血管生成因子在胃癌中的表达和意义

肿瘤血管生成方面的研究是目前肿瘤研究的热点 ,血管生成因子可以促进肿瘤血管生成 ,在肿瘤中具有重要意义。目前已经分离和纯化出 2 0多种血管生成因子和相关因子 ,其中对胃癌血管生成较为重要的有ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＰＤ ＥＣＧＦ ,本文就它们在胃癌中的表达及意义综述如下。1　血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)1.1　ＶＥＧＦ在胃癌的表达 :通常所说的ＶＥＧＦ即指ＶＥＧＦ Ａ ,是目前研究得较透彻的一个血管生成因子 ,它是一种分子量大小在 34～ 5 0ＫＤ的能与肝素结合的糖蛋白 ,是唯一能特异地作用于血管内皮细胞的有丝分裂原 ,许多正常组…     

体外共培养体系中胆管癌细胞对人脐静脉内皮细胞b-FGF和VEGF表达的影响

目的 探讨体外共培养体系中胆管癌细胞(QBC939)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立胆管癌QBC939细胞与HUVEC体外共培养体系,采用CCK-8法检测共培养不同时相HUVEC的增殖;ELISA检测共培养上清液中b-FGF含量;qRT-PCR和Western blot检测共培养不同时相点HUVEC细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达.结果 共培养后12、24、48 h和72 h,HUVEC增殖较对照组显著增高(P＜0.01).与0h组比较,共培养12、24、48 h上清液中b-FGF含量显著增高(P＜0.05).共培养12 h时VEGF mRNA表达显著增加,并持续至72 h(P＜0.01),VEGF蛋白表达在共培养12h后显著增高,24、48、72 h时与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人胆管癌QBC939细胞可促进血管内皮细胞增殖、增加b-FGF分泌和VEGF表达.b-FGF和VEGF表达增加与肿瘤血管新生,以及肿瘤的生长和转移可能具有相关性.     

三氧化二砷对人胃癌MGC803细胞FOX03a和VEGF表达的影响

目的观察FOXO3a基因沉默后,三氧二砷（As2O3）对人胃癌MGC803细胞FOX03a和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法采用脂质体转染小干扰RNA（siRNA）方法降低胃癌MGC803细胞FOX03a的表达。采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测FOX03a和VEGF mRNA的表达;采用Western blot法检测FOX03a和VEGF蛋白的表达。结果与对照组相比,As2O3促进胃癌MGC803细胞内FOX03a蛋白和mRNA的表达,并抑制VEGF蛋白和mRNA的表达,FOXO3 asiRNA处理后明显抑制FOX03a蛋白与mRNA表达且增加VEGF蛋白和mRNA表达。结论As2O3可能是通过促进MGC803细胞中FOXO3a的表达引起VEGF表达的降低。     

Twist基因转染胃癌细胞对VEGF表达的影响

①目的研究Twist基因转染人胃癌细胞株MKN28对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。②方法利用DNA的限制性内切酶双酶切技术鉴定重组质粒PCDNA3.1-Twist、脂质体介导转染技术和G418筛选得到稳定表达Twist蛋白的Twist-MKN28(PCD-NA3.1-Twist转染的MKN28胃癌细胞株)细胞模型;采用Western blot检测细胞中Twist的表达;采用ElISA法检测细胞上清液中VEGF的蛋白表达量;采用半定量逆转录多聚酶链反应RT-PCR技术检测细胞中VEGF的mRNA表达量。③结果阳性质粒组Twist-MKN28细胞的Twist蛋白表达强于空白质粒组PCDNA3.1-MKN28和未转染组MKN28;Twist-MKN28组细胞上清液VEGF蛋白分泌明显增加,与PCDNA3.1-MKN28组和MKN28组比较差异有显著性(P<0.05),Twist-MKN28组细胞VEGF mRNA半定量结果和MKN28组、PCD-NA3.1-MKN28组比较,其表达量分别增加28.3%和26.5%,而PCDNA3.1-MKN28组和MKN28组比较无明显改变。④结论 Twist可促进人胃癌...     

