C-KIT抑制剂对过敏性哮喘气道炎症反应的作用及机制探讨

目的研究C-KIT抑制剂对过敏性哮喘小鼠气道炎症的作用及机制。方法使用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)构建过敏性哮喘小鼠模型,收集支气管肺泡灌洗细胞进行细胞定量和定性分析,使用IL-13处理细胞并检测细胞中内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER)蛋白的表达和信号通路状态,处死小鼠后收集其肺部组织,通过免疫组化检测内质网应激标志物的表达,通过免疫印迹分析相关蛋白表达;通过RNA模拟物诱导肺上皮细胞中C-KIT的过表达,使用IL-13处理细胞并检测相关蛋白的表达。结果 OVA可以诱导野生小鼠气道炎症,促进杯状细胞增生,增加嗜酸性理细胞比例,促进内质网应激标志物的表达,而c-kit敲低/C-KIT抑制剂处理可以抑制OVA诱导的ER应激和炎症反应;体外实验显示,相对于敲除小鼠,野生小鼠肺部细胞中IL-13表达增加,从而促进PI3K/Akt/NF-κB的激活并诱导ER,c-kit敲低/C-KIT抑制剂处理可以抑制IL-13表达,并下调PI3K/Akt/NF-κB的激活。结论 C-KIT抑制剂能够通过抑制PI3K/AKT信号通路减轻IL-13诱导的内质网应激,从而起到治疗过敏性哮喘小鼠模型中的气道炎症的作用。     

炎症介导的PI3K/Akt/Sp1信号通路激活及内源性H_2S生成加剧重症急性胰腺炎肠道损伤

目的:探讨内源性硫化氢(hydrogen sulphide,H_2S)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肠道动力的调控及相关机制。方法:构建SAP大鼠模型,观察大鼠粪便颗粒的排出情况及肠道炎症水平;采用SAP大鼠血浆、TNF-α和IL-6处理大鼠肠道平滑肌细胞,RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色等方法检测H_2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)、胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)、转录因子Sp1和PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达;采用PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞或转染Sp1的干扰序列至细胞中,以验证PI3K/Akt/Sp1信号通路在肠道H_2S产生过程中的调控作用。结果:SAP大鼠排便减少(P0.05),内源性H_2S生成增加(P0.05),血清TNF-α和IL-6含量增加(P0.05)。SAP大鼠血浆、TNF-α和IL-6可诱导肠道平滑肌细胞CSE和CBS的表达上调(P0.05)。阻断PI3K/Akt/Sp1信号通路可以显著抑制肠道平滑肌细胞CSE和CBS的表达(P0.05)。结论:炎症反应介导的PI3K/Akt/Sp1信号通路激活和内源性H_2S产生增多是SAP肠道动力减退的潜在机制。     

IL-8通过激活PI3K/AKT通路促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

为研究IL-8对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制,应用免疫组织化学法检测结肠癌组织和正常癌旁组织中IL-8的表达;MTT法检测不同浓度IL-8处理或抑制PI3K/AKT信号通路后结肠癌细胞SW480的增殖情况;Western blotting检测IL-8处理后SW480细胞中p-AKT、t-AKT蛋白的表达;Transwell法检测抑制PI3K/AKT通路或IL-8处理后SW480细胞的迁移和侵袭能力。结果显示,与癌旁组织相比,结肠癌组织中IL-8的表达水平明显提高;IL-8处理后SW480细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增加,且PI3K/AKT通路异常激活;抑制PI3K/AKT通路可逆转IL-8对SW480细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。由此IL-8可促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与激活PI3K/AKT通路有关,可为IL-8在结肠癌中的治疗提供参考。     

