木贼提取物对大鼠动脉粥样硬化早期血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究木贼正丁醇提取物对大鼠动脉粥样硬化（AS）早期主动脉平滑肌细胞增殖及凋亡的影响。方法选用雄性SD大鼠，随机分为正常对照、模型、阻性药对照及提取物组。复制食饵性AS早期模型，同时给予提取物预防性给药。以吉非罗齐为阳性药对照。实验9w，观察主动脉壁病理形态学变化，流式细胞术定量检测主动脉壁平滑肌增殖及凋亡率。结果木贼正丁醇提取物组平滑肌凋亡率明显高于模型组（P〈0．01），增殖指数低于模型组（P〈0．01）。结论木贼正丁醇提取物可促进AS早期平滑肌凋亡，抑制其增殖，具有阻断AS早期病变进展的作用。     

血管紧张素原对动脉粥样硬化的作用及机制

目的探讨血管紧张素原(AGT)对动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法构建AS小鼠模型,RT-PCR检测AS小鼠斑块组织和正常小鼠主动脉血管组织中AGT的表达水平。以人巨噬细胞RAW264.7和人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)为研究对象,转染siRNA AGT、siRNA control,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染后的AGT水平。MTT检测细胞转染后细胞的增殖情况,流式细胞仪检测转染后的细胞凋亡情况。Western印迹检测转染后细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果 AS小鼠斑块组织中AGT的表达水平高于正常小鼠主动脉组织(P<0.01)。siRNA AGT可以有效抑制巨噬细胞RAW264.7和人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC中AGT的转录表达。转染siRNA AGT后的巨噬细胞RAW264.7存活率与siRNA control组比较差异显著(P<0.01),转染siRNA AGT后的主动脉平滑肌细胞HA-VSMC存活率与siRNA control组差异显著(P<0.01),抑制AGT的表达可以抑制巨噬细胞和平滑肌细胞的增殖。转染siRNA AGT后的巨噬细胞RAW264.7凋亡率显著高于siRNA control组(P<0.01);转染siRNA AGT后的主动脉平滑肌细胞HA-VSMC凋亡率显著高于siRNA control组(P<0.01)。转染siRNA AGT后的巨噬细胞RAW264.7和主动脉平滑肌细胞HA-VSMC中Caspase-3、Bax蛋白表达量显著高于siRNA control组,Bcl-2蛋白表达量显著低于siRNA control组(均P<0.01)。结论AGT在鼠AS斑块组织中过表达,抑制AGT可以抑制AS相关细胞增殖,促进细胞凋亡,作用机制与凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax有关。     

两种木贼提取物对高血脂大鼠血管内皮保护作用的扫描电镜观察

目的扫描电镜对比观察两种木贼提取物对高血脂大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响。方法50只健康雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,吉非罗齐（阳性对照药）组,木贼正丁醇提取物组,正丁醇提取剩余物组。实验9w后取主动脉用扫描电镜观察血管内皮细胞的结构变化。结果木贼提取物组大鼠血管内皮细胞排列比较整齐,形态结构基本正常,内皮细胞间隙较小,细胞黏附和脂质沉积少见。结论超微结构观察提示两种木贼提取物对高血脂所致主动脉血管内皮细胞损伤有良好的修复和保护作用,正丁醇提取物效果尤为明显。     

木贼有效部位提取物对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡相关基因的调控

目的提取木贼有效部位,并观察其对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响,探讨其保护血管内皮,抗AS(AS)的机制。方法乙醇回流提取、大孔树脂分离纯化出木贼有效部位,并测定其中槲皮素与阿魏酸的含量;ox-LDL刺激培养的HUVECs;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞Caspase-3、Bax、Bcl-2的mRNA表达。结果木贼有效部位槲皮素与阿魏酸的平均含量分别为1.69,1.23 mg/g,纯度为63.28%;木贼有效部位组能明显降低内皮细胞Caspase-3及Bax mRNA的表达(P<0.01),升高Bcl-2 mRNA的表达(P<0.01),明显降低Bax/Bcl-2比值(P<0.01)。结论所得木贼提取物达到有效部位标准,并通过调节凋亡相关基因抑制ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡。     

