Puerarin逆转K562/AO2耐药的分子机制

目的:研究黄酮类化合物puerarin对K562/A02(人红白血病多药耐药细胞系)细胞耐药逆转作用的分子机制.方法:免疫荧光染色方法检测阿霉素(ADR)和puerarin对K562(人红白血病细胞系)和K562/A02两种细胞NF-кB活性的影响;免疫细胞化学染色方法检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的survivin表达的影响;流式细胞仪检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的P-gP表达的影响.结果:经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞NF-кB的活性明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的NF-кB的活性明显低于只用ADR处理的K562细胞.经puerarin干预后的K562/A02细胞的NF-кB的活性明显低于未经puerarin干预的K562/A02细胞;经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞的p-gP,survivin表达明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的p-gp,survivin表达明显低于未经pu-erarin预处理的K562细胞;经puerarin干预后的K562/A02细胞的p-gp,survivin表达明显低于未经puer-arin干预的K562/A02细胞.p-gp和survivin表达呈正相关.结论:NF-кB的活化使p-gp和survivin表达增多可能是K562细胞多药耐药形成的机制之一.Puerarin能预防和阻止K562细胞耐药形成,并能逆转K562/A02对ADR的耐药,其机制与抑制NF-кB活性及survivin和p-gp的表达有关.     

汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞耐药的研究

目的 :探讨汉防己甲素 (Tet)联合屈洛昔芬 (Drol)对耐药细胞系K5 62 /A0 2的逆转作用。方法 :采用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )测定柔红霉素 (DNR)的细胞毒性。结果 :1μmol·L-1Tet、5 μmol·L-1Drol均能增加DNR对耐药细胞系K5 62 /A0 2的细胞毒作用 ,半数抑制量 (IC50 )分别为 (7.2 8± 2 .0 6)mg·L-1和 (7.5 8± 3 .44 )mg·L-1,逆转倍数分别为 2 .94和2 .82倍。两药联合应用后作用明显增强 ,IC50 为 (1.66± 0 .41)mg·L-1,逆转倍数达 12 .9倍。结论 :单独应用Tet、Drol可部分逆转K5 62 /A0 2细胞的耐药性 ,两药联用具有明显协同效应。     

甲孕酮联合苦参碱对耐药细胞株K562/AO2多药耐药逆转作用的研究

目的应用甲孕酮(MPA)联合苦参碱(MAT)逆转人白血病细胞株K562/AO2对阿霉素的耐药性,观察联合用药逆转耐药的疗效。方法用MTT法检测MPA与MAT的细胞毒性,荧光分光光度法检测各组细胞内药物(ADM)浓度的改变,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,流式细胞术检测细胞的p-gp表达情况。结果(1)确定了甲孕酮及苦参碱对K562/AO2细胞的非细胞毒性剂量和低细胞毒性剂量,确定了非细胞毒性剂量的两药联合应用后未出现毒性叠加。(2)在与ADM合用时,K562/AO2+甲孕酮及K562/AO2+苦参碱组,细胞凋亡百分率均高于K562/AO2耐药组(P<0.05,P<0.01),但均低于K562/AO2+甲孕酮+苦参碱组(P<0.01,P<0.05)。(3)与K562比较,K562/AO2细胞中P-gP呈高表达;与K562/AO2耐药组比较,K562/AO2十苦参碱组及K562/AO2+甲孕酮组P-gp表达量降低(P<0.01),但当两者联合应用时作用大于两者单独作用。(4)与ADM组比较苦参碱、甲孕酮均能提高K562/AO2细胞内ADM浓度,P均<0.01,两者联合应用时作用大于两者单独作用。结论非细胞毒性剂量的...     

