IL-1及VEGF在大鼠皮肤切创愈合过程中的免疫组织化学表达

目的：探讨白细胞介素1（IL-1）及血管内皮生长因子（VEGF）的表达变化与损伤时间的关系，以期为法医病理学皮肤损伤时间判定提供有效的免疫组织化学指标。方法：51只雄性SD大鼠随机均分为17组(每组3只)，随机选取13组大鼠背部皮肤行切割创，在伤后不同时间(5、10、30 min及1、3、5、7、9和12 h以及1、3、5和7 d)处死大鼠作为生前损伤组；另取3组大鼠，脱颈处死后5、10及30 min在背部行切割创，作为死后伤对照组；取余下1组大鼠背部皮肤作为正常对照组。应用免疫组织化学技术，检测生前损伤组、死后伤对照组和正常对照组大鼠不同损伤时间的生前伤、死后伤及正常皮肤组织中IL-1及VEGF的表达变化。结果：在生前损伤组，IL-1于伤后30 min，即在上皮组织和肉芽组织（巨噬细胞和成纤维细胞）中呈阳性表达，并持续至伤后5 d，IL-1阳性细胞率在损伤后3 h内较低，伤后5 h达到峰值（49.87%±3.42%），随后有所下降，但伤后3 d达第2次峰值（47.56%±7.52%），而后逐渐恢复至正常水平；VEGF于损伤后３ h在表皮组织中呈阳性表达，且持续至伤后10 d。死后伤对照组与正常对照组IL-1及VEGF的表达比较，差异均无显著性（P>0.05）。结论：VEGF和IL-1随损伤时间变化呈规律性表达，VEGF和IL-1可作为法医学皮肤损伤时间判定的有效指标。     

大鼠皮肤切创愈合过程中VEGF,TGF-β1蛋白的表达

目的:通过研究皮肤切创愈合过程中血管内皮生长因子(Vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、转化生长因子β1(Transforming growth factor- β1,TGF-β1)的表达与损伤时间的关系,探讨VEGF、TGF-β1能否在法医学判断损伤时间方面作为一个指标.方法:用大鼠建立皮肤切创模型,按随机原则分为实验组、正常对照组和死后损伤组,采用免疫组化(Immunohi stochemistry,IHC)方法对大鼠皮肤切创愈合过程中VEGF、TGF- β1的表达变化进行观察.结果:实验组VEGF、TGF-β1在创伤周围组织中的表达高于对照组及死后伤组(P<0.05);VEGF在创伤后3~24 h主要在中性粒细胞、巨噬细胞和成纤维细胞中表达,阳性表达的强度与创伤后时间正相关;2 d出现在新生肉芽组织血管内皮细胞、巨噬细胞及成纤维细胞中,呈强阳性表达,于伤后4 d达到峰值;以后各组阳性细胞逐渐减少,呈弱阳性表达,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);TGF-β1的生前伤后变化规律与VEGF基本相似.结论:VEGF、TGF-β1在创伤修复过程中的表达呈现时序性规律,可以为法医学损伤时间推断提供一种新的指标.     

皮肤创伤愈合过程中TGF-β1mRNA表达与损伤时间关系的实验研究

目的研究TGF-β1 mRNA在皮肤创伤愈合中的表达变化规律及其在损伤时间推断中的价值。方法用实时PCR技术检测不同造创时间（生前伤15min-2周,死后伤。1-6h）小鼠皮肤切创创缘组织TGF-β1 mRNA含量,并同时检测GAPDH含量对结果进行均一化。结果TGF-β1 mRNA于伤后24h显著增高（和对照组比较19〈0．01）,48h和72h时还保持在较高水平。死后伤1h和3h时,TGF-β1 mRNA的表达有增高的趋势,6h则降至对照水平。结论TGF-β1 mRNA在小鼠皮肤创伤后有明显的规律性表达,能作为一种代表性细胞因子参与有一定存活时间（6h以上）的生前伤损伤时间的推断。实时PCR技术能对mRNA的表达水平进行较为精确的检测,是目前损伤时间推断研究中用于细胞因子定性和定量研究的有效方法。     

ELISA检测损伤皮肤中PGE2含量推断损伤时间的实验研究

目的：探讨鉴别生前伤、死后伤及推断损伤时间的方法。方法：运用ELISA检测大白鼠切割创缘皮肤内PGE3含量的变化规律。结果：生前损伤后10－70min，损伤组织中PGE2含量逐渐升高。生前伤PGE2含量与损伤时间有线性关系。结论：ELISA检测损伤皮肤中PGE2含量能鉴别生前伤及死后伤，推断损伤时间。     

