甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的作用及其相关机制.方法 采用Hoechst33258染色技术检测甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响,并采用RT-PCR方法在mRNA水平研究cFLIP基因在甲基硫代腺苷诱导的结肠癌HCT116细胞凋亡过程中的作用.结果 甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞具有明显促进凋亡作用.在这一过程中,cFLIP基因在mRNA水平上出现明显下调情况.绪论甲基硫代腺苷对HCT116细胞具有明显凋亡诱导作用.cFLIP基因的下调可能起到了重要作用.     

MTA对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的作用. 方法: 采用MTT比色技术、Hoechst33258染色技术检测MTA对NCM460和RKO细胞增殖和凋亡的影响. 结果: MTA对结肠癌RKO细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡的作用, 该作用强于对结肠正常上皮细胞NCM460细胞的增殖和凋亡的影响. 结论: MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性,对NCM460细胞的毒性较低.     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的影响

[目的]观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的作用,初步探讨其可能的机制。[方法]采用体外细胞培养技术,用MTT法观察三叶青提取物RKO细胞的影响;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bid,Bax,Bcl-2和Bcl-XL的表达改变。[结果]三叶青提取物能显著地抑制人结肠癌细胞系RKO细胞的生长,并且具有浓度依赖性,且细胞有明显的凋亡特征性改变,并能下调Bcl-XL、上调Bid来诱导凋亡。[结论]三叶青提取物具有对人结肠癌细胞系RKO细胞抗增殖和诱导凋亡的作用,且呈剂量依赖性。     

甲基硫代腺苷对结肠癌RKO细胞增殖及RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录影响实验研究

目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌RKO细胞增殖的影响及其转录水平相关机制。方法:采用MTT比色技术及细胞计数作生存曲线的方法分析MTA对结肠癌RKO细胞增殖的影响,并采用Realtime PCR的方法分析RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5SrRNA)。结果:0.5、1、2、3mmol/L MTA作用16h后,RKO细胞的增殖能力分别为对照组的(84.1±4.5)%、(69.4±5.2)%、(55.3±3.8)%、(40.9±3.5)%(P均<0.01);MTA 0.5mmol/L作用4、8h后,RKO细胞tRNAs、5SrRNA的转录水平分别为对照组的0.584±0.033、0.624±0.035,0.453±0.025、0.372±0.027(P均﹤0.01)。结论:MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性,且对RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录的下调可能起到重要作用。     

三氧化二砷对结肠癌凋亡及耐药基因表达影响的研究

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对结肠癌SW620的抑制和诱导凋亡作用及对MRP基因表达的影响.方法 选用结肠癌SW620细胞系,运用流式细胞术检测As2O3对结肠癌的抑制和诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MRP mRNA的表达.结果 As2O3对结肠癌SW620细胞具有抑制生长作用及增加凋亡诱导率,不同浓度的As2O3均可诱导凋亡.1.0 pmol/L、2.0μmol/L的As2O3可下调MRP mRNA的表达.结论 As2O3具有诱导细胞凋亡的作用,并能下调MRP mRNA表达.     

苦参碱联合奥沙利铂对人结肠癌细胞SW1116作用的实验研究

目的 探讨苦参碱(matrine,Ma)和奥沙利铂(oxalipla,L-OHP)联合应用对人结肠癌细胞SW1116的增殖抑制作用及机制.方法 用不同浓度的Ma、L-OHP和两药联用处理人结肠癌细胞SW1116,采用MTT法测定细胞的增殖抑制作用,TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR方法检测fas和fasL基因mRNA表达水平.结果 Ma、L-OHP单独应用和联合应用均能抑制SW1116增殖,Ma和L-OHP联合应用后对人结肠癌SW1116细胞的抑制率明显大于单药,并有显著的协同杀伤作用.与单药相比,联合用药组的细胞凋亡率显著上升(P<0.01),Fas mRNA表达显著上升(P<0.01),FasL mR3qA表达明显下降(P<0.01).结论 Ma和L-OHP联合应用具有明显的协同抗结肠癌SW1116细胞增殖的作用,并能诱导细胞凋亡,其机制可能与上调fas基因和下调FasL基因表达有关.     

