心脏外层细胞具有修复受损组织功能

英国科学家研究发现，心脏最外层中的细胞接受刺激后可以深入心肌，帮助修复受损组织。
　　据《独立报》日前报道，英国伦敦儿童健康研究所的科学家发现，心脏最外层包含一种叫做祖细胞的细胞。它像干细胞一样，具有生长成心脏中任何一种新组织的能力。
　　此前，科学家一直认为成熟心脏的细胞处于“静止”状态，任何参与修复心脏的祖细胞必须从骨髓移植到心脏。但伦敦儿童健康研究所负责这项研究的保罗·赖利说，这种祖细胞已经存在于心脏本身，所需要的是＂适当＂的指令，使它们形成新血管，帮助修复心肌损伤。     

Wnt通路调节心脏干/祖细胞增殖和存活及干性维持

Wnt在胚胎发育过程中通过调节心脏干/祖细胞增殖、迁移及定向分化促进心脏形成。成体心脏最先被认为是一个终末分化器官,不具有再生能力,但近年来发现成体心脏中仍存在着原始的心脏干/祖细胞,当受到外源性刺激时,这些细胞就会被激活,参与到心脏再生中。然而关于心脏干/祖细胞的启动、活化机制仍没有研究清楚。因为Wnt参与胚胎期心脏的发育形成,研究者对成体心脏与Wnt的关系进行研究,发现Wnt也参与成体心脏再生。现就Wnt如何调节成体心脏中心脏干/祖细胞的命运促进心脏再生进行综述。     

干细胞移植在心血管疾病治疗中的应用进展

心血管疾病,已成为人类死亡的主要疾病,干细胞移植为心血管疾病的治疗带来了新的希望.细胞移植为病损心脏细胞重建及衰竭心脏功能恢复提供了一种全新的治疗方法.干细胞具有自我更新、定向分化成为心肌细胞等多种组织细胞的潜能.其增殖分化能力能维持终身,目前可供移植的种子细胞包括胚胎干细胞,骨骼肌生肌细胞,骨髓干细胞,内皮祖细胞等,移植避免了免疫排斥和伦理道德问题.近期研究表明移植的干细胞能在心肌损伤部位中存活,增强心功能.     

小鼠心肌祖细胞的永生化及筛选

背景:移植外源干细胞治疗功能性心肌细胞死亡或凋亡,易导致移植并发症,因此心脏本身存在的心肌祖细胞成为理想的种子细胞。目的:建立稳定来源于小鼠心脏的心肌祖细胞株,为研究影响心肌祖细胞在成体心肌细胞受损时的增殖分化因素提供理想的细胞模型。方法:①分离培养胚胎15.5 d的小鼠心肌细胞。②感染反转录病毒SSR69使心肌细胞永生化,通过抗生素筛选和无限稀释法获得永生化的单克隆心肌祖细胞。③筛选出具有心肌祖细胞特性的单克隆细胞株。结果与结论:①成功分离培养出心肌细胞,部分细胞可见明显搏动。②感染病毒后,通过潮霉素筛选成功选出76个单克隆,并将其进行命名为CP15-#。③对第1-20号克隆,根据心肌细胞标志基因筛选出具有心肌祖细胞特性的克隆。表明通过可逆SV40 T抗原介导的途径成功建立永生化心肌祖细胞。     

波形蛋白阳性细胞在人胚脑中的分布

波形蛋白 (Ｖｉｍｅｎｔｉｎ)是中间丝蛋白的一种 ,其表达在神经系统发育过程中有一定的时间性 ,主要表达于尚未发生终末分化的细胞 ,即神经祖细胞 /前体细胞。神经祖细胞 /前体细胞是一类尚保留有分化潜能的细胞 ,是神经系统发育到一定阶段的细胞群体 ,具有有限的自我更新 (增殖 )和分化能力[1～ 3 ] 。该细胞移植后可以发生增殖和分化 ,为治疗神经系统退行性疾病开辟了一条新的途径[1] 。目前关于人胚胎神经干细胞 /祖细胞或前体细胞分布的研究尚少 ,本研究用2 7+ 2 周人胚脑 ,通过对Ｖｉｍｅｎｔｉｎ阳性细胞形态特征及其分布情况的研究 …     