PI3K / Akt 通路调节LPS 诱导的小胶质细胞内HSPA12B 表达

目的:探讨PI3K/ Akt 通路对内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞内热休克蛋白A12B(Heat shock proteins A 12B,HSPA12B)表达的影响。方法:体外培养小胶质细胞,并分三组处理:对照组、0.1 μg/ ml LPS 刺激组、PI3K/ Akt 通路抑制LPS 刺激组。Western blot 法检测小胶质细胞内HSPA12B 和Akt 磷酸化的蛋白水平表达,间接免疫荧光标记法检测HSPA12B 在小胶质细胞中的细胞表达定位。结果:LPS 刺激2 h 后,小胶质细胞内HSPA12B 和Akt 磷酸化的表达增加;应用LY294002 预处理后,LPS 诱导HSPA12B 蛋白水平表达显著抑制。免疫细胞荧光染色证明小胶质细胞LPS 组HSPA12B 核周荧光强度明显增强,LY294002 预处理组HSPA12B 荧光强度明显减弱。结论:PI3K/ Akt 途径参与调控LPS 诱导小胶质细胞HSPA12B 表达。     

PI3K/Akt调控内质网应激对GRP78的诱导

目的: 研究内质网应激条件下PI3K/Akt信号通路对HEK293细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平的调控作用。方法: 采用PI3K抑制剂LY294002、Akt1失活型突变载体Akt1(K179M)及Akt siRNAs阻断内质网应激介导的Akt活化,采用Akt激活型突变载体Myr-Akt过度激活内质网应激介导的Akt活化,并利用RT-PCR和Western blotting技术分析内质网应激条件下PI3K/Akt信号途径对HEK293细胞中GRP78表达水平的调控作用。结果: LY294002、Akt1(K179M)及Akt1 siRNA均明显抑制了内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt1明显促进内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt2/3及Akt2/3 siRNA对GRP78的诱导均无影响。PI3K/Akt信号通路阻断或过度激活对GRP78 mRNA水平的诱导无影响,但是对GRP78的降解有显著影响。结论: HEK293细胞中,PI3K/Akt通过蛋白稳定性调节促进内质网应激对GRP78的诱导。     

磷脂酰肌醇3-激酶通路对脂多糖预激动小胶质细胞高迁移率族蛋白1表达的影响

目的 探讨磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinaseB,P13K/Akt)通路对脂多糖 (lipopolyssacride,LPS)预处理体外培养大脑皮质小胶质细胞高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1protein 1,HMGB-1)表达的影响.方法 体外分离纯化小鼠大脑皮质小胶质细胞,纯度鉴定后按未刺激对照组、0.01μg/mL LPS单次刺激组(18 h)、1μg/mL LPS刺激组(24 h)、预处理组、PI3K/AKT通路抑制组(2 h)分别进行处理.收获各组细胞与培养上清,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌水平,免疫荧光法检测HMGB-1在细胞中的定位情况,Western blot 检测 HMGB-1和磷酸化Akt的表达水平.结果 PI3K/Akt通路抑制后,LPS预刺激小胶质细胞产生的TNF-α水平较1μg/mL单次刺激组、预刺激组水平降低(P=0.043;P=0.046);磷酸化Akt表达降低,小胶质细胞HMGB-1表达以及向胞浆中转位呈现降低趋势.结论 PI3K/Akt通路在LPS预激诱导的HMGB-1活化中起正性调节作用,这些分子及调节通路的变化参与LPS耐受诱导的重新调配过程,从而共同影响小胶质细胞的最终效应.     

