白藜芦醇对缺氧环境中鼻咽癌细胞株CNE2的化疗增敏作用

目的：观察缺氧环境下白藜芦醇（resveratrol,Res）提高人鼻咽癌细胞株CNE2对化疗药物敏感性的作用并探讨其机制。 方法：将不同浓度白藜芦醇加入化疗药物干预过的CNE2中,低氧培养48 h,甲基噻唑基四唑法检测CNE2中白藜芦醇对化疗药物的逆转倍数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,应用反转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测CNE2细胞中多药耐药相关基因1（multidrug resistance gene 1,mdr1）、多药耐药相关蛋白1（multidrug resistance-associated protein 1,MRP1）和缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）mRNA和蛋白水平的表达变化。 结果：缺氧环境下白藜芦醇对化疗药物具有协同增效作用,200 μmol/L白藜芦醇对紫杉醇的逆转倍数为2.58。25、50、100和200 μmol/L白藜芦醇与紫杉醇合用,使紫杉醇诱导的CNE2细胞凋亡增加,且表现出明显的浓度依赖效应。此外随着白藜芦醇浓度的增加,mdr1、MRP1和HIF-1α的表达显著降低,加用白藜芦醇组与不加白藜芦醇组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。 结论：白藜芦醇可以通过下调核转录因子HIF-1α及多药耐药相关基因mdr1、MRP1的表达提高缺氧环境中鼻咽癌细胞株CNE2对化疗药物的敏感性。     

鼻咽癌多药耐药表型与化疗效果关系的探讨

目的 :观察鼻咽癌患者多药耐药表型与化疗效果的关系。方法 :对 2 4例未经治疗的鼻咽癌患者 ,取鼻咽部活检标本 ,用免疫组化法抗P -糖蛋白 (P -gp)单克隆抗体 (JSB -Ⅰ )检测P -gp。全部患者均接受长春新碱、环磷酰胺和 5 -氟尿嘧啶联合方案的化疗。患者对化疗反应的评分 :有效者包括完全反应或部分反应 ;无效者包括稳定或恶化。结果 :2 4例治疗前鼻咽癌患者中 ,8例 (33 3% )检测出P -gp阳性 ,16例 (6 6 7% )P -gp阴性。 8例P -gp阳性患者对化疗反应有效者 2例(2 5 % ) ,无效者 6例 (75 % )。 16例P -gp阴性患者对化疗有效者 14例 (87 5 % ) ,无效者 2例 (12 5 % ) ,两者差别显著 (P <0 0 1)。结论 :以P -gp介导的多药耐药表型与鼻咽癌对化疗耐药之间存在有统计学意义的关系     

CoCl2缺氧诱导SW480细胞化疗耐药及其机制

目的：研究不同程度的CoCl2化学缺氧条件下SW480细胞的生长情况及对氟尿嘧啶（fluorouracil,FU）的敏感性,以及缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α）和诱导型血红素氧化酶（heme oxygenase-1,HO-1）基因在缺氧条件下的表达,以探讨缺氧条件下导致肿瘤细胞耐药的机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定不同CoCl2浓度下SW480细胞的生长情况及化疗药物FU对SW480细胞的生长抑制作用;采用逆转录聚合酶链反应检测HIF-1α和HO-1 mRNA在缺氧条件下的表达。结果：MTT结果显示,随着CoCl2浓度增加,SW480细胞的增殖速度减慢。FU对SW480的杀伤作用降低。RT-PCR结果显示,CoCl2化学缺氧处理使HIF-1α和HO-1 mRNA表达上调,并呈较好的剂量和时间依赖性关系。结论：CoCl2诱导的体外缺氧可以减缓SW480细胞的生长速度,并降低SW480细胞对FU的敏感性,其机制可能与HIF-1α及HO-1的表达上调有关。     