白黎芦醇对AS模型大鼠主动脉bcl-2及caspase-3表达影响的研究

目的 观察白黎芦醇对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠主动脉壁平滑肌细胞bcl-2和caspase-3 mRNA表达的影响.方法 雄性SD大鼠复制食饵性AS早期模型,用药组灌胃白藜芦醇70 mg/(kg·d)共4 w.造模给药用逆转录聚合酶链反应,观察对照组、模型组和用药组主动脉壁平滑肌细胞bcl-2和caspase-3 mRNA的表达.结果 白藜芦醇组通过影响AS早期主动脉壁平滑肌细胞bcl-2和caspase-3表达,阻止AS的进程.结论 白藜芦醇对大鼠动脉粥样硬化具有保护作用,并能提高AS斑块稳定性.     

模拟失重大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡的变化及间断性人工重力对抗的影响

目的:观察模拟失重大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡的变化及间断性人工重力对其影响。方法: 将27只SD大鼠随机分为3组（每组9只）,即对照组(CON)、模拟失重组(SUS)及站立对抗组(STD)。以尾部悬吊大鼠模拟失重3周,同期每天悬吊23 h、站立1 h模拟间断性人工重力对抗的效果。用TUNEL染色法检测SUS组、同步对照(CON)组及STD组大鼠胸主动脉平滑肌细胞的凋亡情况;用Western blot法检测各组大鼠胸主动脉组织中Bad、FasL及Caspase-3蛋白表达的变化。结果: 与CON组比较,SUS组大鼠胸主动脉平滑肌细胞TUNEL染色阳性的细胞明显减少(P<0.01);STD组TUNEL染色阳性的细胞较CON组及SUS组显著增加（P<0.01）。SUS组Bad的表达较CON组和STD组显著减少（P<0.05）,STD组Bad的表达较CON组有增加的趋势,但无统计学差异。SUS组FasL及Caspase-3的表达较CON组显著降低(P<0.05);STD组FasL及Caspase-3的表达较CON组及SUS组显著增高(P<0.01)。结论: 模拟失重可减少大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡,每日1 h的-Gx对抗可使胸主动脉平滑肌细胞的凋亡增加,提示血管组织平滑肌细胞的凋亡在失重引起的动脉血管适应性重构中可能发挥重要作用。     

梓醇对衰老大鼠血管内皮细胞的保护作用研究

目的探讨梓醇对D-半乳糖诱导的衰老大鼠血管内皮细胞的保护作用及对内皮细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法选取3月龄Wistar大鼠32只,随机抽取8只作为正常组,余24只腹腔注射D-半乳糖复制衰老模型。造模成功后随机分为模型组、低剂量组[梓醇5 mg/(kg·d)腹腔内注射]和高剂量组[梓醇10 mg/(kg·d)腹腔内注射]3组,每组8只。12周后处死大鼠。显微镜下观察大鼠主动脉血管内皮细胞的形态学改变; TUNEL法原位标记凋亡的血管内皮细胞,计算细胞凋亡率;免疫组化法检测大鼠主动脉血管内皮细胞Caspase-3蛋白的表达; RT-PCR法检测Bcl-2及Bax的表达,并计算Bcl-2/Bax的比值。结果 D-半乳糖所致衰老大鼠主动脉血管内皮细胞出现明显病理学改变,与模型组比较,梓醇低剂量组及高剂量组均能明显改善大鼠主动脉血管内皮细胞的病理损害。模型组主动脉血管内皮细胞凋亡率明显高于正常组(P 0.01),梓醇低剂量组与高剂量组细胞凋亡率均明显低于模型组(P 0.01)。模型组Bcl-2的表达量明显低于正常组(P 0.01),而高剂量组Bcl-2的表达量明显高于模型组;模型组Bax的表达量明显高于正常组(P 0.01),高剂量组明显低于模型组;模型组Bcl-2/Bax比值明显低于正常组,梓醇低剂量组与高剂量组均能明显提高Bcl-2/Bax比值,与模型组比较差异有统计学意义(P 0.05或P 0.01);模型组Caspase-3蛋白表达明显高于正常组,而低剂量组与高剂量组Caspase-3蛋白表达均明显低于模型组(P 0.01)。结论梓醇能保护D-半乳糖所致衰老大鼠主动脉血管内皮细胞的形态学损害。梓醇的抗衰老作用可能与梓醇能抑制主动脉内皮细胞促凋亡基因Bax及Caspase-3的表达,促进抗凋亡基因Bcl-2的表达,同时上调Bcl-2/Bax比值有关。提示梓醇能抑制D-半乳糖诱导的衰老大鼠的血管内皮细胞凋亡,从而起到保护血管内皮细胞、延缓衰老的作用。梓醇的抗血管衰老作用呈现一定的剂量依赖性。     