白细胞介素37缓解氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮祖细胞损伤和炎症

目的探究白细胞介素37(IL-37)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮祖细胞损伤和炎症的影响。方法从健康人的外周血中分离并培养内皮祖细胞,使用不同质量浓度的ox-LDL刺激后以CCK-8检测细胞活力,并用real-time PCR和Western blot检测IL-37 mRNA和蛋白水平表达。然后将内皮祖细胞分成3组:对照组、ox-LDL组和ox-LDL+IL-37组,其中对照组中细胞不进行任何处理,ox-LDL组细胞使用适宜质量浓度的ox-LDL处理24 h,ox-LDL+IL-37组细胞先使用10 ng/ml IL-37重组蛋白预处理2 h后,再加入适宜质量浓度的ox-LDL刺激24 h。CCK-8检测各组细胞活力,BrdU检测细胞增殖情况,Western blot检测凋亡相关蛋白剪切型Caspase-3、Bax、Bcl-2,NF-κB活化相关蛋白NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)以及PI3K/Akt通路蛋白表达水平,ELISA检测细胞上清液中IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。结果 ox-LDL显著抑制内皮祖细胞的活力,降低细胞中IL-37 mRNA和蛋白表达,且具有剂量依赖性(P0.05)。与对照组相比,ox-LDL组中细胞活力和BrdU阳性细胞数目均降低,剪切型Caspase-3和Bax表达、p-p65/p65以及IL-6和TNF-α含量增加,Bcl-2表达、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt降低(P0.05)。与ox-LDL组相比,ox-LDL+IL-37组细胞活力和BrdU阳性细胞数目均增加,剪切型Caspase-3和Bax表达、p-p65/p65以及IL-6和TNF-α含量降低,Bcl-2表达、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt增加(P0.05)。结论 IL-37通过抑制炎症减弱ox-LDL诱导的内皮祖细胞损伤,这可能是通过激活PI3K/Akt通路发挥作用的。     

磷酯酰肌醇3激酶抑制剂对碱性成纤维细胞生长因子诱导的平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的:研究磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂Wortmannin (WT)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移及磷酸化Akt蛋白表达的影响,为探讨bFGF诱导平滑肌细胞增殖和迁移的信号通路提供实验依据.方法:采用细胞计数、划痕损伤实验和免疫印迹法,观察Wortmannin对bFGF诱导的VSMCs增殖、迁移及磷酸化Akt表达的影响.结果:干预后24h, bFGF组VSMCs增殖、迁移较对照组明显增强,同时磷酸化Akt的表达平行增高.加用Wortmannin后,明显抑制了VSMCs的增殖、迁移和磷酸化Akt的表达.结论:bFGF诱导的VSMCs增殖和迁移可能是通过PI3K/Akt信号通路发挥作用.     

胡椒碱抑制LPS活化的人结肠腺癌细胞SW480表达IL-8的作用机制研究

目的研究胡椒碱(piperine,PIP)对脂多糖(LPS)活化的人结肠腺癌细胞SW480表达炎症因子的调节效应及可能的作用机制。方法采用WST-1法检测PIP对SW480细胞增殖的作用,利用流式微球捕获蛋白定量技术(cytometric beads array,CBA)检测炎症因子的蛋白表达水平,以实时定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子mRNA的表达水平,免疫印迹法检测p38MAPK信号通路和JNK信号通路的活化水平。结果 PIP处理可剂量依赖性地抑制SW480细胞的增殖,但PIP对细胞的毒性较小;CBA检测结果显示PIP以剂量依赖性方式抑制LPS诱导的SW480细胞中IL-8的分泌;实时定量RT-PCR检测显示,LPS+PIP处理组与LPS刺激组相比,IL-8的mRNA表达水平明显下降;免疫印迹分析表明,PIP可抑制LPS诱导的p38和JNK MAPK信号通路的活化水平。结论 PIP能够抑制LPS激活的人结肠腺癌细胞SW480中IL-8的分泌从而发挥抗炎作用,其机制可能与抑制p38和JNK MAPK信号通路有关。     

CCN1在脂多糖诱导急性肺损伤中的表达调控和在炎症反应中的作用

目的:体内观察富半胱氨酸蛋白61(CYR61/CCN1)在正常肺组织中的表达定位和在脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤中的表达变化,体外研究LPS调控CCN1表达的分子机制和CCN1在LPS诱导炎症介质表达中的作用。方法:分别通过免疫组化(IHC)染色及免疫荧光法观察CCN1在小鼠肺组织和气道上皮细胞16HBE中的表达定位;气道滴注LPS建立小鼠急性肺损伤模型,IHC观察CCN1在肺组织中的表达变化;体外研究中,分别予气道上皮16HBE细胞以ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂预处理2 h后加入LPS刺激,通过RT-qPCR和Western blot检测CCN1的mRNA和蛋白表达变化;分别通过CCN1-siRNA和重组CCN1蛋白刺激16HBE细胞,qPCR检测炎症介质白细胞介素6(IL-6)、IL-8、转化生长因子β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA水平。结果:CCN1在正常肺组织中以气道上皮表达为主,在LPS诱导的急性肺损伤小鼠气道上皮细胞中CCN1表达升高;LPS可刺激16HBE细胞中CCN1的表达水平升高,其中ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂可以不同程度逆转LPS诱导的CCN1表达升高。重组CCN1蛋白可以诱导16HBE细胞中IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成,干扰CCN1可以部分逆转LPS刺激后IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成。结论:气道上皮来源的CCN1在急性肺损伤中表达升高,其表达调控涉及ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路;CCN1在介导LPS诱导的炎症介质表达过程中发挥了重要作用。本研究为未来急性肺损伤诊治的潜在靶点提供了一定的理论基础。     

