罗格列酮对高糖环境中大鼠系膜细胞转化生长因子β1制作用的研究

目的：观察罗格列酮对高糖培养基中大鼠系膜细胞转录激活蛋白-1（AP-1）活性及转化生长因子β1（TGF—β1）表达的抑制作用,探讨罗格列酮对肾脏的直接保护作用及相关机制。方法：将大鼠系膜细胞分为对照组（C组,普通MEM培养基,含5．6mmol·L^-1葡萄糖）、高糖组（H组,30mmol·L^-1高糖MEM培养基）、甘露醇组（M组,24．2mmol·L^-1甘露醇＋C组）、大剂量罗格列酮干预组（RH组,H组＋20μmol·L^-1罗格列酮）、小剂量罗格列酮干预组（RL组,H组＋10wmol·L-1罗格列酮）;N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC-抗氧化剂）干预组（N组,H组＋5mmol·L^-1NAC）。48h后,采用EMSA检测AP-1的活性,RT—PCR和ELISA法检测TGF—β1 mRNA及蛋白含量。结果：对照组和甘露醇组AP-1和TGF-β1的表达无明显差别,高糖组AP-1活性、TGF—β1 mRNA及蛋白水平较对照组明显升高,采用NAC和罗格列酮（20tLmol·L^-1）干预后,两者表达均较高糖组明显下降。结论：罗格列酮可通过抑制AP—1活性而降低高糖所诱导的TGF-β1表达,这可能是罗格列酮发挥直接肾脏保护作用的机制之一。     

高糖环境下HGF对肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1的影响

目的研究高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)的增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)的分泌、以及肝细胞生长因子(HGF)的干预作用。方法①将RMC分为3组:正常对照组;高糖组;高糖+HGF组(25.0mmol/L葡萄糖,50ng/mlHGF)。分别培养不同时间(12,24,48,72,96h)。运用MTT法测定细胞的增殖情况。②将RMC分为3组:正常对照组;高糖组;甘露醇对照组:(20.0mmol/L甘露醇)。分别于培养的12、24、48、96h收集细胞及上清夜,用ELISA法来检测TGF-β1分泌量。③将RMC分为:正常对照组;高糖组;高糖+HGF组(HGF浓度分别为25、50、100、200ng/ml)。分别培养48h后,用ELISA法测定此时TGF-β1分泌情况。以上各组正常组中葡萄糖浓度5.5mmol/L,高糖浓度25.0mmol/L。结果①25.0mmol/L高糖在24h促进RMC增殖,肝细胞生长因子(HGF)可以抑制细胞增殖。在48,72和96h高糖抑制细胞增殖。HGF对抗高糖对细胞增殖的抑制作用;而且呈时间依赖性。②高糖促进TGF-β1分泌,HGF可以抑制TGF-β1的分泌,且呈剂量依赖性。结论高糖刺激肾小球系膜细胞TGF-β1出现稳定高表达,而给予外源性的HGF后,系膜细胞TGF-β1的分泌减少,而且呈时间依赖性。     

丹参对体外高糖环境中大鼠系膜细胞活性氧抑制作用的研究

目的：观察丹参对高糖环境中系膜细胞所产生的活性氧（ROS）及转化生长因子β1（TGF—β1）的抑制作用。方法：将细胞分为以下6组：对照组（C组,普通MEM培养基,含5．6mmol·L^-1葡萄糖）;高糖组（H组,30mmol·L^-1高糖MEM培养基）;小剂量丹参干预组（S1组,H组＋37．5mg·ml^-1丹参）;中剂量丹参干预组（S2组,H组＋75mg·ml^-1丹参）;大剂量丹参干预组（S3组,H组＋150mg·ml^-1丹参）;单纯丹参组（S组,C组＋150mg·ml^-1丹参）。分别采用激光共聚焦和ELISA法检测ROS及TGF—β1水平。结果：H组ROS水平较C组明显增高,分别采用不同浓度丹参干预后,ROS水平均显著降低,并呈剂量依赖性;与H组相比,不同剂量丹参干预组TGF-β1表达均降低,但仅S3组TGF—β1的下降具有统计学意义。与对照组相比,单纯丹参干预组中ROS和TGF—β1水平无明显变化。结论：丹参可减少高糖环境中系膜细胞ROS及TGF—β1的产生,而这可能是丹参发挥肾脏保护作用机制之一。     

