PTEN基因对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响

目的研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响。方法将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定;pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞（pBp-PTEN-BIU87）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU87细胞（pBp-BIU87）和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT法分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素（MMC）、羟基喜树碱和吡柔比星的敏感性变化。结果RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达。PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物敏感性明显提高,对吡柔比星和羟基喜树碱的药物敏感性无明显变化。结论PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对抗癌药物MMC的敏感性。     

单克隆抗体逆转多药耐药性研究进展

体外及动物实验发现抗P-糖蛋白单抗MRK_(16)、MRK_(17)等能与P-糖蛋白表达细胞膜表面的抗原决定簇结合,使P-糖蛋白构象改变,阻止药物外流,增加细胞内药物浓度。同时可通过免疫反应产生CDC和ADCC,杀伤耐药细胞。尤其是鼠人嵌合型抗P-糖蛋白单抗具有特异性好、细胞毒作用强和免疫原性低等特点。而且抗P-糖蛋白单抗与环孢菌素、IFN、脂质体包被药物等联合应用具有协同作用,为逆转MDR开辟了一条新的途径。     

热化疗对膀胱癌BIU-87细胞侵袭能力的影响及机制

目的观察不同温度下吉西他滨(GEM)热化疗对膀胱癌BIU-87细胞株侵袭能力的影响,并探讨其可能的机制。方法将处于对数生长期的BIU-87细胞分为4组,A组为对照组,B组为热化疗1组[(38±0.2)℃],C组为热化疗2组[(40±0.2)℃],D组为热化疗3组[(43±0.2)℃],GEM的工作浓度为1μg/ml。用Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力;用RT-PCR检测MMP-9m RNA的表达情况;用ELISA法检测各组细胞的MMP-9蛋白的表达情况;用EMSA检测各组细胞NF-κB的活性。结果 Transwell小室实验显示相对于A组,B、C、D组对BIU-87细胞的穿透能力均可产生抑制作用,热化疗组与对照组之间的差异均有统计学意义(P<0.05),其中D组的抑制作用最为明显。ELISA检测结果显示与对照组相比,实验组各组均能抑制MMP-9蛋白的表达,热化疗组与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05),其中D组的抑制最为明显。EMSA实验结果显示实验组NF-κB的活性明显降低,与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论热化疗能够抑制BIU-87细胞的侵袭,并且随着温度的升高抑制作用越明显,其机制可能是通过抑制NF-κB的活性,降低MMP-9蛋白的表达来发挥作用的。     

鸦胆子油乳对膀胱癌细胞系BIU-87坏死与凋亡的影响

目的探讨鸦胆子油乳对膀胱癌BIU 87细胞坏死与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法将不同浓度的鸦胆子油乳加入体外培养的BIU 87细胞 ,用流式细胞仪检测细胞凋亡与坏死比例、并检测线粒体膜电位 (MMP) ,用激光共聚焦显微镜观察细胞色素C分布。结果高浓度鸦胆子油乳作用 4h后 ,肿瘤细胞MMP明显降低 ,2 4h后多数细胞发生坏死 ,与对照组相比有非常显著性差异 (P <0 0 1) ;低浓度鸦胆子油乳作用 6h后 ,诱导细胞色素C释放 ,2 4h后可见典型的凋亡现象 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论鸦胆子油乳高浓度主要诱导肿瘤细胞坏死 ,低浓度诱导细胞凋亡。     

多药耐药1基因与膀胱癌耐药及其逆转的关系

膀胱肿瘤细胞产生耐药性，导致肿瘤化疗的失败，其主要原因之一是多药耐药1基因的过度表达。本文对多药耐药1基因与膀胱癌耐药关系及临床逆转进行探讨。     

三氧化二砷对K562/ADM耐药细胞凋亡抑制的逆转作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。方法:采用MTT比色法检测K562/ADM耐药细胞增殖活性,细胞形态学和annexinV /PI双染色检测细胞凋亡,RT-PCR检测mdr1、bcl-2和caspase-3基因mRNA的表达水平,流式细胞法(FCM)测定P-糖蛋白(P -glycoprotein,P-gp)和bcl-2蛋白表达及caspase-3活性。结果:As2O3显著抑制K562/ADM耐药细胞的增殖;经 As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,annexinV /PI双染显示凋亡细胞明显增加;mdr1mRNA表达和P-gp合成明显降低,凋亡抑制基因bcl-2mRNA及其蛋白bcl-2表达下调, caspase-3mRNA表达和caspase-3活性显著增强。结论:As2O3诱导K562/ADM耐药细胞凋亡,其主要机制可能为As2O3抑制 mdr1和bcl-2基因表达,逆转耐药白血病细胞因bcl-2和P-gp高表达所介导的凋亡抑制。     

