雷帕霉素在人肝癌裸鼠肝移植瘤血管形成和肿瘤进展中的作用

目的 探讨雷帕霉素(RPM)在人肝癌裸鼠肝移植瘤血管形成和肿瘤发展中的作用.方法 建立人肝癌裸鼠肝移植瘤模型,使用RPM、环孢素A(CsA)进行干预治疗,采用实时定量PCR法检测移植瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA的表达,免疫组织化学方法和图像分析技术检测移植瘤VEGF蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和微血管密度(MVD),ELISA法检测外周血VEGF蛋白水平的变化.结果 (1)RPM、CsA和对照组移植瘤重量分别为(372±35)mg、(769±39)mg、(751±42)mg;RPM组移植瘤重量较对照组显著减少(P<0.01);CsA组和对照组比较无明显变化(P>0.05).(2)RPM组移植瘤VEGF mRNA、蛋白和PCNA的表达及外周血中VEGF蛋白水平较对照组显著下调(P<0.05),CsA组和对照组比较无明显差异(P>0.05).(3)RPM组移植瘤MVD较对照组显著减少(P<0.01);CsA组和对照组相比无明显变化(P>0.05).结论 RPM通过阻止肿瘤增殖,下调VEGF的表达,抑制肝癌血管形成和肿瘤进展.     

贝伐单抗对乳腺癌皮下移植瘤放疗的增敏作用及其机制

目的 观察贝伐单抗对乳腺癌皮下移植瘤放射治疗的影响并探讨其机制.方法 将30只建立皮下移植瘤裸鼠随机分为贝伐单抗联合放射治疗组、单纯放射治疗组、正常组,相应处理后绘制生长曲线,Western blot法及免疫组织化学法检测各组缺氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞核增殖抗原(Ki-67)、CD31的表达.结果 联合组皮下移植瘤退缩更为显著(P＜0.05);免疫组织化学显示联合组Ki-67表达最弱,HIF-1 α、CD31表达也较单纯放射治疗组减弱,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot显示联合组HIF-1α、VEGF表达最弱.结论 贝伐单抗在乳腺癌皮下移植瘤放射治疗中发挥放射治疗增敏作用,可能是通过抑制HIF-1α、VEGF表达从而抑制肿瘤细胞增殖及肿瘤组织内血管形成来实现的.     

SRPK1基因对膀胱癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响, 并进一步探究其分子机制。方法利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达;构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC), 包装慢病毒颗粒, 分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2);采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化;采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化;采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果 Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织(P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检...     

miR-4783-3p在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究miR-4783-3p在肝癌组织中的表达及对肝癌Huh-7细胞增殖及迁移产生的影响。方法采用cBioPortal数据库分析肝癌组织和癌旁组织中miR-4783-3p的表达, 严格按照Lipofectamine? 2000转染试剂盒说明书, 分别将miR-4783-3p过表达模拟物或过表达对照模拟物转染至Huh-7细胞, 即过表达组和对照组。通过CCK-8实验分析Huh-7细胞增殖情况, 细胞划痕法分析Huh-7细胞迁移情况。双荧光素酶报告基因法检测miR-4783-3p与胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)mRNA的靶向关系。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测IGFBP2mRNA的表达。Western-blotting检测IGFBP2蛋白和EGFR-STAT3分子通路蛋白的表达。正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示, 组间比较采用t检验或单因素方差分析。结果肝癌组织中miR-4783-3p的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。与对照组比较, 过表达组Huh-7细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。对照组和过表达组中Huh-7细胞划痕愈合率...     

重组人HMGB1调控内皮细胞成血管作用的机制初探

目的 探讨重组人高迁移率族蛋白1(rhHMGB1)在调控内皮细胞成血管过程中可能涉及的机制。方法 将内皮细胞分为对照组、骨髓间充质干细胞（MSC）上清组以及rhHMGB1组。采用细胞计数试剂（CCK）-8法检测内皮细胞的增殖、存活情况;采用蛋白质印迹法检测血管内皮生长因子（VEGF）、Yes相关蛋白（YAP）、CD31、缺氧诱导因子（HIF）-1α的蛋白相对表达量;采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测VEGF、YAP、CD31、HIF-1α的信使RNA(mRNA)相对表达量;采用Transwell实验检测内皮细胞迁移水平;免疫荧光实验检测YAP定位情况。结果 与对照组比较,rhHMGB1组内皮细胞迁移率增加（P<0.05）,且细胞迁移率随着时间的延长而增加。与对照组比较,MSC上清组VEGF蛋白相对表达量增加,p-YAP蛋白表达增多,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与对照组比较,rhHMGB1组的VEGF和HIF-1α蛋白相对表达量以及VEGF和CD31 mRNA相对表达量均增加,YAP和p-YAP蛋白表达均增多,YAP/p-YAP比值增加,差异均有统...     