生存素下调多药耐药蛋白增强人鼻咽癌细胞株对紫杉醇敏感性的研究

目的 研究生存素（Survivin）下调多药耐药蛋白（MRP）的表达与鼻咽癌紫杉醇（PTX）耐药性关系,探讨鼻咽癌PTX耐药的分子机制.方法 采用免疫组化检测Survivin和MRP在42例鼻咽癌PTX耐药患者与24例PTX非耐药患者中的表达;采用浓度递增法持续诱导建立鼻咽癌化疗耐药细胞株5-8F-PTX（＋）,绘制细胞生长曲线,测定细胞生长的倍增时间,检测肿瘤细胞的周期分布;采用siRNA技术干扰5-8F-PTX（＋）中Survivin的表达后,Western blot法检测Survivin和MRP表达变化,MTT检测不同抗肿瘤药物PTX、顺铂（cDDP）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、长春新碱（VCR）耐药敏感性的变化.结果 Survivin在鼻咽癌化疗耐药患者中阳性表达率为83.3％,明显高于非耐药患者（41.7％）,差异有高度统计学意义（P＜0.01）;MRP在鼻咽癌PTX耐药患者中表达阳性率为88.1％,明显高于非耐药患者（37.5％）,差异有高度统计学意义（P＜0.01）.5-8F-PTX（＋）较5-8F的细胞生长速度明显减慢,5-8F-PTX（＋）细胞生长的倍增时间为21h,亲本5-8F细胞生长的倍增时间为15 h;5-8F-PTX（＋）的G2/M期细胞百分比[（23.1±1.3）％]显著高于亲本5-8F细胞[（13.5±0.9）％];Survivin和MRP在PTX耐药细胞株5-8F-PTX（＋）细胞株中的表达水平明显高于非耐药的5-8F,siRNA干扰5-8F-PTX（＋）中Survivin的表达后,Survivin和MRP表达明显下调,PTX、cDDP、5-FU、VCR耐在siRNA-5-8F-PTX（＋）中的IC50值不同程度地下降.结论 Survivin可通过下调MRP的表达增强鼻咽癌细胞对PTX的敏感性.     

卵巢癌化疗耐药机制的研究进展

目前卵巢癌的临床治疗主要采用手术切除联合术后化疗,但绝大多数晚期患者会在5年内复发,或发展为化疗耐药,其5年生存率<50%,这已成为困扰妇产科医师的一大难题。卵巢癌化疗耐药的发生机制一直不能明确,为进一步治疗带来障碍,在此,我们将从细胞的膜、浆及核三方面对近期耐药机制     

鼻咽癌多药耐药发生机制的研究进展?

鼻咽癌是鼻咽部上皮组织发生的恶性肿瘤,在我国南方地区发病率较高。鼻咽癌发病隐匿,大多数患者就诊时已属中晚期,单纯放疗中晚期鼻咽癌肿瘤,局部控制率低,疗效不尽满意,目前临床多采用放疗加化疗的综合治疗方式,但肿瘤细胞多药耐药性(multidrug resistance,MDR)的产生严重影响临床化疗效果。MDR 是指肿瘤细胞在接触某一种化疗药物后,不仅对该药物产生耐药性,同时对某些与之结构不同、作用机制不同的化疗药物产生交叉耐药的现象。鼻咽癌 MDR 的发生机制复杂,本文通过总结近年来国内外文献,从膜转运蛋白介导的鼻咽癌 MDR、酶介导的鼻咽癌 MDR 以及细胞凋亡基因介导的鼻咽癌 MDR 等方面综述鼻咽癌 MDR的发生机制[1],以期为临床克服鼻咽癌 MDR、提高化疗效果提供参考。     

耐药蛋白介导的鼻咽癌多药耐药机制及其逆转剂的研究进展

鼻咽癌在治疗上以放疗为主,并结合化疗、免疫治疗等综合治疗。而多药耐药(MDR)机制是导致其化疗等综合治疗失败的主要原因。研究鼻咽癌MDR的机制及其逆转剂,有望克服鼻咽癌MDR。本文就耐药蛋白介导的鼻咽癌多药耐药机制及其逆转剂进行综述。     

人鼻咽癌多药耐药细胞株CNE2/ADM的建立及生物学特性研究?

