盐酸小檗碱对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、自噬及MAPK通路影响的研究

目的观察盐酸小檗碱对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、自噬及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响,探讨盐酸小檗碱治疗胃癌的可能分子机制。方法通过CCK-8实验检测0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.5 g/L的盐酸小檗碱培养24 h、48 h、72 h后胃癌SGC-7901细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测0 g/L(空白组)、4 g/L和8 g/L的盐酸小檗碱培养48 h后胃癌SGC-7901细胞凋亡情况,采用Western blot实验检测0 g/L(空白组)、4 g/L和16 g/L的盐酸小檗碱培养12 h后胃癌SGC-7901细胞中Bax、Caspase-3、Bcl-2、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin 1、RAS、p38蛋白表达情况。结果从2 g/L盐酸小檗碱浓度开始,胃癌SGC-7901细胞存活率随着盐酸小檗碱浓度的增加而逐渐降低,差异均有统计学意义(P均0.05);胃癌SGC-7901细胞凋亡率随着盐酸小檗碱浓度的增加而递增;与空白组比较,16 g/L盐酸小檗碱培养后胃癌SGC-7901细胞中Bax、Caspase-3、LC3Ⅱ、Beclin 1、RAS、p38表达量均显著增高,Bcl-2、LC3I蛋白表达量均显著减少,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论盐酸小檗碱可通过调控Bax/Bcl-2蛋白的表达抑制胃癌SGC-7901细胞增殖及促进其凋亡,可通过激活p38 MAPK信号通路诱导胃癌SGC-7901细胞发生自噬,从而达到对胃癌的干预和治疗作用。     

基于P38 MAPK信号通路探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌LNCaP细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞增殖、凋亡及p38 MAPK通路的作用。方法：应用CCK-8法观察扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪分析扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞凋亡的影响,Western Blot法检测LNCaP细胞p38 MAPK、p-p38MAPK、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53等蛋白的表达。结果：扶正利湿抗癌方含药血清能够以剂量依赖性地抑制LNCaP细胞增殖并诱导其凋亡,上调p-p38 MAPK、Bax、Caspase-3及p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平。结论：扶正利湿抗癌方含药血清可能通过激活p38 MAPK信号传导通路抑制LNCaP细胞增殖并促进其凋亡。     

补阳还五汤类方提取物对PC12细胞氧化应激损伤模型凋亡与自噬的调控

目的从凋亡与自噬的调控探讨补阳还五汤类方提取物对PC12细胞氧化应激模型的保护机制。方法以不同浓度H_2O_2刺激PC12细胞制备不同损伤程度的氧化应激模型,采用MTT法确定补阳还五汤类方提取物对氧化应激损伤初期和加剧期发挥保护作用的有效浓度,流式细胞术和TUNNEL法检测细胞凋亡情况,透射电镜和m RFP-GFP-LC3腺病毒双标法检测细胞自噬情况,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)与自噬相关蛋白(Beclin1、LC3A和LC3B)的表达。结果分别以0.5、2.0 mmol/L H_2O_2处理PC12细胞制备氧化应激损伤的初期模型和加剧期模型;与对照组比较,模型组细胞凋亡率增加,自噬程度加剧,Bax/Bcl-2比例增加,Beclin1和LC3B表达上调,LC3A表达下调(P0.05);与氧化应激损伤初期的模型1组比较,补阳还五汤类方提取物均能下调Bax/Bcl-2,抑制凋亡率,并一定程度上调Beclin1和LC3B/LC3A的表达,激活自噬(P0.05);当氧化应激损伤程度加剧时,模型细胞中出现较高水平的凋亡与自噬,此时,两方则通过抑制凋亡和降低自噬,共同发挥保护作用。结论补阳还五汤类方提取物可通过对凋亡与自噬的交互动态调控对不同程度损伤的氧化应激模型细胞挥发保护作用。     