木贼正丁醇萃取物对高脂血症大鼠血管内皮黏附分子表达的影响

目的研究木贼正丁醇萃取物对高脂血症大鼠血脂及主动脉内皮细胞黏附功能的影响。方法选用雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、病理模型组、吉非罗齐组及木贼正丁醇治疗组。复制食饵性动脉粥样硬化早期动物模型,用木贼萃取物预防性给药,以吉非罗齐为阳性药对照。实验9 w,检测血脂,流式细胞术定量检测主动脉内皮细胞ICAM-1、VCAM-1的表达及凋亡率,光镜下观察主动脉形态学变化。结果木贼萃取物组血清TG、VLDL水平较模型组显著下降(P<0.05),内皮ICAM-1表达较模型组明显下降(P<0.05),VCAM-1有下降趋势(P>0.05),凋亡率显著下降(P<0.05);形态学显示木贼萃取物组主动脉内皮损伤程度较模型组减轻。结论木贼正丁醇萃取物可保护血管内皮,降低内皮细胞黏附分子表达,阻止动脉粥样硬化早期炎症反应的发生。     

菟丝子总黄酮对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响

目的观察菟丝子总黄酮对血管平滑肌细胞凋亡的影响,并探讨其保护作用机制。方法菟丝子经溶剂提取,聚酰胺柱分离得黄酮提取物;大鼠胸主动脉平滑肌细胞传代培养,实验分四组,采用流式细胞仪检测细胞凋亡、Westen印迹法测定细胞Bcl-2和Bax蛋白表达及RT-PCR测定C-myc基因表达情况。结果菟丝子总黄酮高剂量组能够增加活细胞数量,降低死亡细胞数,特别是降低早期凋亡细胞数,与模型组比较有显著差异(P<0.05);菟丝子总黄酮高剂量组能够下降Bax蛋白表达量,与模型组比较有显著差异(P<0.05),而菟丝子总黄酮低剂量组升高Bcl-2蛋白表达量,与模型组比较有显著差异(P<0.05);菟丝子总黄酮高剂量和低剂量组C-myc m RNA表达量显著升高,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),无剂量依从效应。结论菟丝子总黄酮能抑制平滑肌细胞凋亡,其可能是通过能够下降Bax蛋白和升高Bcl-2蛋白表达,改善抗凋亡和促凋亡的蛋白失衡,增加细胞周期C-myc的基因的表达来发挥对心血管起保护作用。     

益气活血中药对糖尿病动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的探讨益气活血中药对糖尿病动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2表达的影响。方法选用新西兰家兔,利用静脉注射胰岛β细胞毒剂四氧嘧啶,继以高糖高脂饲料复制家兔糖尿病动脉粥样硬化模型,随机分为模型组、小剂量中药治疗组、大剂量中药治疗组和正常对照组,实验12周后,处死家兔,观察主动脉内膜的病理形态学改变,采用流式细胞术检测凋亡率以及凋亡相关基因Bcl-2表达。结果模型组与正常对照组比较,动脉内膜出现典型的斑块,动脉管腔极度狭窄,平滑肌细胞凋亡率明显增高(13.89%±1.53%比2.36%±0.76%,P<0.01),Bcl-2表达降低(22.04±1.38比30.48±0.68,P<0.01)。中药治疗组与模型组比较,主动脉斑块缩小,动脉管腔狭窄减轻,平滑肌细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Bcl-2表达上调(P<0.05),且大剂量中药治疗组优于小剂量中药治疗组。结论益气活血中药拮抗糖尿病动脉粥样硬化形成的机制可能与上调Bcl-2蛋白的表达,抑制血管平滑肌细胞凋亡有关。     