高糖环境对小鼠肝脏枯否细胞增殖及分泌功能的影响

目的：探讨高糖环境下枯否细胞( kupffer cells, KCs)增殖及分泌功能的变化。方法将小鼠原代KCs培养扩增后,参照文献随机分为正常对照组(11.1 mmol/L D-葡萄糖)、低糖组(5.6 mmol/L D-葡萄糖)、中糖组(12.5 mmol/L D-葡萄糖)和高糖组(25.0 mmol/L D-葡萄糖),培养24、48和72 h后,血球计数板进行细胞计数,流式细胞仪检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖,并收集细胞上清液,应用Luminex xMAP技术检测肿瘤坏死因子-α( tumornecrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β( interleukin-1β, IL-1β)和 IL-6水平。结果培养24、48和72 h时,高糖组和低糖组KCs扩增数量、OD值明显低于对照组和中糖组(P<0．01,P<0．05)。培养24 h时高糖组和低糖组G0/G1期明显高于对照组和中糖组,S期和G2/M期明显低于对照组和中糖组(P<0．01)。培养24、48和72 h时高糖组TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显低于对照组(P<0．05)。结论高糖环境下KCs活性明显下降,增殖及分泌功能受到抑制。     

丹酚酸B对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖及转分化的作用研究

目的基于Wnt/β-catenin信号途径探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对高糖诱导心肌成纤维细胞(car-diac fibroblasts,CFs)增殖及转分化的影响。方法SD大鼠乳鼠CFs,高糖诱导,CCK-8检测不同浓度葡萄糖诱导CFs增殖的浓度及时间效应;加Sal B(12.5、25、50μmol·L^-1)预处理CFs,确定Sal B最佳给药浓度。天狼猩红染色观察胶原纤维沉积;免疫荧光及Western blot检测α-SMA表达,Western blot检测p-GSK 3β、β-catenin表达。结果与正常对照组相比,25 mmol·L^-1高糖刺激CFs24 h明显促进CFs增殖及转分化(P<0.01),增加胶原纤维沉积,α-SMA、β-catenin、p-GSK 3β表达增加;与高糖组比较,经Sal B(25μmol·L^-1)及XAV939(1μmol·L^-1)预处理后,CFs增殖明显抑制(P<0.01),胶原纤维沉积减少,α-SMA、β-catenin、p-GSK 3β表达降低(P<0.01)。结论Sal B可抑制高糖诱导CFs增殖及转分化,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

米非司酮对胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响及其机制

目的：考察米非司酮对单用或合并使用胰岛素和地塞米松诱导的胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响,并初步探讨其作用机制。方法：1）将常规培养的人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组,胰岛素（5×10^-6、5×10^-1和5×10^-8mol·L^-1）组,地塞米松（3×10^-5和3×10^-6mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6和1．5×10^-7mol·L^1）组。培养24或48h后,测定各组细胞葡萄糖消耗量,以考察人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗的形成情况,并通过胰岛素刺激和模型持续时间研究进一步验证造模效果。2）将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组,米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（5×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6、1×10～×10^-7mol·L^1）组,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-5mol·L^1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组。分别加入不同浓度的药物培养24或48h,然后对各组细胞葡萄糖消耗量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位进行测定,以考察细胞功能状态变化。结果：1）胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）作用24h可诱导人脐静脉内皮细胞发生胰岛素抵抗并可维持24h,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）作用48h可诱导细胞的胰岛索抵抗并可维持36h,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6molL^-1）共同作用48h可诱导细胞的胰岛素抵抗并可维持24h。2）地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组,以及胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组人脐静脉内皮细胞的葡萄糖摄取量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位分别显著高于地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组和胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）组;胰岛素（5×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^-1）组细胞的上述指标则与胰岛素（5××10^-7mol·L^-1）组无显著性差异。结论：胰岛素、地塞米松单独使用及合用均可诱导人脐静脉内皮细胞出现胰岛素抵抗并持续一定时间;米非司酮可改善地塞米松及地塞米松＋胰岛素诱导的胰岛素抵抗内皮细胞的功能紊乱,而对胰岛素诱导的胰岛素抵抗无改善作用。     