冬凌草甲素联合免疫因子TRAF4对非小细胞肺癌细胞自噬和凋亡的影响及机制研究

[目的] 探讨冬凌草甲素联合免疫因子肿瘤坏死因子受体相关因子4（TRAF4）对非小细胞肺癌细胞自噬和凋亡的影响及机制研究。[方法] 选择不同浓度的冬凌草甲素处理A549细胞，然后采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞的活力。体外培养A549细胞，将细胞分为对照组、冬凌草甲素组、si-NC组（转染si-NC）、si-TRAF4组（转染si-TRAF4）、冬凌草甲素+pcDNA组（转染pcDNA后，选择冬凌草甲素浓度为20 μmol/L处理）、冬凌草甲素+TRAF4组（转染TRAF4后，选择冬凌草甲素浓度为20 μmol/L处理）。采用流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、微管相关蛋白1的轻链3（LC3）、Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1、自噬相关蛋白7（ATG7）和TRAF4蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测TRAF4 mRNA表达量。[结果] 不同浓度冬凌草甲素明显抑制细胞活力。冬凌草甲素组细胞凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、ATG7蛋白表达明显高于对照组；TRAF4 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显低于对照组。si-TRAF4组TRAF4 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显低于si-NC组；细胞凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和ATG7蛋白表达明显高于si-NC组。冬凌草甲素+TRAF4组TRAF4 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显高于冬凌草甲素+pcDNA组；细胞凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和ATG7蛋白表达明显低于冬凌草甲素+pcDNA组。[结论] 冬凌草甲素通过下调TRAF4的表达抑制非小细胞肺癌细胞的凋亡和自噬。     

大黄醇提物对氯化血红素诱导HT22细胞自噬和凋亡的影响

目的 探究大黄醇提物对氯化血红素诱导损伤后HT22细胞自噬与凋亡的影响。方法 将HT22细胞分为正常组、模型组和大黄醇提物高、中、低剂量组(25、12.5、6.25μg/mL),给药干预24 h后，以40μmol/L氯化血红素诱导3 h建立细胞脑出血损伤模型。造模结束后，CCK-8法检测细胞存活率，试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot法检测细胞凋亡及自噬相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin1及P62表达。结果 与正常组比较，模型组细胞存活率降低(P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax/Bcl-2、caspase-3、Beclin1、LC3蛋白表达升高(P<0.01),P62蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较，大黄醇提物各剂量组细胞存活率升高(P<0.05,P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax/Bcl-2、caspase-3、Beclin1、LC3蛋白表达降低...     

桑葚花色苷诱导人胃癌SGC-7901细胞自噬凋亡的研究

目的:观察桑葚花色苷对人胃癌SGC-7901细胞自噬和凋亡的作用及机制。方法:MTT法检测桑葚花色苷对SGC-7901细胞增殖的作用;流式细胞术分析桑葚花色苷对SGC-7901细胞凋亡的影响;Hoechst33342/PI活细胞染色观察凋亡细胞核形态学变化;透射电镜观察SGC-7901细胞的超微结构变化。Western blot检测SGC-7901细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和凋亡蛋白BAX、BCL-2及Caspase-8的表达。结果:桑葚花色苷能抑制SGC-7901细胞增殖,流式细胞术及Hoechst33342/PI双染结果显示桑葚花色苷可诱导SGC-7901细胞凋亡。透射电镜观察显示桑葚花色苷干预后的SGC-7901细胞发生自噬。Western blot证实桑葚花色苷可提高SGC-7901细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,BAX/BCL-2比值以及Beclin1、Caspase-8的表达。结论:桑葚花色苷能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,诱导细胞出现凋亡和自噬,其机制与上调SGC-7901细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,BAX/BCL-2比值及Beclin1、Caspase-8的表达有关。     

基于Akt/mTOR信号通路探讨洋地黄毒苷调控甲状腺滤泡上皮细胞自噬与凋亡的机制

目的 探究洋地黄毒苷对脂多糖刺激下的人甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-roi3-1凋亡与自噬的影响及其作用机制。方法 (1)将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷低剂量组、脂多糖+洋地黄毒苷中剂量组及脂多糖+洋地黄毒苷高剂量组,各组进行对应处理后,CCK-8法检测各组细胞活力,免疫荧光染色观察各组细胞自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bcl-2同源结构域蛋白抗体(Beclin 1)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70S6K蛋白表达情况。(2)将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷组、脂多糖+洋地黄毒苷+自噬抑制剂组,各组进行对应处理后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR及p70S6K蛋白表达情况。结果 (1...     