动脉粥样硬化对大鼠心肌钙敏感受体表达和细胞凋亡的影响

目的 观察高脂血症和动脉粥样硬化对大鼠心肌钙敏感受体(CaSR)表达和细胞凋亡的影响.方法 采用腹腔注射维生素(Vit)D3(6×105U/kg)+高脂饮食6周的方法,建立大鼠高脂血症和动脉粥样硬化模型.Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=12)和动脉粥样硬化组(n=12).采用RT-PCR和Western blot分别观察CaSR、Bax、Bcl-2、easpase-3的mRNA和蛋白表达.TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况.光镜观察腹主动脉和心肌形态学变化.电镜观察心脏超微结构变化.紫外分光法检测乳酸脱氢酶、肌酸激酶、超氧化物岐化酶的活性和丙二醛的含量,电化学免疫发光法检测肌钙蛋白水平.结果 动脉粥样硬化组乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性、丙二醛含量和肌钙蛋白水平、细胞凋亡指数以及CaSR、Bax和caspase-3的表达均高于对照组,而超氧化物岐化酶活性则低于对照组,Bcl-2表达低于对照组,心肌细胞超微结构损伤严重.结论 高脂血症和动脉粥样硬化可引起大鼠心肌CaSR的表达增加和细胞凋亡,其机制与心肌缺血所致的氧化应激有关.     

肝细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2在慢性乙型重型肝炎中的作用

目的 探讨肝细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2在慢性乙型重型肝炎(慢重肝)发生发展机制中的作用.方法 选择慢重肝肝组织标本68例(慢重肝组),正常肝组织标本20例(对照组).采用原位末端转移酶标记技术(terminaldeoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP...     

脑缺血再灌流损伤神经细胞凋亡与Bcl-2和caspase-3的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌流后神经细胞凋亡及其与Bcl-2和caspase-3基因表达的关系。方法应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌流不同时间点神经细胞凋亡的变化与Bcl-2mRNA和caspase-3 mRNA的表达。结果(1)脑缺血再灌流后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区，随着再灌流时间的延长凋亡细胞数逐渐增加，至24h达高峰，2d开始下降，14d时仍高于假手术组。(2)脑缺血再灌注2h后，神经细胞Bel-2 mRNA开始表达，并随着再灌流时间的延长而增强，12～24h达高峰，2d后逐渐下降，至14d略高于假手术组。(3)脑缺血再灌流后，神经细胞caspase-3 mRNA的表达与Bcl-2m RNA的表达规律相似，但于再灌流24h达高峰。结论脑缺血再灌流后，缺血周围区神经细胞的凋亡是-个动态的渐进过程，Bel-2基因表达可能抑制细胞凋亡，caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。     

肺炎克雷伯菌肺炎对大鼠胸腺细胞凋亡的影响及机制

目的研究肺炎克雷伯菌肺炎对大鼠胸腺细胞凋亡的影响及机制。方法选择10只6周龄健康SPF级Sprague Dawleg雄性大鼠,构建肺炎克雷伯菌肺炎大鼠模型,另外10只SD大鼠尾对照组。造模第6天取腹腔静脉血进行白细胞和中性粒细胞计数。电镜观察大鼠胸腺组织切片,流式细胞术检测胸腺细胞凋亡情况。免疫组织化学法检测胸腺组织中IL-23、Bcl-2和Caspase-3蛋白水平,免疫共沉淀检测Bcl-2泛素化水平。结果模型组大鼠胸腺组织中白细胞和中性粒细胞数目显著高于对照组(P0.05)。电镜观察显示模型组大鼠胸腺细胞凋亡情况明显,而对照组无显著凋亡情况,模型组胸腺细胞凋亡指数高于对照组,且具有显著性差异(P0.05)。模型组大鼠胸腺组织中IL-23和Caspase-3蛋白水平高于对照组、Bcl-2蛋白水平低于对照组,且泛素化水平高于对照组。结论肺炎克雷伯菌肺炎会导致大鼠胸腺细胞凋亡,IL-23/Bcl-2/Caspase-3的级联反应参与其中。     

