多成分含量测定结合UPLC指纹图谱及其模式判别评价子芩与枯芩质量

目的:建立子芩与枯芩的UPLC指纹图谱及其分析方法,从整体成分分析子芩与枯芩饮片质量的专属性差异。方法:采用UPLC法测定不同产地的子芩与枯芩样品,对比了黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A 5种成分的含量变化;分析两者UPLC的专属性差异特征和相似度评价,并采用主成分分析和偏最小二乘法判别20批子芩与枯芩的指纹图谱。结果:子芩中黄芩苷和汉黄芩苷含量较枯芩分别高28.87%、54.12%,其中子芩的黄芩苷含量范围在11.60%~13.03%之间,枯芩在8.01%~10.53%之间;子芩中黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A含量较枯芩明显较低,分别低70.37%、44.44%、59.09%;通过主成分分析、偏最小二乘判别分析发现子芩与枯芩差异明显,且不同产地也存在一定差异。结论:子芩和枯芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素以及千层纸素A的含量具有明显差异,其UPLC指纹图谱中黄芩苷(3号峰)与黄芩素(10号峰)峰面积比具有明显差异,具鉴别意义,同时其化学计量模式的识别也为子芩和枯芩的质量评价及品质研究提供了一定的参考。     

子芩与枯芩超高效液相色谱指纹图谱及模式识别研究

目的建立子芩与枯芩的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,为黄芩药材的鉴别和质量控制提供依据。方法采用UPLC对22批不同产地的子芩、枯芩进行测定,建立其特异性指纹图谱;运用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)对其进行模式识别研究,分类并筛选其主要差异性成分,并通过对照品比对进行鉴定。结果建立的子芩和枯芩UPLC指纹图谱稳定可靠,可用于评价两者的差异性;得到15个共有峰,各产地样品指纹图谱相似度较高。PCA不能完全区分子芩与枯芩,OPLS-DA能对子芩与枯芩进行明确区分,导致差异的主要成分有3个,经鉴定分别为黄芩新素Ⅱ、千层纸素A和黄芩素,且三者在子芩与枯芩中含量变化显著。结论本研究建立的指纹图谱和模式识别方法相结合能够区分子芩与枯芩,可作为黄芩质量控制和评价的有效手段之一。     

黄芩不同规格与化学成分及内在质量相关性的研究

目的:比较4种不同规格黄芩化学成分差异,研究枯心部位对药材化学成分的影响,为该药材生产、加工、销售、临床各环节的质量评价提供科学依据。方法:采用中药材鉴定学方法对不同规格黄芩药材的外观性状进行观察,采用HPLC指纹图谱方法对不同规格黄芩药材及枯心、非枯心部位的化学成分进行检测。结果:不同规格黄芩药材直径、长度以及枯心程度差异明显,因芩王、条芩一级样品全部可见枯心,作者将其分类为枯芩,条芩二级、末等品内部坚实,可分类为子芩。发现黄芩同产地不同规格样品指纹谱轮廓相似,但特征色谱峰相对峰面积有差异,枯芩的3对黄酮苷元和苷成分(黄芩素与黄芩苷、汉黄芩素与汉黄芩苷、千层纸素A与千层纸素A苷)的峰面积比值显著高于子芩。枯心部分的HPLC指纹谱总峰面积显著低于非枯心部分,但一些特征峰含量和3对成分的峰面积比值却高于非枯心部分,可视为区分枯芩和子芩的特征参数。结论:不同规格黄芩可分类为枯芩和子芩。枯芩和子芩化学成分特征不同,有必要进一步探讨二者药效的异同。该研究结果可为不同规格黄芩鉴别和质量控制及枯芩、子芩药效学物质基础研究提供参考依据。     

不同等级枯芩条芩有效成分含量比较

目的 建立黄芩中4 种成分的分析方法,对收集的市售不同等级的枯芩、条芩药材、饮片进行成分分析,为市场优质优价提供依据.方法 采用高效液相色谱法.色谱柱:Kromasil Eternity-5-C18(250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈溶液(A)-0.4%乙酸溶液(B),梯度洗脱;柱温:30 ℃;检测波长:280 nm;流速:1.0 mL/min.结果 条芩饮片中的黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素4 个成分含量总和比枯芩饮片低6.52%;而条芩药材(个子货)中4种成分含量总和比枯芩药材含量高21%～25%,其中主要是黄芩苷、汉黄芩苷含量较枯芩高.结论 本方法重复性好,准确,回收率好.所测4 种成分平均含量高低与枯芩条芩药材、饮片等级略呈正相关性.     