B淋巴细胞分化相关的基因调控

B淋巴细胞是免疫系统中的抗体产生细胞,是免疫系统的重要组成细胞.骨髓及胎肝中的多能造血干细胞(pluri-potent hematopoietic stem cells,PHSC)可以分化为具有向髓系以及淋巴系分化能力的多能前体细胞,它进一步分化为早期淋巴祖细胞.早期淋巴祖细胞在骨髓中分化为共同淋巴祖细胞.共同淋巴祖细胞能够分化产生B细胞、T细胞、自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)以及树突状细胞(Den-dritic cells,DC).B淋巴细胞在骨髓中经历了顺序性分化:原B细胞(pro-B)→前B细胞(pre-B,包括pre-B Ⅰ和pre-BⅡ)→未成熟B细胞(immature B).     

成人骨髓多能成体祖细胞生物学性状及向成软骨样细胞的诱导分化

背景：骨髓多能成体祖细胞具有比骨髓间充质干细胞更强的分化潜能和扩增能力并具有胚胎干细胞样的多向分化潜能,但分化为成软骨样细胞的研究目前少见报道。 目的：观察成人骨髓成体多能祖细胞的体外培养条件、生物学特性及其向成软骨样细胞分化的可能性。 方法：观察体外培养成人骨髓成体多能祖细胞的形态、生长情况,并鉴定;以分化培养基诱导成人骨髓成体多能祖细胞向无软骨细胞分化。 结果与结论：光学显微镜下观察培养的成人骨髓多能成体祖细胞体积偏大,长多角型,数个细长伪足,细胞核大,细胞质丰富,细胞增殖能力旺盛;可见转录因子4、阶段特异性胚胎表面抗原1表达,未见T细胞表面黏附分子CD44,CD45,CD133和主要组织相容性抗原系统Ⅱ的表达;诱导分化后,分化细胞经甲苯胺蓝染色后呈异染性,可表达Ⅱ型胶原。证实,实验成功体外培养了成人骨髓多能成体祖细胞,骨髓多能成体祖细胞在一定诱导条件下具有向成软骨样细胞分化的潜能。     

大鼠胚胎视网膜祖细胞分离培养及其分化特性

目的：建立大鼠胚胎视网膜祖细胞体外培养方法并观察其分化特性。方法：取孕18d大鼠胚胎,用无血清培养技术扩增视网膜祖细胞;用免疫细胞化学、扫描电镜与透射电镜技术对祖细胞的特性及诱导分化的细胞类型进行鉴定。结果：从胚胎大鼠视网膜神经部分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞球能表达Nestin并具有掺入BrdU的能力。诱导分化后的细胞表达,其中,Thy1．1^ 细胞最多,Opsin^ 细胞次之,GS^ 细胞较少,PKC^ 细胞少,Syntaxin^ 及Peripherin^ 细胞极少,不表达Calbindin D-28K。结论：从胚胎大鼠分离的细胞具有自我增殖能力和多向分化潜能,属于视网膜祖细胞;诱导分化产生5种视网膜细胞,以节细胞最多,未见水平细胞。     

人神经胶质祖细胞移植于小鼠脑内两侧侧脑室周区后发育成人星形胶质细胞

目的观察人神经胶质祖细胞移植于小鼠脑内两侧侧脑室周区后的形态结构发育变化。方法将人神经胶质祖细胞移植入出生1天的小鼠脑内两侧侧脑室周区,用免疫荧光组化技术和共聚焦显微镜观察移植6个月后,小鼠脑内人神经胶质祖细胞的分布、分化和形态结构的特点。结果人神经胶质祖细胞移植6个月后成功地在小鼠脑内存活并广泛分布,主要发育成人神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein GFAP)阳性的星形胶质细胞,表现人星形胶质细胞的形态结构特点,部分神经胶质祖细胞分化成硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulphate proteoglycan,NG2)阳性的细胞。结论人神经胶质祖细胞移植小鼠脑内环境中主要分化为GFAP阳性的星形胶质细胞和部分NG2阳性细胞。     

