼠模型形成的部分原因。     

人参皂苷对糖基化终末产物条件下视网膜Müller细胞活力的影响

目的：探讨人参皂苷对糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法：以改良酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将纯化培养的视网膜Müller细胞分别置于低剂量AGEs（终质量浓度为75 mg·L^-1）及高剂量AGEs（终质量浓度为150 mg·L^-1）下进行培养,并分别以人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁及人参皂苷提取物干预。在干预24,48,72 h后以酶联免疫吸附法测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量,以推测Müller细胞活力。结果：低AGEs组24,48 h的LDH漏出量较正常对照组均无明显差异,但72 h的LDH漏出量较正常对照组增多（P<0.05）;高AGEs组各时段LDH漏出量均较正常对照组以及低AGEs组增多（P<0.05）;人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁及人参皂苷提取物均能减少低AGEs组48,72 h的LDH漏出量（P<0.05）,减少高AGEs组各时段的LDH漏出量（P<0.05）。结论：AGEs能明显增加视网膜Müller细胞膜的通透性,降低细胞活力,并且与干预的时间、浓度有关;人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁及人参皂苷提取物能降低本实验中AGEs条件下Müller细胞膜的通透性、提高Müller细胞膜稳定性,增强细胞活力,尤其以人参皂苷提取物效果显著。     

补肾益气活血方对胎儿宫内生长迟缓孕鼠红细胞膜钠、钾-ATP酶及钙、镁-ATP酶作用的研究

目的:研究补肾益气活血方对被动吸咽所致宫内胎儿生长迟缓(IUGR)孕鼠红细膜的保护作用。方法:以钠、钾-ATP 酶(Na~ 、K~ -ATPase),钙、镁-ATP 酶(Ca~(2 )、Mg~(2 )-AT-Pase)活性为指标,并观察红细胞形态。结果:用药组和对照组 Na~ 、K~ -ATPase(0.32±0.07、0.38±0.11μmolPi·mg pro~(-1)·h~(-1))、Ca~(2 )、Mg~(2 )-ATPase(0.79±0.10、0.85±0.08μmolPi·mgpro~(-1)·h~(-1))活性均高于模型组(0.22±0.03、0.52±0.08μmolPi·mg pro~(-1)·h~(-1)),均有显著性差异(P< 0.01);前两组之间无显著性差异(P>0.05)。电镜下红细胞形态用药组基本正常,异形红细胞出现率(6.5%)接近对照组(4.0%),而模型组达53.0%。结论:补肾益气活血方具有保护红细胞膜 ATPase 活性、维持红细胞正常形态的作用,使红细胞变形能力恢复,从而改善子宫和胎盘血流灌注及营养供给,防止 IUGR 的发生。