白细胞介素-1受体Ⅱ对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨人白细胞介素-1受体Ⅱ(IL-1R2)对胃癌细胞生物学行为的影响及其对血管的影响。方法用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法检测胃癌细胞株(AGS、MGC-803、BGC-823、SGC-7901、HGC-27、HSC-39)及人胃黏膜细胞(GES-1)中IL-1R2的mRNA、蛋白水平, 选择MGC-803、BGC-823构建下调及过表达IL-1R2细胞模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖、划痕实验、Transwell侵袭实验明确IL-1R2对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。细胞周期及凋亡实验探究IL-1R2对细胞周期及凋亡的作用。RT-PCR检测下调及过表达IL-1R2的MGC-803、BGC-823细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF) mRNA水平。下调、过表达IL-1R2细胞组及其对照组与血管内皮细胞(HMEC-1)共培养, 明确IL-1R2对HMEC-1增殖、迁移及VEGF、IL-6 mRNA水平的影响。两组间差异表达采用t检验方法比较;多组间采用方差分析(ANOVA)和T...     

瘢痕中HIF-1α的表达及其与VEGF和HO-1的关系

目的:探讨HIF-1α减轻瘢痕内缺氧环境的机制。方法:采用免疫组化法检测烧伤后肉芽、不同时期瘢痕和正常皮肤中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-induciblefactor1α,HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、血红素氧化酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)的表达,采用权重方法分别对各组瘢痕的HIF-1α、VEGF、HO-1表达结果进行量化,分析各自规律及相互间关系。结果:随瘢痕的成熟,HIF-1α、VEGF、HO-1表达强度均逐渐减弱,相互间具有正相关性(P<0.01)。结论:HIF-1α、VEGF、HO-1在瘢痕成熟过程中起重要作用,HIF-1α可能通过诱导VEGF、HO-1的表达,促进血管生成、成熟,增加组织内供氧,来减轻瘢痕内缺氧环境。     

缺氧诱导因子1α对人羊膜间充质干细胞耐受缺氧能力影响的实验研究

目的通过瞬时转染缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因,观察缺氧处理后人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)成活及凋亡情况,探讨HIF-1α对hAMSCs耐受缺氧能力的影响。方法取健康剖宫产产妇自愿捐赠的羊膜组织分离、培养hAMSCs,通过倒置相差显微镜观察细胞形态及免疫荧光法检测干细胞标志物OCT-4、NANOG表达,对培养细胞进行鉴定。取第3代hAMSCs进行缺氧处理(200μmol/L CoCl_2)后,按以下分组瞬时转染对应质粒:A组为hAMSCs空白组,B组为pcDNA3.1阴性对照组,C组为shRNA阴性对照组,D组为shRNA-HIF-1α干扰组,E组为pcDNA3.1-HIF-1α过表达组。缺氧处理后12、24、48 h采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测各组细胞成活率;24 h采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,并采用Western blot检测HIF-1α、VEGF、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma2,Bcl-2)、Bax、活化型半胱天冬酶-3(cleaved Caspase-3,C-Caspase-3)蛋白表达。结果 CCK-8法检测示,缺氧处理后各时间点与A、C组比较,D组细胞成活率明显降低(P0.05);与A、B组比较,E组细胞成活率明显升高,其中24 h组间比较差异有统计学意义(P0.05);E组内24 h时细胞成活率明显高于12、48 h时(P0.05)。流式细胞仪检测示,与A、C组比较,D组细胞凋亡率明显升高(P0.05);与A、B组比较,E组细胞凋亡率明显降低(P0.05)。Western blot检测示,与A、C组比较,D组细胞中HIF-1α、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax、CCaspase-3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05);而E组结果相反,与A、B组比较,E组细胞中HIF-1α、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax、C-Caspase-3蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HIF-1α基因过表达能够明显改善hAMSCs耐受缺氧能力,其机制可能与上调VEGF和Bcl-2表达及下调Bax和C-Caspase-3表达作用相关。     

长链非编码核旁斑装配转录物1对结肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的探讨长链非编码核旁斑装配转录物1(Lnc NEAT1)靶向微小RNA(miR)-506-3p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法收集河南省人民医院手术切除的结肠癌组织标本和癌旁正常组织标本各82例, 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测结肠癌组织和癌旁组织中Lnc NEAT1的mRNA表达水平;构建miRNA-Control、miR-506-3p和短发卡RNA(shRNA)-Control、shRNA-Lnc NEAT1慢病毒结肠癌细胞株, 采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析Lnc NEAT1和miR-506-3p的靶向关系;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell分别检测shRNA-Control和shRNA-Lnc NEAT1细胞的增殖、迁移能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测shRNA-Control和shRNA-Lnc NEAT1细胞中LAMC1的蛋白表达水平。两组均数比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果 Lnc NEAT1在结肠癌组织(1.93±0.18)中的mRNA相对表达水平显著高于癌旁组织(0.52±0.0...     