人类神经干/祖细胞的体外扩增

目的和方法：探索体外长期扩增人类神经干/祖细胞的有效方法。以含有EGF，b-FGF和B27的限制性培养基对人类7-20周胚胎的大脑细胞行体外扩增培养，在形成稳定的神经球后，撤除EGF，b-FGF，添加FBS，使其分化，以免疫组化法鉴定所分化的细胞类型，分析不同胎龄、不同因子对神经干/祖细胞生长分化的影响。 结果： 在以上3个因子的存在下，人类胚胎大脑细胞能在体外扩增并维持不分化状态1年之久，扩增的细胞可达原始细胞的107倍；这些细胞在分化后可形成神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞这3种中枢神经系统的主要组成细胞。其中，b-FGF对神经元的定向分化有促进作用，B27有促进神经元表型成熟的作用。结论： 在体外长期扩增人类神经干/祖细胞是可行的，以该方法扩增的神经干/祖细胞有可能为今后的神经移植治疗提供稳定的、性状良好的、特异性的神经细胞来源。     

外周血内皮祖细胞种植小径聚氨酯人工血管及流体切应力处理的实验研究

本研究收集健康成人骨髓单个核细胞,用血管内皮生长因子等加以诱导分化,通过荧光显微镜和荧光免疫标记等方法观察和鉴定诱导后的细胞。之后将诱导分化的内皮祖细胞种植到聚氨酯小径人工血管表面,予以15 dyn／cm2的流体切应力处理,并用扫描电镜观察。结果发现外周血单个核细胞诱导分化成为内皮祖细胞,ac- LDL及lectin抗体荧光标记阳性。扫描电镜下,未种植细胞的聚氨酯小径人工血管表面孔径大小比较适合内皮祖细胞爬行;静态种植细胞后,人工血管表面内皮祖细胞排列不整齐;切应力条件下种植细胞后,人工血管表面内皮祖细胞排列较为整齐。因此,在体外能将外周血单个核细胞诱导分化成为内皮祖细胞,内皮祖细胞是小径人工血管内皮化的理想种子细胞。流体切应力对小径聚氨酯人工血管表面内皮祖细胞的生长排列有着良好的机械塑形作用。     

体外培养获取高纯度O-2A祖细胞

目的获取较高纯度的O-2A祖细胞,并观察在不同的实验条件下O-2A祖细胞的分化作用。方法 根据星形胶质细胞、O-2A祖细胞的生长时间差异,细胞的粘附特性不同,采用振荡和差速贴壁法结合Ⅰ型星形胶质细胞条件培养液,培养、分离纯化O-2A祖细胞。结果培养的o-2A祖细胞胞体呈椭圆形,有典型的双极突起,少数呈三极突起;经免疫组织化学染色鉴定细胞的纯度达90％。在有血清的情况下,O-2A祖细胞定向分化为Ⅱ型星形胶质细胞;在无血清的情况下,其定向分化为少突胶质细胞。结论通过振荡法和Ⅰ型星形胶质细胞条件培养液结合差速贴壁法分离纯化培养O-2A祖细胞是一种可行的培养方法。     

血管平滑肌细胞对联合培养内皮祖细胞黏附、增殖与形态的影响

目的：探讨血管平滑肌细胞对联合培养的内皮祖细胞黏附、增殖与分化的影响。方法：从人脐血中分离纯化内皮祖细胞并鉴定；建立内皮祖细胞和平滑肌细胞的联合培养模型；细胞粘附实验测定内皮祖细胞的粘附能力；形态学观察内皮祖细胞的分化与增殖。结果：与血管平滑肌细胞联合培养的内皮祖细胞的粘附能力比单独培养时提高了63％，长梭形细胞数量增加，同时克隆形成单位的数量下降了约60％。结论：血管平滑肌细胞促进了内皮祖细胞的粘附与分化，同时抑制了内皮祖细胞的增殖能力。     