枯芩、条芩中无机元素与功效组分累积特征相关性研究

目的 通过考察枯芩、条芩、枯心部位中主要活性成分与无机元素含量的变化规律,拟揭示枯芩、条芩中功效物质基础组成特征,阐明传统两者“区别用药”的科学本质.方法 用HPLC-UV法测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的含量,UV-VIS法测定总黄酮含量,醇溶性浸出法测定浸出物含量;用火焰原子吸收光谱法测定Fe、Mn、Cu、Zn含量,...     

黄芩的谱效关系研究

目的:明确黄芩UPLC-MS/MS指纹图谱与其抗炎药效的相关性,为中药黄芩质量控制、药效物质基础等研究提供科学依据。方法:对黄芩进行谱效关系研究,以灰色关联度分析法对黄芩UPLC-MS/MS指纹图谱及黄芩抗炎药效信息相关联,寻找黄芩抗炎作用的药效物质基础。结果:建立了黄芩UPLC-MS/MS指纹图谱的共有模式,确定了能够表征黄芩特征的15个共有峰。不同批次的黄芩给药组与模型组相比,均能不同程度的降低湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型血清TNF-α的含量。黄芩UPLC-MS/MS指纹图谱的各共有峰与其抗炎药效作用的关联度均大于0.7。结论:通过谱效关系研究明确了黄芩发挥抗炎药效作用是黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等多成分共同作用的结果。     

枯芩中清热黄酮类药效组分的测定

目的:测定枯芩中4种黄酮类药效组分,为建立黄芩类中药与疗效对应的质量标准提供科学依据。方法:采用药对配伍组分-液相色谱综合分析法。结果:药效组分黄芩苷-黄芩素-汉黄芩苷-汉黄芩素含量为(75.83±7.25),(2.72±0.53),(18.62±2.89),(1.44±0.37)mg.g-1。结论:枯芩中黄酮类药效组分黄芩苷-黄芩素-汉黄芩苷-汉黄芩素,比例为52.44:1.89:12.88:1,有清热燥湿作用,与子芩比较有极显著性差异(P<0.01),建议分别建立黄芩类中药药效组分质量评价指标。     

葛根芩连汤中葛根和甘草对黄芩有效成分在大鼠肝代谢的影响

目的 研究葛根芩连汤中葛根和甘草对黄芩有效成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在大鼠肝微粒体代谢的影响,探讨该复方配伍机制.方法 采用在体诱导-体外肝微粒体温孵方法,分别考察葛根芩连汤中葛根、甘草对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在大鼠肝微粒体中代谢的影响,利用超高效液相色谱(UPLC)法测定大鼠肝微粒体中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的量.结果 温孵时间黄芩苷在0～90 min,汉黄芩苷在0～60 min,黄芩素在0～10 min,汉黄芩素在0～40 min呈线性消除.对照组各成分代谢速率大小顺序为:黄芩素＞汉黄芩素＞汉黄芩苷＞黄芩苷.与对照组相比,葛根对汉黄芩苷、黄芩素的代谢具有抑制作用,对黄芩苷及汉黄芩素的代谢具有诱导作用;甘草对汉黄芩素的代谢具抑制作用,对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的代谢则呈现诱导作用.结论 黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素可以被大鼠肝微粒体代谢,葛根芩连汤中葛根、甘草对黄芩有效成分的代谢过程有影响.     

基于多组学技术的枯芩“中枯而飘”性状特征研究

“中枯而飘”是枯芩药材重要的性状鉴定特征,该文旨在利用多组学技术阐明枯芩“中枯而飘”性状特征的科学内涵。该研究运用代谢组学、转录组学技术并结合主成分分析(PCA)及偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)等多元统计方法,系统比较了枯芩韧皮部、外层木质部、近枯心木质部在化学成分和基因表达方面的差异。研究结果表明,三者的黄酮苷及苷元含量存在显著差异,相较于韧皮部和外层木质部,近枯心木质部中黄芩苷、去甲汉黄芩素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷等黄酮苷类成分含量显著较低,而3,5,7,2′,6′-五羟基二氢黄酮、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A等黄酮苷元类成分含量显著较高。三者的差异表达基因主要集中在苯丙烷代谢、类黄酮生物合成、ABC转运蛋白、植物MAPK信号转导通路等KEGG途径。该文系统地阐明了高年限黄芩“中枯而飘”性状特征的物质基础,即近枯心木质部的黄酮苷元含量明显升高,黄酮苷水解、木间木栓合成、程序性凋亡等代谢通路基因表达显著上调,为引导枯芩药材的高品质生产提供了理论依据。     

