H2S对鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨硫化氢(H2S)对鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的影响。方法采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色荧光显微镜观察PC12细胞形态和核的形态。结果PC12细胞自然凋亡率为3.23%±0.64%,1和3μmol/L鱼藤酮作用于PC12细胞24 h后,细胞凋亡率分别为26.24%±2.92%(P<0.05)和48.82%±6.66%(P<0.01)。400μmol/L NaHS不诱导细胞凋亡,但可使1和3μmol/L鱼藤酮组细胞凋亡率分别下降到11.13%±3.82%(P<0.05)和31.28%±6.85%。结论H2S可以抑制鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡。     

镇肝熄风汤载药脑脊液对MPP^＋诱导的PC12细胞c-Jun磷酸化的影响

目的探讨镇肝熄风汤载药脑脊液对甲基-苯基-吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP＋）诱导的PC12细胞c-Jun磷酸化的影响。方法镇肝熄风汤载药脑脊液预处理体外培养的PC12细胞后,加入MPP＋诱导PC12细胞损伤模型。用Western blotting检测c-Jun和phospho-c-jun蛋白表达。结果 MPP＋处理72h,与空白对照组比较,模型组phospho-c-jun蛋白表达显著上调,差异具有统计学意义（P〈0.05）。与模型组比较,镇肝熄风汤载药脑脊液组phospho-c-jun蛋白表达显著下调,差异具有统计学意义（P〈0.05）。而各组之间c-jun蛋白表达无显著性差异（P〉0.05）。结论镇肝熄风汤载药脑脊液对MPP＋诱导的PC12细胞c-Jun磷酸化具有抑制作用。     

淫羊藿总黄酮对MPP＋诱导MES23．5细胞损伤保护作用

目的 探讨淫羊藿总黄酮对1-甲基-4-苯吡啶离子（MPP＋）诱导的MES23.5细胞损伤的保护作用.方法 MES23.5细胞常规培养,淫羊藿总黄酮预处理24 h,再用MPP＋和淫羊藿总黄酮共同处理细胞24 h,MTT法检测细胞的存活率,实时反转录聚合酶链反应（real time RT-PCR）观察bcl-2和bax基因的表达情况.结果 MPP＋可剂量依赖性地损伤MES23.5细胞（F=18.38,P〈0.001）;淫羊藿总黄酮预处理可明显对抗MPP＋的毒性作用 （F=44.36,P〈0.001）;MPP＋对bcl-2基因表达没有明显影响,但可明显增加bax基因的表达（F=10.92,P〈0.05）;淫羊藿总黄酮预处理可明显增加bcl-2基因的表达（F=15.76,P〈0.01）,并可逆转bax基因表达的增高（F=10.92,P〈0.05）.结论 淫羊藿总黄酮可明显对抗MPP＋对MES23.5神经细胞的损伤,其作用机制可能与抗凋亡有关.     

姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察姜黄素(Curcumin,Cur)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机理。方法采用MTT法检测细胞存活率,碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(ROS)的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24h后,细胞存活率显著下降(P<0.01),与单纯MPP+处理组比较,20μmol/L Cur和不同浓度的MPP+同时处理PC12细胞24h后,细胞存活率显著升高(P<0.01);一定浓度的Cur对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但可使MPP+处理组细胞凋亡率下降(P<0.01);20μmol/L Cur可抑制MPP+引起的PC12细胞△Ψm降低及细胞内ROS含量增多。结论姜黄素可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机理可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,清除ROS有关。     

姜黄素对MPP+诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其与iNOS的关系

[目的]观察姜黄素(curcumin,Cur)对MPP 诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,并且探讨其与iNOS关系.[方法]采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,间接免疫荧光FCM检测PC12细胞iNOS的表达.[结果]PC12细胞自然凋亡率为(1.5±0.1)%,0.5 mmol·L-1MPP 作用24 h后,PC12细胞凋亡率为(59.5±2.7)%;20μmol·L-1Cur和0.1 mmol·L-1特异性iNOS抑制剂氨基胍(aminoguanidine,AG)对PC12细胞作用24 h后无明显凋亡诱导作用,但分别使0.5 mmol·L-1MPP 处理组细胞凋亡率由(59.5±2.7)%下降到(15.9±5.3)%和(39.7±8.7)%(P＜0.01);PC12细胞经0.5 mmol·L-1MPP 处理24 h后,其iNOS表达率由正常对照的(13.5±1.5)%增加到(71.9±4.0)%(P＜0.01),加入20 μmol·L-1Cur同时处理24 h后,其iNOS蛋白表达率由(71.9±4.0)%下降到(40.0±3.0)%(P＜0.01).[结论]Cur可以抑制MPP 诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制之一可能与抑制iNOS高表达有关.     

