抑制CD96可促进NK细胞分泌IFN-γ并减轻小鼠肺部的衣原体感染

目的 通过调控CD96在C. muridarum肺炎小鼠体内的水平，探讨CD96调控NK细胞功能在衣原体肺部感染中的作用及可能机制。方法 选取雄性BALB/c小鼠45只，采用随机数字表法将小鼠分为Cm组、anti-CD96组及sham组，5只/组，进行3次独立重复实验。采用滴鼻吸入C. muridarum建立肺部感染模型，anti-CD96组：小鼠在感染基础上给予腹腔注射anti-CD96抗体（250 μg/只，每3 d给药1次）；Cm组：腹腔注射生理盐水；sham组：小鼠鼻吸入缓冲液。小鼠每日称重并绘制体质量曲线，造模5 d后，经颈椎脱臼法处死小鼠。采用荧光定量PCR与Western blot法检测CD96的表达；通过HE染色及病理评分评估小鼠肺炎症状；肺组织匀浆检测包涵体形成单位，评估肺部衣原体负荷；采用流式细胞术及ELISA等方法检测肺NK细胞产生IFN-γ的能力，以及NK细胞对巨噬细胞和Th1型细胞的免疫调节能力。结果 C. muridarum感染后第1、3、5天，采用磁珠分离各时间点以及Sham组小鼠肺NK细胞，结果显示NK细胞中CD96 mRNA表达显著降低（P<0.05），NK92细胞系经C. muridarum感染后6、12、24 h，CD96表达均明显下降（P<0.05）；Western blot验证anti-CD96抗体可有效中和小鼠肺组织中CD96表达（P<0.05），自感染后第3天开始anti-CD96组小鼠体质量下降程度较Cm组减轻（P<0.05），肺组织病理切片结果证实，anti-CD96组小鼠肺炎减轻。与Cm组相比，anti-CD96组小鼠肺部衣原体负荷降低（P<0.05）；Anti-CD96组小鼠肺组织中分泌IFN-γ的NK细胞（DX5+IFN-γ+）比例高于Cm组（P<0.05），与Cm组相比，anti-CD96组小鼠肺单个核细胞中IFN-γ的蛋白表达水平也显著升高（P< 0.05）。anti-CD96组与Cm组相比，NK细胞免疫调节作用也显著增强，小鼠肺脏中巨噬细胞比例增加（F4/80+，P<0.05），Th1应答增强（CD3+CD4+IFN-γ+，P<0.05）。结论 抑制CD96可减轻C. muridarum感染小鼠肺炎，可能与其增强NK细胞分泌IFN-γ能力及对固有和适应性免疫的调节作用有关。     

融合DNA疫苗CRT180/HPV6E7的构建及其免疫学特性研究

目的 构建融合DNA疫苗CRT180/HPV6E7,并评价其体外实验和动物模型上的免疫学特性,尤其是抗病毒致病基因的特异性细胞免疫反应.方法 分别构建DNA重组体pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7,pcDNA3.1-CRT180,pcDNA3.1-HPV6E7.将pcDNA3.1-HPV6E7质粒经脂质体介导转染B16细胞,以G418筛选阳性细胞集落,荧光显微镜观察和RT-PCR鉴定表达HPV6E7的阳性细胞株.将质粒DNA肌注免疫C57BL/6小鼠,3次后取全血经流式细胞仪检测T细胞亚群的变化,LDH法检测小鼠的脾细胞和淋巴细胞与靶细胞B16/HPV6E7孵育后的CTL活性以及ELISA法检测共孵育上清中IL-2和IFN-γ浓度的变化.结果 各组质粒经鉴定表明构建正确.转染后细胞株稳定表达HPV6E7.DNA疫苗免疫小鼠后,pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7免疫组较pcDNA3.1-HPV6E7免疫组的外周血CD8 T细胞和TCRγδT细胞的比例显著增加,脾细胞和淋巴细胞针对靶细胞B16/HPV6E7的CTL杀伤活性更明显,分泌IL-2和IFN-γ的水平升高(P＜0.05).结论 CRT180与HPV致病基因6E7相连的重组质粒疫苗pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7能引发小鼠T细胞亚群CD8 分化并诱导出显著的特异性CTL反应.推测CRT180/HPV6E7 DNA疫苗在动物模型上可以有效激活抗HPV特异性细胞免疫,有利于病毒感染的清除.     