糖蛋白P及其介导的多药耐药及逆转策略

多药耐药（MDR）是肿瘤细胞对多种化疗药物产生抗药性的同时，对其它结构不同、靶位不同、作用方式不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性，是最重要、最常见的肿瘤耐药现象，肿瘤细胞对抗癌药物产生耐受性成为肿瘤化学治疗最大障碍之一。近年来研究发现肿瘤的多药耐药主要与一种分子量为170KD的跨膜糖蛋白P（P-gp）有关，由多药耐药基因1（MDR1）编码，本文将讨论有关P-gP及由其介导的肿瘤多药耐药的逆转策略的研究进展。     

左旋氧氟沙星对人肺腺癌多药耐药细胞株A_(549)/ADM的逆转作用

目的研究左旋氧氟沙星对人肺腺癌多药耐药细胞株A549/ADM的耐药逆转作用及机制。方法使用流式细胞仪分别检测耐药细胞系和敏感细胞系表面的多药耐药蛋白MRP和P-gp的表达;并通过流式细胞仪测定细胞内阿霉素的荧光强度来确定细胞的耐药程度以及左旋氧氟沙星对多药耐药的逆转作用。采用MTT方法检测耐药细胞系对肺癌几种常用的化疗药物的耐药程度及左旋氧氟沙星对其耐药逆转的效果。结果诱导的耐药细胞系与母细胞系相比:耐药细胞系A549/ADM表面的耐药蛋白MRP、P-GP表达分别达到74.8%和61.2%(P<0.01);耐药细胞系A549/ADM对ADM的耐药程度增加了14.29倍,对VCR、DDP、VP16均有不同程度的耐药,但对5-FU无耐药性;加用左旋氧氟沙星后,A549/ADM细胞内ADM的荧光强度明显增强,A549/ADM对ADM敏感性增加了2.55倍,对VCR、DDP及VP16敏感度分别增加了7.38倍、1.29倍和4.05倍。结论A549/ADM对肺癌的几种常用化疗药物表现出不同程度的耐药性,其耐药性可能与P-GP和MRP高表达有关;左旋氧氟沙星对A549/ADM的多药耐药有一定的逆转作用。     

mdr1及bcr-abl阳性白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571耐药的逆转

为了探索bcr—abl和mdr-1阳性的白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571是否有交叉耐药及其逆转方法，采用MTT法检测STI571对K562-n／VCR细胞的抑制作用，采用多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA)、他莫西芬(TAM)、α-干扰素(IFN—α)单用及CsA与IFN—α联合应用研究对STI571耐药的逆转作用。结果表明：K562-n／VCR细胞对STI571有交叉耐药性。CsA，IFN-α，TAM3种逆转剂对其均有不同程度的逆转作用，逆转倍数分别为5．18倍、1．67倍及1．82倍。而半量CsA IFN—α对K562-n／VCR细胞STI571的逆转倍数为34．87倍。结论：多药耐药基因mdrl的扩增可以导致bcr—abl阳性白血病细胞对STI571的耐药。多药耐药逆转荆CsA，TAM和IFN-α对STI571耐药有明显的逆转作用，CsA与IFN—α半量联合对K562-n／VCR细胞的杀伤作用显超过全量CsA或IFN—α的逆转耐药作用。本研究结果提示对STI571发生耐药的患加用CsA和IFN-α可能会提高其疗效。     

碱基错配对短发夹RNA逆转白血病细胞耐药作用的影响

目的探讨碱基错配对短发夹RNA（shRNA）逆转白血病细胞耐药作用的影响。方法针对mdrl基因mRNA合成一条序列正确的shRNA及正义链少1个碱基的对应错配shRNA，构建一对抗mdrlshRNA真核表达载体，脂质体介导转染白血病耐药细胞株K562／A02。采用实时荧光定量RT．PCR检测mdrlmRNA表达；柔红霉素泵出实验检测P．gp外排泵功能；M1rr法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果序列正确和对应错配shRNA真核表达载体均明显下调mdrlmRNA的表达，降低细胞膜P-gP外泵功能，60min柔红霉素泵出率分别为6％和10％，显著低于对照组的45％；细胞内柔红霉素平均荧光强度分别为9．51和7．09，明显高于对照组的2．80；对阿霉素药物敏感性的相对逆转率为90％和87％。结论正义链碱基错配shRNA对RNA干扰功能无明显影响，与序列正确的shRNA一样可有效逆转mdrl所致的耐药。     