硫化氢对MPP+诱导 PC12 细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨硫化氢对MPP＋诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用。方法以MPP＋损伤PC12细胞作为帕金森病的细胞模型,甲氮甲唑蓝（MTT）法检测细胞存活率;丙酮酸二硝基苯腙比色法检测细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）浓度;双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧水平变化;应用硫化氢钠（sodium hydrosulfide,NaHS）作为H2S的供体。结果 200μmol/L和400μmol/L硫氢化钠呈浓度依赖性阻断MPP＋引起PC12细胞存活率的降低;400μmol/L硫氢化钠能明显抑制400μmol/L MPP＋诱导的PC12细胞LDH的漏出,以及抑制MDA和活性氧的产生。结论硫化氢对MPP＋诱导PC12细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinum,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡是否具有保护作用。方法采用MPP+诱导的具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞凋亡作为帕金森病(Parkinson disease,PD)的体外模型。实验分正常对照组、MPP+损伤组、人参皂苷Rg1(10、20、50μmol/L)3个浓度预处理组。用MTT法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,TUNEL法检测细胞凋亡断裂的DNA片段,蛋白质印迹法分析细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白含量。结果 10、20、50μmol/L人参皂苷Rg1对MPP+诱导的PC12细胞具有一定的保护作用。与MPP+损伤组[(52±4.7)%]相比,10、20、50μmol/L人参皂苷Rg1预处理细胞活力分别上升为(64±3.4)%、(72±5.2)%、(83±6.2)%(P<0.05或P<0.01)。经流式细胞术检测,正常组、MPP+损伤组、人参皂苷Rg1预处理组(10、20、50μmol/L)细胞凋亡率分别为1.8%、44.5%、32.9%、21.1%和14.2%。人参皂苷Rg1预处理后,细胞断裂的DNA片段明显减少。另外,蛋白质印迹分析也显示人参皂苷Rg1可抑制MPP+诱导的Cyt C的过表达。结论人参皂苷Rg1对MPP+诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用,其保护机制可能与下调线粒体内Cyt C的过表达有关。     

维持性血液透析患者血清和透析液对脂肪细胞凋亡的影响

目的观察维持性血液透析（HD）患者血清及其与常规透析液（CD）或高纯透析液（HPD）联合干预对脂肪细胞凋亡的影响。方法采集20例HD患者（CD和HPD治疗各10例）血样并分离血清,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。分别以HD患者血清（HDPS组）、HD患者血清联合CD（HDPS＋CD组）和HD患者血清联合HPD（HDPS＋HPD组）对经体外诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞进行干预,48 h后收集细胞。Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞形态学改变;Annexin-V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡。PCR检测CD和HPD中细菌DNA片段表达。结果 ELISA法检测结果显示,与HPD治疗HD患者比较,CD治疗HD患者血清TNF-α水平显著升高（P〈0.05）。在HDPS组和HDPS＋CD组,荧光显微镜观察可见呈典型凋亡形态学改变的细胞增多,两组细胞凋亡率均显著高于HDPS＋HPD组（P〈0.05）。PCR检测显示,CD和HPD中细菌DNA表达分别为902.79±60.57和454.87±32.22,两者差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 HDPS可诱导3T3-L1脂肪细胞凋亡,可能与患者血清TNF-α水平升高有关。与HD患者血清联合CD干预比较,联合HPD干预诱导的脂肪细胞凋亡率较低且HPD中细菌DNA表达较少。     