小鼠胚胎成纤维细胞的转染与阳性细胞的初步筛选

目的：建立表达白血病抑制因子（LIF）的胚胎成纤维细胞的方法体系,为建立转基因动物模型提供理论依据。方法：以13.5 d ICR小鼠胚胎为材料,采用胰酶消化方法,培养小鼠原代胚胎成纤维细胞。利用脂质体介导方法,将线性化的pcDNA3.1-LIF真核表达载体转染至小鼠胚胎成纤维细胞中。经G418筛选阳性细胞,提取阳性细胞的基因组DNA并测序。结果：通过对小鼠原代胚胎成纤维细胞的分离、培养,获得原代胚胎成纤维细胞。经过转染,建立了表达LIF的胚胎成纤维细胞,并在倒置显微镜下观察到筛选得到的阳性细胞。对阳性细胞克隆质粒测序表明同源性达99%。结论：pcDNA3.1-LIF真核表达载体成功转染到小鼠胚胎成纤维细胞中。     

IFN-γ、IL-12联合CD80基因转染对肝癌细胞免疫效应的影响

目的观察IFN-γ、IL-12对转染CD80基因前后肝癌细胞表面分子CD80的表达,评价CD80分子联合细胞因子对肝癌细胞杀伤效应的影响。方法取HepG2细胞和经逆转录病毒载体介导CD80转染的HepG2/CD80细胞,分别经IFN-γ、IL-12处理后,流式细胞仪检测CDS0分子的表达水平。LDH释放试验检测刺激前后肝癌瘤苗对CTL杀伤效应的影响。结果HepG2细胞表面CD80分子表达水平低,转染后HepG2/CD80细胞的表达增高。经IL-12、IFN-γ细胞因子诱导后,HepG2/CD80细胞表面的CD80基因表达进一步增强。细胞因子联合CD80基因转染提高细胞毒性淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤作用,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论(1)IL-12、IFN-γ刺激转染CD80肝癌细胞共刺激信号的进一步表达。(2)CD80基因转染联合IL-12、IFN-γ明显增强CTL对肝癌细胞的杀伤作用,提示两者存在协同作用。     

T细胞亚群、NK细胞活性及Th1/Th2细胞因子漂移在FOLFOX化疗前后的动态变化

目的研究FOLFOX化疗对肠癌根治性术后患者免疫功能的影响。方法83例肠癌患者根治性术后6周取外周静脉血,采用抗体标记流式细胞仪检测T细胞亚群细胞,MTT法测NK细胞活性,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中Th1/Th2细胞因子。1个月为1个疗程,共化疗6个疗程。分别于化疗开始前、化疗结束时和化疗结束后6个月监测外周血CD3^＋T、CD4^＋T和CD8^＋T数量比例,NK细胞活性,以及血清中白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）的动态水平变化。结果CD8^＋T、CD4^＋T/CD8^＋T化疗后明显下降（均〈0.05）,化疗结束后6个月恢复至化疗前水平。化疗组的NK细胞活性在化疗结束时较对照组和自身化疗前低（均〈0.01）;化疗结束后6个月NK细胞活性略低于自身化疗前及对照组同期水平,但差异无显著意义（P〉0.05）。化疗结束时IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平较对照组或自身化疗前低,化疗结束后6个月恢复正常（均P〈0.05）。结论FOLFOX化疗可能降低肠癌根治性术后患者的CD8＋T的数量比例及NK细胞活性,引起Th1、Th2细胞因子血清水平下降,抑制抗肿瘤免疫功能。     

