血管紧张素Ⅱ对成人脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对成人脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向心肌细胞方向分化的诱导作用,并与5-氮杂胞苷(5-aza)作比较.方法:自成人脂肪组织中分离培养ADMSCs,分别用Ang Ⅱ(Ⅰ组)和5-aza(Ⅱ组)诱导ADM-SCs,同时设立对照组(Ⅲ组),光镜下观察细胞的生长情况及形态学变化,电镜下观察细胞的超微结构,免疫细胞化学方法检测心肌特异性肌钙蛋白-Ⅰ(cTn-Ⅰ),MTT法检测细胞活性,流式细胞术分析细胞周期及凋亡.结果:Ⅰ,Ⅱ组ADM-SCs诱导后呈现类似心肌细胞的形态学特征,第28日Ⅰ,Ⅱ组均表达cTn-Ⅰ,两组间诱导转化率无差别,其中Ⅰ组ADM-SCs增殖迅速,较少凋亡细胞.结论:AngⅡ在促进ADMSCs增殖的同时诱导其向心肌细胞分化,优于传统的化学诱导剂5-aza.     

成人脂肪间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的实验观察

目的:探索成人脂肪组织来源的间充质干细胞(ADMSCs)体外分离、培养方法,并化学诱导使其向心肌细胞分化,为心肌再生医学提供理想的种子细胞来源. 方法:体外分离成人ADMSCs并进行传代培养,5-氮胞苷(5-aza)诱导其向心肌细胞分化. 分别于诱导后14,21,28 d时用免疫细胞化学染色、RT-PCR法进行心肌细胞鉴定. 结果:ADMSCs经5-aza诱导后14 d时细胞形态趋向于心肌细胞,诱导28 d免疫细胞化学显示心肌特异性肌钙蛋白I(cTN-I)、结蛋白(Desmin)表达阳性,RT-PCR检测心肌β-肌球蛋白重链(Cardiac β-MHC)基因表达阳性. 结论:成人脂肪组织存在丰富的间充质干细胞且易于分离扩增,体外5-aza诱导可使其向心肌细胞分化,可做为心肌再生医学的理想种子细胞.     

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的实验研究

目的：研究兔骨髓间充质干细胞（MSCs）的体外分离、培养及向心肌细胞诱导分化的条件。方法：抽取兔髂骨骨髓，用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化MSCs，第3代细胞（P3）用流式细胞术检测细胞表面抗原CD34、CD45、CD11b，CD90、CD29。以10μmol／L5-氮胞苷（5-aza）进行诱导分化，4周后，用倒置显微镜、透射电镜观察MSCs形态学变化及超微结构特征，RT—PCR检测心肌特异性β-肌球蛋白重链（β—MHC）、肌钙蛋白I（cTnI）的表达。结果：兔MSCs呈贴壁集落生长，流式细胞术检测显示P3细胞均一性在97％以上，纯度较高。诱导后细胞体积较诱导前增大，更加细长。14天后细胞之间出现连接，排列方向渐趋一致。4周后，透射电镜下有肌丝、心房特殊颗粒及线粒体等心肌细胞超微结构形成。RT—PCR显示B—MHC、cTnI呈阳性反应。结论：MSCs在体外经5-aza诱导可以向心肌细胞进行分化。     

骨髓间质干细胞分离培养及向心肌细胞的转化

目的:探讨骨髓间质干细胞(MsCs)诱导分化为心肌细胞的可能性,为干细胞移植治疗心肌梗死寻求理想的细胞材料.方法:体外分离培养大鼠骨髓MSCs,5-氮胞苷(5-aza)诱导24 h后继续培养,免疫细胞化学染色和RT-PCR检测心肌细胞特异性蛋白的表达.结果:MSCs经5-aza诱导后3周心肌肌钙蛋白T和连接蛋白43免疫细胞化学染色阳性表达;RT-PCR显示诱导3周细胞有心肌肌钙蛋白I、α心肌肌动蛋白表达.结论:MsCs可在体外经5-aza诱导定向分化为心肌细胞.     