基于化学模式识别方法分析止得咳颗粒的抗炎谱效关系

目的:研究止得咳颗粒HPLC指纹图谱与抗炎作用的谱效关系,探索其抗炎药效物质基础。方法:采用HPLC建立10批止得咳颗粒的指纹图谱并进行色谱峰归属,流动相甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长254 nm。综合应用相似度评价,聚类分析(HCA),主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)评价止得咳颗粒批间质量差异。采用偏最小二乘法(PLS)将指纹图谱共有峰与二甲苯致小鼠耳肿胀和小鼠棉球肉芽肿的抑制率进行关联性分析,筛选出对抗炎药效作用贡献较大的色谱峰。结果:止得咳颗粒HPLC指纹图谱标定了31个共有峰,10批样品相似度均≥0.992。HCA与PCA分析结果一致,均将样品分为3类;OPLS-DA结果发现15个成分是影响样品批间差异的主要标记物。不同批次止得咳颗粒样品均有不同程度的抗炎作用,PLS分析得出与抗炎作用呈正相关的色谱峰主要来自射干、黄芩,贡献较大的色谱峰为3,6,19,27～30号峰,其中28,30号峰依次为次野鸢尾黄素、汉黄芩素。结论:HPLC指纹图谱结合化学模式识别方法可为系统评价止得咳颗粒整体质量提供参考。止得咳颗粒对小鼠急、慢性炎症反应有一定的抑制作用,抗炎作用是多种成分共同作用的结果,射干、黄芩对该制剂发挥抗炎作用具有显著意义。     

基于指纹图谱及多组分含量测定的黄芩提取物质量控制研究

目的 建立黄芩提取物HPLC指纹图谱及多指标定量测定方法,为黄芩提取物质量控制及临床应用提供参考。方法 采用高效液相色谱法,建立18批次黄芩提取物的指纹图谱,基于指纹图谱相似性评价结合聚类分析（CA）、主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘-判别分析（OPLS-DA）,同时测定野黄芩苷等6种成分的含量。结果 18批黄芩提取物指纹图谱相似度均大于0.998,包含13个共有峰,指认其中8个成分。CA和PCA把样品分为两类,结合OPLS-DA筛选出导致各批次之间产生差异的5个差异性标志物,分别为3 （黄芩苷）、2号色谱峰、6（千层纸素A苷）、11（汉黄芩素）、4号色谱峰。野黄芩苷、千层纸素A苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A的平均加样回收率在99.43%～100.08%(n=9)范围内,RSD值均小于2%;6种成分分别在23.61～755.40 ng、182.40～5 836.90 ng、7.44～238.10 ng、17.66～565.20 ng、3.09～98.80 ng、7.02～224.70 ng范围内线性关系良好（r≥0.999 8）。结论 建立的HPLC指纹图谱及多指标成分...     

基于指纹图谱评价葛根芩连汤中药物的成分分析研究

目的:采用HPLC(高效液相)指纹图谱分析研究葛根芩连汤中药物的成分。方法:在指纹图谱研究方法中采用HPLC-DAD(高效液相-二极管阵列检测器),HPLC指纹图谱试验色谱条件:进样量为20μL,色谱柱选择直径5μm的Ultimate AQ C_(18)柱,柱温30℃,流动相A是0. 02 mol/L醋酸铵+0. 3%三乙胺+1%冰醋酸混合而成,最终PH值为4. 3;流动相B是乙腈,流速统一为0. 7 m L/min。检测波长通过预实验不断调整,最终葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、甘草酸铵和甘草次酸的检查波长为250 nm;黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和甘草苷检测波长为280 nm;余下对照品检测波长为346 nm;并对HPLC精密度试验、重复性试验、稳定性试验、专属性试验、加样回收率试验、线性回归试验等方法学进行严谨性考察,通过比较混合对照品溶液指纹图谱,葛根芩连汤单味药材指纹图谱和葛根芩连汤指纹图谱,分析研究葛根芩连汤中的14个药物成分。结果:1)精密度试验平均相对峰面积RSD为0. 38%,重复性试验平均相对峰面积RSD为1. 14%,稳定性试验平均相对峰面积RSD为1. 03%,专属性试验结果良好。2) 14个药物成分线性回归良好,且加样回收试验中平均回收率的范围是96. 45%～104. 69%,RSD的范围是为0. 65%～2. 11%。3)本研究根据不同的检测波长250nm、280 nm和346 nm,将混合对照品指纹图谱分为3张图,便于后续分析,同时标注14个对照品成分的峰号。4)在检测波长为250 nm时,葛根指纹图谱有11个特征峰,而甘草有2个特征峰;在检测波长280 nm时,黄芩有6个特征峰,而在检测波长346 nm时,黄连有4个特征峰。5)在葛根芩连汤的指纹图谱中显示波长250 nm时有12个特征峰,其中1～11主要体现葛根的药物成分特征,而12主要体现甘草的药物成分特征;波长280 nm时有7个特征峰,主要体现甘草和黄芩的药物成分特征;波长346 nm时有4个特征峰,主要体现黄连的药物成分特征。结论:从整体性解析葛根芩连汤剂HPLC指纹图谱的药物成分来源,为葛根芩连汤中含有的药物成分等物质基础、药理相关性研究提供实验基础。     