目的：建立人鼻咽癌多药耐药细胞株 CNE2/ADM,并研究其生物学特性。方法以人鼻咽癌细胞株 CNE2为亲本细胞,采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法诱导建立多药耐药细胞株 CNE2/ADM。通过观察细胞形态学变化,药物敏感性试验,测定生长曲线、群体倍增时间、细胞周期及 P-糖蛋白(P-gp)功能和表达情况,评价CNE2/ADM 的生物学特性。结果与 CNE2细胞相比,CNE2/ADM 耐药细胞异形明显,并对 ADM 在内的4种化疗药物产生了耐药性,增殖速度减慢,群体倍增时间延长(P <0.05),G0/G1期细胞增多,S 期、G2/M 期细胞减少(P <0.05),P-gp 的药物泵出功能增强、表达水平升高。结论成功建立了人鼻咽癌多药耐药细胞株 CNE2/ADM,其具有典型的多药耐药表型,可作为进一步研究鼻咽癌多药耐药机制及筛选逆转剂较为理想的细胞模型。     

鼻咽癌顺铂耐药细胞系的建立及其耐药性变化

目的通过顺铂（cDDP）浓度递增法建立鼻咽癌耐药的细胞株CNE2／cDDP,并研究其耐药性变化。方法采用cDDP浓度递增法建立鼻咽癌顺铂耐药细胞系CNE2／cDDP,倒置显微镜进行形态学观察,MTT检测CNE2／cDDP细胞系对不同化疗药物的耐药性。结果MTT研究发现在不同药物（顺铂、长春新碱、卡铂、紫杉醇、5-FU）作用下,CNE2／cDDP较CNE2的IC50值及耐药指数均有明显的增加,CNE2／cDDP细胞对顺铂的耐药性最强,增加到200．6倍,对5-Fu的耐药性最差,增加到2．8倍;耐药细胞株CNE2／cDDP较非耐药细胞株CNE2生长速度减慢,其细胞倍增时间由18h增加到24h;CNE2／cDDP细胞体积较CNE2为小,常呈克隆聚集现象。结论CNE2／cDDP具有多药耐药性,是一个理想的用于鼻咽癌的多药耐药研究的细胞系。     

诱导鼻咽癌细胞Necroptosis样死亡以规避其耐药性的研究

鼻咽癌的治疗是以放疗为主,配合化疗、中医中药、免疫治疗等的综合治疗,但因鼻咽癌细胞的耐药性而致放化疗效果不佳。究其耐药性的原因主要包括细胞表面耐药蛋白高表达介导的多药耐药性（MDR）及凋亡调控基因表达失控导致的凋亡耐受。近来有研究者从诱导肿瘤细胞不同于凋亡的程序性死亡方式（如Necroptosis）着手,有望规避肿瘤细胞的耐药性。本文就鼻咽癌耐药性的机制、Necroptosis样死亡机制进行综述。     

柞蚕抗菌肽对人鼻咽癌细胞CNE 2骨架的作用

目的：探讨柞蚕抗菌肽对癌细胞骨架的破坏作用。方法：用柞蚕抗菌肽对人鼻咽癌细胞CNE2处理12和18h，抗微管蛋白单克隆抗体检测细胞骨架结构的变化。结果：免疫组织化学染色见抗菌肽处理后细胞骨架分布不均匀，形态不规则，散乱，卷缩。结论：柞蚕抗菌肽具有较明显的破坏人鼻咽癌细胞株CNE2细胞骨架的作用。     