3种体外培养方法诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化效果比较

目的：采用3种体外培养方法对骨髓间充质干细胞（BMSCs）进行诱导分化,探讨体外诱导BMSCs向心肌细胞分化的最佳方法。方法：采用密度梯度离心法结合贴壁培养法体外分离培养大鼠BMSCs,分为5-氮胞苷（5-aza）组、扩张型心肌病（DCM）模型大鼠心肌细胞裂解液组和DCM模型大鼠血清+5-aza组,同时设对照组（同等条件下在含10%胎牛血清的L-DMEM培养基中培养）,观察细胞形态表现,采用RT-PCR法、Western blotting法和免疫组织化学染色法检测细胞中肌钙蛋白T（cTnT）的表达。结果：密度梯度离心法结合贴壁培养法获得大鼠BMSCs,BMSCs高表达间充质干细胞（MSCs）的特征性表面标记CD44、CD29和CD105,不表达造血干细胞的特征性表面标志CD34;特定诱导条件下,BMSCs可以向成骨细胞及脂肪样细胞分化。体外3种培养方法均可诱导BMSCs表达cTnT,分化为心肌样细胞;5-aza组细胞生长状态差,其余2组细胞生长状态较好,DCM模型大鼠血清+5-aza组细胞中cTnT阳性表达率最高。结论：采用DCM模型大鼠血清联合5-aza诱导BMSCs向心肌细胞分化的效果最佳。     

肝细胞生长因子基因转染5-aza诱导后的骨髓基质干细胞及其表达、分化的研究

目的 将重组腺病毒(Ad-HGF)转染5-氮胞苷(5-aza)诱导后的骨髓基质干细胞(BMSCs),检测其心肌样细胞分化和HGF基因表达,探讨其用于缺血性心脏病治疗的可行性.方法 以5-aza诱导比格犬BMSCs向心肌样细胞分化,形态学观察、免疫组化检测心肌样细胞标志--β-肌球重链蛋白(β-MHC)和(α-横纹肌肌动蛋白的表达;以Ad-HGF转染5-aza诱导后的BMSCs,RT-PCR、ELISA检测肝细胞生长因子(HGF)的表达.结果 形态学观察与免疫组化结果表明,5-aza诱导BMSCs向心肌样细胞分化,Ad-HGF转染5-aza诱导后的BMSCs在mRNA和蛋白水平均有HGF表达,转染后48h表达量最高,达103ng/ml.结论 Ad-HGF可高效转染5-aza诱导后的BMSCs,为其应用于缺血性心脏病的生物治疗奠定了基础.     

不同诱导条件下大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的比较研究

目的探讨不同诱导条件对大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）向心肌样细胞分化的影响。方法分离培养大鼠MSCs,将第4代经鉴定证实的MSCs随机分成4组：血管紧张素II（AngiotensinII,AngII）诱导组（含不同浓度3个亚组）、心肌细胞裂解液诱导组、AngII＋心肌细胞裂解液共同诱导组及空白对照组,并进行定向诱导,观察细胞形态学变化,采用免疫细胞化学法对分化细胞进行鉴定并计算阳性细胞转化率。结果除对照组外,其余各组经诱导培养4周后的细胞形态均有改变,且都表达心肌特异性肌钙蛋白I（Cardiac-specific troponin I,cTnI）及间隙连接蛋白43（Connexin-43）,但表达率不同,共同诱导组较其余各组形成的克隆、肌管结构多,细胞转化率较高（P〈0.05）,AngII单独诱导时以0.2 mol/L组诱导效果最佳（P〈0.05）。结论 AngII和心肌细胞裂解液均可将MSCs定向诱导分化为心肌样细胞,二者联合应用转化率更高。在一定浓度范围内,单独应用AngII诱导,诱导剂浓度越高,转化率越高。     

骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的实验研究

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及向心肌样细胞转化的条件及可行性。方法：取Wistar大鼠胫骨、股骨干骨髓,采用贴壁法进行间充质干细胞的培养、传代,观察经5 氮胞苷(5 azacytidine,5 Aza)诱导后骨髓间充质干细胞的生长和分化,并检测其α 肌动蛋白（α actin）和肌钙蛋白I（cTnI）的表达。结果：大鼠骨髓干细胞贴壁呈集落生长,5 Aza诱导后的骨髓干细胞形态类似心肌细胞,α actin和cTnI表达阳性。结论：骨髓干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞,为心肌细胞移植提供了一种良好的细胞来源。     