二苯乙烯苷上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

目的研究二苯乙烯苷（TSG）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用,以及对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度,以不同浓度二苯乙烯苷作用24 h。采用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst33258染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测Bcl-2蛋白的含量。结果过氧化氢能引起内皮细胞损伤,抑制细胞增殖,并且随着浓度增加,细胞生存率逐渐降低。其中300μmol/L H2O2作用后细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Bcl-2蛋白的表达量显著减少;加入二苯乙烯苷作用后,随着TSG浓度增加,细胞生存率增加,凋亡率逐渐降低;与H2O2造模组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷预处理能够显著提高细胞生存率,抑制细胞的凋亡,并且使Bcl-2表达增加（P〈0.05）。结论二苯乙烯苷能抑制过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,该作用与上调Bcl-2表达有关。     

苯那普利后处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的观察苯那普利后处理对大鼠心肌缺血再灌注（I/R）心肌细胞凋亡和核因子-κB（NF-κB）表达的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法应用Langendroff离体灌流装置,采用完全停灌复灌的方法制作离体大鼠心肌缺血再灌注模型。将32只SD大鼠随机等分为4组,对照组、I/R组、缺血预处理组、苯那普利后处理组。改良亮绿变色酸法（GCA）观察心肌损害程度;免疫组化法检测心肌组织中核因子-κB（NF-κB）的表达;原位末端标记法（TUNEL）测定组织中细胞凋亡率。结果与对照组比,I/R组心肌损害程度增加（P〈0.01）,免疫组织化学染色可见NF-κB蛋白表达显著增强（P〈0.01）,细胞凋亡率明显升高（P〈0.01）。与I/R组相比,苯那普利后处理组GCA染色心肌变性减轻,阳性率减低（14±7）%vs（40±17）%,（P〈0.01）,NF-κB表达减少（34.8±4.7）%vs（49.3±9.7）%,P〈0.05）,细胞凋亡率明显下降（13±1.7）%vs（18.5±2.5）%,（P〈0.01）。苯那普利后处理组和预处理组相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论苯那普利后处理具有明显降低大鼠缺血再灌注后心肌细胞凋亡的作用,其机制可能与苯那普利后处理抑制NF-κB参与的细胞凋亡有关。     

燃煤型氟中毒对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的：观察燃煤型氟中毒对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。方法：5月龄SD雄性大鼠18只,按体质量随机分为染氟组、染氟＋大豆组和对照组,各组大鼠自由饮用自来水（含氟〈0.5 mg/L）;各染氟组采用含氟量为69.33 mg/kg的煤烘玉米饲食,染氟＋大豆组的大豆重量比为20%,对照组采用含氟为9.37 mg/kg的常食玉米饲食,实验期间动物自由进食、进水;染氟第90天,处死大鼠,使用H-E染色法和TUNEL方法对大鼠睾丸切片进行染色,观察细胞凋亡情况,结果：染氟组生精细胞凋亡个数高于对照组[（278.17±25.47）个,（129±21.02）个,P〈0.05];染氟＋大豆组生精细胞凋亡个数高于对照组[（141.5±5.24）个,（129±21.02）个,P〈0.05];染氟＋大豆组生精细胞凋亡数低于染氟组[（141.5±5.24）个,（278.17±25.47）个],P〈0.05。结论：燃煤型氟中毒可造成大鼠生精细胞凋亡增加,增加营养后可有效减少氟中毒造成的生精细胞的凋亡。     

Adv-CT1转染对神经元的作用

目的观察重组腺病毒心肌营养素1（recombinant adenovirus cardiotrophin-1,Adv-CT1）对谷氨酸（glutamate,Glu）诱导损伤神经元的保护作用。方法分离、培养新生Wistar大鼠神经元细胞,将细胞分为单纯谷氨酸损伤组、Adv-CT1转染组及正常对照组;利用台盼蓝染色技术检测神经元细胞存活率;采用TUNEL原位细胞凋亡检测技术检测神经元细胞凋亡率。结果谷氨酸损伤第1、2及3天,单纯谷氨酸损伤组细胞存活率（77.4%、72.7%、67.0%）较Adv-CT1转染组（84.8%、78.5%、74.0%）明显降低（P〈0.05）;单纯谷氨酸损伤组细胞凋亡率（2.7%、5.5%、6.8%）较Adv-CT1转染组（1.5%、2.0%、3.2%）明显增高（P〈0.05）。结论 CT1转染可减少谷氨酸损伤诱导的神经元细胞凋亡发生,促进损伤神经元细胞存活,对损伤的神经元细胞具有保护作用。     

