复合壳多糖人工皮肤的初步实验研究

目的探讨复合壳多糖人工皮肤移植家兔后表皮层角蛋白的表达以了解移植后皮肤表皮的分化情况.方法分别将复合壳多糖人工皮肤移植前、移植后1个月、移植后2个月、正常人皮肤、正常兔皮肤石蜡块切片,用抗广谱角蛋白多抗、抗角蛋白K5和K10单抗进行免疫组化染色,观察表皮层角蛋白的表达和表皮分化情况.结果复合壳多糖人工皮肤移植后1个月及2个月表皮层均有较强的角蛋白表达,与正常皮肤相似;基底层以上细胞有角蛋白K10表达,且越接近表皮表面表达越强,与正常人皮肤相似,基底层细胞有角蛋白K5表达,但明显弱于正常人皮肤.结论复合壳多糖人工皮肤移植家兔后表皮层均有角蛋白表达,有增生性细胞和分化细胞,表皮分化良好、层次清楚,与正常皮肤相近.     

糖尿病慢性皮肤溃疡瘦素及其受体OB-RL的定量表达

目的 观察瘦素(Leptin)及其受体OB-RL在糖尿病慢性皮肤溃疡边缘皮肤组织中的定量表达,探讨Leptin及其受体在糖尿病慢性皮肤溃疡发生及难愈合机制中的意义.方法 以糖尿病慢性皮肤溃疡边缘皮肤组织为观察组,以正常皮肤组织为对照组,采用HE常规染色观察两组皮肤基本组织学变化,通过反转录PCR法检测两组Leptin及OB-RL mRNA的表达.结果 观察组具有典型的组织学改变,与对照组清晰的表皮复层结构,丰富且规则、致密的胶原排列形成了鲜明的组织学反差.对照组及观察组表皮厚度分别为(0.99±0.23)mm、(1.63±0.33)mm,两组真皮层厚度分别为(2.71±0.38)mm、(1.38±0.41)mm,差异均有统计学意义(P<0.01).Leptin mRNA的表达在对照组及观察组表达分别为(0.46±0.05)%和(0.23±0.02)%, OB-RL mRNA在两组中的表达分别为(0.44±0.09)%和(0.28±0.03)%,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 糖尿病慢性皮肤溃疡Leptin及其受体OB-RL表达下调可能是其愈合延迟的重要原因之一.     

PTEN与Survivin在人皮肤血管瘤组织中的表达及意义

目的 探讨PTEN与Survivin在血管瘤发生、发展过程中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学方法和RT-PCR法检测了皮肤血管瘤增生期、退化期以及正常皮肤组织中PTEN和Survivin的表达水平.结果 ①免疫组织化学结果:PTEN在增生期血管瘤内皮细胞的表达低于退化期,差异有显著性意义(P<0.05);退化期血管瘤内皮细胞PTEN表达水平高于正常皮肤组织,差异有显著性意义(P<0.05).Survivin在增生期血管瘤内皮细胞的表达明显高于退化期血管瘤内皮细胞和正常皮肤组织血管内皮细胞(均P<0.01),而Survivin在正常皮肤组织血管内皮细胞的表达与退化期血管瘤内皮细胞的表达差异无显著性意义(P>0.05).②RT-PCR结果:在退化期血管瘤和正常皮肤组织中均有明显的PTEN mRNA表达,而增生期血管瘤中PTEN mRNA的表达较弱;在增生期血管瘤中有明显的Survivin mRNA表达,而退化期血管瘤和正常皮肤组织中Survivin mRNA均无表达.结论 PTEN和Survivin参与了血管瘤的发生、发展和退化,PTEN通过诱导内皮细胞凋亡而促进血管瘤由增生向退化的转变,Survivin通过抑制内皮细胞凋亡而促进血管瘤的增生,两者在血管瘤的发生发展中发挥协同效应.     