损伤皮肤纤维蛋白形成能荧光法定量研究

本文报告对124个大鼠切割皮肤样本采用荧光光度法检测损伤皮肤纤维蛋白形成能,以探讨生前伤与死后伤的区别及不同存活时间的生前损伤之间的关系。实验表明,生前30分钟损伤与死后伤的形成能有显著差异;此形成能的检出率与死后放置时间长短和温度有关,而与该部位有尸斑无关。     

损伤肌肉中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量变化

本研究在大鼠的肌肉损伤模型上，探讨测定超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）含量的变化，推断生前、死后损伤的可能性。结果显示：生前实验组伤、侧肌肉的ＳＯＤ活性与对照侧肌肉相比明显减少，有显著性差异（Ｐ＜０．０１），ＭＤＡ的含量与对照侧肌肉相比明显增加，有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；死后实验组伤侧肌肉的ＳＯＤ活性、ＭＤＡ含量与对照侧肌肉相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；生前损伤组ＳＯＤ活性、ＭＤ     

小鼠皮肤切创愈合过程中巨噬细胞炎性蛋白-1α的表达及其与损伤时间的关系

目的:探讨MIP-1 α在小鼠皮肤切创损伤愈合过程中的表达分布变化规律及其与损伤时间的关系.方法:小鼠背部制做全层切创,应用免疫组织化学技术及阳性细胞计数法观察伤后小鼠切创组织中不同时程的生前伤(1h～14d)和死后伤(0.5～6 h)皮肤创伤局部MIP-1 α的表达,并和无切创的小鼠作为对照.结果:在生前损伤组中,MIP-1 α最早在伤后6h出现阳性表达,随后表达逐渐增多,在3d达到高峰,其后呈下降趋势.而MIP-1 α在早期死后伤组及对照组仅在表皮,皮脂腺,汗腺上皮细胞呈弱阳性表达.结论:MIP-1α在小鼠皮肤切创愈合过程中呈现一定时序性变化,有望作为法医损伤时间推断的一个有用的参考指标.     

损伤时间推断研究进展

损伤时间的推断一直是法医病理学研究的重要课题之一.损伤时间推断有两个重要内容,一是生前受伤与死后伤的鉴别,二是伤后存活时间的推断.     

生前与死后伤的区别——用免疫组化法检测损伤组织中的免疫球蛋白G

目的 :研究损伤组织中的免疫球蛋白 G(Ig G)的分布以区别生前与死后伤。方法 :卵白素—生物素过氧化物酶复合物技术 (ABC法 ) ,直接用辣根过氧化物酶标记单一特异性抗体 (直接法 )检测人体生前与死后损伤皮肤组织中的 Ig G。结果 :生前损伤标本均阳性 ,死后损伤标本均阴性。应用本方法可以检测极短时间 (<1 0 min)内死亡的生前伤。钝器伤 Ig G阳性反应分布范围比锐器伤广。结论 :应用 ABC法、直接法的免疫组化技术检测人体损伤皮肤组织中的 Ig G比较简便 ,该方法适用基层推广应用。     

碱性成纤维细胞生长因子与脊髓损伤

脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)后，受损神经元的保护与存活是近年来神经科学界研究的重点。许多研究表明，碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)在体内能促进受损伤神经元的存活和突起生长，体外也能促进损伤神经元的修复与再生。本文拟就bFGF的分子结构，在脊髓中的分布，脊髓损伤后的表达变化及其可能的作用机制及bFGF在脊髓损伤实验性治疗中的研究现状，综述如下。     

碱性成纤维细胞生长因子在大鼠脊髓损伤后的变化及意义

目的：比较碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)在脊髓损伤前后的表达差异。方法：采用免疫组化染色方法，观察bFGF在脊髓中的分布，以图像分析技术对损伤前后的变化进行定量分析。结果：在正常脊髓中，bFGF定位于灰质星形胶质细胞核和一些神经元胞质中，脊髓损伤后，表达阳性细胞数增多（P＜0．01），灰度值增加（P＜0．01），结论：bFGF可能在脊髓损伤后的自身修复与再生方面起重要作用。     