人参皂苷Rd对高糖所致HMC表达TGF-β1的影响

目的 考察人参皂苷Rd对高糖条件下人肾小球系膜细胞（human mesangial cells,HMC）增殖及对HMC分泌的转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法 将人肾小球系膜细胞分为正常血糖组、高糖对照组、高糖＋药物组（5组,人参皂苷Rd浓度分别为6.25,12.5,25,50,100μg.mL 1）,分别于24,48,72 h用MTT法检测细胞增殖情况;实时定量荧光PCR检测TGF-β1的mRNA的表达;ELISA试剂盒检测HMC分泌TGF-β1的量。结果 高糖对HMC的增殖无明显影响,但能显著促进HMC分泌TGF-β1的功能,并上调TGF-β1 mRNA的表达,与正常血糖组比较具有统计学意义;而不同浓度的人参皂苷Rd对高糖所致HMC合成、分泌TGF-β1的功能均有不同程度的抑制作用,其中,浓度为12.5,25,50,100μg.mL 1的人参皂苷Rd效果显著,具有显著性差异（P〈0.05）,且能下调TGF-β1 mRNA的表达。结论 人参皂苷Rd可以减少高糖状态下HMC合成和分泌的TGF-β1蛋白的量以及下调TGF-β1 mRNA的表达。     

舒洛地特对高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用研究

目的：观察舒洛地特对高糖培养基中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用,探讨舒洛地特对肾脏的保护作用。方法：培养大鼠肾小球系膜细胞24 h后,将培养的细胞分为对照组（C组,普通培养基,含5.6 mmol·L-1葡萄糖）,甘露醇组（M组,24.2 mmol·L-1甘露醇＋C组）,高糖组（H组,30 mmol·L-1高糖MEM培养基）、舒洛地特干预组（S组,H组＋1.0 LRU·ml-1舒洛地特）。培养24 h后,RT-PCR和Western blotting法检测各组CD36 mRNA及蛋白的表达。结果：对照组和甘露醇组CD36mRNA（0.24±0.07和0.21±0.06）及蛋白（0.26±0.08和0.22±0.07）的表达差异无统计学意义（P〉0.05）,高糖组CD36 mRNA（0.62±0.11和0.24±0.07）及蛋白（0.83±0.23和0.26±0.08）表达显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,舒洛地特干预组CD36 mRNA（0.36±0.13和0.62±0.11）及蛋白（0.42±0.15和0.83±0.23）表达显著低于高糖组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：舒洛地特可抑制高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原的表达,可能是舒洛地特发挥肾脏保护作用的机制之一。     

脂联素对高糖环境下肾小球系膜细胞转化生长因子β1及细胞间粘附分子1表达的影响

目的研究脂联素(ADPN)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞间粘附分子1(ICAM-1)表达的影响。方法以培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为3组:正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖,NG组),高糖组(30mmol/L葡萄糖,HG组),高糖+不同浓度的脂联素组(30mmol/L葡萄糖,2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0μg/mlADPN)分别作用48h后,用ELISA法测定细胞内TGF-β1及ICAM-1表达。结果作用48h后,高糖明显上调细胞内TGF-β1及ICAM-1表达。加入低浓度脂联素对于TGF-β1、ICAM-1表达影响不大,而随着脂联素浓度的升高,TGF-β1及ICAM-1的表达明显下降,与高糖组相比,浓度为10～20mg/L的脂联素组TGF-β1及ICAM-1的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论中等以上浓度的脂联素能下调TGF-β1及ICAM-1表达,提示脂联素可能通过阻抑TGF-β1及ICAM-1表达起到抗纤维化,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用。     

雷帕霉素对TGF-β1诱导的Treg细胞的体外影响

目的体外观察雷帕霉素（Rapa）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的CD4^＋CD25^＋Treg细胞（i Treg）扩增的有效性及其相关性。方法以抗原提呈细胞（APC）、植物血凝素（PHA,10μg·L^-1）、TGF-β1（7.5 ng·L^-1）联合刺激诱导CD4^＋CD25^-T细胞转化为CD4^＋CD25^＋Treg细胞,培养第5日添加不同浓度Rapa刺激培养3d作为实验组,设阴性对照组（不加Rapa）和空白对照组（RPMI 1640培养基）,FCM检测各组中CD4^＋CD25^＋T细胞比例变化情况;MTT法测定各组诱导细胞的抑制功能。结果①阴性对照组CD4＋CD25＋T细胞比例较空白对照组增高（P〈0.01）,而实验组CD4^＋CD25^＋T细胞比例显著升高,Rapa（100 ng·mL^-1）增殖效应显著（P〈0.01）,CD4^＋CD25^＋T细胞增殖比例达到42.6%;②实验组i Treg细胞能够明显抑制同型CD4^＋CD25^-T细胞的增殖（P〈0.01）且不同浓度Rapa之间存在差异,100 ng.mL^-1Rapa抑制效应最明显（P〈0.01）。结论在体外条件下,Rapa可以促进TGF-β1诱导分化的Treg细胞增殖,且具有免疫抑制功能,这为体外回输Treg细胞治疗疾病开辟了新途径。     