IL-1β通过激活PI3K/AKT1/STAT3轴诱导IL-6分泌和胶质母细胞瘤增殖

为探讨IL-1β促进胶质母细胞瘤增殖的作用机制,采用ELISA和CCK8法检测IL-1β对IL-6产生和胶质母细胞瘤增殖的影响;Western blotting检测PI3K/AKT1/STAT3蛋白的活化及其在IL-1β诱导的IL-6产生和胶质母细胞瘤增殖中的作用;采用荧光素酶报告基因实验检测STAT3激活对IL-6基因启动子活性的影响。结果显示,IL-1β不仅能促进胶质母细胞瘤的增殖,而且能促进肿瘤细胞IL-6的产生。此外,IL-6中和抗体能显著抑制IL-1β诱导的胶质母细胞瘤增殖(P<0.01)。机制研究表明,IL-1β刺激可提高胶质母细胞瘤细胞AKT1和STAT3的磷酸化水平,抑制PI3K、AKT1和STAT3的表达也能降低IL-1β诱导的IL-6生成和胶质母细胞瘤增殖。PI3K/AKT1激活的STAT3能与IL-6启动子结合,诱导IL-6的基因转录。该研究提示,IL-1β通过PI3K/AKT1/STAT3信号通路激活介导IL-6分泌促进胶质母细胞瘤增殖。     

Akt、ERK1/2活化在脑源性神经营养因子促血管新生中的作用

目的： 探讨脑源性神经营养因子(BDNF) 促进血管新生的作用及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。 方法: 以人脐静脉内皮细胞为对象,采用Western 印迹方法检测细胞内磷酸化Akt、ERK1/2蛋白质的表达； 采用Transwell小室迁移实验、管腔形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力，MTT法检测内皮细胞增殖 活性，FITC-Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡。 结果: BDNF以时间依赖性方式激活PI3K/Akt 和MEK1/ERK信号通路。分别应用PI3K激酶抑制剂Ly294002、 MEK1激酶抑制剂PD98059可以明显阻断BDNF对PI3K/Akt、MEK1/ERK信号通路的激活。100 μg/L 的BDNF体 外促内皮细胞血管新生能力与 25 μg/L 血管内皮生长因子（VEGF）相当， 其中BDNF诱导的细胞迁移分 别被Ly294002和PD98059阻断，其抑制率分别约为74%和36%；同样，Ly294002、PD98059可部分阻断BDNF诱 导的小管形成效应，其阻断率分别约57%和37%；而BDNF的促增殖效应仅被PD98059拮抗，抑制凋亡效应仅受Ly294002影响。 结论: BDNF在体外有促血管新生的作用。PI3K/Akt 和MEK1/ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI3K/Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

乙肝病毒X 蛋白结合蛋白可能通过PI3K / Akt 信号通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)通过调控PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常肝脏细胞HL7702和肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白表达;以肝癌细胞HepG2为研究对象,MTT实验、划痕实验检测过表达HBXIP及抑制HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的影响,Western blot检测过表达HBXIP的肝癌细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达,分析PI3K抑制剂(LY294002)对过表达HBXIP的肝癌细胞增殖和迁移的影响。结果:与HL7702细胞比较,肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白相对表达水平均明显升高(P0.05);过表达HBXIP能够促进肝癌细胞增殖和迁移能力,促进肝癌细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达,而沉默HBXIP后肝癌细胞增殖和迁移能力降低;使用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路能够逆转过表达HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的促进作用。结论:HBXIP在肝癌细胞中高表达,可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移。     