糖尿病裸鼠的皮肤组织改变及其与创面愈合的相关性

目的 研究糖尿病裸鼠的皮肤组织改变及其与皮肤创面愈合的相关性。方法 采用150 mg/kg链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔注射建立糖尿病裸鼠模型。对正常对照组裸鼠（n=20）和诱导成模后4周的糖尿病裸鼠（n=20）分别切取背部直径为1.8 cm的全层皮肤。采用苏木精-伊红（HE）染色,观察裸鼠皮肤的组织学改变并测量真皮层和表皮层厚度。采用苦味酸天狼猩红染色并分析相对胶原含量;应用氧化酶法测量皮肤组织糖含量。于术后第3、5、7、14和21天观察创面的愈合率。结果 糖尿病组裸鼠的皮肤真皮层和表皮层厚度较正常对照组明显变薄,真皮层相对胶原含量也明显少于正常对照组,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。糖尿病组裸鼠的血糖浓度和皮肤糖含量均高于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;皮肤组织糖含量与血糖浓度呈正相关（r=0.951,P＜0.01）。糖尿病组裸鼠在术后第3、5、7、14和21天的创面愈合率显著低于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 应用STZ诱导的糖尿病裸鼠模型的皮肤组织改变明显,这些改变可能与局部糖基化终末产物蓄积,导致糖尿病皮肤创面不易愈合有关。     

糖尿病慢性皮肤溃疡Leptin及OB-RL定量表达研究

目的：观察瘦素（Leptin）及其受体OB-RL在糖尿病慢性皮肤溃疡边缘皮肤组织中定量表达，探讨Leptin及其受体在糖尿病慢性皮肤溃疡发生及难愈合机制中的临床意义。方法：以糖尿病慢性皮肤溃疡边缘皮肤组织为研究对象，以正常皮肤组织为对照，采用HE常规染色观察两组皮肤基本组织学变化，通过转录PCR法检测糖尿病慢性皮肤溃疡组及正常皮肤组Leptin及OB-RL两种mRNA的表达。结果：糖尿病慢性皮肤溃疡组的溃疡边缘皮肤组织具有典型的组织学改变，与正常皮肤清晰的表皮复层结构、丰富且规则、致密的胶原排列形成了鲜明的组织学反差。正常皮肤组及糖尿病慢性皮肤溃疡两组表皮厚度为(0.99±0.23)mm、(1.63±0.33) mm，二组真皮层厚度为(2.71±0.38) mm、(1.38±0.41)mm，差异均有统计学意义（均P <0.01）。Leptin mRNA在正常皮肤组及糖尿病慢性皮肤溃疡组的分别为0.46±0.05和0.23±0.02， OB-RL mRNA在两组中的表达分别为0.44±0.09和0.28±0.03，差异均有统计学意义（均P <0.01）。结论：糖尿病慢性皮肤溃疡Leptin及其受体OB-RL表达下调可能是其愈合延迟的重要原因之一。     

K-RAS蛋白的表达、基因突变在皮肤瘢痕癌组织中的意义

目的 探讨K-ras蛋白表达、基因突变在皮肤瘢痕癌组织中的意义.方法 以皮肤病理性瘢痕、皮肤瘢痕癌组织为研究对象,以正常皮肤组织为对照.采用免疫组织化学(SP)法检测K-ras蛋白的表达.另外,从瘢痕和瘢痕癌石蜡组织中提取DNA,进行PCR扩增及测序,分析K-RAS基因第12、13位密码子点突变情况.所有数据运用SPSS16.0软件包进行统计学分析.结果 ①K-ras蛋白在正常皮肤表皮和皮肤病理性瘢痕上皮中呈弱阳性表达,在瘢痕癌组织中呈强阳性表达.瘢痕癌组的表达与正常皮肤组及皮肤瘢痕组比较,差异均有显著性(P＜0.05)；正常皮肤组与瘢痕组比较,差异无显著性(P＞0.05).②从14例皮肤瘢痕和14例瘢痕癌石蜡组织中提取DNA,经PCR反应,均成功扩增出目的片段,测序未发现K-ras基因第12、13位密码子的点突变.结论 ①皮肤瘢痕癌的发生可能与K-ras蛋白的高表达有关.②瘢痕癌中K-ras基因的突变位点有待进一步探讨.     