蟾蜍灵对结肠癌SW620细胞凋亡的影响

目的:研究蟾蜍灵诱导结肠癌细胞的凋亡作用.方法:采用不同浓度的蟾蜍灵处理结肠癌SW620细胞,采用四唑蓝比色法检测细胞生长,分别通过检测caspase-3活性和琼脂糖凝胶电泳了解细胞凋亡情况,以Fura-2荧光复合技术测结肠癌细胞内游离Ca2 浓度.结果:蟾蜍灵对结肠癌细胞增殖具有很强的抑制作用.蟾蜍灵能够诱导结肠癌细胞凋亡.在结肠癌细胞凋亡过程中,胞内游离Ca2 浓度明显升高,以凋亡早期更为明显.1 h时为(288.56±8.46)nmol/L,明显高于对照组(125.56±3.18)nmol/L(P＜0.01).结论:蟾蜍灵对结肠癌细胞生长具有很强的抑制作用,与诱导细胞凋亡有关.Ca2 在蟾蜍灵诱导结肠癌细胞凋亡过程中有一定的作用.     

β-榄香烯诱导结肠癌Lovo细胞凋亡的作用

目的　研究 β 榄香烯诱导结肠癌细胞的凋亡作用 ,探讨其治疗结肠癌的作用机制。 方法　选择 β 榄香烯诱导结肠癌细胞凋亡 ,采用光镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡及细胞周期。Fura 2荧光复合技术测结肠癌细胞内 [Ca2 +]i浓度。结果　β 榄香烯对结肠癌细胞增殖具有很强的抑制作用。β 榄香烯能够诱导结肠癌凋亡。在结肠癌细胞凋亡过程中 ,胞内 [Ca2 +]i明显升高 ,以凋亡早期更为明显。 1h时为 ( 2 5 6.18± 8.85 )nmol/L ,明显高于对照组 ( 12 7.81± 5 .18)nmol/L(P <0 .0 1)。结论　β 榄香烯对结肠癌细胞生长具有很强的抑制作用 ,与诱导凋亡有关。Ca2 +在 β 榄香烯诱导结肠癌细胞凋亡过程中有一定的作用     

蒜氨酸+蒜酶诱导人胃腺癌细胞凋亡及其分子机制的研究

目的：观察蒜氨酸 蒜酶诱导人胃腺癌细胞(MGC-803)的凋亡作用，并进一步研究Bcl-2、Bax和p21基因在此过程中的作用。方法：将不同浓度的蒜氨酸 蒜酶作用于MGC-803细胞，观察其时间和剂量效应;利用光镜和荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状带形成;利用RT—PCR法观察蒜氨酸 蒜酶作用过程中Bcl-2、Bax和p21基因的mRNA表达变化。结果：蒜氨酸 蒜酶可抑制MGC-803细胞的生长，存在时间和剂量关系;蒜氨酸 蒜酶可诱导MGC-803细胞凋亡;出现Bcl-2基因mRNA表达下调，Bax和p21基因mRNA个别剂量点的表达。结论：蒜氨酸 蒜酶诱导人胃腺癌细胞MGC-803的凋亡，其机理可能在于Bcl-2基因mRNA表达下调。     

光甘草定对结直肠癌细胞RKO增殖和凋亡的影响

目的 研究光甘草定(Gla)对人结直肠癌细胞株RKO增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 选取RKO细胞为研究对象,采用MTT比色法测定Gla对RKO细胞增殖的影响,通过Hoechst 33258染色检测RKO细胞凋亡情况;Western blot法检测RKO细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白以及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9前体(Procaspase-9)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平.结果 Gla抑制RKO细胞的增殖,并呈浓度与时间依赖性(P<0.05);Gla能调节MAPK信号通路JNK1/2,p38磷酸化的水平;Gla可诱导RKO细胞凋亡,下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Procaspase-9的表达水平(P<0.05),上调Bax、Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),而Caspase-8蛋白水平在各组变化均不明显.结论 Gla能抑制结直肠癌RKO细胞的增殖,并通过下调Bcl-2/Bax的比值诱导凋亡,其可能与MAPK信号通路的激活有关.     