普乐林对K562、K562/AO2的增殖抑制和耐药逆转作用

目的 研究黄酮类化合物普乐林(Puerarin)对K562和K562/AO2细胞增殖抑制、药物增敏、耐药逆转的作用.方法 台盼蓝拒染试验、MTT实验检测Puerarin对K562、K562/AO2的抑制作用;MTT实验检测阿霉素单独和与Puerarin合用对K562、K562/AO2的半数抑制浓度.结果 3.2μmol/L的Puerarin即对K562、K562/AO2有生长抑制作用,其最大抑制浓度为25.0μmol/L,Puerarin对两种细胞的抑制差异无统计学意义(P＞0.05);阿霉素对K562细胞的IC50为0.131μg/mL,对K562/AO2的IC50为7.542μg/mL,耐药倍数为57.14倍;Puerarin加大了阿霉素对K562的杀伤敏感性(最大增敏倍数1.42),同时能部分逆转K562/AO2对阿霉素的耐药性(最大相对逆转效率91%).结论 Puerarin对K562、K562/AO2细胞的增殖抑制作用有限;但Puerarin具有较明显逆转K562/AO2对阿霉素的耐药作用.     

siRNA对K562和K562/ADM细胞耐药和凋亡的调节

目的 研究联合转染以MRP和bcl-2基因为靶标的siRNA,对白血病细胞株K562和耐药的K562/ADM细胞药物敏感性和凋亡的影响.方法 体外化学合成以多药耐药相关蛋白(MRP)和bcl-2为靶标的siRNA,分别或联合用脂质体转染人阿霉素处理的K562和K562/ADM以单纯化疗处理组和未处理组为对照.转染后24、48、72 h,MTT法检测各组细胞生长抑制率,计算IC50值.转染24 h后RT-PCR检测各组细胞相应靶基因mRNA表达水平,48 h后流式细胞仪检测细胞MRP和bcl-2蛋白表达率和细胞凋亡率.结果 K562/ADM细胞ADM的IC50为12.81 μg/ml,ADM MRP-siRNA组降为3.74 μg/ml,ADM bcl2-siRNA组降为6.82 μg/ml ADM MRP-siRNA bcl2-siRNA组降至2.51 μg/ml;K562细胞ADM的IC50为6.75 μg/dml,ADM MRP-siRNA组降为3.22 μg/ml,ADM bcl2-siRNA组降为3.56 μg/ml,ADM MRP-siRNA bcl2-siRNA降至1.84 μg/ml,有统计学意义(P<0.01).转染以MRP和bcl-2为靶标的siRNA后,细胞相应靶基因的mRNA及蛋白的表达明显减低,细胞凋亡率显著升高,联合转染两种siRNA,细胞的IC50进一步下降,细胞凋亡率进一步升高,与分别转染组相比有统计学差异(P<0.05);结论联合转染以MRP和bcl-2基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因蛋白表达,产生协同作用,明显增加耐药和亲本肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率.     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

4种细胞因子对K562／S及其耐药细胞株K562／A02积蓄柔红？…

目的 通过检测４种用细胞因子对白血病细胞株Ｋ５６２／Ｓ及其药耐药细胞株Ｋ５６２／Ａ０２积蓄柔红霉素（ＤＮＲ）能力的影响。评价细胞因子在 病细胞多药耐药必贩应用前景方法 用流式细胞仪及荧光法检测重组人α－干扰素（ＩＦＮ－α）、白细胞介素２（ＩＬ－２）、肿瘤坏死因子（ＩＮＦ）重组人粒－单集落刺因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对Ｋ５６２＝Ｓ及Ｋ５６２／Ａ０２积蓄柔红霉素能力的影响。结果 ＩＬ－１ ＩＮＦ、ＧＭ－ＣＳ     

微波对白血病耐药细胞株K562/MDR的影响

目的 研究微波对白血病耐药细胞株K562／MDR耐药性的影响。方法 使用流式细胞仪测量K562／MDR细胞内罗丹明（Rh123)含量及多药耐药基因产物P－糖蛋白（P－gp)的表达，使用DPH标记的荧光分光光度计法测量K562／MDR细胞膜流动性。结果 微波处理后，K562／MDR细胞内罗丹明含量增加，P－gp糖蛋白表达下降，细胞膜流动性增加。结论 微波能对白血病耐药细胞株K562／MDR的耐药性起一定的逆转作用。     

汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562／A02核因子kB表达的影响

目的：通过研究汉防己甲素（tetrandrine,Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02核因子kB（nuclear factor-kaPPaB,NF-kB）表达的影响,探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1umol／L Tet作用K562和K562／A02细胞6h和12h舌,细胞NF-kB核转位水平和胞核NF—kB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后,对K562细胞的NF-kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）;K562／A02细胞NF—kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达明显高于K562细胞对照组（P〈0．01）;Tet作用6h和12h后,可明显降低K562／A02细胞NF-kB蛋白核转位（P〈0．05）和胞核NF—kB蛋白表达水平（P〈0．01）。作用12h较作用6h效果更显著（P〈0．05）。结论：1umol／L Tet可能通过抑制NF—kB活化逆转K562／A02细胞多药耐药性。     

G-CSF和IFN-α对K562/A02耐药细胞株的抗耐药作用

[目的 ]观察G CSF ,IFN α分别或联合应用于K 562 /A0 2耐药细胞株时对柔红霉素敏感性的影响 .[方法 ]通过MTT法测定各组的K 562 /A0 2细胞的抑制率 .[结果 ]G CSF组及IFN α组K 562 /A0 2细胞抑制率明显升高 ,分别为 55 0 8%± 2 18%及 56 72 %± 1 77% ,与柔红霉素组比较具有显著性差异 ;联合用药组K 562 /A0 2细胞的抑制率明显升高 ,与柔红霉素组、G CSF组及IFN α组比较均具有非常显著性差异 . [结论 ]G CSF及IFN α逆转K562 /A0 2的多种药物耐药性 ,且具有协同作用     

甲孕酮对K562/AO2细胞及P-gp、Bcl-2耐药蛋白表达的影响

目的：探讨甲孕酮对白血病 K562/ AO2细胞凋亡率及 P - gp、Bcl -2耐药蛋白表达的影响。方法以 MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、P - gp 及 Bcl -2表达。结果甲孕酮能够提高 K562/AO2细胞的凋亡,能够下调 K562/ AO2细胞 P - gp、Bcl -2的表达。结论甲孕酮能提高 K562/ AO2细胞化疗敏感性,促进其凋亡,对 K562/ AO2细胞有一定的逆转耐药作用。     

粉防己甲素逆转耐药细胞株K_(562)/VCR多药耐药的研究

粉防己甲素(Tet)可逆转耐药细胞株K_(562)/VCR对长春新碱(VCR)、足叶乙甙(VP—16)、阿霉素(Dox)和柔红霉素(Dau)的多药耐药。2×10~(-7)～5×10~(-6)μmol/L处理细胞后,VCR、VP—16、Dox和Dau对K_(562)/VCR的半数抑制剂量(IC_(50))分别减少3.4～45.5、1.5～38.5、2.6～9.7和3.2～33.1倍。1×10~(-6)μmol/L Tet与0.02～0.2μmol/L的上述抗癌药共同处理细胞后,其细胞集落数分别减少44.3～84.5、56.4～79.0,52.6～97.4和63.9～10.0％。本文结果表明,Tet是一有效的肿瘤多药耐药逆转剂。     

微波联合化疗对白血病耐药细胞株K562/MDR的作用

目的 :研究微波联合化疗药物对白血病耐药细胞株K5 6 2 MDR的抑制作用。方法 :用四唑蓝快速比色法 (MTT法 )检测细胞存活率。结果 :吡柔比星 (THP)经 2 0min 43℃水浴加热处理 ,对K5 6 2 MDR的抑制作用明显提高 (P <0 .0 5 ) ,再联合微波对吡柔比星抑制作用的提高不明显。长春新碱 (VCR)经 2 0min 43℃水浴加热处理 ,对K5 6 2 MDR的抑制作用提高不明显 ,但联合微波后 ,长春新碱的抑制作用明显提高 (P <0 .0 5 )。结论 :微波与高温能增加K5 6 2 MDR细胞对化疗药物的敏感性。     