5-氮胞苷对大鼠脂肪间充质干细胞的诱导分化作用及相关蛋白的表达

目的 探讨5-氮胞苷(5-Aza)对大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的诱导分化作用及相关蛋白的表达。 方法 采取酶消化法和贴壁法分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠腹部皮下脂肪组织，采用抗单核细胞人类白细胞抗原DR(HLA-DR)、兔抗CD13、CD44、CD105、血管性血友病因子(vWF)多克隆抗体对培养细胞进行鉴定，排除造血干细胞及成纤维细胞，取第3代ADMSCs细胞，以每孔1×104个细胞接种于24孔培养板中，并将其随机分为正常组和诱导组，正常组细胞于常规培养基中加入无菌生理盐水培养，诱导组细胞于常规培养基中加入浓度为10 μmol/L的5-Aza进行诱导培养。比较2组细胞的形态结构、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及缝隙连接蛋白43(Connexin43)基因表达量及cTnT、cTnI、Connexin43蛋白的表达情况。 结果 诱导组ADMSCs细胞增殖缓慢，体积增大并逐渐变为棒状或宽梭形，形态呈心肌细胞特征；RT-qPCR结果显示，诱导组细胞cTnT、cTnI及Connexin43基因表达量增强；免疫组化结果显示，诱导组细胞细胞质明显可见棕黄色或棕褐色颗粒物质，而正常组细胞细胞质中棕黄色或棕褐色颗粒物质较少，且诱导组细胞cTnT、cTnI及Connexin43蛋白阳性表达评分明显高于正常组(P<0.05)。 结论 大鼠脂肪组织中含有多向分化潜能的间充质干细胞(MSCs)，5-Aza可以诱导大鼠ADMSCs向心肌细胞分化，ADMSCs有望成为治疗心肌梗死的种子细胞。      

5-氮胞苷诱导单层P19细胞向心肌分化

目的：研究Nkx2—5基因在5-氮胞苷（5-aza）诱导单层P19细胞向心肌分化中的作用．方法：实验分实验组和对照组,实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,对照组为P19细胞．两组细胞均单层培养,以5-aza（1μmol／L）诱导,倒置显微镜观察细胞的生长状态;5-aza诱导的4,8,12,16d,免疫细胞化学检测横纹肌α-actin（α-SA）和心肌肌钙蛋白T（cTnT）的表达;取5-aza诱导16d的细胞透射电镜观察超微结构的变化．结果：实验组5-aza诱导的8,12,16d检测到α—SA和cTnT的阳性表达,表达量逐渐增多．对照组没有两种抗体的阳性表达;实验组5-aza诱导16d,电镜观察发现部分相邻细胞分化出细胞连接和心肌发育早期的闰盘结构,胞质中出现密集平行排列肌丝样结构．对照组没有发现分化的细胞．结论：外源表达Nkx2-5基因促进P19细胞单层生长时向心肌分化．     