IL-15对体外培养的DC致敏的T淋巴细胞的作用研究

目的 通过与IL-2进行比较,观察IL-15激活T细胞反应,增强DC细胞疫苗抗肿瘤的免疫反应.方法 将骨髓来源的树突状细胞（BMDCs）皮下注射小鼠作为初次免疫,14d后取小鼠脾脏,制备淋巴细胞,与细胞因子（IL-2、IL-15）和BMDCs共同培养作为再次免疫,产生细胞毒T淋巴细胞（CTL）.流式细胞术检测细胞因子（IL-2或IL-15）联合BMDCs刺激小鼠淋巴细胞CD62L、CD69、CD44的表达情况;采用Cr51释放实验检测CTL对Levis肺癌细胞的杀伤作用;采用酶联免疫斑点实验（ELISPOT）检测分泌干扰素γ（IFN-γ）细胞亚群比例.结果 IL-15联合BMDCs疫苗上调CD8＋T细胞表达CD69＋、CD44＋,增强对肿瘤细胞的杀伤活性,并能产生更多的IFN-γ分泌细胞.结论 IL-15可能较IL-2更能增强DC疫苗抗肿瘤的免疫反应,为IL-15和DC疫苗的联合免疫治疗提供重要的试验依据和临床前研究的理论基础.     

肝脏持续过表达IL-15对NK/NKT细胞和T细胞数目和活化状态的影响

目的研究靶向肝脏过表达细胞因子IL-15对机体免疫系统的影响。方法构建IL-15重组表达质粒pLIVE-IL-15,采用高压注射的方式尾静脉注射C57BL/6小鼠,ELISA检测小鼠血清中IL-15的表达水平,流式检测小鼠脾脏和肝脏淋巴细胞亚群变化。结果成功构建pLIVE-IL-15质粒,pLIVE-IL-15质粒高压注射小鼠后血清中能检测到IL-15持续表达。与pLIVE-EGFP对照组相比,pLIVE-IL-15质粒注射鼠天然免疫系统NK细胞和NKT细胞以及获得性免疫系统的CD4+T细胞和CD8+T细胞数目均显著增加(P<0.05)。体内过表达IL-15促进NK细胞高表达CD69和IFN-γ,而NKT细胞活化状态改变不明显,IL-15能显著诱导CD8+T细胞高分泌IFN-γ(P<0.05),而对CD4+T细胞IFN-γ分泌影响较小。结论 pLIVE-IL-15靶向肝脏后能在体内持续表达,并且能调节天然免疫系统和获得性免疫系统反应。     

急性戊型肝炎病毒感染后免疫状态及转归

目的：探讨急性戊型肝炎病毒感染后免疫状态的变化及转归.方法：采用双抗体酶联分析法检测急性戊型肝炎病毒感染患者不同时期外周血细胞因子IFN-γ,IL-4和IL-12的水平; 流式细胞仪免疫荧光法检测急性戊型肝炎病毒感染患者T淋巴细胞亚群细胞含量.结果：观察结束时,96例抗-HEVIgM转阴,14例未转阴.急性戊型肝炎抗-HEVIgM转阴患者,急性期IL-12,IFN-γ,IL-4和Th1/Th2水平、CD3＋,CD4＋和CD4＋/CD8＋细胞亚群比例明显升高（P〈0.05）; 恢复期IL-12,IFN-γ,IL-4和Th1/Th2水平、CD3＋,CD4＋和CD4＋/CD8＋细胞亚群比例明显降低（P〈0.05）.急性戊型肝炎抗-HEVIgM未转阴阳性患者,急性期IL-12,IFN-γ,IL-4和Th1/Th2水平、CD3＋,CD4＋和CD4＋/CD8＋细胞亚群比例明显升高（P〈0.05）,而CD8＋细胞亚群比例无明显变化; 恢复期IL-12、IFN-γ和Th1/Th2水平、CD3＋,CD4＋和CD4＋/CD8＋细胞亚群比例明显降低（P〈0.05）,且Th1/Th2水平、CD4＋/CD8＋细胞亚群比例低于对照组,但IL-4水平、CD8＋细胞亚群比例明显升高,且明显高于对照组（P〈0.05）.结论：急性戊型肝炎抗-HEVIgM未转阴阳性患者,恢复期持续高水平的IL-4不利于疾病恢复,Th1/Th2细胞的失衡可能是戊型肝炎病毒持续感染的一条途径.增高的CD8＋细胞亚群比例和CD4＋/CD8＋失调可能影响机体清除戊型肝炎病毒的能力,导致感染的持续.     