VEGF及PD-ECGF在膀胱癌的表达及与肿瘤血管生成的关系

目的：研究膀胱移行细胞癌中血管内皮生长因子（VEGF），血小板源性内皮细胞生长因子（PD－ECGF）的表达及肿瘤血管形成的情况及意义。方法：采用免疫组化SP法分析68例原发性膀胱移行细胞部的VEGF，PDECGF的表达情况，检测CD34以计算微血管密度（MVD）。结果：膀胱癌中VEGF表达率为61．76％（42／68）；PDECGF表达率为54．41％（37／68）；二者共同阳性表达率为38．24％（26／68）。VEGF，PD－ECGF与膀胱癌的分级，分期和预后相关，并与MVD呈正相关（P＜0．05）。此外二者之间也有相关性（P＜0．05）。结论：VEGF，PD－ECGF能共同调节膀胱癌的血管形成，可用于判断膀胱癌的生物学行为。     

VEGF shRNA表达质粒的构建及对血管内皮细胞VEGF表达的抑制

目的：构建大鼠血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA（shor thairpin RNA,shRNA）真核表达质粒,观察其对大鼠主动脉血管内皮细胞（ECs）中VEGF表达的影响.方法：采用DNA重组技术根据大鼠VEGF mRNA序列设计并合成3条shRNA寡核苷酸片段,构建表达质粒并通过脂质体介导转染ECs,采用RT-PCR,Western Blot方法分别检测VEGF mR-NA及蛋白质的表达.结果：经酶切和测序证实VEGF shRNA重组质粒构建成功.3条VEGF shRNA质粒均可下调VEGF mRNA和蛋白的表达,其中VEGF shRNA3质粒的抑制作用较强,转染72h时VEGF mRNA和蛋白的抑制率可分别达到71.91%和67.86%.结论：成功构建VEGF靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制ECs中VEGF mRNA和蛋白的表达,为利用RNA干扰技术从转录后水平抑制角膜新生血管的研究提供依据.     

RNAi沉默VEGF表达对大肠癌细胞肝转移的影响

目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对大肠癌肝转移的影响。方法:根据VEGF基因mRNA设计合成小干扰RNA,采用荧光实时定量PCR检测VEGF mRNA水平,分别以软琼脂集落培养试验和Boyden模型观察癌细胞锚着不依赖性增殖和癌细胞侵袭能力。以脾切除法建立大肠癌肝转移模型,以不同方法处理的癌细胞接种模型,观察对大肠癌细胞肝转移的影响。结果:转染组VEGF基因mRNA水平明显降低,且呈浓度和时间依赖性。经VEGF siRNA转染处理的癌细胞软琼脂集落形成数和穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性(P<0.05,P<0.05)。体内试验发现,对照组10只全部出现大肠癌肝转移灶,而siRNA组仅仅1只出现肝转移,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:VEGF基因在大肠癌肝转移中起着重要的作用;以RNAi技术沉默VEGF基因表达,可抑制大肠癌细胞肝转移。     

RNA干扰对VEGF在人卵巢癌细胞中表达及细胞增殖的影响

目的:探讨小发夹RNA(shRNA)载体介导抑制人卵巢癌细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达和对卵巢癌细胞增殖的影响.方法::采用脂质体介导的方法将抗VEGF小发夹状双链RNA真核基因表达载体转染到人卵巢癌细胞(HO-8910)中,用G418 筛选获得阳性克隆.用Western印迹法、RT-PCR检测VEGF基因在卵巢癌细胞中的表达;通过MTT及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响. 结果:转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的HO-8910细胞中VEGF表达量明显减少;HO-8910细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少.结论:VEGF小发夹RNA质粒载体可显著抑制HO-8910细胞中的VEGF基因的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖,该研究为应用RNAi进行肿瘤的基因治疗提供了实验依据.     