新生大鼠大脑皮质O-2A祖细胞的体外诱导分化

目的　在获取高纯度O 2A祖细胞的基础上 ,探讨O 2A祖细胞在体外分化的形态学特点。方法　采用“两次恒温摇床振荡法”和差速贴壁法 ,结合使用神经营养因子 (bFGF、PDGF AA) ,进行O 2A祖细胞体外纯化和扩增培养 ,并观察O 2A祖细胞在有血清和无血清培养条件下的分化情况 ,用免疫细胞化学鉴定分化成熟的 2型星型胶质细胞和少突胶质细胞。结果　培养的O 2A祖细胞能形成克隆球 ,具有增殖能力 ,经免疫细胞化学鉴定细胞纯度达 90 %以上。在含血清的培养基中能定向分化为 2型星形胶质细胞 ,其胞体较大 ,从胞体上伸出细长突起 ,由突起上再发出更为细小的分支 ,GFAP和A2B5抗体标记均为阳性 ;在无血清的化学条件培养基中能定向分化为少突胶质细胞 ,其胞体较小 ,突起短而细 ,相互交织呈“蜘蛛网”样 ,CNPase抗体标记阳性。结论　 (1)培养的O 2A祖细胞保持定向干细胞的特性 ,具有增殖和双向分化的潜能 ;(2 )O 2A祖细胞定向分化为 2型星形胶质细胞过程中经历较长的增殖期 ,而分化为少突胶质细胞过程中则增殖期较短 ;(3)分化的 2型星形胶质细胞和少突胶质细胞在形态学和抗原表达上存在差异。     

脐带血干细胞:组织工程人工心脏研究种子细胞的新来源

背景:脐带血干细胞富含多种干/祖细胞,其各种干/祖细胞移植治疗和作为种子细胞在组织工程领域的研究成为当前的热点。目的:综述脐带血干细胞中存在的多种干/祖细胞的生物学特性及在心脏疾病的实验应用和脐带血干细胞在心脏疾病的实验应用。方法:应用计算机检索1999-01/2009-10中国数字图书馆、维普期刊数据库相关文章,检索词为"脐带血干细胞,造血干/祖细胞,间充质干细胞,内皮祖细胞,内皮细胞,心肌细胞,组织工程,种子细胞",并限定文章语言种类为中文。同时计算机检索1999-01/2009-10PubMed数据库相关文章,检索词为"umbilical cord blood stem cells,hematopoietic progenitor cells/hematopoietic stem cells,mesenchymal stem cells,endothelial progenitor cells,endothelial cells,myocardial cells,tissue engineering,seeded cells",并限定文章语言种类为English。同时手工检索《干细胞生物学》专著,共检索到文献95篇。根据纳入标准最终纳入文献30篇。结果与结论:脐带血干细胞是一种成体多能干细胞,富含造血干/祖细胞、间充质干细胞、内皮祖细胞、非限制性体干细胞等。相对于骨髓干细胞和外周血干细胞,脐带血干细胞来源丰富,获得更为容易,更为原始,分化增殖能力更强,排斥反应小,在体外可以分化为血管内皮细胞、心肌细胞等多种细胞。基于脐带血干细胞独特的生物特性、资源优势及在冠心病和缺血性心肌病的治疗上取得了一定的成果,为构建组织工程人工心脏的种子细胞来源提供可能,在心脏再生和组织工程人工心脏方面的应用展示了广阔的前景。     