分泌IFN-γ的杀伤性树突状细胞的体外诱导培养及鉴定

目的从体外诱导的骨髓来源的树突状细胞（dendritic cells,DC）中分离分泌IFN-γ的杀伤性树突状细胞（IFN-γproducing killer dendritic cells,IKDC）.方法取C57BL/6小鼠骨髓细胞,以小鼠重组GM-CSF和IL-4协同诱导下培养.培养第6天,加LPS刺激.培养第7天,收集细胞,通过流式细胞仪（flowcytometer,FCM）分选出CD11clowB220＋NK1.1＋的细胞,FCM进一步鉴定其表型.并将其与肿瘤细胞系B16F10共培养24 h后,CBA（cytometric bead array）法检测共培养上清中IFN-γ的分泌水平.结果体外培养的骨髓来源的DC中,FCM检测存在CD11clowB220＋NK1.1＋的细胞,进一步鉴定发现其高表达CD49b,低表达MHC II类分子,不表达Gr-1分子;并且与肿瘤细胞B16F10共培养后可分泌大量IFN-γ.结论通过FCM分选的方法可从体外培养的骨髓来源的DC中获得IKDC.     

白介素-18对树突状细胞瘤苗的抗肿瘤作用

目的：进一步提高树突状细胞（DC）瘤苗的抗肿瘤作用。方法：以腺病毒为载体转染目的基因至DC，研究DC瘤苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。分别以乳酸脱氢酶（LDH）释放法、酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）、自然杀伤细胞（NK）活性和细胞因子的分泌水平。结果：IL-18／gp100-DC瘤苗对荷瘤小鼠具有显著的治疗作用。IL-18／gp100-DC瘤苗治疗后，能明显增强CTL和NK活性，提高IFN-r和IL-2的分泌水平，使体内肿瘤细胞发生明显坏死，瘤体及瘤周有大量炎性细胞浸润。CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞为发挥抗肿瘤作用所必须，NK细胞也起到一定的作用。结论：辅助性T细胞1（Th1）型细胞因子IL-18基因修饰的gp100-DC瘤苗能有效地诱导抗肿瘤免疫反应。     

微囊化转mIL-12基因CHO细胞皮下移植及联合5-FU对荷瘤小鼠的治疗作用

目的：观察微囊化CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞皮下移植及联合5-FU对荷瘤小鼠的治疗作用。方法：将微囊化的CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞移植到荷瘤小鼠的皮下,观察肿瘤的生长速度、荷瘤小鼠的生存期,20d后,检测小鼠血清Th1和Th2类细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12和IL-4、IL-10的水平及NK细胞和CTL细胞的活性。结果：经微囊化CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞皮下移植干预治疗后,小鼠血清Th1细胞因子水平明显升高,NK细胞和CTL细胞的活性明显增强,而Th2类细胞因子则明显降低;小鼠肿瘤的生长速度明显减慢,生存期明显延长;同时可部分改善化疗引起的免疫抑制作用。结论：微囊化的CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞皮下移植可以明显改善荷瘤小鼠的细胞免疫功能,部分减轻化疗引起的免疫抑制作用 ,对减慢肿瘤的生长速度和延长荷瘤小鼠的生存期均有明显的效果。     