宣肺平喘胶囊基于p38磷酸化途径对COPD自噬影响研究

目的 探讨宣肺平喘胶囊是否通过抑制p38磷酸化而影响香烟烟雾提取物诱导的支气管上皮细胞自噬。方法 将支气管上皮细胞分为空白组、香烟烟雾提取物组、宣肺平喘低剂量组、宣肺平喘中剂量组、宣肺平喘高剂量组。以香烟烟雾提取物诱导支气管上皮细胞建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)细胞模型,空白组以空白血清培养,宣肺平喘各组加入宣肺平喘含药血清培养。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光显微镜观察自噬情况,Western blot法检测细胞中p38、p-p38、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin 1蛋白表达情况,RT-PCR法检测细胞中LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin 1 mRNA表达情况。结果 与空白组比较,香烟烟雾提取物组细胞活力均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、自噬水平和p-p38、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin 1蛋白表达量及LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin 1 mRNA表达量均显著增高(P均<0.05);与香烟烟雾提取物组比较,宣肺平喘各组细胞活力均显著增加(P均<0.05),细胞凋亡率、自噬水平和p-p38、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ...     

自噬在乌头碱诱导H_9C_2心肌细胞凋亡中的作用及机制研究

目的:观察自噬在乌头碱诱导H_9C_2心肌细胞凋亡中的作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以0.05%、0.1%、0.2%、0.4%浓度的乌头碱分别对H_9C_2心肌细胞作用30、60、90、180 min,采用MTT法测定乌头碱对H_9C_2心肌细胞的增殖抑制作用;0.05%乌头碱作用H_9C_2心肌细胞不同时间后,应用MDC荧光染色观察自噬的发生,Hoechst 33342/PI荧光双染观察凋亡的发生;并通过Western blot法检测自噬相关蛋白LC3B、Beclin-1和凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的变化。结果:乌头碱对H_9C_2心肌细胞增殖有显著的抑制作用,且该作用呈时间及浓度依赖性;MDC荧光染色和Hoechst 33342/PI双染检测结果显示乌头碱给药后可诱导H_9C_2心肌细胞发生自噬和凋亡;Western blot检测结果显示,自噬特异性蛋白LC3B和Beclin-1被激活,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达升高。用3-MA抑制自噬后,可下调LC3B、Beclin-1、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达。结论:乌头碱能抑制H_9C_2心肌细胞的生长,并诱导其发生自噬和凋亡,此过程中自噬和凋亡可能为拮抗作用,3-MA特异性抑制自噬后可增加乌头碱诱导的H_9C_2心肌细胞凋亡。     

活血消瘿方含药血清调控AMPK/mTOR通路对脂多糖诱导的甲状腺滤泡上皮细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨活血消瘿方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的甲状腺滤泡上皮细胞(TFECs)自噬和凋亡的影响以及作用机制。方法 光学显微镜观察分离培养的SD大鼠TFECs细胞的形态;免疫荧光染色鉴定TFECs中特异抗原甲状腺球蛋白(Tg)。取对数生长期的TFECs,分为对照组、LPS组、含药血清组、含药血清+compound C(AMPK抑制剂)组、含药血清+MHY1485(mTOR激活剂)组,MTT法检测各组细胞活力;绿色荧光蛋白(GFP)标记质粒转染检测各组细胞自噬小体变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡;western blot检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)I、LC3II、Beclin1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及AMP活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达。结果 光学显微镜观察显示,TFECs形态为梭形、形态均一,且可成簇生长。免疫荧光结果显示,TFECs细胞质中可见较强的Tg荧光染色。与对照组比较,LPS组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著降低,炎性因子IL-6 、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著升高(P< 0.05);与LPS组比较,含药血清组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著升高,炎性因子IL-6 、 TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著降低(P< 0.05);与含药血清组比较,含药血清+compound C组、含药血清+MHY1485组TFECs中相应指标与上述趋势相反。结论 活血消瘿方含药血清对LPS诱导的TFECs自噬的促进作用及细胞凋亡的抑制作用可能与激活AMPK/mTOR通路有关。     

青藤碱诱导人红白血病细胞株K562凋亡的实验研究

目的:通过青藤碱(Sinomeine,SIN)诱导K562细胞凋亡实验,研究SIN诱导K562细胞凋亡机制。方法:CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术(FMC)检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色细胞凋亡形态学改变,Real-time PCR检测bcl-2和bax基因表达,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:CCK-8和FCM结果显示,SIN可抑制K562细胞增殖并诱导其早期凋亡;Hoechst 33258染色结果显示,经SIN诱导48h后表现出细胞凋亡的典型变化;Real-time PCR结果显示,SIN组bax基因表达升高,bcl-2基因表达降低;Western blot结果显示,SIN组中Caspase-3、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低。结论:SIN可诱导K562病细胞凋亡从而抑制细胞增殖。     