5-氮-2′-脱氧胞苷对RKO结肠癌细胞株p16/CDKN2基因去甲基化的转录调节作用

目的 探讨DNA5′CpG岛去甲基化对RKO结肠癌细胞株p16／CDKN2抑癌基因的转录调控作用及对细胞株生长增殖的生物学影响,寻找抗癌治疗的新靶点。方法 用特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine)作用结肠癌细胞株72h后,甲基特异性PCR(Methylation-specific PCR．MSP)、T-A克隆及DNA测序分析甲基化状态,四唑盐(MTT)比色、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光定量PCR(Real-timePCR)、免疫组织化学染色(IHC)及蛋白印迹(Western blot)检测用药前后RKO细胞株生长倍增时间以及对p16／CDKN2 mRNA及蛋白表达的影响。结果 (1)未经5-Aza-deoxycytidine作用的对照组RKO细胞基因组DNA的胞嘧啶保持不变,而经5-Aza-CdR作用的RKO结肠癌细胞基因组DNA的胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶;(2)与对照组相比,3组不同浓度5-Aza-2′-deoxycytidine均能明显抑制肿瘤细胞生长,倍增时间分别增加了1．49、1．64、1．87倍;(3)经5-Aza-2′-deoxycytidine作用后,p16／CDKN2基因mRNA表达分别增加了4．89、16．91、19．97倍,而DNA甲基转移酶mRNA表达显著降低;(4)免疫组化染色和蛋白印迹均显示,经处理后的肿瘤细胞p16／CDKN2蛋白表达呈明显增强。结论 DNA异常甲基化与RKO结肠癌细胞有关;特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-2′-deoxycytidine能较好地逆转RKO细胞DNA异常甲基化,并有效地激活因高甲基化所致p16／CDKN2基因沉默的再转录,诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞生长。     

胃腺癌组织中cFLIP mRNA的表达及细胞凋亡检测

目的:检测胃腺癌组织中cFLIP mRNA的表达及胃腺癌细胞的凋亡.方法:采用原位杂交技术检测45例胃腺癌、23例癌旁不典型增生及21例正常胃黏膜组织中cFLIP mRNA的表达;运用TUNEL法检测胃腺癌细胞凋亡情况,计算凋亡指数(AI).结果:胃腺癌组织中cFLIP mRNA的阳性表达率高于正常黏膜及不典型增生组织...     

GnRH激动剂对子宫内膜异位症患者卵巢颗粒细胞细胞周期及抗凋亡蛋白cFLIP表达的影响

目的探讨GnRH激动剂（GnRHa）治疗对子宫内膜异位症（EMs）患者卵巢颗粒细胞细胞周期以及抗凋亡蛋白cFLIP表达的影响。方法共45例接受体外授精-胚胎移植（IVF-ET）治疗的患者,其中EMs患者19例,随机分配至GnRH-a治疗组（A组,n=11）和常规长方案治疗组（B组,n=8例）,另26例管性因素不孕的常规长方案治疗患者为对照组（C组）。各组取卵时收集卵泡液颗粒细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting测定颗粒细胞cFLIP蛋白含量。结果三组的受精率、临床妊娠率、种植率及流产率差异均无统计学意义（P〉0.05）。三组患者G0/G1期细胞比例的差异无统计学意义（P〉0.05）;A组和B组S期细胞比例显著高于C组,G2/M期细胞比例显著低于C组（P〈0.05）,凋亡峰显著高于C组（P〈0.05）;但A组与B组细胞周期各时相差异均无统计学意义（P〉0.05）。C组卵巢颗粒细胞cFLIP蛋白表达水平显著高于A和B组（P〈0.05）,A、B两组cFLIP蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 EMs患者卵巢颗粒细胞凋亡升高,且细胞周期异常;延长的GnRH-a治疗并不改善这种异常以及抗凋亡蛋白cFLIP的低表达状态。     

