金雀异黄素对血小板源生长因子刺激下大鼠系膜细胞周期调节蛋白的影响

金雀异黄素（genistein）可影响多种细胞尤其肿瘤细胞的细胞周期调节蛋白的表达而调控细胞的增殖与凋亡，并通过调节细胞外基质（ECM）降解系统酶的活性影响基质的积聚。我们的前期实验已证实血小板源生长因子（PDGF—BB）可诱导体外培养的大鼠系膜细胞（MC）增殖，金雀异黄素可呈浓度依赖性抑制其增殖。既然细胞增殖的调控是在细胞周期水平上进行，而细胞周期又由细胞周期调节蛋白来调控，本实验我们拟研究金雀异黄素如何影响细胞周期调节蛋白的表达最终达到抑制细胞增殖的效应，为金雀异黄素在肾病中的应用提供实验依据。     

金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞外基质产生及TGF-β分泌的影响

目的探讨金雀异黄素对体外高糖培养下大鼠系膜细胞（MC）、细胞外基质（ECM）的产生及转化生长因子β（TGF-β）分泌的影响。方法实验分组：对照组：低糖DMEM培养液（不含金雀异黄素）;实验组：高糖DMEM培养液（分别含金雀异黄素0、1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L、30μmol／L、50μmol／L）,各组分别培养12、24、36、48h。ELISA法检测细胞培养上清液Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白及TGF-β的含量,RT-PCR法检测TGF-βmRNA的表达。结果在实验的48h内,高糖可促进MC合成Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白,分泌TGF-β;高浓度的金雀异黄素（≥5μmol／L）可显著抑制ECM的产生及TGF-β分泌,作用具有时间、剂量依赖效应;且可抑制MCTGF-μmRNA的表达。结论在体外高糖条件下,一定浓度的金雀异黄素可抑制ECM的产生,并从蛋白和基因水平抑制MCTGF-β的表达。     

金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞TIMP-1表达的影响

目的探讨金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞表达基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的影响。方法实验分组：对照组，低糖DMEM培养液(不含金雀异黄素)；实验组，高糖DMEM培养液 不同浓度金雀异黄素(含0、5、10、50、100、200μmol／L金雀异黄素)。各组分别培养12、24、48h。ELISA法检测细胞培养上清液TIMP-1含量；半定量RT—PCR法检测TIMP-1 mRNA表达。结果在实验48h内，金雀异黄素浓度和时间依赖性地抑制系膜细胞外TIMP-1的蛋白水平。对照组及高糖 不同浓度金雀异黄素作用24h后TIMP-1 mRNA表达量分别为0．797、1．286、1．186、1．013、0．954、0．939、0．823；对照组、高糖组及高糖 50μmol／L金雀异黄素组作用不同时间(12、24、48h)后TIMP-1 mRNA表达量分别为0．801、1．084、0．970、0．865、0．820。结论在体外高糖条件下，一定浓度的金雀异黄素可降低大鼠肾小球系膜细胞TIMP-1的蛋白水平及其mRNA的表达，提示金雀异黄素可能通过促进细胞外基质(ECM)的降解而减少ECM的积聚，延缓糖尿病肾病进展。     

丝裂素活化蛋白激酶信号转导途径对血小板源生长因子所致鼠肾系膜细胞表型转化的调控作用

目的 研究血小板源生长因子（PDGF）对肾小球系膜细胞（MC）表型转化的影响,并探讨丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）信号转导途径在其作用中的调控机制。方法 以体外培养的大鼠MC为对象,观察PDGF对细胞增殖、α-平滑肌肌动蛋白（SMA）表达和细胞内c-Jun氨基末端激酶（JNK）活性的作用;观察细胞外信号调节激酶（ERK）途径上游信号MEK-1阻断剂PD98059对PDGF所致上术作用的影响;应用raf-1基因转染并稳定高表达的MC观察其对α-SMA表达,细胞形态及其超微结构的影响。结果 PDGF可刺激MC持续增殖;刺激6～48h可使α-SMA表达增加,但持续刺激72h以上则可导致其表达被抑制近50%,PDGF对JNK活性无明显影响,阻断ERK活化不影响JNK活性及PDGF对α-SMA表达的短时刺激作用。Raf-1蛋白激酶稳定高表达的MC细胞内α-SMA表达缺失,同时细胞内微丝、微管结构减少,细胞形态改变。结论 PDGF对系膜细胞表型转化的影响表现为促进细胞持续增殖、短时作用刺激α-SMA表达而持续作用则抑制α-SMA表达,提示其为具有调控MC增殖和分化双重作用的细胞因子。PDGF的作用可能与MAPK不同亚类的调控有关,其中Raf-1和JNK活性可能对细胞表型具有关键调控作用。     