缺氧诱导因子-1α和血管内皮细胞生长因子在前列腺癌组织中的表达

目的：探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在前列腺癌中的表达及其与病理分级、临床分期的关系。方法：采用免疫组化方法检测前列腺癌和良性前列腺增生(BPH)组织中HIF-1α和VEGF的表达。结果：前列腺癌中HIF-1α和VEGF的表达均明显高于BPH；HIF-1α和VEGF在前列腺癌中的表达水平与其病理分级和临床分期均呈正相关；前列腺癌中的HIF-1α表达水平和VEGF的表达水平呈正相关。结论：HIF-1α和VEGF是检测前列腺癌的较好分子标志物，可望用于前列腺癌的辅助诊断和预后判断，HIF-1α是VEGF表达的调控因子之一。     

微小RNA-422a靶向叉头框蛋白Q1抑制人结直肠癌生长和侵袭能力的研究

目的研究人结直肠癌中微小RNA(miR)-422a的异常表达与肿瘤生物学特征之间的关系, 探讨miR-422a对人结直肠癌细胞系HCT15生长和侵袭能力的调控机制。方法收集2017年8月至2018年1月在武汉大学中南医院实施结直肠癌手术切除标本65例, 收取结直肠癌组织及癌旁组织。采用实时定量反转录聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测组织中miR-422a及叉头框蛋白Q1(FoxQ1)的mRNA表达水平, 蛋白质印迹法(Western blot)分析检测组织中FoxQ1的蛋白表达强度。分析miR-422a与结直肠癌肿瘤生物学特征和FoxQ1 mRNA表达水平的相关性。RT-qPCR检测miR-422a在结直肠癌细胞中的表达, 并使用miR-422a模拟物转染人结直肠癌HCT15细胞。采用双荧光素酶活性实验验证miR-422a对FoxQ1的靶向作用。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖情况, Transwell小室法检测细胞侵袭, Western blot法检测FoxQ1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达。结果结直肠癌组织miR-422a的表...     

血管瘤中缺氧诱导因子-1α的表达和血管生成的研究

目的　探讨缺氧诱导因子- 1α(HIF-1α)在血管瘤中的表达以及其和血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、新生微血管密度 (MVD)的关系。方法　采用免疫组化SP法检测 2 8例婴幼儿血管瘤中HIF 1α、VEGF的蛋白表达和MVD。结果　 2 8例血管瘤中HIF-1α、VEGF的蛋白表达阳性率分别是6 4 % ,71.4 %。其中增生期和消退期HIF 1α阳性率分别为 87.5 %、33.3% (P <0.0 1) ,VEGF阳性率分别为 93.7%、4 1.7% (P <0.0 1) ;MVD分别为 73 4± 14 6 3、30 2± 9 1(P <0.0 1)。HIF 1α蛋白表达与VEGF成正相关 (P <0.0 1) ,HIF 1α和VEGF与MVD都成正相关 (P <0.0 1)。结论　血管瘤增生期血管内皮细胞存在着特殊的缺氧微环境 ,并通过HIF-1α表达水平提高调节VEGF等血管生成相关因子表达水平升高 ,促进了新生微血管生成     

敲除NET-1基因对肺癌细胞行为和肿瘤生长的影响

NET-1基因是新近报道的肿瘤相关分子基因,与肿瘤细胞增殖、迁移、浸润相关.我们通过靶向性短发卡RNA( shRNA)敲除肺癌A549细胞中NET-1基因的表达,研究其对A549细胞癌生物学行为的影响,进一步制备荷人肺腺癌裸鼠移植瘤模型,观察沉默NET-1基因后对裸鼠体内肿瘤生长的影响,探讨肺癌中NET-1基因表达的意义. 一、材料与方法 将NET-1基因的shRNA真核表达载体转染A549细胞,实时定量聚合酶链反应( RT-qPCR)、Western blot法分别检测细胞内NET-1 mRNA和蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞仪分别检测增殖与不同周期细胞百分比;     