兔骨髓内皮祖细胞在组织工程血管构建中的实验研究

建立体外分离、培养及鉴定兔骨髓血内皮祖细胞（endothelial progenitor cell,EPCs）的方法,并探讨其在血管组织工程构建过程中的功能。采用密度梯度离心法分离单个核细胞,经培养鉴定为EPCs后作为种子细胞接种于人纤维连接蛋白包被（FN）的组织工程血管支架上,加入血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）进行体外诱导培养,同时设置未包被纤维连接蛋白及未添加血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的培养方法作为对照组,体外培养10 d后,对构建的组织工程血管进行鉴定分析。分离培养的骨髓单个核细胞呈典型的＂铺路石样＂外观。经免疫荧光检测、细胞吞噬功能鉴定为内皮祖细胞;种植细胞10 d后结果显示：加入纤维连接蛋白和血管内皮生长因子的血管支架可见细胞种植密度明显高于对照组,扫描电子显微镜观察到,血管内腔面较为完整的覆盖内皮细胞。HE染色显示：内皮细胞在血管支架上成活并较为均匀;免疫组化结果显示分化为成熟血管内皮细胞并表达VEGFR-2、vWF、CD34。兔骨髓单个核细胞体外培养可以诱导分化为内皮祖细胞,血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和纤维连接蛋白（FN）的组合更有利于内皮祖细胞在血管支架上增殖和分化,为人工血管制备创造了条件。     

小鼠骨髓多能成体祖细胞的分离、培养及体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的：探讨培养骨髓多能成体祖细胞的条件和生物学特性及其向胰岛素分泌细胞分化的可能性。 方法： 采用文献报道的条件培养液培养小鼠骨髓多能成体祖细胞，观察其细胞形态、生长情况、细胞表面标志及mRNA水平，检测其oct-4基因表达，并以含胰高糖素多肽-1的无血清培养液诱导分化细胞，基因水平检测与胰岛素分泌细胞有关的基因表达。 结果： 小鼠骨髓多能成体祖细胞类圆形，细胞核大，胞质少；细胞增殖能力尚可；细胞表面CD13+、CD44-、CD45-、MHCⅡ-；有oct-4基因表达；诱导分化后，可见与胰岛素分泌细胞有关的基因表达。 结论： 成功培养小鼠骨髓多能成体祖细胞，具有与文献报道类似的生物学特征；有被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性。     

心肌干细胞的提交分化及其调控机制

心肌细胞被认为是终末分化细胞,损伤后不能再生。但最近研究发现,成人心脏中存在多能心肌干细胞(cardiacstemcell,CSC),CSC能够再生为心肌。另外,全能胚胎干细胞(ES细胞)、多能成体祖细胞(MAPC)和成体多能干细胞(aMSC)具有向心肌分化的潜力,可用于心肌损伤后的修复治疗。ES细胞和MAPC作为CSC的前体细胞,在心肌梗塞的干细胞移植治疗方面需经过向心肌谱系的提交过程。本文综述了干细胞向心肌谱系的提交、分化及其调控机制。     

bHLH转录因子与大脑皮质祖细胞分化

在大脑新皮质发育过程中 ,bHLH转录调控因子 (basichelix loop helixtranscripitionfactor)参与调节大脑皮质多能祖细胞的分化。前神经bHLH因子 (Mash1,Neurogenin1,andNeurogenin2 )活性增强和Hes、Id因子的活性相应的减弱引起皮质多能祖细胞由增殖状态向神经生成转变。神经元形成后 ,Hes因子的激活促进星形胶质细胞的分化 ,而前神经bHLH因子Ngn抑制星形胶质细胞的分化。bHLH因子Olig1和Olig2活性的增加和Id活性的减弱启动了少突胶质细胞的形成。     

心肌干细胞的提交分化及其调控机制

心肌细胞被认为是终末分化细胞，损伤后不能再生。但最近研究发现，成人心脏中存在多能心肌干细胞(cardiacstemcell，CSC)，CSC能够再生为心肌。另外，全能胚胎干细胞(ES细胞)、多能成体祖细胞(MAPC)和成体多能干细胞(aMSC)具有向心肌分化的潜力，可用于心肌损伤后的修复治疗。ES细胞和MAPC作为CSC的前体细胞，在心肌梗塞的干细胞移植治疗方面需经过向心肌谱系的提交过程。本综述了干细胞向心肌谱系的提交、分化及其调控机制。