木贼对动脉粥样硬化早期大鼠内皮细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的 观察木贼对大鼠动脉粥样硬化早期血管内皮细胞凋亡及bax、bcl—2表达的影响。方法 高脂饲料复制SD大鼠高脂血症和早期动脉粥样硬化模型，同时给以不同剂量木贼水煎刑灌胃，实验10w后，流式细胞术定量检测各组主动脉内皮细胞凋亡率及bax、bcl—2基因蛋白表达。结果 模型组内皮细胞凋亡率及两个基因表达明显高于正常组(P＜0．01)；木贼组内皮细胞凋亡率与bax表达量显著低于模型组(P＜0．01)，bcl—2比较虽无统计学意义，但用药后bax／bcl—2比值差异具有显著性。结论 木贼可从基因水乎调控早期动脉粥样硬化主动脉内皮细胞凋亡，干预动脉粥样硬化始动环节及其发生。     

大鼠急性脑缺血再灌注细胞凋亡调控因素的研究

目的　探讨 Bcl- 2及 Caspase- 3在脑缺血再灌注损伤中的表达及与缺血性凋亡的关系。方法　制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。通过免疫组化及原位杂交显色方法测定 Bcl- 2、Caspase- 3在脑缺血再灌注损伤后随时间延长蛋白表达的动态变化 ,并用图像分析方法测定二者的免疫强度。结果　图像分析显示 Bcl- 2表达于缺血再灌注 3h后达高峰 ,再灌注 6 h后呈下降趋势 ,2 4 h后表达明显减少 ,与 3h相比 P<0 .0 1。Caspase- 3于缺血再灌注 6 h后达高峰 ,于再灌注 2 4 h后表达下降 ,与 6 h相比 P<0 .0 1。结论　 Bcl- 2及 Caspase- 3均介导了脑缺血再灌后神经细胞凋亡的发生 ,并可能参与迟发神经细胞死亡     

红花注射液对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因的影响

目的探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及红花注射液的干预及机制。方法健康日本大耳白兔84只,随机分为对照组、缺血再灌注1、3、5h组和红花干预1、3、5h组。复制在体肺缺血再灌注损伤模型。采用电镜和原位缺口末端标记法观测肺组织细胞凋亡情况,并计算凋亡指数;免疫组织化学和原位杂交技术检测各组肺组织Bcl-2和Bax基因表达的变化。结果缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数和Bcl-2、Bax蛋白及mRNA均显著高于对照组(P<0.01)。红花干预组肺组织凋亡指数、Bax蛋白及Bax mRNA低于缺血再灌注组,而Bcl-2蛋白、Bcl-2mRNA以及Bcl-2与Bax的比值较缺血再灌注组上调(P<0.01或P<0.05)。电镜观察发现,缺血再灌注组肺毛细血管内皮细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞超微结构损伤明显,红花干预组损伤明显减轻。肺组织凋亡指数与Bax蛋白、Bax mRNA呈显著正相关(r分别=0.926,0.913;均P<0.01),与Bcl-2/Bax蛋白、Bcl-2/Bax mRNA的比值呈负相关(r分别=-0.367,-0.375;均P<0.01)。结论肺组织细胞凋亡参与了肺缺血再灌注损伤的发生,红花注射液可能通过下调Bax基因的表达,提高Bcl-2/Bax的比值抑制肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

氨溴索对大鼠胃内容物吸入性肺损伤细胞凋亡的影响

目的研究细胞凋亡在胃内容物吸入性肺损伤中的作用机制,并初步探讨氨溴索对肺损伤发生后细胞凋亡的影响。方法 30只健康Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:对照组、损伤组、氨溴索组。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bc12(B cell lymphoma/lewkmia-2)蛋白、Bax(Bc12 associated x protein)蛋白及Caspase-3蛋白表达;DNA原位末端标记(TUNEL)法测定肺组织细胞凋亡指数。结果与对照组比较,损伤组中Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达增多,细胞凋亡指数增高;Bc12蛋白表达减少;差异均显著(P<0.05)。与损伤组比较,氨溴索组Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达减少,细胞凋亡指数降低;Bc12蛋白表达增高;差异均显著(P<0.05)。结论细胞凋亡参与了胃内容物吸入后肺损伤发病过程,氨溴索在吸入性肺损伤组织中发挥抗细胞凋亡作用,可能机制在于调控死亡信号通路中Bax/Bc12蛋白表达相关。