同种异体组织工程复合皮肤移植修复大鼠皮肤缺损

目的：检测组织工程皮肤的生物活性及免疫原性，探讨临床可行性。方法：以新生SD大鼠皮肤为原材料培养组织工程复合皮肤并将其移植到成年Wistar大鼠，通过大体观察，组织学检测对不同时间自体，异体及组织工程复合皮肤移植进行比较，研究了组织工程复合皮肤的存活及免疫排斥情况。结果：异体皮肤移植组有明显的免疫排斥，组织工程皮肤组见有明显排斥，且与自体皮肤结合良好。结论：组织工程复合皮无明显的免疫排斥，是较好的皮肤移植替代品，具有潜在的发展前景。     

黑色素细胞与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程化皮肤

目的 探讨构建含有黑色素细胞组织工程化皮肤的方法.方法 从人包皮组织中获取黑色素细胞,从人骨髓中获取骨髓间充质干细胞(BMSCs),以二者为种子细胞,按照1:10的比例混和培养,并与I型胶原膜复合体外构建组织工程化皮肤,对裸鼠创面进行修复.通过大体标本观察、4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)体内示踪标记、HE染色、免疫组织化学检测及透射电镜观察等方法,观察组织工程化皮肤修复裸鼠皮肤创面缺损及黑色素细胞的分布情况.结果 裸鼠创面皮肤生长良好,DAPI体内示踪标记、免疫组织化学检测S-100蛋白及透射电镜观察可以发现黑色素细胞以正常的组织结构形式分布于创面皮肤.结论 黑色素细胞与BMSCs通过适当的比例及体外条件培养,与I型胶原膜复合可以在体外构建出具有黑色素细胞的组织工程化皮肤.     

体外构建的皮肤模型Inspectskin Ⅰ修复裸鼠全层皮肤缺损

【目的】探讨胚胎来源表皮干细胞构建的人工皮肤模型InspectskinⅠ修复全层皮肤缺损的作用,为构建含皮肤附属结构的检验用皮肤奠定基础。【方法】将人羊膜和BMP-4定向诱导小鼠胚胎细胞分化为表皮干细胞,采用筏式培养在体外与PHBV和成纤维细胞共培养构建组织工程皮肤,经短暂培养后移植于裸鼠皮肤缺损创面,对移植物进行形态学和免疫组织化学观察。【结果】移植物可封闭皮肤缺损,在其表面可形成复层表皮样结构,真皮部分可见大小不等的由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构、汗腺样结构和毛囊样结构。免疫组化和免疫双标结果表明新生表皮的基底层分别呈CK19和CK10阳性,腺管样结构分别呈CEA和CK18阳性。【结论】体外重建的人工皮肤能修复裸鼠全层皮肤缺损,胚胎来源表皮干细胞具有分化为复层扁平上皮、汗腺样结构和毛囊样结构的潜能。     

天狼猩红-偏振光检测组织工程皮肤中胶原的观察

目的 研究组织工程皮肤中胶原合成及分泌情况,并与正常皮肤对照.方法 采用苦味酸-天狼星红染色, 偏振光显微镜观察, Photoshop半定量分析,观察Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量.结果 正常皮肤和组织工程皮肤的真皮中都有Ⅰ、Ⅲ型胶原,在正常皮肤的真皮中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量分别是 98.51±11.28、33.93±3.90;培养成熟的组织工程皮肤中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量分别是 91.42±3.82、30.75±2.29,二者相比差异无统计学意义(P＞0.05).组织工程皮肤培养8、15、30d,组织内Ⅰ型胶原分别为 50.75±4.22、63.57±6.87、91.42±3.82,Ⅲ型胶原分别为16.90±1.64、23.65±4.08、30.75±2.29,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 (1) 培养成熟的组织工程皮肤与正常人皮肤中胶原含量及分布无明显差异;(2)组织工程皮肤不同的培养时期胶原的含量及种类有明显差异.     