羟基喜树碱诱导膀胱癌T24细胞凋亡的研究

目的探讨羟基喜树碱（HCPT）诱导膀胱癌T24细胞凋亡与氧化应激的关系。方法体外培养人膀胱癌T24细胞,以0.10～100.00 mg/L的羟基喜树碱处理6～48 h后,MTT法测定细胞抑制率,得出HCPT的IC50和最佳作用时间,DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡情况。HCPT 10.00 mg/L作用细胞24 h后,采用生物化学方法检测SOD、MDA、LDH、总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、活性氧以及谷胱甘肽（glutathione,GSH）与谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase,GR）的水平并与正常值对照,分析HCPT对T24细胞氧化与抗氧化系统的影响。结果0.10～100.00 mg/L的HCPT均能抑制T24细胞增殖并诱导调亡,其作用具有时间及浓度依赖性。细胞生化指标分析HCPT明显提高了培养上清液LDH的活力,降低了细胞内LDH的活力;细胞内SOD、T-AOC、GSH及GR的水平明显减少（P〈0.05）,MDA、活性氧的水平显著升高（P〈0.05）。结论通过诱导激活氧化应激致使凋亡抑制细胞增殖可能是HCPT抗肿瘤作用机制之一。     

坎地沙坦对膀胱癌细胞株BIU-87侵袭力和黏附力的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）拮抗剂坎地沙坦对膀胱癌BIU-87细胞株的侵袭力和黏附力的影响。方法采用免疫组化SABC法检测膀胱癌BIU-87细胞株AT1R的表达,用Transwell法检测细胞侵袭力,用细胞同质黏附实验检测细胞黏附力。结果 AT1R拮抗剂坎地沙坦能降低BIU-87细胞株的侵袭能力和黏附能力。结论 AT1R拮抗剂有可能通过降低肿瘤细胞的侵袭、黏附能力和抑制血管生成而达到抗癌作用,AT1R拮抗剂将来可能会成为一种抗癌治疗的新方法。     

PTEN基因和FHIT基因在膀胱尿路上皮癌中的表达和意义

目的探讨磷酸酶和张力蛋白同源（phosphatase and tensin homolog,PTEN）基因及脆性组氨酸三联体（fragile histindine triad,FHIT）基因在膀胱尿路上皮癌组织中的表达水平及临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测14例正常膀胱黏膜及37例膀胱尿路上皮癌组织中的PTEN及FHIT基因的表达水平。结果在14例正常膀胱组织中PTEN与FHIT基因均表达阳性或强阳性。在37例膀胱尿路上皮癌组织中PTEN基因阳性表达率为56.8%（21/37）,其中阳性9例,强阳性12例,FHIT基因阳性表达率为48.6%（18/37）,其中阳性8例,强阳性10例。随着肿瘤分期、分级的增加PTEN和FHIT基因表达均显著减少;PTEN基因的表达与FHIT基因的表达呈正相关（P〈0.01）。结论PTEN与FHIT基因可能成为估计膀胱尿路上皮癌恶性程度及肿瘤侵袭性的一项有用的指标,联合检测PTEN和FHIT基因在膀胱尿路上皮癌中的表达,有助于对膀胱肿瘤的细胞分化程度及诊断做出正确评价。     