HSV-TK基因和IL-12基因治疗裸鼠鼻咽癌的实验研究

目的：研究腺病毒介导的KDR启动子-单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV—tk）系统（AdKDR—tk）联合白细胞介素12基因对裸鼠鼻咽癌的治疗作用．方法：建立鼻咽癌裸鼠模型,将36只成瘤鼠随机分成IL-12基因组、AdKDR—tk／GCV组、IL-12基因＋AdKDR—TK／GCV组和生理盐水／GCV组（对照组）,每组9只．采用瘤内注射分别给予相对应的重组腺病毒液及生理盐水,24h后重复注射1次．次日起连续10d每天ip GCV1次,100mg／kg．治疗结束后处死裸鼠,检测肿瘤质量、组织形态学变化及肿瘤微血管密度．结果：IL-12基因组裸鼠鼻咽癌瘤体质量（1．82±0．78）g及肿瘤微血管密度（15．54±3．46）个／mm^3和AdKDR—tk／GCV组[分别为（1．61±0．61）g,（10．69±4．12）＋／mm^3]与IL-12基因＋AdKDR—TK／GCV组[分别为（1．04±0．52）g,（6．53±1．61）个／mm^3]相比差异有显著性（P〈0．05）;IL-12基因组,AdKDR—tk／GCV组及IL-12基因＋AdKDR—TK／GCV组与生理盐水GCV组[分别为（2．52±1．18）g,（22．78±5．12）个／mm^3]比较也存在显著差异（P〈0．05）．结论：HSV-TK基因和IL-12基因治疗可抑制裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答,两者联合运用可产生协同效应,为鼻咽癌的治疗提供新的方法．     

Gene therapy for murine renal cell carcinoma using genetically engineered tumor cells to secrete interleukin-12

To determine the possibility of gene therapy for renal cell carcinoma (RCC) using interleukin-12 (IL-12), we prepared genetically engineered murine RCC cells (Renca) which secrete IL-12 and evaluated the usefulness of these cells as a tumor vaccine. The IL-12 gene was transduced using MFG retroviral vector. The in vitro characteristics of transfectants--i.e., cell proliferation and expression of surface antigens--were then examined. In vivo tumorigenicity was assessed by subcutaneously injecting each type of cell in syngenic BALB/c mice. For the challenge experiments, the mice rejecting previously injected Renca IL-12 cells were rechallenged with parental cells. To determine the antitumor effect at remote sites, mice were injected with parental cells into the left flank, and then either Renca IL-12 or parental cells were inoculated into the opposite site on day 0 or 1. The transfected cells can secrete 146.7 ng/ml/10(6)cells/48 hr of IL-12, as confirmed here by bioassay. The in vitro characteristics of the transfectants were not altered, but in vivo tumorigenicity was significantly reduced. Of the 21 mice that rejected Renca IL-12 cells, 9 failed to develop tumors after the challenge with parental cells. In the mice treated with Renca IL-12 as a vaccine, both number and tumor volume of the mice that developed tumors at remote sites were reduced. IL-12 secreting Renca cells conferred both protective immunity to parental cells and delay of tumor growth at remote sites, indicating that IL-12 secreting Renca cells are a feasible candidate for use in gene therapy of RCC.     

白细胞介素-18与白细胞介素-12协同增强肿瘤浸润淋巴细胞对胃癌细胞的杀伤作用

目的:研究白细胞介素-18(IL-18)与白细胞介素-12(IL-12)对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)杀伤功能的影响.方法:IL-18与IL-12共同刺激的TIL与人的胃癌细胞系SGC-7901共孵育后接种于BALB/c SCID小鼠皮下,测定小鼠肿瘤的生长大小并观察荷瘤小鼠的生存时间,酶联免疫吸附试验(ELISA方法)检测小鼠血清中Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ及Th2型细胞因子IL-10、IL-4的表达水平,同时体外测定NK细胞及CD8+T细胞的肿瘤杀伤活性.结果:IL-18与IL-12共同作用于TIL后,与对照组相比,SGC-7910细胞的荷瘤小鼠皮下肿瘤生长明显减慢,小鼠生存率明显延长;同时,两种细胞因子联合处理组荷瘤小鼠血清中细胞因子TNF-α、IFN-γ的水平明显增高,而IL-10与IL-4水平明显降低;体外LDH杀伤实验证实IL-18联合IL-12处理组NK细胞及CD8+T细胞杀伤活性明显提高.结论:IL-18与IL-12协同刺激能增强TIL对胃癌胞的杀伤功能.     