基于Akt/mTOR通路研究地榆皂苷II诱导肝癌细胞凋亡和自噬作用机制

目的 探讨地榆皂苷II抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡和自噬的作用机制。方法 采用不同浓度（0、10、20、40 μmol/L）地榆皂苷II处理人肝癌HepG2细胞和小鼠肝癌Hepa1-6细胞,通过CCK-8和EdU实验观察地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6细胞增殖的影响;运用流式细胞术检测地榆皂苷II对细胞凋亡的影响;通过Western blotting检测地榆皂苷II对细胞凋亡和自噬相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cysteine-aspartic acid protease-3,Caspase-3）、Caspase-8、Caspase-9、B细胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、cleaved Caspase-3、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-II（microtubule-associated protein light chain3-II,LC3II）、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-Ⅰ（microtubule-associated protein light chain3-Ⅰ,LC3Ⅰ）、自噬相关蛋白p62、Beclin1及蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通路关键蛋白表达的影响。结果 地榆皂苷II显著抑制HepG2和Hepa1-6细胞活力,且呈现一定的剂量相关性;流式细胞检测发现地榆皂苷II给药后细胞凋亡率显著增加（P＜0.01、0.001）;Western blotting结果显示,与对照组比较,地榆皂苷II给药后Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2表达显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）,cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01）,LC3Ⅱ/LC3I值显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,Beclin1蛋白表达量显著升高（P＜0.05、0.01）,p62蛋白表达量显著下降（P＜0.05、0.01）,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR值显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 地榆皂苷II通过Akt/mTOR通路诱导HepG2和Hepa1-6细胞自噬和凋亡实现对肝癌细胞增殖的抑制,为抗肝细胞癌新药发现提供药理学证据。     

葛根素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及其分子机制研究

[目的] 探索葛根素（Puerarin）诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及其可能的分子机制。[方法] 以二甲基亚砜（DMSO，空白组）、葛根素（50、100、200 μg/mL）、顺铂20 μg/mL分别干预对数生长期人肝癌HepG2细胞。48 h后，CCK-8法检测细胞增殖抑制率，Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平，吖啶橙染色法观察细胞自噬状况，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、激活型半胱氨酸蛋白酶（Cleaved Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、酵母ATG6同源物（Beclin1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白表达。[结果] 与空白组比较，葛根素100、200 μg/mL组和顺铂20 μg/mL组HepG2细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高（P<0.01），自噬溶酶体数量明显增多（P<0.01），p-Akt、p-mTOR、bcl-2表达明显下调而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-I、LC3-Ⅱ表达明显上调（P<0.05或P<0.01），Akt磷酸化（p-Akt/Akt比值）降低且Bax/bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高（P<0.01）。与顺铂20 μg/mL组比较，葛根素200 μg/mL组细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高（P<0.05或P<0.01），自噬溶酶体数量明显增多（P<0.05），p-Akt、p-mTOR表达下调而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-Ⅱ明显上调（P<0.05或P<0.01），Akt磷酸化降低且Bax/Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-I比值升高（P<0.01）。[结论] 葛根素具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬的作用，该作用具有一定的剂量依赖性；抑制Akt/mTOR/Beclin1通路进而诱导促凋亡、促自噬相关蛋白表达和活化可能是其重要的分子机制。     