苦参汤黄酮类成分HPLC指纹图谱及其与组方药味黄芩和苦参的相关性研究

目的：建立苦参汤黄酮类成分的HPLC指纹图谱,研究该指纹图谱与组方药味黄芩和苦参的相关性。方法：采用HPLC方法,在检测波长280 nm 和365 nm下,建立苦参汤黄酮类成分的指纹图谱；通过分析苦参汤不同配伍的HPLC图谱,探讨全方指纹图谱共有指纹峰与处方药味的相关性；采用添加对照品分析方法对共有指纹峰进行化学成分确认。结果：在检测波长280 nm下,苦参汤黄酮类成分的HPLC指纹图谱有19个共有指纹峰,除2个峰来源于苦参外,其余峰均来源于黄芩,其中8个峰分别为黄芩苷/三叶豆紫檀苷、汉黄芩苷、木犀草素、黄芩素、千层纸素A、 5,8-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮、汉黄芩素和芒柄花素/白杨素。在检测波长365 nm下,有22个共有指纹峰,13个峰来源于黄芩,6个峰来源于苦参,其中11个峰分别为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、千层纸素A、 5,8-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮、汉黄芩素、白杨素/7-甲氧基黄酮、2′,4-二羟基-4′,6′-二甲氧基查耳酮、4,4′-二甲氧基查耳酮、黄腐醇和苦参啶。结论：在检测波长280 nm 和365 nm下获得的苦参汤黄酮类成分的HPLC指纹图谱共有指纹峰来源于组成药味黄芩和苦参,其中以365 nm为检测波长,建立苦参汤黄酮类成分的HPLC指纹图谱,更具代表性和全面性。     

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS 技术分析黄芩清肺汤中黄芩、栀子单煎与合煎的成分变化

目的研究黄芩清肺汤中黄芩、栀子配伍前后的成分变化,探讨二者配伍的合理性。方法采用超高效 液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱联用（UPLC-LTQ-Orbitrap-MS）技术建立黄芩、栀子配伍前后的化学指纹 图谱,通过正交偏最小二乘判别法分析药对配伍前后的化学成分变化,并对筛选到的化学标记物进行鉴定。 结果黄芩、栀子合并液与合煎液化学成分存在明显差异,合煎后京尼平苷酸（geniposidic acid）、栀子苷 （gardenoside）等含量显著下降,黄芩素（baicalein）、槲皮素（quercetin）等含量显著升高。结论黄芩清肺汤中黄 芩、栀子配伍后,可促进多种活性成分在合煎液中的溶出,这些成分可能是黄芩、栀子配伍协同增效的物质 基础。     

葛根芩连丸UPLC指纹图谱建立及7种成分测定

目的建立葛根芩连丸(葛根、黄芩、黄连、炙甘草)UPLC指纹图谱,并测定葛根素、黄芩素、巴马汀、汉黄芩素、大豆苷、大豆苷元、药根碱的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Waters ACQUITY UPLC~ BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm);甲醇-0.1%冰醋酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.3 m L/min;检测波长260 nm;柱温30℃。结果 10批样品指纹图谱中有25个共有峰,相似度大于0.98。7种成分在各自范围内线性关系良好(r0.999 0),平均加样回收率98.99%~103.6%,RSD 1.13%~2.03%。结论该方法简便可靠,重复性好,可用于葛根芩连丸的质量控制。     

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS谱-效相关的柴胡-黄芩药对解热质量标志物的筛选及含量测定方法的建立