Immune response induced by HPV18 E2 DNA vaccine combined with IL-12

Objective:To study the effectiveness of human papillomavirus type 18 E2 gene (HPV18-E2) vaccine and interleukin-12(IL-12) on their immune effects. Methods:Thirty-five Balb/c female mice aged 6-8-week-old were randomly divided into five groups (each n =7).The mice were given instramuscular injection of DNA vaccines at 2-week four 4 times(100mg/time).The tails were cut to draw blood at the 0,2,4,6 weeks,and then the mice were executed by eyeball blood letting at 8 weeks.ELISA was used for the quantitative detection of the specific lgG antibody in the srea of Balb/c mice and the cytokine IFN-γ and IL-4 in mice MTT assay.Results: after 8 weeks immunization, antibody IgA in E2 vaccine group andE2 +IL-12 vaccine group was statistically increased as compared with that of control group, and the difference was statistically significant (P<0.01). IFN-γand IL-4 levels of mice spleen lymphocyte culture supernatant inE2 group and E2 + IL-12 were significantly higher than other control groups (P<0.01). the spleen lymphopoiesis activeness of E2 + IL-12 group was significant enhanced as compared with the E2 group, there were statistically significant differences (P<0.01) . Conclusions: E2 DNA vaccine combined with IL-12 immune mice can effectively induce cell-mediated immunity and humoral immune responses, their capabilities of inducing immune response might be more stronger than that of single one.     

IL-12和IL-12受体在刚地弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究

目的探讨IL-12和IL-12受体（IL-12R）在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法将24只C57BL/6孕鼠随机分为感染组（n=12）和对照组（n=12）,感染组小鼠于孕8d每只腹腔注射400个RH株刚地弓形虫速殖子,对照组注射等量无菌PBS,所有孕鼠均于孕14d时安乐死,观察胎盘及胎鼠的发育情况,采用流式细胞仪的方法检测小鼠子宫自然杀伤细胞（uNK）表面的IL^-12受体表达水平的高低,用ELISA的方法检测小鼠胎盘分泌的IL-12细胞因子水平的高低。结果在孕14d感染组小鼠的胎盘出血坏死较多,未感染的对照组小鼠胎盘血供丰富。感染组小鼠的死胎率比对照组小鼠显著增加（P〈0.01）。弓形虫感染组孕鼠子宫自然杀伤细胞表面的IL^-12受体表达水平明显高于正常对照组（P〈0.05）,感染组孕鼠胎盘中的IL-12水平明显高于正常对照组（P〈0.05）。结论 IL-12水平升高和IL-12受体的高表达在弓形虫感染致不良妊娠结局中发挥重要作用。     

Interleukin-18 and -12 synergistically enhance cytotoxic functions of tumor-infiltrating lymphocytes

Background  The role of tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) in the immunopathogenesis of individual cancer is not clear and is a challenge for anti-tumor immunotherapy. This study aimed to investigate the effects of interleukin (IL)-18 and -12 on cytotoxic functions of TILs.

Methods  TILs from postoperative gastric cancer patients were costimulated with IL-18 and IL-12. SGC-7901 tumor cells were pre-incubated with TILs and subcutaneously injected into BALB/C SCID mice. The function of TILs was evaluated by measuring tumor sizes in tumor-bearing mice, T helper (Th)1 (tumor necrosis factor (TNF)-α, interferon (IFN)-γ) and Th2 cytokine levels (IL-10 and IL-4) in serum and cytotoxicity of mouse natural killer (NK) and CD8⁺ T cells.

Results  IL-18 and IL-12 synergistically inhibited the growth of SGC-7901 cells in vivo and significantly extended the survival rate of SGC-7901-bearing mice (66.7% vs. 13.7%, P <0.01). Moreover, TILs could promote the secretion of TNF-α and IFN-γ ((130.34±7.65) vs. (210.63±12.31) pg/ml, P <0.01; (14.23±1.97) vs. (30.52±2.12) pg/ml, P <0.01), and downregulate IL-10 and IL-4 secretion ((103.72±11.21) vs. (61.36±5.41) pg/ml, P=0.021; (49.36±4.67) vs. (28.48±3.86) pg/ml, P=0.024).

Conclusion  IL-18 and IL-12 can synergistically enhance cytotoxic functions of TILs from human gastric cancer.