损伤肌肉中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量变化

本研究在大鼠的肌肉损伤模型上，探讨测定超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）含量的变化，推断生前、死后损伤的可能性。结果显示：生前实验组伤侧肌肉的ＳＯＤ活性与对照侧肌肉相比明显减少，有显著性差异（Ｐ＜０．０１），ＭＤＡ的含量与对照侧肌肉相比明显增加，有显著性差异（ｐ＜０．０１）；死后实验组伤侧肌肉的ＳＯＤ活性、ＭＤＡ含量与对照侧肌肉相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。生前损伤组ＳＯＤ活性、ＭＤＡ含量的差值与正常组和死后损伤组相比，有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；正常组ＳＯＤ活性、ＭＤＡ含量差值与死后损伤组差值相比，无显著性差异（ｐ＞０．０５）。实验表明：通过检测局部组织肌肉的ＳＯＤ活性及ＭＤＡ含量可区分生前、死后伤。可望在今后的法医学实践中验证使用。     

大鼠皮肤MMP-2，MMP-9表达与损伤时间相关性的实验研究

目的:探讨创伤皮肤组织基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase-s,MMPs)-2、9的表达与损伤时间的相关性,为损伤时间推断提供实验依据.方法:建立大鼠皮肤切创模型,应用免疫组织化学技术、图像分析技术检测不同损伤时间大鼠皮肤组织生前及死后MMP-2与MMP-9表达.结果:生前伤组大鼠损伤后皮肤组织内MMP-2与MMP-9在损伤区及损伤区周围皮肤组织中表达明显高于正常埘照组(P<0.05).死后伤组皮肤组织中MMP-2与MMP-9表达与正常对照组比较无明显差异(P>0.05).生前伤组中MMP-2在损伤后0.5 h可见在中性粒细胞中阳性表达,随时间进展表达逐渐增强,并可见在少量血管内皮细胞中阳性表达.12 h后明显增多,3 d达到高峰,维持到第5 d后在炎细胞中表达显著减少,而在成纤维细胞,血管内皮细胞中表达增加,维持在一个相对稳定的水平,12～14 d恢复正常.MMP-9在损伤后1 h可见在中性粒细胞中阳性表达,随时间进展表达逐渐增强,12 h后明显增多,3 d达到高峰,维持到第5 d,5 d后在炎细胞中表达显著减少,而在成纤维细胞,血管内皮细胞中表达增加,维持在一个相对稳定的水平,12～14 d恢复正常.结论:皮肤损伤组织MMP-2与MMP-9表达具有规律性且有良好的时间相关性,可望成为法医学损伤时间推断的指标.     

大鼠生前、死后皮肤骨骼肌损伤的形态变化

用HE及组织学特染方法对大鼠皮肤、骨骼肌生前和死后损伤的特异形态结构变化进行对照性实验研究。结果表明：生前伤组皮肤HE及特染光镜下出现较特异的生活反应，死后伤组弱或不明显；生前及死后损伤骨骼肌的特异性染色明显，研究结果为法医学在确定生前与死后伤方面提供了可靠、敏感、客观的指标。     

大鼠损伤组织中VEGF bFGF表达变化的免疫组化研究

目的 :探讨大鼠锐器损伤后组织中血管内皮细胞生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)表达的动态变化。方法 :在大鼠背侧切开皮肤全层建立大鼠模型 ,不同时间 (0 .5、1、3、6、12、2 4、4 8、72、96h)分批处死大鼠。应用免疫组化ABC法检测VEGF、bFGF的表达 ,并用图像分析系统分析其表达情况。结果 :VEGF在损伤后12h开始表达 ,72h表达最强 ,与正常对照大鼠皮肤组织比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,96h以后开始下降。bFGF在损伤后 1h开始表达 ,4 8h表达最强 ,与正常对照大鼠皮肤组织比较 ,差异也有显著性 (P <0 .0 5 ) ,72h后开始下降。结论 :VEGF和bFGF可望在法医学损伤时间推断中作为一种客观指标 ,但bFGF在损伤组织中表达早于VEGF ,持续的时间较VEGF长 ,因此bFGF在法医损伤时间推断中有着重要作用。     

深Ⅱ度烧伤创面细胞bFGF和PDGF对愈合的影响

目的：研究bFGF和PDGF在深Ⅱ度烧伤愈合中的表达特点，以及与创面愈合中的关系，为临床合理应用外源性的bFGF和PDGF提供实验依据。方法采用地高辛细胞原位杂交方法检测SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型在伤后不同时段创面渗出液细胞的bFGF和PDGF中mRNA表达表达变化。结果实验组的bFGF是在5d开始表达，在7d达到高峰，然后缓慢下降，至14d还有一定水平的表达，对照组bFGF的表达水平都较低，仅在5d有低水平表达，14d已基本无表达，在检测PDGF时，实验组1－3d处于较低水平表达，7d开始高水平表达，10d是表达的高峰，随后下降，对照组PDGF的表达在1－3d处于较低水平表达，7d开始高水平表达，10d是表达的高峰，随后下降，对照组PDGF的表达在1－3D处于较低水平表达，7d开始高水平表达，10d是表达的高峰，随后下降，对照组PDGF的表达在1－3d处于较低水平，5－14d有一个低水平的mRNA表达延迟峰段。结论创面渗出液细胞bFGF、PDGF的mRNA表达的启动，表达的高峰和减弱与深Ⅱ度烧伤的创面愈合状况有关，与相关细胞在创面聚集、诱导和分泌bFGF、PDGF有关。     