褪黑素对结肠癌细胞系RKO增殖和凋亡的影响

目的研究褪黑素(Mel)作用下,结直肠癌细胞系RKO细胞增殖和凋亡发生的变化。方法 MTT法检测Mel对RKO细胞增殖的影响,并同时观察不同浓度Mel作用下相应受体表达的变化,通过Hoechst染色观察细胞核染色结果,判断细胞凋亡情况,并同时用Western blot观察凋亡相关蛋白表达的变化。结果毫摩尔级的Mel可以抑制细胞增殖,膜受体MEL1AR随着浓度的增加表达上调,Hoechst染色显示Mel作用下细胞凋亡增加,抑制凋亡的相关蛋白,如Bcl-2和Bcl-XL的表达明显下降,而促进凋亡的相关蛋白,如Bax、Bak等表达量相应提高。结论 Mel通过受体MEL1AR发挥作用,抑制细胞的增殖,并促进细胞凋亡。     

HIC-5/ARA55在人大肠癌中的表达及其作用机制

目的:研究局部黏着蛋白HIC-5/ARA55与大肠癌分化和转移的关系,以及对大肠癌细胞生长和凋亡的影响.方法:用RT-PCR方法检测42例大肠癌组织HIC-5/ARA55 mRNA的表达,用Western-blot检测42例大肠癌组织蛋白水平的表达.用PCDNA4A-HIC-5/ARA55转染大肠癌Lovo细胞构建稳定转染细胞系,用流式细胞学方法检测HIC-5/ARA55对大肠癌Lovo细胞系凋亡的影响,用Western-blot方法检测HIC-5/ARA55对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的影响,用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测HIC-5/ARA55对细胞生长的影响.结果:大肠癌组织中HIC-5/ARA55在mRNA表达水平和蛋白表达水平均低于正常组织(P＜0.05),HIC-5/ARA55可以促进大肠癌细胞的凋亡,使凋亡促进蛋白Bax表达升高,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低.HIC-5/ARA55可以抑制大肠癌细胞的生长.结论:HIC-5/ARA55可能是一种具有肿瘤抑制作用的蛋白质,在大肠癌中表达明显降低,可以抑制大肠癌细胞生长,促进大肠癌细胞凋亡.     

薯蓣皂苷对人结肠癌细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探究薯蓣皂苷（Dioscin）诱导人结肠癌HCT-116细胞、RKO细胞凋亡的作用及机制。方法:通过将体外培养的HCT-116细胞和RKO细胞分为对照组和不同浓度的药物组,采用CCK-8实验分析Dioscin对细胞增殖的抑制作用,可见分光光度法检测细胞LDH活性的变化;借助DNA含量检测法、Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测细胞凋亡情况;DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧簇（ROS）含量的变化;采用荧光探针法和可见分光光度法分别检测细胞超氧化物含量及细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化,Western 印迹法检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果: 在24 h、48 h处理时间下,与对照组相比,HCT-116细胞Dioscin组（2、4、6、8、10 μmol/L）、RKO细胞Dioscin组（5、10、15、20、25 μmol/L）都明显抑制了结肠癌细胞的增殖活性（均P＜0.05）,且HCT-116、RKO细胞经Dioscin处理后,细胞膜破坏,细胞LDH释放量较对照组增多（P<0.05,P<0.01）;与对照组相比,Dioscin作用HCT-116、RKO细胞后,DNA含量暴露增多（P＜0.05,P＜0.001）,细胞凋亡率上调（P＜0.001,P＜0.01）,ROS水平升高（P<0.05,P<0.001）,超氧化物含量增多（均P<0.001）,SOD表达降低（P＜0.05,P＜0.001）;Western 印迹结果表明,与对照组相比,Dioscin可以抑制HCT-116、RKO细胞蛋白p-Akt（P<0.01,P<0.001）、Nrf2（均P<0.001）、Bcl-2（均P<0.001）的表达,促进蛋白cleaved Caspase-9（P<0.001,P<0.01）的表达。结论:薯蓣皂苷可能通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路激活氧化应激反应,从而抑制结肠癌细胞生长,促进其凋亡。     