以表皮干细胞与HaCaT细胞为种子细胞构建组织工程皮肤的比较研究

目的 比较人表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)与人永生化角质细胞HaCaT作为种子细胞构建组织工程皮肤的差异.方法 Ⅳ型胶原快速黏附法分选表皮干细胞,无血清培养基DK-SFM培养,取第2代备用;应用DK-SFM培养HacaT细胞,取对数生长期的细胞备用;利用组织工程技术构建真皮等价物(dermal equivalent);将上述备用的两种种子细胞分别接种在真皮替代物的表面,构建组织工程皮肤,先后进行浸没培养和气-液面器官型培养,从形态学、物理特性、HE染色等方面观察比较培养物的差异.结果 以ESCs构建的组织工程皮肤收缩快,分层分化近似于正常皮肤,具有较好的张力和韧性.以HaCaT细胞构建的组织工程皮肤分层少,生长慢,张力韧性较差.两种皮肤的直径都随培养时间的增加而缩短,且在3～7 d各检测时相点间有显著性差异(P＜0.05).结论 ESCs比永生化的HaCaT细胞更适合作为种子细胞构建组织工程皮肤.     

组织工程化皮瓣的构建

目的应用脂肪组织来源干细胞(ASCs)在体外构建组织工程脂肪并与已构建的复合皮组装培育,试构建出含脂肪层的组织工程化皮瓣。方法(1)构建组织工程脂肪从脂肪组织中分离培养ASCs并进行三系分化诱导鉴定。ASCs与胶原凝胶混合并进行体外成脂诱导,诱导15 d后分别进行倒置显微镜、油红O染色及HE染色观察。(2)构建复合皮从包皮组织中分离培养表皮细胞(Kc)和成纤维细胞(Fb)。Fb与胶原凝胶混合后培养5 d,将Kc接种到含有Fb的凝胶表面,在液面下培养4 d后移至气-液界面继续培养10 d形成复合皮。(3)构建含皮下脂肪组织的3层结构的皮肤复合组织将培养的复合皮与脂肪组织按正常皮肤结构顺序组装后继续培养3 d并行HE染色观察。结果(1)ASCs具有成脂、成软骨和成骨分化能力。ASCs凝胶复合物体外成脂诱导15 d后,可见细胞内充满圆形脂滴,呈单房或多房形,油红O染色及HE染色均显示为成熟脂滴。(2)经过气-液界面培养后,Kc成层分化,形成基底上层。(3)组装培育后的皮肤复合组织分3层,表层Kc成层分化并形成基底上层;中层和底层连接处细胞聚集;成脂分化的ASCs位于底层。结论分别应用Kc、Fb和ASCs三种细胞,在体外构建出组织工程化脂肪和复合皮,且按序组装培育,可构建出组织工程化皮瓣。     

组织工程化皮肤的研究现状与展望

通过查阅近年来国内外组织工程化皮肤相关的研究,综述组织工程化皮肤研究领域中的现状与进展。广泛查阅国内外有关组织工程化皮肤研究的文献,着重阐述表皮替代物、真皮替代物及表皮真皮复合皮片的研究现状和进展。组织工程是再生医学研究的热点,组织工程化皮肤是组织工程迄今为止最成功的产品之一,现已广泛应用于临床。这篇文章从表皮替代物、真皮替代物及含有表皮和真皮复合皮片结构的皮肤替代物等方面对该领域的最新研究现状和进展进行综述,并探讨了组织工程化皮肤的应用情况,分析了组织工程化皮肤目前存在的问题及未来的发展方向。组织工程化皮肤及其在患者身上的应用已经成为现实,随着组织工程技术的快速发展,我们可以获得与正常皮肤功能特征相似的理想的组织工程化皮肤。     

以表皮细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤

目的 体外扩增培养表皮细胞，复合脱细胞真皮构建组织工程皮肤，以促进其进一步临床应用。方法 将人表皮细胞进行体外培养扩增后，以生长良好的表皮细胞接种于制备好的异种（猪）无细胞真皮支架上，行气液界面联合体外培养，构建组织工程皮肤。观察细胞生长情况及复合皮结构。结果 培养的表皮细胞扩增良好，脱细胞真皮支架去细胞完全，表皮细胞在脱细胞真皮上可以生长，可体外构建复合皮肤。结论 利用体外扩增的表皮细胞及制备的脱细胞真皮可体外联合构建具有复层结构的组织工程皮肤。     