As2O3对耐药的白血病细胞株UF-1和K562/D细胞增殖的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对耐药的白血病细胞株UF-1和K562/D的作用.方法:采用台盼蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率;细胞涂片经Wright-Giemsa染色,光镜下观察细胞的形态;流式细胞仪解析细胞周期.结果:As2O3对耐药的白血病细胞株UF-1和K562/D的增殖均具有明显的抑制作用,与敏感细胞株NB4和K562细胞相比均无显著性差异.2 μmol/L的As2O3能够使UF-1细胞株的凋亡细胞占48.5%,亚G1期细胞明显增多,4 μmol/L的As2O3使K862/D细胞株的分裂期细胞占40.6%,G2/M期细胞增多.结论:耐药白血病细胞株UF-1和K562/D分别与敏感株NB4和K562相比,对As2O3的敏感性相同.As2O3诱导UF-1细胞凋亡,使K562/D细胞发生G2/M期阻滞.     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562的凋亡作用及机制

目的 探讨硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562(K562R)的诱导凋亡作用及机制.方法 采用浓度梯增法建立耐伊马替尼K562细胞系.应用CCK-8法检测不同浓度硼替佐米分别作用K562和K562R细胞24 h、48 h后,对细胞的增殖抑制的效果.使用流式细胞术方法分别检测硼替佐米单独或联合伊马替尼作用于K562R细胞48 h后的细胞凋亡.应用Western blotting检测不同浓度硼替佐米作用K562R细胞48 h后,Mcl-1、Bcl-2、Bcr/Abl蛋白表达的异同.结果 成功将对伊马替尼敏感的K562细胞诱导为K562R,耐药倍数为31.8;硼替佐米对K562及K562R细胞的增殖抑制呈浓度、时间依赖(P均<0.05);随着硼替佐米浓度增加,对K562R细胞的诱导凋亡作用增强,且硼替佐米与伊马替尼联合具有协同作用(P<0.05);硼替佐米可抑制K562R细胞Mcl-1,Bcr/Abl蛋白的表达,Bcl-2无变化.结论 硼替佐米具有对K562R细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与下调K562R细胞Bcr/Abl和MCL-1的表达以及促进MCL-1发生切割有关.     

阿霉素纳米粒对白血病耐药细胞株K562/DOX耐药逆转作用的研究

目的　合成阿霉素聚氰基丙烯酸异丁酯纳米粒 ,观察其对阿霉素耐受性细胞株K5 6 2 (K5 6 2 /DOX)耐药性逆转效果并探讨可能机制。方法　采用乳液聚合法合成纳米粒 ,透射电镜观察计算粒径 ,分光光度法计算包封率 ;以梯度浓度的阿霉素纳米粒处理培养的K5 6 2 /DOX细胞 ,噻唑蓝比色法 (MTT)检测K5 6 2 /DOX细胞的半数生长抑制浓度 (IC50 )并计算逆转倍数 ;流式细胞术检测细胞内药物浓度 ;TUNEL法检测药物诱导后凋亡的发生及凋亡率。结果　阿霉素纳米粒平均粒径 (98 5± 3 7)nm ,包封率为 95 % ;MTT结果显示阿霉素纳米粒对K5 6 2 /DOX细胞的生长抑制率较单纯阿霉素显著增高 ,阿霉素纳米粒对K5 6 2 /DOX的耐药逆转倍数为 6 2 ;TUNEL检测经 10 μg/ml阿霉素纳米粒处理后的K5 6 2 /DOX平均凋亡率为 38 7%。结论　以聚氰基丙烯酸异丁酯纳米粒为载体的阿霉素可增强诱导K5 6 2 /DOX细胞凋亡的效率和有效逆转其耐药性。     