mdr1基因shRNA表达载体逆转白血病耐药细胞系K562/ADM多药耐药的实验研究

目的 探讨mdr1短发夹RNA（mdr1 shRNA）对人红白血病耐阿霉素细胞系K562／ADM的耐药逆转作用。方法 编码设计合成靶位mdr1基因mRNA具有19个碱基发夹结构互补的寡核苷酸模板，构建2个shRNA表达载体pSilencer^Tm3．1-H1 neo mdr1—A和mdr1—B，将其稳定转染K562／ADM细胞。用RT—PCR法检测转染后K562／ADM细胞mdr1 mRNA表达，Western blot检测P-糖蛋白（P—gP）表达，流式细胞术和MTT法分别检测K562／ADM细胞凋亡和对阿霉素的敏感性，用激光共聚焦荧光显微镜观察并测定细胞内柔红霉素的积累。结果 在pSilencer^TM3．1-H1 neomdr1—A和mdr1—B shRNA表达载体稳定转染的K562／ADM细胞，mdr1mRNA表达分别减少到转染前的35．9％（P〈0．05）和27．5％（P〈0．01）；同时Western blot结果显示P—gP表达被明显而特异地抑制，对阿霉素的耐药性由79倍分别减低到38倍和30倍；并且，细胞内荧光强度与对照组相比显著增加（P〈0．05），与阿霉素联合应用凋亡细胞百分率分别增加至18．1％（P〈0．05）和54．4％（P〈0．01）。结论 靶向mdr1基因shRNA表达载体可有效逆转耐药，使耐药的肿瘤细胞恢复对化疗药物的敏感性。     

膀胱癌术后尿流改道与膀胱替代的现状与进展

根治性全膀胱切除是治疗肌层浸润性膀胱癌的金标准,但膀胱全切术后尿流改道方式的选择尚无统一标准。尿流改道术主要包括不可控尿流改道术、可控性尿流改道术、原位新膀胱术三种方式。在条件允许的情况下,应将原位新膀胱作为膀胱替代的首选方式。而乙状结肠原位膀胱更接近自然膀胱的功能,是一种理想的尿流改道方式。对于肿瘤侵犯尿道或尿道狭窄不能经尿道排尿的患者,乙状结肠直肠膀胱术是越来越被广泛接受的可控性尿流改道方式。Bricker回肠膀胱术因手术简单、并发症少,仍被广泛应用。而输尿管皮肤造口术则特别适用于年龄大、体质差、耐受力低、不能承受复杂手术的患者。组织工程技术为膀胱替代带来了新的希望,组织工程膀胱的一系列基础研究显示了广阔临床应用前景。     

影响膀胱肿瘤患者的心理因素及护理对策

目的通过有效的护理干预,消除影响膀胱肿瘤患者的不良心理因素。方法对56例膀胱肿瘤患者实施全程、无缝隙责任制护理。结果所有患者均能积极配合治疗。结论有效的护理干预在膀胱肿瘤术后治疗过程中扮演着重要角色。     

Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌细胞T24侵袭能力的影响

目的以Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌细胞系T24细胞,观察其对T24细胞侵袭能力的影响。方法Ad-Surp-LRIG1转染T24细胞,用RT-PCR和Westernblot检测细胞中LRIG1的表达水平,并采用Transwel!小室测定转染后细胞侵袭能力的变化。结果Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌T24细胞后,与对照组和空白对照组相比,体外侵袭实验显示实验组细胞的侵袭能力明显下降。LRIG1的mRNA和蛋白表达水平明显升高,而EGFR的mRNA和蛋白表达水平则显著降低（P〈0．01）。结论Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1能够在T24细胞中有效表达,并显著抑制T24细胞的侵袭能力。     

膀胱原发性B细胞恶性淋巴瘤1例

患者女,80岁,因"排尿不畅伴下腹部酸胀不适2月余"就诊.患者自发病以来无尿频、尿急、尿痛,无明显肉眼血尿,无肾区叩击痛.实验室检查:潜血(++++).CT:膀胱前壁见一类圆形软组织密度影,边缘光整,大小约3.0 cm×4.0 cm×2.5 cm,密度均匀(图1),增强后呈明显均匀性强化(图2),后腹膜、盆腔及腹股沟未见明显肿大淋巴结,考虑膀胱占位.     

新的肿瘤转移抑制基因LASS2在不同侵袭潜能的膀胱癌细胞中表达的体外研究

目的探讨新发现的肿瘤转移抑制基因人源性长寿保障基因Ⅱ型（homo sapiens longevity assurance homologue2,LASS2）与人膀胱癌细胞侵袭潜能的关系。方法通过细胞生长曲线和体外侵袭实验,确定膀胱癌BIU-87、EJ、T24和EJ-M3细胞的增殖和侵袭能力;运用实时定量PCR法和Western blot法检测4株细胞中LASS2基因的表达。结果 4株膀胱癌细胞中,EJ-M3的增殖和侵袭能力最强;增殖和侵袭能力高的细胞系EJ-M3和BIU-87的LASS2mRNA表达降低（P〈0.001）,而在低转移能力的人膀胱癌细胞株T24和EJ细胞中则相对较高表达。结论 LASS2基因表达的降低,可能与膀胱癌细胞的增殖和侵袭有关。