小鼠脂肪源间充质干细胞的培养鉴定及增强绿色荧光蛋白-慢病毒载体转染

目的探索脂肪源间充质干细胞（ADMSCs）的分离培养方法、生长特性及筛选出慢病毒载体感染间充质干细胞的最佳感染指数（MOI）,并鉴定其感染后的增殖能力,为ADMSCs移植治疗急性肾小管损伤提供实验依据。方法取4周龄昆明小鼠腹股沟脂肪组织,差速贴壁法培养分离昆明小鼠脂肪源间充质干细胞。经细胞培养液洗涤、离心后接种于细胞培养瓶,放置体积分数5％CO2孵箱中培养,24h后换液,以后每3d更换培养基,待细胞融合达到约90％时,传代培养。取第3代ADMSCs用流式细胞术（FCM）检测其表型、茜素红染色及油红O染色鉴定其多向分化潜能;用携带增强绿色荧光蛋白（EGFP）的慢病毒载体（LV）感染ADMSCs,FCM检测病毒感染效率,四甲基偶氮唑蓝（MTY）比色法检测感染后的细胞活力。结果（1）差速贴壁法培养分离7-11d时细胞融合达80％以上。原代细胞融合达80％～90％进行1：4传代,细胞贴壁和生长速度快于原代细胞培养。第3代及再传代细胞形体趋于一致,细胞呈梭形。细胞连续传代10次,生长速度未见明显减缓;（2）FCM检测第3代细胞CD29阳性表达98．93％,CD34阳性表达0．17％;（3）第3代细胞成脂诱导14d油红O染色阳性,成骨诱导14d茜红染色阳性;（4）当MOI=25感染第3代细胞72h后,共聚焦荧光显微镜观察细胞EGFP阳性表达60％～70％,细胞活力不受影响;（5）MrIT法显示重组慢病毒转染细胞与未转染慢病毒细胞比较,细胞增殖能力无差异。结论从昆明小鼠腹股沟脂肪组织中分离的ADMSCs可在体外稳定传代;差速贴壁法可以简便、高效地提取ADMSCs;携带EGFP的LV可有效感染ADMSCs,并且感染后其增殖能力不受影响。     

心肌钙蛋白Ⅰ与脑钠肽在心肌梗死组织中的表达及其意义

目的：探讨心肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）、脑钠肽（BNP）在心肌梗死组织中的表达及其意义。方法：应用免疫组化方法检测cTnI、BNP在心肌梗死组织中的表达情况,然后应用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件进行图像分析及数据统计。结果：cTnI和BNP在正常心肌组织中呈强阳性表达,染色均匀,未见明显的缺失区域,细胞间质内无表达;在心肌梗死组织中可见不规则分布的点状、灶状、片状、条带状染色缺失,部分心肌细胞呈弱阳性表达;两组间的差异具有统计学意义。结论：cTnI、BNP免疫组化染色方法的联合应用对心肌梗死诊断具有一定的意义。     

血清C反应蛋白和肌钙蛋白I测定在冠心病诊断中的临床应用

目的:探讨血清C反应蛋白(CRP)和肌钙蛋白I(cTnI)测定在冠心病(CHD)诊断中的应用价值.方法:CRP采用速率散射比浊法测定,cTnI采用化学发光法测定,共检测135例不同类型的CHD患者血清的CRP和cTnI水平.结果:CHD组的CRP和cTnI水平均明显高于正常对照组(P＜0.01);不同类型的CHD患者C...     

新生儿支原体肺炎血清心肌酶和肌钙蛋白I水平检测

目的：观察支原体肺炎与细菌性肺炎新生儿心肌酶及肌钙蛋白Ⅰ （cTnⅠ）的水平.方法：临床确诊为新生儿支原体肺炎（MPP组）55例和新生儿细菌性肺炎（N-MPP组）60例,于入院后第2天、第7天和2周测定血清心肌酶及cTnⅠ,并与56例健康新生儿（对照组）进行比较.结果：MPP组、N-MPP组患儿入院第2天、第7天心肌酶及cTnⅠ均高于对照组（P＜0.01）,入院后第2天N-MPP组高于MPP组（P＜0.05或P＜0.01）,第7天MPP组高于N-MPP组（P＜0.05或P＜0.01）;入院后2周N-MPP组心肌酶及cTnⅠ基本降至正常,与对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,而MPP组仍明显高于对照组（P＜0.01）.结论：新生儿支原体肺炎较细菌性肺炎心肌酶及cTnⅠ水平升高延迟出现且恢复慢,不同时间检测心肌酶及cTnⅠ,可了解患儿心肌损害情况,及时给予保护心肌治疗.     

Effects of endothelin-1 on differentiation of cardiac myocyte induced from rabbit bone marrow stromal cells

Background Cardiomyocyte transplantation for the therapy of myocardial ischaemia is being paid close attention. However, how the microenvironment controls the differentiation of transplanted bone marrow stromal cells （BMSCs） is unknown. Endothelin-1 （ET-1）, a cytokine, increases during myocardial infarction, but it is not known whether ET-1 is responsible for the fate of transplanted BMSCs. In the present study, we investigated the effects of ET-1 on differentiation and maturation of induced rabbit BMSCs, in vitro, to elucidate the cellular biological mechanisms.     