降糖通脉片对人肾小球系膜细胞及细胞外基质影响的实验研究

目的：探讨降糖通脉片对人肾小球系膜细胞（MC）及其细胞外基质（ECM）的影响。方法;采用血清药理学方法和体外人肾小球系膜细胞培养技术,观察具有清热化瘀,滋阴补气作用的中药降糖通脉片对MC增殖及其ECM成分的影响。结果：降糖通脉片具有抑制MC增殖及ECM成分中纤维连接蛋白（FN）,层粘连蛋白（LN）和IV型胶原（ColIV)的作用,该抑制作用具有一定的量效关系。结论：MC是降糖通脉片发挥治疗作用的 重要靶细胞,抑制MC增殖和ECM的产生可能是该方延缓肾小球硬化的重要机制之一。     

中医药防治肾间质纤维化的机制研究进展

肾间质纤维化renal interstitial fibrcsis，RIF）是各种慢性肾脏疾病发展到终末期肾衰竭的共同途径，以细胞外基质（extracellular matrix，ECM）在肾间质的过度积聚与沉积，以及成纤维细胞的增生为特征，是多种细胞、生长因子、细胞因子共同参与，相互作用，最终导致ECM合成增多，降解减少，     

有丝分裂原蛋白激酶与糖尿病肾病

糖尿病时，多种因素激活肾脏细胞内有丝分裂原蛋白激酶（MAPK）信号通路，MAPK激活后通过调节下游转录因子活性，控制基因表达，最终引起肾小球肥大和细胞外基质（ECM）积聚，导致糖尿病肾病（DN）的发生。     

ROS与肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质积聚

肾小球系膜细胞(GMC)增生及细胞外基质(ECM)积聚是导致多种肾小球疾病进展的重要因素。ROS可通过激活相关的信号转导级联反应及转录因子等多种机制介导GMC增殖及ECM的积聚。完善对ROS作用机制的认识，可能会对临床诊疗产生积极的影响。     

植物雌激素对体外培养的正常人皮肤成纤维细胞的作用

目的：观察植物雌激素（金雀异黄素）对正常人皮肤成纤维细胞的影响,探讨其延缓皮肤衰老的机制。方法：利用体外培养的健康人真皮成纤维细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测金雀异黄素对成纤维细胞存活力的影响;流式细胞仪检测金雀异黄素作用成纤维细胞后,细胞内活性氧（ROS）水平的改变;用分光光度法检测金雀异黄素作用成纤维细胞后,细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量的变化。结果：0．0625、0．125和0．25mg／L的金雀异黄素可以促进人皮肤成纤维细胞的增殖（P〈0．05）,并降低细胞内活性氧（ROS）的产生（19〈0．05）;0．0625～0．25mg／L的金雀异黄素可以减少人正常皮肤成纤维细胞内MDA的生成（P〈0．05）,提高超氧化物歧化酶（SOD）活性（P〈0．05）。结论：金雀异黄素可以促进人正常皮肤成纤维细胞增殖,这可能与金雀异黄素可以降低细胞氧自由基的含量和提高细胞抗氧化的能力有关。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠腹膜间皮细胞表达细胞外基质的调控作用

腹膜纤维化（PF）可导致超滤衰竭，是长期腹透（PD）患者的主要并发症之一。细胞外基质（ECM）过度积聚是PF的特征性改变，与ECM合成和降解间的动态平衡受到破坏有关。现已证实腹膜间皮细胞（PMC）能产生纤连蛋白（FN）。金属蛋白酶组织抑制物（TIMP）和纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）可通过抑制蛋白降解酶活性减少ECM降解。