血管内皮生长因子干扰RNA对人鼻咽癌CNE一2Z细胞VEGF表达调控的实验研究

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）的特异性小片段干扰RNA（siRNA）对低分化人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达的抑制作用，为鼻咽癌的治疗提供新的途径。方法：体外培养人鼻咽癌细胞CNE-2Z，并分成正常氧状态培养组（20％）和低氧（1％）培养组。采用脂质体（LF2000）将VEGF siRNA转染两组细胞，并采用RT—PCR、ELISA检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGF mRNA和蛋白质表达的差异。结果：与未转染组和转染空载体组相比，在正常氧和低氧状态下，VEGFsiRNA均能明显抑制VEGFmRNA的表达（P〈0．01）；正常氧状态下VEGFsiRNA的抑制效率比低氧状态高。正常氧状态下：未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为：423．92、419．68和328．86pg／mL；低氧状态下VEGF165的含量分别为：813．62、799．89和500．96pg／mL，转染VEGF siRNA组VEGF的表达下调。结论：VEGF siRNA能有效地、特异地抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达，因而有望成为治疗鼻咽癌的一种有效方法。     

HIF-1α基因表达下调对人结肠癌SW480细胞增殖和VEGF表达的影响

目的:研究转录因子-缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在缺氧条件下对人结肠癌SW480细胞增殖的作用,以及HIF-1α对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,研究HIF-1α调节SW480细胞增殖的机制.方法: 构建针对HIF-1α的pSuper-EGFP siRNA表达载体,转染SW480细胞,抑制HIF-1α的表达,RT-PCR和Western Blot检测抑制结果;MTT法检测HIF-1α被抑制后,SW480在缺氧培养条件下的增殖情况;RT-PCR和Western Blot检测VEGF 的表达.结果: 缺氧培养条件下,HIF-1α和VEGF表达明显上升;转染pSuper-EGFP siRNA表达载体后,SW480细胞HIF-1α mRNA和蛋白质的表达大幅下降;SW480细胞增殖下降(P《0.05);而在缺氧培养条件下有较高表达的VEGF,其mRNA和蛋白质的表达也大幅下降.结论: HIF-1α在缺氧条件下,对SW480细胞在增殖有影响,其机制可能是通过在缺氧时上调节VEGF等细胞生长因子的表达,进而调节肿瘤细胞生长.     

白藜三醇对人脐静脉内皮细胞增殖及NO表达的影响

目的观察白藜三醇对正常状态下人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HU—VECs）磷酸化蛋白激酶B（P—Akt）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（P-NOS）及一氧化氮（NO）表达的调节作用,探讨白藜三醇对HUVECs增殖的影响及可能机制。方法实验分组：DMEM高糖（〈4．5mg／L）培养基培养组（正常组）、白藜三醇组（分为0．2、1、5、10、20μmol／L5个剂量亚组）、白藜三醇＋LY294002组、LY294002组（阻断剂组）。其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,P13-K）抑制剂。应用CCK-8法检测细胞增殖情况;Westernblot检测各组细胞内蛋白激酶B（Akt）、P—Akt、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、P-eNOS蛋白的表达;硝酸还原酶法检测细胞培养液中NO的浓度。结果①白藜三醇组1、5μmol／L2个剂量亚组与正常组相比细胞增殖增加（P〈0．01）,5μmol／L亚组与0．2、10、20μmol／L亚组相比细胞增殖增加（P〈0．01）;白藜三醇20μmol／L对细胞增殖有抑制作用（P〈0．01）。②与对照组比较,白藜三醇组P-Akt（P〈0．01）、P-eNOS（P〈0．05）蛋白表达增加;与白藜三醇组比较,白藜三醇＋LY294002组P-Akt、P-eNOS蛋白表达降低（P〈0．01）。③与对照组比较,白藜三醇组NO表达增加（P〈0．05）;与白藜三醇组比较,白藜三醇＋LY294002组NO表达降低（P〈0．01）。结论白藜三醇可能通过P13-K／Akt／eNOS信号通路诱导正常状态下内皮细胞NO表达的增加,从而促进内皮细胞增殖。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达影响的初步研究