大鼠电流损伤后心肌PEG-3表达的法医学研究

目的:探讨电击伤和电击死后心肌中PEG-3表达的时间相关性以及其能否用于生前电击和死后电击的鉴别.方法:建立大鼠电流损伤的模型.电击伤组于电击后oh、3h、6h、12h、24h、3d、6d、12d断颈处死取材;电击死组分别于死后oh、lh、3h、6h、12h取材;死后电击组分别于断颈处死后的0h、0.5h、lh、3h电击后取材;阴性对照组直接断颈处死后分别于oh、0.5h、1h、3h、6h、12h取材,取材的部位均为左心室前壁中央部,取材后采用免疫组化染色法检测所有大鼠心肌PEG-3的表达情况,其结果经图象分析处理后进行统计分析.结果:电击伤(死)组在电损伤早期PEG-3即表达增加,且不同时间的表达有一定的规律,故可用于推断心肌电击伤(死)的时间.而在死后电击及阴性对照组只有弱表达,根据这点可以将死后电击和电击致死进行区分.结论:心肌电损伤后PEG-3的表达有一定的时间相关性,可以用于对电击伤(死)的诊断;心肌电损伤后PEG-3的表达情况可以鉴别生前电击和死后电击.     

深Ⅱ度烧伤创面细胞bFGF和PDGF对愈合的影响

目的研究bFGF和PDGF在深Ⅱ度烧伤愈合中的表达特点,以及与创面愈合中的关系。为临床合理应用外源性的bFGF和PDGF提供实验依据。方法采用地高辛细胞原位杂交方法检测SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型在伤后不同时段的创面渗出液细胞的bFGF和PDGF中mRNA表达变化。结果实验组的bFGF是在5d开始表达,在7d达到高峰,然后缓慢下降,至14d时还有一定水平的表达,对照组bFGF的表达水平都较低,仅在5d有低水平表达,14d已基本无表达。在检测PDGF时,实验组1～3d处于较低水平表达,7d开始高水平表达,10d是表达的高峰,随后下降。对照组PDGF的表达在1～3d处于较低水平,5～14d有一个低水平的mRNA表达延迟峰段。结论创面渗出液细胞bFGF、PDGF的mRNA表达的启动、表达的高峰和减弱与深Ⅱ度烧伤的创面愈合状况有关,与相关细胞在创面聚集、诱导和分泌bFGF、PDGF有关。     

损伤皮肤中组胺荧光显微定位定量、血浆蛋白渗出定量与损伤时间推断

本项研究经过多年努力完成,作者分别运用荧光组化、荧光显微分光光度计定量的先进方法对动物及实际检案的生前和死后皮肤中组胺含量和分布进行了研究,并对损伤局部白蛋白、总蛋白含量进行了生化测定,提出据损伤边缘HA分布及含量变化以及血浆蛋白渗出变化来鉴别生前与死后伤并推断损伤时间的论点,建立了几种简便的检测方法,为法医办案中确定受伤时间提供了较准确的检测手段。该课题设计严密,论证科学性强,     

红光照射对创伤愈合的影响

目的:建立双抗体夹心ABC-ELISA法,研究红光照射对创伤愈合的作用机制.方法:40名受使者随机分为4组,每组10人,A组:20 mW/cm2;B组:30 mW/cm2;C组:40 mW/cm2;D组:对照组.红光照射45 min/次,1次/d,连续10 d,采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定受试者VEGF,PDGF,TGF-β1,bFGF含量变化情况.结果:双抗体夹心ABC-ELISA法检测VEGF,PDGF,TGF-β1,bFGF具有很好的特异性,红光照射组VEGF,PDGF,TGF-β1,bFGF含量高于对照组(P<0.05),在30 mW/cm2红光照射时,bFGF含量最高.结论:红光照射加快创伤愈合与促进VEGF,PDGF,TGF-β1,bFGF分泌有关,有利于临床推广应用.