目的 筛选柴胡-黄芩（柴黄）药对解热作用质量标志物（qualitymarker,Q-Marker）,并建立Q-Marker的UPLC含量测定方法。方法 采用均匀设计法建立柴黄药对配伍差异样品,利用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱质谱（UPLCQ-Exactive Orbitrap-MS）技术建立柴黄药对煎液指纹图谱,采用Thermo Scientific Hypersil Gold C18色谱柱（150 mm×2.1 mm,3μm）,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,并采用电喷雾电离,正离子扫描模式下进行质谱数据采集。采用新西兰兔耳缘静脉脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）注射的方法建立少阳证高热模型,以体温变化值作为解热药效指标,采用灰色关联度分析法建立指纹图谱中共有峰与解热作用的相关关系,筛选出关联性较大的成分作为柴黄药对解热作用的主要Q-Marker,采用UPLC建立Q-Marker含量测定方法。结果 筛选出黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、去甲汉黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、汉黄芩素、...     

葛根芩连汤单味提取物组方与传统汤剂功效成分一致性研究

正本研究拟通过建立高效液相色谱法(HPLC)单一色谱条件,同时测定葛根芩连汤中四味药的葛根素、大豆苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷和甘草酸铵7种成分含量的方法,探究以传统汤剂或单味提取物合并的用药方式对葛根芩连汤溶液及其沉淀中有效成分的影响。此外,建立HPLC指纹图谱比较的方法,研究单味提取物合并液与传统煎剂的溶液及其沉淀的指纹图谱的差异,阐述葛根芩连汤单味提取物组方用药的合理性,为葛根芩连汤相关制剂及其单味提取物组方用药方式的质量评价及临床科学使用提供参考。     

黄芩不同中医调剂品的HPLC指纹图谱比较研究

目的 比较黄芩不同中医调剂品黄芩生饮片、3种酒制黄芩、条芩与枯芩样品之间的HPLC图谱,探讨各组样品间的化学差异.方法 采用HPLC法.色谱条件:Hypersil ODS2 C_(18)柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-0.05%磷酸水溶液线性梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长280 nm.运用相似度软件、SIMCA-P与SPSS软件对指纹图谱进行分析.结果 不同黄芩指纹图谱组间分类明显,组内集中性好:生品与酒制品之何分类明显,差异很大;不同酒制品相比,酒炒和酒炒炭样品比较相近,酒烘与酒炒样品则差异明显;枯芩与条芩相比,差异明显.其中变化明显的成分是黄芩中黄酮类成分中极性较小的成分.结论 证明了古代中医区别用药的合理性,为黄芩质量控制及综合评价提供可靠的科学依据,并为黄芩合理用药提供参考.     

黄连-黄芩药对在泻心汤和葛根芩连汤组方配伍中主要成分的含量变化

目的：探索药对黄连-黄芩在泻心汤和葛根芩连汤组方不同配伍情况下其中所含小檗碱、巴马汀、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量变化。方法：采用HPLC以乙腈-10 mmol·mL^-1甲酸铵溶液（内含0.2%三乙胺,用甲酸调pH到4.00）为流动相进行梯度洗脱。结果：组方中黄芩、大黄、甘草使黄连中小檗碱、巴马汀含量降低,葛根使小檗碱、巴马汀含量增加。组方配伍中黄连使黄芩中黄酮类成分含量降低,大黄和甘草对黄芩苷含量的影响无显著性差异,但使黄芩素、汉黄芩素含量降低;葛根使黄芩苷含量降低,但使黄芩素、汉黄芩素含量增加。结论：该方法可以有效鉴定泻心汤和葛根汤中5种成分,不同配伍对5种有效成分含量有影响增加。     

基于超高效液相色谱指纹图谱和主成分分析法评价不同主产地半枝莲的质量＊

目的 建立半枝莲药材的超高效液相色谱（UPLC）指纹图谱，综合比较不同主产区的半枝莲质量；方法 采用UPLC建立半枝莲药材的指纹图谱，应用超高效液相飞行时间高分辨质谱技术对色谱峰进行指认；应用PCA法对UPLC指纹图谱进行分析。结果 半枝莲药材UPLC指纹图谱共11个共有峰，其中4个为野黄芩苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、野黄芩素、芹菜素；产自河南、安徽和四川3个产地的半枝莲药材相似度为0.871 ~ 0.999；从主成分分析来看，野黄芩苷、芹菜素-7-O-葡糖糖苷、成分1、4、6、7、8及10在半枝莲质量上起重大作用。结论 UPLC指纹图谱结合PCA可以客观地评价不同主产地半枝莲药材的质量及各成分对质量的贡献。