机械张应变诱导的大鼠血管平滑肌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路相关基因的筛选

目的 筛选机械张应变诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的相关基因.方法 应用FX-4000T 细胞应变加载系统,对大鼠主动脉VSMCs施加1 Hz、10 % 张应变,Western blotting检测细胞在不同加载时间下Akt磷酸化水平的变化;用抑制消减杂交法(SSH) ,筛选给予PI3K的抑制剂Wortmannin和给予DMSO 两组细胞在加载张应变24 h后的差异表达基因片段,得到的消减杂交产物连接到T 载体上,经过蓝白斑筛选,对所有阳性克隆进行菌液PCR筛选及测序,应用BLASTN进行序列比对.结果 机械张应变改变了VSMCs磷酸化Akt水平;SSH所获得的54个克隆随机挑选30个送测序,得到10个不同差异表达序列标签(EST),发现6个EST代表的大鼠基因可能与机械张应变诱导的VSMCs PI3K/Akt信号通路相关,它们是:High mobility group box 1(HMGB1), Neural precursor cell expressed(Nedd4a ), Cyclin-dependent kinase 5(CDK5), Histone deacetylase 3(HDAC3), Ubiquitin-like 1(Uble1a), Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H1(hnRNP).结论 SSH有效筛选到了机械张应变诱导的VSMCs PI3K/Akt信号通路的相关基因,为进一步研究机械张应变诱导的血管病理生理改变提供了资料.     

PI3K/Akt信号通路在脓毒症肾脏损伤诱导的自噬中的调节作用*

 目的：研究脓毒症造成肾脏损伤时的自噬情况以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调节作用。方法：对大鼠盲肠进行结扎与穿刺（CLP）,对肾脏组织切片进行HE染色,并测定血清尿素氮和肌酐。通过Western blotting定量分析CLP大鼠肾脏损伤发生后不同时点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3（LC3）Ⅰ/Ⅱ、beclin-1和Akt蛋白磷酸化的表达情况;体外用LPS诱导人近端肾小管上皮细胞株HK-2发生自噬,检测不同浓度LPS和不同刺激时间自噬相关分子LC3Ⅰ/Ⅱ和Akt蛋白磷酸化的表达情况;进一步使用PI3K抑制剂、Akt抑制剂和LPS刺激HK-2细胞观察自噬相关蛋白的表达情况及细胞的凋亡水平。结果：同对照组相比,CLP大鼠显微镜下可见肾损伤的典型病理改变,血清尿素氮和肌酐均有上升。CLP肾脏损伤发生后,自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ、beclin-1含量及Akt磷酸化水平均有上升。LPS刺激HK-2细胞后,随着刺激浓度的增加,p-Akt(308)表达量逐渐提高,而LC3Ⅰ/Ⅱ及p-Akt(472)的表达量在10 mg/L LPS刺激组最高。随着刺激时间的延长,p-Akt(308)表达量逐渐提高;LC3Ⅰ/Ⅱ表达量同p-Akt(472)在刺激8 h时最高;使用PI3K抑制剂及Akt抑制剂后,LPS诱导的LC3表达显著下调,HK-2细胞凋亡明显增加。结论：CLP肾脏损伤发生时可以诱导自噬发生, PI3K／Akt信号通路在其中发挥重要调节作用。     