目的:观察辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体表达的影响.方法:将人脐静脉内皮细胞分为辛伐他汀组、TNF-α组、辛伐他汀+TNF-α组、IL-1β组、辛伐他汀+IL-1β组和空白对照组.采用免疫细胞化学方法,观察TNF-α和IL-1β对细胞中VEGF及其受体表达的影响,并观察辛伐他汀的干预作用.结果:TNF-α组和IL-1β组的VEGF及其受体表达明显高于空白对照组(P＜0.05),辛伐他汀十TNF-α组和辛伐他汀+IL-1β组表达分别明显低于TNF-α组和IL-1β组(P＜0.05).结论:辛伐他汀可以抑制炎性刺激导致的人脐静脉内皮细胞VEGF及其受体的表达.     

siRNA干扰Ezrin基因对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的探讨细胞膜与细胞骨架连接蛋白埃兹(Ezrin)对人脐静脉内皮细胞生长和转移能力的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞,选择3对小干扰RNA(siRNA)序列下调Ezrin的表达,实时定量PCR和Western-blot印迹法分别检测Ezrin mRNA和蛋白表达水平的变化。BrdU ELISA法检测Ezrin siRNA干扰后细胞增殖能力的改变,伤口愈合实验检测Ezrin siRNA干扰后细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡能力。结果实时定量PCR和Western-blot印迹结果显示,siRNA干扰后Ezrin的基因和蛋白水平均显著下调;BrdU法显示Ezrin siRNA干扰后细胞生长速率降低(P<0.05),划痕实验显示Ezrin siRNA干扰后细胞迁移率降低(P<0.05),流式细胞仪检测显示Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡率升高。结论 Ezrin蛋白可影响脐静脉内皮细胞的增殖和迁移能力,推测其在血管功能和肿瘤研究中可能具有重要意义。     

RNA干扰对体外培养HUVECs增殖和CD105表达的影响

目的 应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对CD105的小片段RNA(siRNA)抑制CD105在体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中表达的情况,观察CD105沉默后对细胞生长的影响.方法 根据人的CD105 mRNA序列选择3个不同的靶位点,分别合成3条CD105 siRNA,并同时合成阴性对照和阳性对照siRNA.采用脂质体介导的基因法转染至体外培养的HUVECs中,采用RT-PCR检测各组细胞CD105表达水平,Western blot检测干扰前后CD105蛋白表达水平,并用MTT法检测人HUVECs的细胞活力.结果 RT-PCR和Western blot检测表明,3号CD105 siRNA能最有效沉默CD105的表达,转染后的HUVECs中CD105 mRNA水平和蛋白表达水平明显下降.MTT结果表明CD105的下调导致了HUVECs活力的下降.结论 特异性的siRNA可以下调HUVECs中CD105 mRNA及蛋白表达水平,减低细胞活力.也提示CD105可能对体外培养HUVECs的生长有促进作用,CD105可以作为治疗新生血管的靶点.     

hVEGF121基因转染对人脐静脉内皮细胞生长的作用

目的:构建人血管内皮生长因子(hVEGF)-121的真核细胞复制表达质粒,将hVEGF121基因转染进人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),通过旁分泌作用来加快其生长速度.方法:采用RT-PCR方法,从人胚胎成纤维细胞中克隆hVEGF121前体蛋白全长cDNA,构建重组真核表达质粒pcDNA3-hVEGF121,用FuGENE 6介导转染入HUVEC.收集转染的HUVEC培养上清,用ELISA法定量检测hVEGF蛋白的表达情况;绘制细胞生长曲线,检测hVEGF121促进HUVEC增殖的生物学活性.设转染pcDNA3空质粒载体和不转染任何DNA的HUVEC做对照.结果:(1)成功构建了pcDNA3-hVEGF121真核表达质粒,经测序证明基因序列与GenBank中核酸序列一致,且插入方向正确;(2)转染细胞瞬时表达hVEGF蛋白,于转染1d后每104个细胞每天可分泌hVEGF蛋白59.95 Pg,约为对照组的100倍;之后表达水平先快后慢下降,于转染7d后仍较对照组高近1倍;(3)转染细胞生长速度明显加快,在转染3 d后细胞数与对照组相比即有显著性差异(P＜0.01),细胞倍增时间从对照组的7d以上缩短为3d左右.结论:成功构建了pcDNA3-hVEGF121真核表达质粒;该质粒能在HUVEC中表达有生物活性的hVEGF121蛋白,通过旁分泌作用明显促进HUVEC的分裂增殖.     