肝细胞癌缺氧微环境下PHD2的表达及其与血管生成的关系

目的探讨脯氨酸羟化酶2(PHD2)蛋白在肝细胞癌(HCC)血管生成中的作用。方法 (1)采用免疫组织化学S-P法,检测72例肝细胞癌组织中的PHD2表达,结合肝细胞癌临床病理和MVD资料加以分析。(2)以不同浓度二氯化钴(CoCl2)诱导体外培养微血管内皮细胞(HMEC-1)缺氧。Western-blot方法检测PHD2、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平,基质胶内皮细胞二维成管实验检测HMEC-1细胞的成管能力。结果 PHD2在72例HCC组织中的阳性表达率22.2%(16/72),低于在癌旁肝组织中阳性表达率68.1%(49/72)。HCC组织中PHD2高表达组MVD计数(52.1±4.3)显著性低于PHD2低表达组(69.2±5.5)。CoCl2处理后HMEC-1细胞PHD2蛋白表达下调,HIF-1α蛋白降解减少,VEGF表达上调,HMEC-1细胞成管能力下降,与对照组(正常肝组织)比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论缺氧微环境下,PHD2表达水平下调,内皮细胞增殖,但细胞成管能力下降,是导致HCC瘤体血管成熟度下降,促进HCC侵袭转移的重要影响因素之一。     

槲皮素经抑制己糖激酶活性介导人肝癌Huh-7细胞的增殖、侵袭和转移

目的探讨槲皮素对人肝癌Huh-7细胞生物学行为及其己糖激酶(Hexokinase)活性的影响。方法 0 μmol/L(对照组)、100、150、200 μmol/L槲皮素处理Huh-7细胞, 24、48、72 h后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测Huh-7细胞的增殖能力, 24 h后采用Transwell法评估Huh-7细胞的迁移及侵袭能力;24 h后应用蛋白质印迹法(Western blot)及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测Huh-7细胞己糖激酶mRNA转录及蛋白水平表达变化;24 h后采用己糖激酶检测试剂盒检测细胞己糖激酶的活性改变。多组定量资料差异比较采用方差分析, 不同槲皮素浓度组的各个指标数值与空白对照组数值的均数间多重比较采用Dunnett法。结果 3种浓度的槲皮素处理Huh-7细胞增殖抑制率均高于对照组(24 h:38.438±6.787、45.776±5.463、56.376±6.457比0.000±0.000, F=102.593, P<0.001;48 h:56.395±6.503、75.124±10.216、83.943±6.297比...     

缺氧诱导因子1α对人羊膜间充质干细胞耐受缺氧能力影响的实验研究北大核心CSCD

目的通过瞬时转染缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因,观察缺氧处理后人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)成活及凋亡情况,探讨HIF-1α对hAMSCs耐受缺氧能力的影响。方法取健康剖宫产产妇自愿捐赠的羊膜组织分离、培养hAMSCs,通过倒置相差显微镜观察细胞形态及免疫荧光法检测干细胞标志物OCT-4、NANOG表达,对培养细胞进行鉴定。取第3代hAMSCs进行缺氧处理(200μmol/L CoCl_2)后,按以下分组瞬时转染对应质粒:A组为hAMSCs空白组,B组为pcDNA3.1阴性对照组,C组为shRNA阴性对照组,D组为shRNA-HIF-1α干扰组,E组为pcDNA3.1-HIF-1α过表达组。缺氧处理后12、24、48 h采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测各组细胞成活率;24 h采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,并采用Western blot检测HIF-1α、VEGF、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma2,Bcl-2)、Bax、活化型半胱天冬酶-3(cleaved Caspase-3,C-Caspase-3)蛋白表达。结果 CCK-8法检测示,缺氧处理后各时间点与A、C组比较,D组细胞成活率明显降低(P<0.05);与A、B组比较,E组细胞成活率明显升高,其中24 h组间比较差异有统计学意义(P<0.05);E组内24 h时细胞成活率明显高于12、48 h时(P<0.05)。流式细胞仪检测示,与A、C组比较,D组细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与A、B组比较,E组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。Western blot检测示,与A、C组比较,D组细胞中HIF-1α、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax、CCaspase-3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);而E组结果相反,与A、B组比较,E组细胞中HIF-1α、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax、C-Caspase-3蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HIF-1α基因过表达能够明显改善hAMSCs耐受缺氧能力,其机制可能与上调VEGF和Bcl-2表达及下调Bax和C-Caspase-3表达作用相关。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制胆囊癌血管生成的研究