酪氨酸酶在自体中厚移植皮片中的表达

目的:检测酪氨酸酶在人体自体中厚移植皮片中的表达,并与自身正常皮肤作对照,初步认识酪氨酸酶在自体移植皮片色素过度沉着中的作用。方法:利用免疫组化法检测人体自体中厚移植皮片与原供区及受区周围自体正常对照皮肤中酪氨酸酶的蛋白表达,并行统计学分析。结果:酪氨酸酶的表达定位于表皮基底部黑素细胞的细胞质,在大部分自体中厚移植皮片中呈强阳性表达,表达率为65.2%,与自体正常对照皮肤比较,差异有显著性意义(P<0.01);酪氨酸酶在受区与原供区周围正常对照皮肤中的表达差异无显著性意义(P>0.05)。结论:α黑素细胞刺激激素(αMSH)在自体中厚移植皮片中较自体正常对照皮肤中的表达显著增高,在自体移植皮片色素过度沉着中起重要的调控作用。     

组织工程皮肤修复动物皮肤缺损的实验研究

目的利用表皮细胞复合脱细胞真皮构建组织工程皮肤，探讨其用于修复动物皮肤缺损的可行性。方法将扩增的人表皮细胞复合异种（猪）脱细胞真皮支架构建组织工程皮肤，将制备的人工皮肤移植于裸鼠全层皮肤缺损，观察创面愈合情况并进行直接免疫荧光鉴定。结果构建的组织工程皮肤可用于修复裸鼠全层皮肤缺损，创面愈合良好，新生的表皮由移植的人表皮细胞增殖形成。结论利用表皮细胞复合脱细胞真皮构建的组织工程皮肤可用于修复动物全层皮肤缺损。     

明胶酶在皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的:探讨明胶酶在皮肤基底细胞癌(basal cell carcinoma,BCC)、鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)和正常皮肤组织中的表达和意义.方法:应用SP法检测10例正常皮肤组织、10例BCC、30例SCC组织石蜡标本中明胶酶的表达水平进行对比研究.结果:明胶酶的表达在SCC...     

跗外侧动脉皮瓣移植修复手足皮肤缺损

目的：探讨跗外侧动脉皮瓣移植修复手足皮肤缺损的临床效果。方法：本组13例,设计以足背动脉为蒂的跗外侧动脉皮支传出点为中心的足外侧皮瓣,逆行修复足前端创面8例,游离跗外侧皮瓣修复手缺损5例。结果：本组13例均成活,2例皮瓣早期有水疱形成,皮缘拆线放血减压后好转;2例皮瓣下感染,皮缘裂开,经换药后二期拉拢缝合,伤口愈合。1...     

选择素在大鼠同种异体皮肤移植皮片的表达

目的通过检测选择素P、选择素E在同种异体大鼠皮肤移植后免疫排斥反应中的表达,研究组织工程皮肤的组织相容性.方法取SD大鼠皮肤和实验室培养的组织工程SD大鼠皮肤移植于成年Wistar大鼠,移植成功后取不同时间点标本用免疫组织化学方法检测选择素P、选择素E在组织中的表达.结果同种异体皮肤移植组,选择素P、选择素E有显著表达,组织工程皮肤移植后,局部组织中水平显著低于同种异体皮肤移植组.结论选择素P、选择素E的改变与同种异体皮肤移植后的免疫排斥反应呈正相关,组织工程皮肤只具有很弱的免疫原性,不引起显著的排斥反应.     

体外构建色素化皮肤类似物模型

目的 探寻构建色素化皮肤类似物的方法.方法 以包皮组织作为细胞来源,采用消化法获得角质形成细胞、黑素细胞;采用组织块法获得成纤维细胞,以鼠尾胶原为支架,构建色素化皮肤类似物.HE染色、Fontana Masson染色检测构建的色素化皮肤类似物的大体结构及其中黑色素细胞的分布和状态,以透射电镜观察类似物的超微结构.结果 构建的色素化皮肤类似物结构完整,细胞状态良好,与皮肤结构相似.结论 成功构建了色素化皮肤类似物模型.