甲肿消对甲状腺细胞凋亡及过氧化物酶活性的影响

目的研究甲肿消对甲状腺细胞凋亡及甲状腺过氧化物酶（TPO）活性的影响。方法用甲状腺FRTL细胞,按甲肿消剂量不同分为：0（对照组）、0.2、0.4、0.8、1.6 mg·mL^-1组。甲状腺细胞培养24 h后,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡指数;改良愈创木酚法检测TPO活性。结果给药24 h后,荧光显微镜下可见凋亡小体及细胞核碎片。0、0.2、0.4、0.8、1.6 mg·mL^-1组细胞凋亡率（%）分别为：5.367±0.816、7.517±0.646、14.183±0.752、17.033±1.461、23.767±0.734,与药物呈剂量依赖性,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。各组TPO活性（单位：GU.mg-1蛋白×10^3）分别为：9.395±1.79、7.289±1.205、6.175±1.818、4.347±0.948、2.93±1.977,随着给药剂量的升高而降低,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论甲肿消可能通过诱导甲状腺细胞凋亡及抑制TPO酶活性来影响甲状腺功能。     

银杏叶提取物对6-OHDA诱导PC12细胞Bax和Bcl—2表达的影响

目的探讨银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract,GBE）对6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OH—DA）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法经不同浓度GBE预处理体外培养的PC12细胞加入6-OHDA诱导多巴胺能神经元损伤模型,用4-甲基偶氮唑蓝（MTT）检测PC12细胞活力;流式细胞仪（FCM）测定PC12细胞凋亡百分比;采用免疫印迹法检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果100μmolZL的6-OHDA处理PC12细胞24h,细胞活力较正常对照组明显降低（P〈0．01）;与模型组比较,GBE20,40μg/ml可明显减轻6-OHDA对PCI2细胞的毒性,GBE可使细胞活性增强,降低凋亡百分比。与正常对照组比较,模型组Bax表达升高,而Bcl-2表达降低（P〈0．05）。与模型组比较,GBE各剂量组Bax降低,而Bcl-2升高,且呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论GBE对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,上调Bcl-2和下调Bax表达可能是其作用的机制之一。     

N-硬脂酰酪氨酸对H2O2诱导PC12细胞氧化应激损伤的影响

目的研究N-硬脂酰酪氨酸（NsTyr）预处理对过氧化氢（H2O2）诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响。方法体外培养传代的PC12细胞分为空白对照组、H2O2损伤组（不同浓度H2O2诱导16h）和NsTyr预处理组（不同浓度NsTy预处理30min后加入100μmol／LH2O2诱导16h）。流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧类（ROS）生成,Westernblotting检测Bax和Bcl-2的表达。结果与H2O2（100μmol／L）损伤组比较,5、10μmol／LNsTyr预处理组PC12细胞存活率显著升高（P〈0．01）,凋亡细胞率降低（P〈0．05）,细胞内ROS生成减少（P〈0．05,P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值升高（P〈0．05）。结论NsTyr能提高PC12细胞的抗氧化应激损伤能力,上调Bcl-2表达和下调Bax表达,抑制细胞凋亡。     

丁酸钠对内毒素性肝损伤小鼠细胞凋亡的影响

目的探讨丁酸钠预处理对内毒素性肝损伤小鼠细胞凋亡的影响。方法取健康雄性昆明小鼠48只,随机分为4组（各12只）：正常组、模型组、联苯双酯组、丁酸钠组。应用脂多糖10 mg/kg腹腔注射小鼠诱导内毒素肝损伤模型。造模后6 h,检测小鼠血清ALT和AST活性,MDA含量和SOD活性,TUNEL法检测小鼠肝脏组织细胞凋亡情况。结果与模型组相比,丁酸钠组和联苯双酯组血清ALT、AST和MDA含量明显降低（P〈0.05）,SOD活性升高（P〈0.05）,肝细胞凋亡指数降低（P〈0.05）。结论丁酸钠预处理可以抑制内毒素肝损伤小鼠细胞凋亡,其机制可能与减少氧自由基的生成有关。     