脊索瘤细胞系CM-319中放化疗抵抗相关基因的表达及临床意义

[目的]探讨多药耐药相关基因如缺氧诱导因子1d（HIF-1α）、多药耐药基因（MDR1）及多药耐药相关蛋白（MRP1）在脊索瘤细胞系CM－319中的表达及临床意义。[方法]用RT—PCR检测HIF－1α、MDR1、MRP1基因表达,间接免疫荧光及免疫细胞化学Envision法检测HIF－1α、MRPl蛋白在CM－319中的表达情况,并分析其与放化疗抵抗的关系。[结果]常氧条件下,在脊索瘤细胞系中能检测到HIF～1α及MRP1 mRNA的表达,但未检测到MDR1 mRNA的表达（P〈0．01）,间接免疫荧光及免疫细胞化学可以检测到HIF-1α表达在细胞浆及核中,而MRP1主要表达在细胞浆中。[结论]HIF-1α与MRP1的过度表达在脊索瘤的放化疗抵抗中可能具有重要作用,而MDR1表达未被检测到,提示脊索瘤的放化疗抵抗主要与HIF－1α和MRP1相关。     

粉防己碱对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡作用的研究

目的：探讨粉防己碱（Tet）对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡的影响。方法：将人鼻咽癌细胞株CNE分为不同浓度Tet处理组,并设立对照组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE体外生长的抑制作用;采用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞术Annenxin V/PI EGFP观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的影响;采用逆转录-多聚酶链反应技术（RT-PCR）观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡相关基因mRNA表达的影响。结果：Tet呈浓度依赖性抑制癌细胞体外生长（P〈0.05）。Tet处理细胞72 h后,电镜下可见细胞缩小,核裂解,凋亡小体形成;随着Tet浓度的提高,各Tet处理组DNA凝胶电泳梯形条带和细胞凋亡率渐趋明显。与对照组相比较,Bcl-2 mRNA的表达渐减弱,Bax基因mRNA表达渐增强（P〈0.05）。结论：Tet可抑制癌细胞生长,促进癌细胞凋亡,其抗癌作用机制可能与下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达有密切联系。     

茶氨酸对鼻咽癌细胞CNE2增殖及凋亡影响的研究

目的研究茶氨酸在体内外对鼻咽癌细胞株CNE2增殖、凋亡、抗血管生成的作用。方法体外培养鼻咽癌CNE2细胞,将其分为阴性对照组,顺铂(CDDP)组和茶氨酸实验组,分别用PBS、CDDP和不同浓度的茶氨酸处理体外培养的CNE2细胞。MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪和TUNEL法分析细胞凋亡,观察茶氨酸对CNE2细胞株裸鼠移植瘤的抑制作用,免疫组织化学检测CD34、VEGF的表达情况。结果 100,200,400,800 mmol/L浓度的茶氨酸对鼻咽癌CNE2细胞作用72 h时细胞增殖抑制率达到峰值。流式细胞仪和TUNEL法检测100,200,400,800 mmol/L浓度的茶氨酸处理72 h后细胞凋亡率最高,而且随着浓度的增加,细胞凋亡率升高。茶氨酸对移植瘤的抑瘤率为44.54%。实验组与对照组相比,瘤体组织中CD34、VEGF的表达均降低,具有统计学意义。结论茶氨酸通过抑制肿瘤血管生成、抑制肿瘤生长、促进肿瘤细胞凋亡,从而抑制鼻咽癌细胞CNE2的增殖。     