IL-6通过PI3K/Akt信号通路促进肾癌细胞恶性转化的研究

目的研究白细胞介素-6 (IL-6)作用于肾癌细胞后PI3K、Akt等蛋白的变化,以阐明其作用机制。方法采用免疫组化法检测肾癌组织中IL-6相对表达水平;采用细胞侵袭实验检测IL-6对肾癌细胞A498侵袭能力的作用;采用Western blotting实验和荧光定量PCR实验检测IL-6作用后肾癌细胞A498内恶性转化相关蛋白水平。结果肾癌患者肿瘤组织中IL-6水平明显高于癌旁组织(P0.05)。与其它浓度相比,10ng/mL IL-6对肾癌细胞A498侵袭能力刺激最强(P0.05)。IL-6刺激A498细胞后,E-cadherin和p53表达水平下降(P0.05),而vimentin,MDM2,PI3K和Akt蛋白,PI3K和Akt mRNA表达水平上升(P0.05)。结论 IL-6激活肾癌细胞的PI3K/Akt信号通路,降低p53表达水平,促进肿瘤细胞发生EMT,提高肾癌细胞的侵袭能力。     

鸢尾素抑制JAK/STAT3通路促进炎症状态下的血管生成

目的　研究急性炎症状态下鸢尾素对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）血管生成的影响及其机制。 方法　通过CCK-8检测不同浓度（0.1、1.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL）的鸢尾素对HUVEC增殖的影响;用脂多糖诱导HUVEC急性炎症状态,通过划痕和成管实验,研究鸢尾素对细胞迁移及管样形成的影响,通过RT-PCR研究相关细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、PDGF-BB的基因表达;Western blot检测JAK／STAT3信号通路中关键蛋白Erk1／2、Jak、Stat3的表达。 结果　各浓度的重组鸢尾素均不影响HUVEC的增殖;在急性炎症状态下,鸢尾素可以促进HUVEC细胞迁移和管样形成,并且抑制HUVEC炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因的表达,增加组织修复相关因子PDGF-BB的基因表达;鸢尾素抑制LPS诱导的JAK／STAT3通路激活。 结论　鸢尾素可以抑制JAK／STAT3信号通路,缓解LPS诱导的HUVEC急性炎症状态,促进血管新生。     

S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移

 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用。方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6, rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和05 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt, t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt, p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。 结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P<005）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P<005）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降103%～697%,细胞迁移率下降379%～416%,差异均有统计学意义（P<005）。 结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

双氢睾酮对Aβ_(1-42)诱导的突触损害的保护作用

目的:探讨双氢睾酮(DHT)对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞突触损害的影响及机制。方法:本研究分为对照组、Aβ_(1-42)组、DHT组及Aβ_(1-42)+DHT组,以Aβ_(1-42)处理SH-SY5Y细胞建立突触损害细胞模型,予DHT预处理,利用Western Blot及免疫荧光检测突触后致密区蛋白95(PSD-95)、Homer-1蛋白的表达变化,并采用磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路阻断剂LY294002观察PI3K/Akt信号通路在DHT突触保护过程中的作用。结果:Aβ_(1-42)可剂量依赖地下调SH-SY5Y细胞PSD-95、Homer-1蛋白的表达。而DHT预处理则可显著增加Aβ_(1-42)处理的SH-SY5Y细胞PSD-95、Homer-1的表达,该效应可被PI3K/Akt特异抑制剂LY294002所逆转。结论:DHT可通过激活PI3K/Akt信号通路逆转Aβ_(1-42)诱导的突触损害。     

RANTES对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制研究

目的:探讨RANTES对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:利用MPP~+处理PC12细胞建立帕金森细胞模型,并分别转染RANTES siRNA和pcRANTES,MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blot检测总Akt(t-Akt)、磷酸化-Akt(p-Akt)和cleaved caspase-3蛋白表达水平。结果:RANTES siRNA显著抑制RNATES的表达,而pc DNA RANTES成功使RNATES过表达;过表达RNATES可显著上调MPP~+处理的PC12细胞增殖(P0.05),并抑制MPP~+诱导的PC12细胞凋亡(P0.05),下调cleasved caspase-3蛋白表达水平(P0.05)。此外,过表达RANTES可显著促进p-Akt/t-Akt蛋白表达水平(P0.05),且PI3K/Akt通路抑制剂LY294002显著抑制RNATES对PC细胞增殖的促进作用和凋亡的抑制作用(P0.05)。结论:RANTES可通过PI3K/Akt信号通路促进MPP~+处理的PC12细胞的增殖并抑制细胞的凋亡。