地佐辛预给药对下肢缺血再灌注诱发心肌损伤的保护作用

目的：观察地佐辛预给药对下肢缺血再灌注诱发心肌损伤的保护作用。方法：选择下肢远端骨折患者40例,ASAI或II级,随机分为两组（n=20）：地佐辛组（B组）和对照组（C组）。所有患者均选择硬膜外麻醉,B组在上止血带前15 min静脉注射地佐辛注射液0.1mg/kg,C组以生理盐水代替。两组分别于上止血带前（T0）,第二次松止血带后5 min（T1）、2h（T2）、6h（T3）、12h（T4）及24h（T5）颈内静脉血采血5ml,检测血清CK-MB、cTnI、TNF-a和丙二醛（MDA）水平。结果：与T0时比较,C组CK-MB水平T2～5时点明显升高,cTnI、MDA及TNF-a水平T1～5时点明显升高（P〈0.05）,B组CK-MB水平T3,4时点明显升高,TNF-a水平T1～3时点明显升高,cTnI水平T1～5时点明显升高（P〈0.05）;与C组比较,B组CK-MB水平T2～5时点降低,cTnI、TNF-a水平T1～5时点明显降低,MDA水平T1～4时点明显降低（P〈0.05）。结论：地佐辛预给药可以降低血清CK-MB、cTnI升高幅度,对肢体缺血再灌注导致的心肌损伤具有保护作用。     

化学发光检测血清和肝素钠抗凝血浆中肌钙蛋白Ⅰ浓度的比较

目的：比较用化学发光检测血清和肝素钠抗凝血浆中肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）浓度的差别。方法：应用Access免疫测定系统定量测定200例血清（A组）和肝素钠抗凝血浆（B组）中的cTnI浓度,比较两者间的差异。结果：血清与肝素钠抗凝血浆cTnI浓度测定结果差异无统计学意义（P〉0.05）,说明两者都可用于化学发光检测cTnI浓度。结论：血清和肝素钠抗凝血浆都可用于化学发光检测cTnI浓度,但由于肝素钠抗凝血浆分离时间更短,对于cTnI这种急诊指标更具优势。     

急性心肌梗死患者cTnI峰值对早期预后的影响

目的：观察急性心肌梗死（AMI）患者心肌肌钙蛋白I（cTnI）峰值对早期预后的影响,并比较不同峰值与预后的相关关系。方法：入选急性ST段抬高心肌梗死（STEMI）患者286例,根据住院期间不同治疗方式分为：〈6h行PCI治疗者为组1（11=100）;6～12h行PCI治疗者为组2（n=96）;采取药物治疗者为组3（n=90）。入选所有患者入院即刻取2mL静脉血分别放入2个抗凝管中测定cTnI,测定cTnI,入院立刻给予测定一次,之后每2～4h测定一次,达到峰值后,每2～3d测定一次,直到cTnI恢复正常。2周内行超声心动图检查,观察住院期间心血管事件发生者的cTnI峰值及各区间分组的死亡率。结果：（1）组1、组2、组3的心功能异常者cTnI峰值显著高于心功能正常者,有统计学意义（P〈0．05）;死亡患者cTnI峰值显著高于心功能正常患者,有统计学意义（P〈0．001）．组1与组2、组3比较LVEF均有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。（2）急性心肌梗死患者死亡率随着cTnI峰值的升高而升高,有统计学意义（P〈0．05）。（3）急性心肌梗死患者cTnI峰值与LVEF显著负相关（P〈0．05）。结论：cTnI的峰值与急性心肌梗死的早期预后密切相关;急性心肌梗死患者cTnI的峰值越高其早期预后越差,心功能越差,死亡率越高;急性心肌梗死患者cTnI的峰值测定有利于对高危患者进行临床指导及治疗。6h内行介入治疗明显改善心功能。