同步放化疗治疗N2、N3期鼻咽癌的临床研究

目的探讨化疗加放疗治疗N2、N3期鼻咽癌的价值.方法 86例N2、N3期鼻咽癌随机分为放化组和单放组,两组放疗均采用60Co r线常规分割照射,鼻咽部剂量为68～70Gy/6.8～7周,颈部淋巴结转移灶剂量为66～76Gy/6.6～7.6周.放化疗组在放疗第1周和第5周行CF 5-Fu DDP化疗2周期.结果放化疗组和单放组近期鼻咽部肿瘤完全消退率分别为93.0%和86.0%(P>0.05);颈部淋巴结转移灶完全消退率为86.0%和65.1%(P<0.05).两组3、5年鼻咽部肿瘤控制率分别是67.4%和44.2%(P<0.05),55.9%和37.2%(P<0.05);两组颈部淋巴结转移灶控制率分别是65.1%和41.9%(P<0.05),58.1%和37.2%(P<0.05);两组3、5年的远处转移率分别是20.9%和41.9%(P<0.05),27.9%和48.9%(P<0.05);两组3、5年生存率分别是58.1%和34.9%(P<0.05),46.5%和25.6%(P<0.05).放化组的消化道反应、血液毒性均高于单放组(P<0.05),但病人可以耐受.结论同步放化疗治疗N2、N3期鼻咽癌有助于提高生存率,减少局部复发和远处转移.     

诱导化疗联合放疗在中晚期鼻咽癌治疗中的临床应用

目的评价诱导化疗联合放疗对中晚期鼻咽癌的客观疗效及毒副反应.方法 90例病理证实的鼻咽癌病例随机分为常规放射治疗组(45例)及诱导化疗 放疗组(45例).常规放射治疗:鼻咽原发灶DT 70 Gy,颈部预防照射DT 50 Gy,转移灶DT 65～70 Gy;诱导化疗:第1～5天行DDP 20 mg、5-Fu 500 mg静脉滴注.结果化疗加放疗组和单放组治疗后,3个月鼻咽肿瘤消退率分别为91.11%、93.33%和82.22%、84.44%(P<0.05),颈淋巴结肿大消退率分别为77.78%、84.44%和62.22%、66.67%(P<0.05).结论对中晚期鼻咽癌行放、化疗联合有助于提高局部控制率.     

吉西他滨对鼻咽癌HNE2细胞株的放射增敏作用及其机制研究

目的研究低浓度吉西他滨对人鼻咽癌HNE2细胞系的放射增敏作用及其机制,并探讨用药后最佳放射时间。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定吉西他滨24h IC10值。以该浓度吉西他滨处理HNE2细胞4、8、12、24h,弃药后立即给予6MV X线单次照射0、2、4、6、8Gy,用克隆形成实验计算各组的放射增敏比,流式细胞仪法分别检测、比较各组的细胞凋亡率及细胞周期变化。Western blot法测定各组细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果吉西他滨的24h IC10值为0.21μg/mL,吉西他滨处理4、8、12、24h后的放射增敏比分别为1.09、1.18、1.23和1.37。流式细胞仪检测显示吉西他滨联合射线主要诱导S期阻滞,且S期细胞比例及细胞凋亡率随吉西他滨作用时间延长而增加。4组中bcl-2的表达随作用时间延长逐步下降,而bax的表达则逐步上升。结论低浓度吉西他滨对HNE2细胞有放射增敏作用,其增敏比随作用时间的延长而延长,以作用24h后增敏作用最强。增敏机制可能与诱导S期阻滞及促进凋亡有关。     

局部进展期鼻咽癌同时放化疗的近期疗效观察

目的提高局部进展期鼻咽癌的局部控制率。材料与方法８６例局部进展期鼻咽癌,前瞻性随机分为同时放化治疗组（Ｒ＋Ｃ组）和单纯放疗组（Ｒ组）,进行疗效对比。两组病例放疗方法相同,放化疗组于放疗同时给５-氟脲嘧啶（５-Ｆｕ）和平阳霉素（ＢＬＭ－Ａ５）。结果放化疗组较单放组肿瘤退缩速度明显加快（Ｐ＜０．０．５）,两年内肿瘤局部复发率下降（Ｐ＜０．０１）,远处转移率两组无差异（Ｐ＞０．０５）。放化纯组较单纯放组毒副反应发生率高（Ｐ＜０．０５）,但经对症治疗均能顺利完成治疗,后遗症两组无差异（Ｐ＞０．０５）。结论放疗同时并用５－Ｆｕ和ＢＬＭ－Ａ５化疗可提高局部进展期鼻咽癌的局部控制率。