三氧化二砷协同柔红霉素对K562／A02细胞株的作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)及柔红霉素(DNR)联合应用后对人白血病耐药细胞株K562/A02的作用,探讨其应用于临床的可能性。方法:采用MTT比色法测定单用DNR及DNR与不同浓度As2O3合用时的生长抑制效果,用流式细胞术检测胞内DNR浓度及凋亡。结果:DNR对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50)为15.4 mg/L,加用0.25,0.5,1.0μmol/L As2O3时的IC50分别为1.73,0.78,1.42 mg/L。1 mg/L DNR作用于K562/A02 48 h后的凋亡率为(17.4±2.19)%,0.5μmol/L As2O3作用于K562/A02 48 h后的凋亡率为(53.8±5.6)%,而两药合用后凋亡率为(65.5±6.2)%,但合用后胞内DNR浓度并未增加。结论:低浓度的As2O3与DNR联合应用对K562/A02细胞的抑制为协同作用,其效应与增加药物的诱导凋亡作用有关,而非通过增加胞内DNR浓度。     

Embelin逆转白血病耐药细胞株K562/D对柔红霉素的耐药性

目的 证明酸藤子(embelin)可以逆转白血病耐药细胞株K562/D对柔红霉素(DNR)的耐药性.方法 应用MTT法求出embelin作用于K562/D 24 h后的IC10以及K562/D对DNR的耐药指数和逆转倍数;应用annexin V FITC/PI复染流式细胞仪检测细胞凋亡;应用JC-1染色流式细胞仪检测线粒体膜电位(△Ψm).结果 K562/D细胞对DNR耐药,耐药指数为7.72;小剂量embelin(5μg/ml)可以逆转K562/D细胞对DNR耐药性,逆转倍数为7.46;embelin(5μg/ml)与DNR(0.1 μg/ml)联合作用于K562/D细胞6 h后△Ψm即出现明显去极化,细胞凋亡率呈时间依赖性升高,与对照组比较有统计学差异.结论 embelin 可以通过促进细胞凋亡逆转K562/D对DNR的耐药性,并且在凋亡早期△Ψm已经出现明显去极化,说明凋亡不可逆转.     

依托泊甙致多药耐药细胞株K562/AO2 DNA双链断裂及hMRE11蛋白表达和分布的研究

目的 研究依托泊甙(VP-16)作用多药耐药细胞K562/AO2后DNA双链断裂和核内hMRE11蛋白表达与分布,了解hMRE11蛋白在多药耐药白血病细胞被DNA靶向化疗药杀伤后的DNA修复过程中的可能作用机制.方法 采用MTT药物敏感试验鉴定K562和K562/AO2细胞对VP-16的药敏性,运用脉冲凝胶电泳(PFGE)检测DNA双链断裂,RT-PCR检测敏感株及耐药株中hMRE11的转录水平,免疫荧光技术观察细胞核中hMRE11蛋白灶(hMRE11 protein foci)形成情况,并通过流式细胞术检测其细胞周期分布.结果 经100μg/ml VP-16处理后8 h,K562细胞的DNA双链断裂率为(37.27±2.58)%,明显高于K562/AO2细胞(13.28±2.33)%(P＜0.05);虽然VP-16处理K562与K562/AO2细胞后hMRE11的mRNA表达水平无明显变化,但hMRE11蛋白却在细胞核中形成散在蛋白灶(foci),这种hMRE11蛋白灶阳性(＞5 foci)K562细胞比例(62.33±4.09)%高于K562/A02细胞(34.73±3.29)%(P＜0.01);此时K562细胞周期分布为S期(47.55±2.35)%,G0/G1期(32.76±1.33)%,G2/M期(19.69±2.11)%;对照组K562 细胞周期分布为S期(21.95±2.91)%,G0/G1期(49.29±0.83)%,G2/M期(28.76±3.72)%.结论 依托泊甙致K562和K562/AO2细胞DNA双链断裂后,hMRE11蛋白在胞核内重新分布形成蛋白灶,同时大部分细胞阻滞在S期;而且耐药细胞K562/AO2 DNA双链断裂率及核中hMRE11蛋白灶的阳性率均低于敏感株K562.