阿司匹林对人食管癌细胞株Eca-109生长及凋亡的影响

目的 通过体外实验观察阿司匹林（ASA）是否有诱导人食管癌Eca-109细胞发生凋亡及增殖抑制的作用.方法 通过噻唑蓝（MTT）实验测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪（FCM）检测凋亡率;通过电镜、Hoechst 33258染色从形态上观察细胞凋亡.结果 （1）阿司匹林能抑制人食管癌Eca-109细胞的生长,并在一定剂量和时间范围内呈现剂量、时间依赖关系.（2）流式细胞仪（FCM）观察细胞的凋亡率随阿司匹林浓度的增大而增加.（3）电镜下凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩致密,并沿核膜边集.（4）Hoechst 33258染色后可见典型的细胞凋亡形态学变化.结论 阿司匹林对人食管癌Eca-109细胞具有增殖抑制作用,能诱导细胞凋亡,凋亡率随阿司匹林浓度的增大而增加.     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导人肺癌（A549）细胞凋亡及其机制的探讨

目的观察8-溴-7-甲氧基白杨素（BrMChR）诱导人肺癌（A549）细胞凋亡作用,并探讨其与P53基因超甲基化的关系。方法以体外培养的A549细胞为研究对象。PI染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率;凝胶电泳观察BrMChR诱导基因DNA梯形条带;甲基化特异性PCR检测A549细胞P53基因甲基化状态及BrMChR对P53基因甲基化的影响。结果 PI染色FCM分析显示0.3,3.0和30.0μmol/L的BrMChR作用于A549细胞48h后,其凋亡率分别为（2.8±0.60）%、（5.1±0.11）%、（19.8±1.74）%,其中30.0μmol/L的BrMChR组的凋亡率明显高于空白对照组（P〈0.01）;琼脂糖凝胶电泳呈现典型＂梯形＂DNA条带;甲基化特异性PCR显示A549细胞P53基因呈现超甲基化状态,BrMchR能逆转P53基因超甲基化。结论 BrMchR具有诱导A549细胞凋亡的作用,其作用机制可能与其逆转P53基因超甲基化作用有关。     

白藜芦醇激活SIRT1抑制高糖诱导的神经细胞凋亡

目的探讨白藜芦醇是否通过激活沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制高糖诱导的神经PC12细胞凋亡。 方法PC12细胞用10 μmol/L白藜芦醇预处理30 min,随后加入50 mmol/L葡萄糖溶液处理24 h, qRT-PCR检测SIRT1 mRNA变化,Westren blot检测SIRT1、p-SIRT1、AMPK及p-AMPK表达,Hoechst33258核染色评估细胞凋亡情况,荧光光度法检测细胞活性氧情况,MTT法检测细胞存活率。 结果白藜芦醇预处理,可显著提高细胞存活率(P＜0.05),降低高糖(HG)诱导PC12细胞的凋亡率以及活性氧的产生(P＜0.05)。此外,Western blot 结果显示HG可显著抑制SIRT1的磷酸化(P＜0.05),而这些作用可被白藜芦醇所逆转(P＜0.05)。 结论白藜芦醇可能通过激活SIRT1保护 PC12 细胞免受 HG 诱导的凋亡。     

高热预处理对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理（HPC）对过氧化氢（H2O2）所致大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）细胞氧化应激损伤的影响。方法 体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组、HPC组、H2O2组、HPC＋H2O2组,采用MTT法测定细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤,流式细胞术分析细胞凋亡。结果 与正常对照组相比,H2O2组引起PC12细胞MTT活力明显下降（P〈0．01）,LDH释放量增多（P〈0．01）,凋亡明显;而与H2O2处理组相比,HPC＋H2O2组则表现为MTT活力升高（P〈0．05）,LDH释放量减少（P〈0．05）,且没有出现明显凋亡。结论 高热预处理对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤产生保护作用。