高良姜素促进胰腺癌PCNA-1细胞凋亡和自噬并抑制移植瘤生长

【目的】 探讨高良姜素对胰腺癌PCNA-1细胞的抑制作用及机制。【方法】 ①体外研究：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞相对存活率,确定高良姜素浓度与处理时间。先设置空白对照组,阳性药物对照组（40 μmol·L-1顺铂）,高良姜素低、中、高剂量组（20、40、80 μmol·L-1）。再设置空白对照组、高良姜素高剂量组、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）siRNA组（转染MAPK siRNA）、高良姜素+MAPK siRNA 组（转染MAPK siRNA +80 μmol·L-1高良姜素）。流式细胞术测定细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9、B细胞淋巴瘤蛋白2（Bcl-2）、Bcl-2相关的X蛋白（Bax）、微管相关蛋白 l 轻链 3（LC3）Ⅰ/LC3Ⅱ、P62、液泡分选蛋白 34（Vps34）、Beclin1,自噬相关蛋白质 Atg7、Atg5,p-MAPK/ MAPK的表达水平。②体内研究：裸鼠皮下注射PCNA-1细胞构建移植瘤模型,测量移植瘤体积和质量,蛋白免疫印迹法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、P62、Vps34、Beclin1、Atg7、Atg5的表达。【结果】后续细胞实验选择20、40、80 μmol·L-1高良姜素处理PCNA-1细胞24 h。与空白对照组比较,高良姜素高剂量组PCNA-1细胞凋亡率明显降低（P < 0.01）,Caspase-3、Caspase-9、Bax、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Vps34、Beclin1、Atg7、Atg5、p-MAPK/MAPK蛋白表达明显上调（P < 0.01）,Bcl-2 和P62蛋白表达水平明显下调（P < 0.01）,而抑制MAPK后可逆转上述现象。高良姜素可减小裸鼠胰腺癌PCNA-1细胞移植瘤体积和质量,各蛋白表达情况同细胞实验结果相一致。【结论】 高良姜素可通过活化MAPK促进胰腺癌PCNA-1细胞的凋亡和自噬,并抑制移植瘤生长。     

复方苦参注射液诱导自噬促进膀胱癌细胞凋亡机制的研究

目的 探究复方苦参注射液对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及自噬的影响,并探究其可能的分子机制,为复方苦参注射液在临床上治疗膀胱癌提供理论依据。方法 CCK-8法检测复方苦参注射液对T24细胞增殖的影响。流式细胞术检测复方苦参注射液对T24细胞凋亡的影响。MDC染色法检测复方苦参注射液对T24细胞自噬的影响。蛋白免疫印迹和免疫荧光实验检测复方苦参注射液对T24细胞凋亡关键蛋白和自噬关键蛋白的影响。结果 复方苦参注射液能有效抑制T24细胞增殖。复方苦参注射液能诱导T24细胞发生凋亡和自噬。蛋白免疫印迹和免疫荧光实验结果表明,随着复方苦参注射液剂量的升高,T24细胞中B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、自噬选择性底物（P62）的表达逐渐下降,B细胞淋巴瘤2相关X蛋白（Bax）、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cleaved-Caspase 3）、自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）、微管相关蛋白B轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）的表达逐渐升高（P<0.05）,Bcl-2/Bax比值逐渐减小（P<0.05）。结论 复方苦参注射液能抑制T24细胞的增殖、调节T24细胞自噬,诱导T24细胞凋亡。     

迷迭香酸抑制自噬诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

目的:观察迷迭香酸(RA)对HepG2细胞凋亡和自噬的作用,探讨自噬与凋亡之间的相互作用。方法:用不同浓度迷迭香酸作用于HepG2细胞24h、48h、72h。MTT法检测细胞存活率,观察迷迭香酸对HepG2细胞核形态的影响,流式细胞术检测细胞凋亡变化,台盼蓝染色法观察细胞自噬泡情况,透射电镜观察HepG2细胞的自噬变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bcl-2和自噬相关蛋白(LC3)、p62的表达水平。采用迷迭香酸+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)或迷迭香酸+雷帕霉素(RAP,自噬诱导剂)分别培养处理HepG2细胞,观察细胞增殖、细胞凋亡情况及相关蛋白表达变化。结果:与对照组相比,迷迭香酸(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)均能降低HepG2细胞的存活率,诱导HepG2细胞发生凋亡,具有量效和时效关系,减少细胞内自噬泡和自噬小体,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3、p62蛋白的表达。与迷迭香酸25μmol/L处理组相比,迷迭香酸25μmol/L+3-MA 1.0μM/mL应用可诱导HepG2细胞凋亡增加,可进一步减少细胞内自噬泡和自噬小体数目,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,进一步抑制HepG2细胞的自噬水平,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3和p62表达;迷迭香酸25μmol/L+RAP 1.0μM/mL处理HepG2细胞,增加细胞内自噬泡和自噬小体数目,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,可以抑制和逆转迷迭香酸诱导的细胞自噬水平下降,增加Bcl-2的表达,减少Cleaved Caspase-3和p62表达,细胞凋亡水平下降,这说明抑制或增强自噬时,迷迭香酸能改变对HepG2细胞的凋亡影响作用。结论:迷迭香酸可通过抑制自噬促进HepG2细胞的凋亡。     

健脾益肾化痰方通过VEGF/PI3K/AKT/FOXO1诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞自噬的实验研究北大核心CSCD