罗格列酮对高糖环境大鼠肾脏成纤维细胞影响

目的观察罗格列酮对高糖环境下大鼠肾脏成纤维细胞（NRK）的影响,探讨RGZ对糖尿病肾病的保护作用及其机制。方法体外培养NRK细胞,分成正常对照组（NG,含1000mg／L D-葡萄糖）、高糖组（HG,含4500mg／L D-葡萄糖）、HG＋RGZ（5μmol／L）组、HG＋RGZ（10μmol／L）组和HG＋RGZ（15μmol／L）组,作用24h后,提取细胞RNA,用RT—PCR的方法检测各组转化生长因子-β1（TGF-β1）和纤溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）mRNA的表达情况。结果HG组细胞TGF—β1和PAI-1mRNA水平较NG组显著升高,RGZ可以抑制这种高表达,其作用呈剂量依赖性。结论RGZ可以改善高糖导致的肾脏成纤维细胞的损害,具有一定的肾保护作用。     

高糖对人肾近端小管细胞TGF-βmRNA表达的影响

目的 观察高糖对人近端肾小管细胞(HPTC)转化生化因子(TGF-β)mRNA表达的影响以及血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)受体1拮抗剂Irbesartan(Irb)对其干预作用。方法 无血清培养HPTC后，(1)用不同浓度葡萄糖(5．5、22．2、30、40mmol／L)培养48h，(2)用高糖(22．2MMol／L)培养6、12、24、48、72h，(3)高糖培养液中加入不同浓度的Irb(10^-3、10^-5、10^-7mol／L)作用48h；采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定HPTC表达TGF-βmRNA的水平变化。结果 高糖能促进HPTC TGF-βmRNA的表达，且呈浓度和时间依赖性。Irb能部分降低高糖诱导HPTC TGF-βmRNA的表达，且呈剂量依赖性。结论 高糖可刺激肾小管细胞表达TGF-β增加，并可能与激活局部肾素血管紧张素系统有关。     

TGF-β/Smads信号通路在姜黄素改善糖尿病大鼠心肌纤维化中的作用

目的探讨TGF-β/Smads信号通路在姜黄素改善糖尿病心肌纤维化中的作用。方法高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg~(-1)建立2型糖尿病大鼠模型,自由饮用300 mg·kg·d~(-1)姜黄素进行干预;天狼猩红染色检测各组大鼠心肌内胶原表达情况;免疫荧光检测各组大鼠心肌内CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达情况;葡萄糖(5.5、20、25、30、35、50 mmol·L~(-1))刺激大鼠乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)24 h确定最佳高糖造模浓度;30 mmol·L~(-1)高糖加姜黄素(10、25、50、100、200μmol·L~(-1))刺激CFs 24h确定最佳姜黄素给药浓度;Western blot法检测细胞内CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、TβR-Ⅲ的蛋白表达水平。结果相比于正常组,糖尿病组大鼠心肌组织胶原出现明显沉积,CollagenⅠ和CollagenⅢ表达明显增多,给予姜黄素治疗后,糖尿病大鼠心肌组织胶原沉积明显减少,CollagenⅠ和CollagenⅢ表达明显减少;30 mmol·L~(-1)高糖刺激CFs 24 h可以明显促进细胞增殖(P<0.05);而10μmol·L~(-1)姜黄素可以明显抑制高糖诱导的CFs增殖(P<0.05);30 mmol·L~(-1)高糖诱导CFs24 h以后,CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、p-Smad2、pSmad3、TβR-Ⅲ的蛋白表达明显增多(P<0.05),给予25μmol·L~(-1)姜黄素以后,上述各蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论姜黄素可通过TGF-β/Smads信号通路改善糖尿病大鼠心肌纤维化,对糖尿病大鼠心肌具有保护作用。     