     

裸鼠S-180和胃部肿瘤模型白细胞介素-12早期检测的应用研究

目的通过建立裸鼠肿瘤模型,检测白细胞介素（IL）-12在肿瘤早期的变化,探讨IL-12的升高和肿瘤发生早期之间的相关性。方法用苯并（a）芘和S-180肉瘤细胞分别建立裸鼠肿瘤模型。在肿瘤形成早期（S-180诱导组在第3、7、10、15天,苯并（a）芘诱导组在第8、11、14、17、20周）用EHSA法检测裸鼠血清中IL-12的浓度。裸鼠肿瘤建立后处死裸鼠,取肿瘤大体组织并做病理切片观察肿瘤形成情况。结果S-180诱导组和苯并（a）芘诱导组均成功建立肿瘤模型。随着肿瘤的逐渐形成,IL-12浓度逐渐升高,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论IL—12可作为发现早期肿瘤的一项常规检测指标,小鼠肿瘤早期血清IL—12浓度升高,具有预测肿瘤的意义。     

IL-12在约氏疟原虫感染中作用的初步实验研究

目的:探讨IL-12在约氏疟原虫感染中的作用.方法:尾静脉注射法感染IL-12基因敲除小鼠和B6小鼠约氏疟原虫(17XNL),于感染后的第0、2或4、6天取小鼠尾静脉血,检测血清中的细胞因子;从感染后的第2天起,隔日检测小鼠虫体血症水平.结果:与B6小鼠相比,IL-12基因敲除小鼠在感染后虫体血症水平增长迅速且水平高;清除感染需时较长,但仍能完全清除虫体而存活.在感染后的第0、2、6天血清中无IL-12、IFN-γ,而B6小鼠IL-12、IFN-γ(D4)水平均较高.两者在TNF-α水平上无差别.结论:尽管IL-12对小鼠感染约氏疟原虫后的存活很重要,但无IL-12的小鼠感染约氏疟原虫后仍能存活.     

Immunogenicity of interleukin 12 and DNA vaccine prime-BCG boost against Mycobacterium tuberculosis

OBJECTIVE: To investigate the immunogenicity of vaccine strategies about human interleukin 12 associated with combined DNA (Ag85A and ESAT-6) prime-BCG boost. METHODS: BALB/c mice were divided into PBS negative control and 4 immunity groups: BCG group, DNA/BCG group, DNA + IL-12/BCG group and DNA/BCG + IL-12 group. All mice received three immunizations at 2-week interval. Specific IgG antibody in serum of mice was determined with indirect ELISA in 4, 6, 8 weeks respectively after final vaccination. The splenic lymphocytes of mice were separated and stimulated with PPD to measure their proliferation by flow cytometry, and to evaluate the production of interferon-gamma (IFN-gamma) in cell suspensions of spleen cells by ELISA. The levels of CD4+ and CD8+ T-cell on surface of spleens lymphocyte were determined by flow cytometry. RESULTS: PPD could stimulate specific IgG responses in 4 immunity groups, and the average valences of 4 groups are 1:80, 1:120,1:160,1:160; the splenic lymphocyte proliferation reactions and IFN-gamma production were detectable in 4 immunity groups, and the most significant response occurred in 12 weeks. DNA + IL-12/BCG group and DNA/ BCG+IL-12 group induced higher production than BCG group and DNA/BCG group (P < 0.05), and the effects between DNA + IL-12/BCG group and DNA/BCG + IL-12 group had little difference. The numbers of CD4+ and CD8+ T-cell in 4 immunity groups were much higher than PBS group (P < 0.05), and DNA+IL-12/BCG group and DNA/BCG+IL-12 group were detected much more CD4+ and CD8+ T-cell than BCG group and DNA/BCG group (P < 0.05). The level of T-cell between DNA + IL-12/BCG group and DNA/BCG + IL-12 group had little difference. CONCLUSION: Interleukin 12 associated with the strategy of priming with the combined DNA vaccines and boosting with attenuated M. bovis vaccine (BCG) could induce much stronger specific cellular immunity compared with simple DNA/BCG or attenuated M. bovis vaccine alone.