CD226分子参与脐静脉内皮细胞的功能

目的：观察人血小板T细胞活化抗原1(CD226)分子所参与的内皮细胞的功能．方法：采用^3H-TdR掺入、^51Cr黏附实验、PI染色结合流式细胞仪技术观测CD226分子对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、粘附、细胞周期及凋亡的影响．结果：CD226分子参与HUVEC的粘附功能，但CD226 mAb(LeoAl)对HUVEC的增殖、细胞周期及细胞凋亡均无显影响．结论：CD226分子是活化HUVEC表面一种新的粘附分子，参与HUVEC的粘附功能．     

Effects of shRNA Targeting VEGF on VEGF mRNA Expression in Gastric Cancer Cells

In order to investigate the inhibitory effect of plasmid-mediated short hairpin RNA tar-geting vascular endothelial growth factor (VEGF) on the expression of VEGF mRNA in human gas-tric cancer cells, a plasmid vector for transcribing specific short hairpin RNA targeting VEGF ( pU6-VEGF ) was constructed, and then transfected into human gastric cancer cells using Lipofec-tamine2000. The VEGF mRNA expression level was detected by RT-PCR. RPMI1640 was used for blank control, and pSilencer 1.0-U6 empty plasmid for the negative control. Results showed the clone and sequence analysis revealed that the recombinant plasmid vector of pU6-VEGF was successfully constructed. The VEGF mRNA expression levels in blank control group, experimental group (pU6-VEGF) and negative control group (pSilencer1.0-U6) were 100%, 49% and 94%, respectively, indicating VEGF mRNA expression in the cells transfected with pU-VEGF vector was inhibited sig-nificantly as compared with blank control group and negative control group. It was concluded that the short hairpin RNA could significantly inhibit the expression of VEGF mRNA, which provided an experimental basis for treating human cancer with anti-angiogenesis.     

结肠癌细胞上调脐静脉内皮细胞EMMPRIN的表达

目的：探讨结肠癌细胞对脐静脉内皮细胞中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）表达的影响,以及EMM-PRIN与肿瘤新生血管生成的关系.方法：建立结肠癌LoVo细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共培养模型,并设HUVEC单独培养对照组,培养36 h后进行形态学观察,并应用免疫细胞化学方法检测内皮细胞EMMPRIN的表达.结果：共培养组HUVEC形成大量管样结构,且EMMPRIN的表达明显强于HUVEC单独培养对照组强.结论：结肠癌细胞上调HUVEC EMMPRIN的表达,并诱导HUVEC管样结构的的形成,EMMPRIN的表达可能与肿瘤新生血管生成具有一定的相关性.     

益心定悸方含药血清对人脐静脉内皮细胞VEGF表达影响的研究

[目的] 通过观察益心定悸方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响探讨其治疗冠心病快速心律失常的作用机制, 同时为临床应用提供客观依据。[方法] 用20只雄性Wistar大鼠制备含药血清, 将内皮细胞接种在两种血清培养基上, 采用免疫组化方法测定VEGF的表达。[结果] 含药血清组细胞边界和核结构清晰细胞核颜色深染, 正常血清组VEGF仅有微弱表达。[结论] 益心定悸方能够明显促进VEGF表达, 这可能是本方治疗冠心病快速心律失常的作用机制之一。     

非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAP mRNA表达的影响

目的:探讨非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增生、凋亡、NO生成及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA表达的影响.方法:体外培养HUVECs株CRL-1730,分为正常对照组、LPC组、低浓度非诺贝特组(10 μmol/L)、中浓度非诺贝特组(50 μmol/L)、高浓度非诺贝特组(100 μmol/L).分别观测内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAP mRNA表达的变化.结果:与正常对照组比较,LPC抑制CRL-1730细胞增生,促进凋亡,降低NO浓度,减弱XIAP mRNA的表达.非诺贝特干预后,CRL-1730细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,XIAP mRNA表达增强,且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系.结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达,干预LPC对HUVECs的影响,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,从而起到抗动脉硬化作用.