罗格列酮对高糖培养肾小球系膜细胞胞外基质产生及降解的影响

目的:探讨罗格列酮(rosiglitazone maleate)对糖尿病肾病的保护机制。方法:大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常糖浓度(5.5mmol/L),高糖浓度(25mmol/L)及25mmol/L葡萄糖+20μmol/L罗格列酮的培养液中。CCK-8测定系膜细胞增殖;ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1);明胶酶谱法检测培养上清液基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)的活性。结果:高糖组系膜细胞较正常对照组出现增殖增加,合成基质蛋白Col-Ⅳ、FN增多;MMP-2及MMP-9活性下降;TIMP-1含量增加;TGF-β1分泌增加。与高糖组比较,罗格列酮干预后能逆转上述变化。结论:罗格列酮能抑制高糖培养的系膜细胞增殖,减少胞外基质合成,增加胞外基质的降解。     

氟伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞CTGF mRNA的影响及其作用机制的研究

目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达以及HMG-CoA还原酶抑制剂氟伐他汀对其的影响及作用机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,实验分为4组：低糖组（LG组,5.5 mmol/L葡萄糖）;低糖＋甘露醇组（LG＋M组,5.5 mmol/L葡萄糖＋24.5 mmol/L甘露醇）;高糖组（HG组,30 mmol/L葡萄糖）;高糖＋氟伐他汀组（HG＋Flu组,30 mmol/L葡萄糖＋10μmol/L氟伐他汀）。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CTGF和纤维粘连蛋白（FN）mRNA的表达,Western印迹检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）及其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1（p-CREB1）。结果与LG＋M组相比,HG组系膜细胞增殖明显,p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,CTGF和FN mRNA的表达增加。与HG组比较,HG＋Flu组可抑制系膜细胞增殖,p-p38 MAPK、p-CREB1的表达明显下调,CTGF和FN mRNA的表达降低。结论高糖状态下肾小球系膜细胞CTGF mRNA表达增强,p-p38 MAPK和p-CREB1表达明显升高,氟伐他汀抑制肾小球系膜细胞CTGF mRNA和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响p38 MAPK及其下游核因子CREB1的激活而实现。     

罗格列酮对血管内皮细胞胰岛素抵抗及ROS/IKK的影响

目的：探讨罗格列酮对高糖诱导胰岛素抵抗（ IR）血管内皮细胞的保护作用及可能机制。方法将人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）分为3组：正常对照组（ DMEM培养液,葡萄糖浓度为5.5 mmol·L-1）;高糖组（建立高糖诱导内皮细胞IR模型后,葡萄糖浓度为33 mmol·L-1的DMEM中培养24 h）;罗格列酮组（建立高糖诱导内皮细胞IR模型后,葡萄糖浓度为33 mmol·L-1的DMEM中加入10μmol·L-1罗格列酮干预24 h）。检测细胞存活率、细胞上清液一氧化氮（NO）和内皮素（ET-1）水平、线粒体膜电位和活性氧（ROS）变化,以及磷酸化I-κB 激酶（p-IKK）和 NF-κB 抑制蛋白（ IKBA）表达水平。结果与正常对照组比较,高糖组细胞存活率和NO水平下降,ET-1水平上升;线粒体膜电位下降, ROS含量升高;IKK磷酸化水平增加,IκBα蛋白表达下调（P〈0.01）,罗格列酮可显著逆转上述变化（P〈0.05）。结论罗格列酮可改善高糖诱导血管内皮细胞IR,其机制与抑制ROS/ IKK 通路有关。     

胆汁酸膜受体TGR5对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞FN、TGF-β1的调控作用

目的探究G蛋白偶联受体TGR5在大鼠肾小球系膜细胞中的表达以及高糖条件下对纤维连接蛋白(fibronectin,FN)以及转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白水平的影响,探索其在糖尿病肾病中可能发挥的作用。方法高糖(30 mmol·L-1glucose,HG)条件下,用特异性激动剂INT-777激活TGR5,或者对TGR5进行过表达、干扰处理,通过Western blot来检测大鼠肾小球系膜细胞中TGR5的表达情况以及FN、TGF-β1蛋白水平的变化。结果在大鼠肾小球系膜细胞中存在TGR5的表达;与对照组相比,激活TGR5后,由高糖引起的FN、TGF-β1蛋白水平的上升受到抑制(P<0.01,P<0.05);另一方面,干扰TGR5后,FN、TGF-β1的蛋白水平与对照组相比异常升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论在大鼠肾小球系膜细胞中,TGR5可以抑制由高糖引起的FN、TGF-β1蛋白水平的升高,在糖尿病肾病的发生发展中可能发挥保护作用。     

骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞增殖和胶原合成的实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSCs）对肝星状细胞（HSCs）增殖、胶原合成的影响。方法 （1）BMSCs对HSCs增殖的影响：利用transwell共培养体系,按1：1细胞比例在6孔塑料培养板上室接种BMSCs（1×105cells/well）,下室接种HSCs;对照组成纤维细胞代替BMSCs接种于上室;空白组为HSCs单独培养。培养24、48、72h后MTT法检测HSCs增殖抑制率;（2）BMSCs对HSCs胶原合成的影响：实验分为3组,A：HSCs组,B：HSCs＋TGF-β1组,C：共培养＋TGF-β1组。按上述方法进行BMSCs、HSCs共培养,培养液中加入TGF-β1诱导活化。培养72h后,取出BMSCs并换液,24h后收集培养液,用ELISA方法测定Ⅰ型胶原浓度,收集HSCs,RT-PCR检测HSCsα-SMA以及Ⅰ型胶原的基因表达。结果培养24、48、72 h后,共培养组较对照组可明显提高HSCs增殖抑制率（P〈0.01）;比较B组,C组Ⅰ型胶原浓度显著下降（P〈0.01）,同时HSCsα-SMA及Ⅰ型胶原基因表达出现显著下调（P〈0.01）。结论 BMSCs在体外可明显抑制HSCs增殖以及抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达和Ⅰ型胶原合成。     

泻心汤有效成分对高糖诱导的肾小球系膜细胞的保护作用

目的研究泻心汤有效成分对高糖诱导的肾小球系膜细胞模型的影响。方法体外高糖（30mmol·L-1）培养肾小球系膜细胞,分别加入不同浓度的小檗碱、黄芩苷和大黄提取物,孵育24h后收集细胞上清液,采用MTr法测定细胞相对活力,ELISA测定Ⅵ型胶原及单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的浓度,利用比色法检测丙二醛（尬A）的含量及超氧化物歧化酶（soD）活力。结果小檗碱、黄芩苷和大黄提取物均可剂量依赖性抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及MCP-1的分泌,提高SOD的酶活力和减少MDA的产生。结论在高糖诱导的肾小球系膜细胞中,泻心汤有效成分具有独立于降糖调脂的直接肾小球系膜保护作用。     

抗氧化剂对甲基胍所致肾小管上皮细胞凋亡的保护作用

目的研究甲基胍对人肾小管上皮细胞凋亡的影响。以及前列腺素E1（PGE1）和普罗布考的抗凋亡作用。方法HK-2细胞分5组培养,A正常对照组;B肌酐组：培养基中加入0．5mmol·L^-1肌酐;C甲基胍组：培养基中加入0．5mmol·L^-1甲基胍;DPGE1组：培养基中加入0．5mmol·L^-1。甲基胍和2μg·L^-1PGE1;E普罗布考组：培养基中加入0．5mmol·L^-1甲基胍和20μmol·L^-1普罗布考。培养48h后用MTT比色法测OD值。并检测培养液NAG酶（N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶）活性;用Hoechst染色及Annexin V-FITC／PI流式细胞仪检测细胞凋亡。结果①肌酐组和甲基胍组HK-2细胞OD值较正常对照组显著下降（P〈0．01）,NAG酶活性上升（P〈0．01）;甲基胍组与肌酐组比较,OD值和酶活性有显著性差异（P〈0．01）;PGEl组和普罗布考组与甲基胍组和肌酐组比较,OD值显著上升而NAG酶活性下降,PGE1改变幅度大于普罗布考组（P〈0．01）。②HK2细胞加入甲基胍后,Hoechst33258染色显示凋亡细胞呈现核固缩,染色加深,并出现凋亡小体。③流式细胞显示甲基胍组HK-2细胞凋亡率显著高于对照组和肌酐组（P〈0．01）。PGE1和普罗布考组的凋亡率显著下降（P〈0．01）,PGE1组下降幅度大于普罗布考组（P〈0．05）。结论肌酐、甲基胍有促进肾小管上皮细胞凋亡的作用,后者较前者明显。PGE1、普罗布考对甲基胍所致肾小管上皮细胞凋亡有一定的保护作用。