目的探讨Oligofectamine介导的血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growthfactor,VEGF)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)转染对人胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠移植瘤的VEGF表达和血管形成的影响。方法裸鼠接种GBC-SD细胞建立移植瘤模型,随机分为A、B、C三组,各组裸鼠在接种1周后,分别给于200μl磷酸缓冲液(PBS)、VEGFSODN100μg Oligofectamine0.5μl及VEGF ASODN100μg Oligofectamine0.5μl,每3天1次,连续治疗5周,观察各组裸鼠的成瘤性、体积及瘤重的变化,各组移植瘤中VEGF表达及微血管密度(MVD)变化。结果三组裸鼠3周时的成瘤率,C组显著低于A、B两组(P<0.05),6周时各组的成瘤率无差异。各组移植瘤6周时的体积和瘤重相比C组显著低于A、B两组(P<0.05),C组的抑瘤率为(50.79±9.19)%。A、B两组移植瘤VEGF表达及MVD均无显著性差异(P>0.05),而C组移植瘤VEGF的表达较A、B两组明显减弱(P<0.05),MVD明显小于A、B两组(P<0.05)。结论VEGF ASODN在体内能显著抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的增殖,降低其在裸鼠体内的成瘤性,抑制VEGF在蛋白水平的表达,减少裸鼠移植瘤中血管的形成,降低微血管密度。     

圆柱瘤基因在非小细胞肺癌中的表达及其对增殖和转移特性的影响

目的探讨圆柱瘤基因(CYLD)在非小细胞肺癌中的表达及其对增殖和转移特性的影响。方法选取2021年6月到2023年12月阜外华中心血管病医院、河南省人民医院和郑州大学人民医院收治的93例非小细胞肺癌组织和癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析组织中CYLD mRNA表达水平;采用对照慢病毒和CYLD过表达慢病毒感染人非小细胞肺癌H1299细胞系, 建立对照组和CYLD组, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、EdU和体外移植瘤分析CYLD对细胞增殖的影响;采用划痕实验、Transwell实验和体外移植瘤分析CYLD对非小细胞肺癌的转移的影响。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析CYLD对细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)、c-MYC、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和活化因子蛋白1(AP1)蛋白表达水平的影响。组间计量数据比较采用t检验。结果癌旁组织CLYD蛋白表达水平(1.02±0.17)明显高于非小细胞肺癌组织(0.49±0.29), 差异有统计学意义(t=15.300, P<0.05)。癌旁组织CLYD...     

反义HIF-1α基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

摘要：目的:探讨反义HIF-1α基因对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的影响及其相关机制。方法:使用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。待肿瘤生长至直径约0.4cm时，将荷瘤裸鼠随机分为3组，分别注射生理盐水、质粒PcDNA3和HIF-1α/PcDNA3B，质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线；取肿瘤标本作免疫组织化学检查（SABC法）及蛋白质印迹检查，检测各组肿瘤的VEGF和HIF-1α表达及微血管密度（MVD）和细胞凋亡。结果:HIF-1α/PcDNA3B治疗组各时点的肿瘤体积，以及肿瘤组织中HIF-1α蛋白、MVD，VEGF表达均低于对照组，而细胞凋亡指数高于对照组，差异均有显著性（P＜0.05）。结论:通过阻断癌细胞的缺氧适应途径，反义HIF-1α基因治疗肝癌有抑制肿瘤生长、抑制肿瘤血管生成及诱导细胞凋亡的作用。     

PPIB蛋白对结肠癌成瘤的影响和低氧机制

目的:研究肽酰脯氨基顺反异构酶B(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIB)蛋白对结肠癌细胞成瘤的影响,探讨结肠癌低氧发病的机制。方法:应用RNAi技术,构建下调PPIB蛋白表达的稳转结肠癌细胞株,移植到BALB/c裸鼠皮下,检测PPIB蛋白下调组与对照组的成瘤差异。TUNEL法检测两组移植瘤的细胞凋亡水平。低氧培养结肠癌细胞株,Western印迹法检测PPIB的表达水平与低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的关系。结果:下调PPIB蛋白表达后,在裸鼠皮下成瘤的能力显著减弱。SW480-si PPIB下调组的移植瘤体积显著小于SW480-NC对照组(P<0.01)。TUNEL检测显示下调组的癌细胞凋亡比例显著高于对照组(P<0.001)。在低氧环境下培养后,结肠癌细胞的PPIB蛋白表达水平随着低氧条件下HIF-1α的上调而升高(P<0.05)。结论:PPIB蛋白在结肠癌中因为低氧环境而表达升高,且在升高后通过抑制癌细胞的凋亡而发挥促进结肠癌形成和进展的作用,是一个极具临床应用价值的防治结肠癌的分子靶点。