GnRH激动剂对子宫内膜异位症患者卵巢颗粒细胞细胞周期及抗凋亡蛋白cFLIP表达的影响

目的 探讨GnRH激动剂（GnRHa）治疗对子宫内膜异位症（EMs）患者卵巢颗粒细胞细胞周期以及抗凋亡蛋白cFLIP表达的影响。方法 共45例接受体外授精-胚胎移植（IVF-ET）治疗的患者,其中EMs患者19例,随机分配至GnRH-a治疗组（A组,n=11)和常规长方案治疗组（B组,n=8例),另26例管性因素不孕的常规长方案治疗患者为对照组（C组）。各组取卵时收集卵泡液颗粒细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting测定颗粒细胞cFLIP蛋白含量。结果 三组的受精率、临床妊娠率、种植率及流产率差异均无统计学意义（P>0.05）。三组患者G0/G1期细胞比例的差异无统计学意义（P>0.05）;A组和B组S期细胞比例显著高于C组,G2/M期细胞比例显著低于C组（P<0.05）,凋亡峰显著高于C组（P<0.05）;但A组与B组细胞周期各时相差异均无统计学意义（P>0.05）。C组卵巢颗粒细胞cFLIP蛋白表达水平显著高于A和B组（P<0.05）,A、B两组cFLIP蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 EMs患者卵巢颗粒细胞凋亡升高,且细胞周期异常;延长的GnRH-a治疗并不改善这种异常以及抗凋亡蛋白cFLIP的低表达状态。     

COX-2 siRNA诱导人肝癌Hep3B细胞凋亡实验研究

目的:观察COX-2在人肝癌细胞Hep3B中的表达及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默COX-2基因对COX-2 mRNA和蛋白表达、细胞增殖及凋亡的影响。方法:将siRNA-COX-2质粒载体转染Hep3B细胞,WST-8法检测细胞增殖抑制情况,透射电镜观察凋亡小体出现情况;筛选单克隆细胞株Hep3B-sh,采用RT-PCR和Western blotting检测COX-2 mRNA和蛋白情况。结果:siRNA-COX-2能抑制Hep3B细胞的增殖,稳定转染pshRNA-COX-2可使Hep3B细胞中COX-2 mRNA及蛋白的表达明显减弱(P<0.01);透射电镜下可见凋亡小体出现,发生凋亡细胞数增加。结论:COX-2siRNA能有效抑制肝癌Hep3B细胞中COX-2的表达和细胞的增殖,促进凋亡发生,为肝细胞癌基因治疗提供实验依据和治疗靶点。     

FLCN在子宫颈鳞癌组织中的表达及其对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖及凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨folliculin (FLCN)基因在子宫颈鳞癌组织中的表达及其对子宫颈鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 采用qRT PCR和免疫组化法分别检测正常宫颈组织和子宫颈鳞癌组织中FLCN mRNA和蛋白的表达;在子宫颈鳞癌SiHa细胞中敲减或过表达FLCN后,qRT-PCR检测FLCN mRNA表达,采用CCK 8检测各组细胞增殖活力,采用TUNEL和磷酸化组蛋白H3(PH3)染色,观察各组细胞凋亡和增殖情况。结果： 与对照组相比,宫颈鳞癌组中FLCN mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05)。FLCN siRNA 沉默后细胞增殖活力增强、凋亡减弱,PH3蛋白阳性比例增加,TUNEL阳性细胞比例减少(P<0.05或0.01)。过表达FLCN细胞增殖活力减弱、凋亡增强,PH3蛋白阳性细胞比例减少,TUNEL阳性细胞比例增加(P均<0.01)。结论： FLCN基因在宫颈鳞癌组织中呈低表达,其可抑制SiHa细胞增殖并促进其凋亡。