目的:观察健脾益肾化痰方含药血清对肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖、凋亡、自噬及SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白的影响,探讨健脾益肾化痰方通过上述蛋白诱导肺鳞癌细胞SK-MES-1自噬的可能作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、32.2 g/kg健脾益肾化痰方组,各组分别灌胃生理盐水或药物,连续7 d后收集血清;采用CCK-8法测定人肺鳞癌细胞株的存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3脂质体转染干预肺鳞癌细胞后自噬发生情况;Western Blot法检测对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1细胞Beclin1蛋白和LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白表达的影响。结果:32.2 g/kg健脾益肾化痰方含药血清各浓度组均能够有效抑制肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖,其抑制率与药物浓度呈正相关;与正常对照组相比,32.2 g/kg健脾益肾化痰方16%含药血清组使SK-MES-1细胞凋亡率明显增高(P<0.05);8%、16%含药血清组自噬小体显著增多(P<0.05);16%含药血清组SK-MES-1细胞内自噬相关蛋白Beclin1、LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ表达显著上调(P<0.01);FOXO1蛋白表达显著上调,VEGFR、PI3K、AKT蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:健脾益肾化痰方含药血清能够诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞发生自噬,其作用机制可能是通过调节VEGF/PI3K/AKT/FOXO1信号通路,上调SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3蛋白表达,促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ有关。     

青钱柳三萜对链脲佐菌素损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响

目的:观察青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响。方法:用链脲佐菌素(STZ)诱导INS-1细胞建立损伤模型。MTT法检测不同浓度青钱柳三萜对INS-1细胞增殖的影响,荧光酶标仪检测青钱柳三萜对胞内活性氧(ROS)含量的影响,用放射免疫法测定其胰岛素分泌能力,比色法测定上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量;比色法测定心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值,Western blot检测细胞中自噬调控蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和凋亡调控蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达。结果:当青钱柳三萜浓度低于25μg/ml时,无论单用青钱柳三萜还是与STZ联用均对INS-1细胞增殖具有促进作用,但是当其浓度大于100μg/ml或与STZ联用大于50μg/ml时,均对其细胞生长具有抑制作用;青钱柳三萜(6.25、12.5、25μg/ml)可抑制INS-1细胞凋亡,促进INS-1细胞分泌胰岛素,降低细胞内ROS含量;升高上清液中SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的蛋白表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,下调促凋亡蛋白Bax mRNA表达及Bcl-2/Bax,降低Caspase-9及Caspase-3的活性。结论:青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞具有较好的保护作用。它通过抑制STZ损伤的INS-1细胞过量产生ROS,增强内源性抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT的活性,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax表达及降低Caspase-9及Caspase-3的活性,进而提高INS-1细胞存活率,来发挥对受损INS-1细胞的保护作用。     

自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响。方法:以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L~(-1)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对HepG2细胞作用24,48 h,以四甲基偶氮唑盐(methye thiazolye telrazlium,MTT)比色法检测细胞活力;以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h,Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annxin V/propidium iodide,PI)双染检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色检测线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1,LC3,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的活性表达。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,使pro-Caspase-3,Bcl-2,LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P0.01),升高cleaved Caspase-3,Bax,Beclin-1,LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡,提高凋亡率(P0.01),增加其降低线粒体膜电位作用(P0.01),明显下调pro-Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P0.01),并上调Beclin-1,LC3,cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡,并诱导细胞自噬,自噬对凋亡有抑制作用。     

白花丹素对乳腺癌细胞凋亡和自噬的影响

目的观察白花丹素对乳腺癌细胞凋亡及自噬的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用不同浓度白花丹素作用于乳腺癌MCF-7和BT549细胞,CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),流式细胞术检测细胞凋亡情况,免疫荧光检测细胞内LC3B蛋白表达,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、LC3B、AMPK和p-AMPK蛋白表达。结果不同浓度白花丹素可抑制乳腺癌MCF-7和BT549细胞生长,抑制细胞克隆形成,其IC50分别为15.9μmol/L和13.51μmol/L;16、32μmol/L白花丹素处理后,MCF-7细胞MMP降低,ROS水平升高,Bcl-2蛋白表达降低,Bax、LC3BⅡ、p-AMPK蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。使用AMPK抑制剂(10μmol/L Dorsomorphin)或自噬抑制剂(5 mmol/L 3-MA)与白花丹素(32μmol/L)同时处理MCF-7细胞后,LC3BⅡ、p-AMPK蛋白表达较单独使用白花丹素(32μmol...