从桂黔交界地区中华硬蜱中分离到莱姆病螺旋体

目的从桂黔交界地区捕获的蜱中分离莱姆病螺旋体,以探查广西壮族自治区（广西区）和贵州省莱姆病的传播媒介。方法用BSK-Ⅱ培养基从蜱中分离莱姆病螺旋体。用PCR扩增分离菌株的5S～23SrRNA基因间隔区,将PCR扩增产物克隆后测序,通过将测序结果与基因库中莱姆病螺旋体菌株的5S～23SrRNA基因间隔区进行同源性比较和分析,从而鉴定分离株的基因型。结果从捕获的中华硬蜱中分离出1株莱姆病螺旋体（命名为QLT1）。分离株经鉴定为Borrelia valaisiana基因型莱姆病螺旋体。结论中华硬蜱很有可能是广西区和贵州省莱姆病的传播媒介。     

广西凭祥地区莱姆病螺旋体检测和基因分型研究

目的 调查广西凭祥地区莱姆病感染情况和基因型别.方法 2011年7月从广西凭祥地区采集蜱、啮齿动物和野鸟标本,分别采取煮沸法和Qiagen试剂盒提取蜱、啮齿动物脾脏以及鸟脾脏中莱姆病螺旋体基因组DNA;采用巢式PCR扩增莱姆病螺旋体5S～23S rRNA基因间隔区;对PCR扩增产物进行测序,并将序列结果与GenBank中莱姆病螺旋体5S～23SrRNA基因问隔区序列比对分析.结果 从3份啮齿动物标本中检测到莱姆病螺旋体5S～23SrRNA基因间隔区片段,啮齿动物的感染率为5.66％(3/53).其中一个序列与GenBank中Borrelia valaisiana基因型莱姆病螺旋体(序列号:HM100125.1,AB091455.1,AB091454.1,AB091453.1)同源性为100％;蜱和鸟标本中未检测到莱姆病螺旋体.结论 广西凭祥地区啮齿动物中存在莱姆病螺旋体B.valaisiana基因型感染.     

大兴安岭林区精神病患者莱姆病螺旋体感染情况调查

采用间接免疫荧光法（IFA）对大兴安岭林区的84例精神病患者进行了抗莱姆病螺旋体IgG抗体检测,阳性人占33.33%,而一般人群阳性率为11.13%（120/1 078）,x2检验差异非常显著。同时应用BSK选择培养基,从11例血清IgG抗体滴度≥1∶256的病人血清中成功分离到1株莱姆病病原体（伯氏疏螺旋体）,经鉴定得到确认,定名为PD91。上述情况表明林区精神病患者中部分为莱姆病螺旋体感染所致。     

新疆北疆部分地区硬蜱伯氏疏螺旋体基因型研究

目的调查和鉴定新疆北疆石河子市、沙湾县、伊宁县和察布查尔县媒介蜱,并确定其携带的莱姆病螺旋体的基因型。方法选择4县市6个牧区为调查点,采集羊源寄生硬蜱,结合形态学与16S rRNA进行蜱种鉴定;采用BSK-H培养基对莱姆病螺旋体分离培养,并用硝酸银染色和巢式PCR法进行病原检测,阳性产物测序结果比对,并与11种GenBank参考序列比对,确定莱姆病螺旋体的基因型。结果6个调查点共采集寄生硬蜱900多只,经形态学与16S rRNA鉴定分别为图兰扇头蜱、刻点血蜱、亚洲璃眼蜱和边缘革蜱;从中分别选取样本硬蜱共102只,分24管,分离培养后结合巢式PCR和硝酸银染色共获得16管阳性培养物。5S～23S rRNA基因问隔区测序比对分析表明,所有菌株为伯氏疏螺旋体与国际报道的B.burgdoq''eri Sensu Stricto(B31)基因型具有高度同源性,同源性为98.6%～99.5%;OspC基因型分析与上述结果一致。结论4县市分离获得伯氏疏螺旋体,基因型为B.burgdooCeri Sensu Stricto,且存在生物多样性。从图兰扇头蜱中分离到伯氏疏螺旋体为我国首次报道。     

我国滇西北山区家犬莱姆病螺旋体基因的检测及序列分析

目的了解滇西北山区莱姆病伯氏疏螺旋体的自然感染及基因分型情况。方法以山区农村家犬作为指示动物,使用真空采血管抽取家犬全血,应用巢式PCR扩增犬血中伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA间隔区片段,然后对阳性片段进行测序,并将所测序列与GenBank中注册的基因序列进行比较分析。结果共检测贡山、福贡2个县3个乡镇山村63只家犬血液,其中发现9只犬为阳性,阳性率14.29%。基因序列分析结果显示,当地犬感染的伯氏疏螺旋体为Borrelia garinii。结论首次证实云南省西北部山区家犬中存在莱姆病Borrelia garinii型伯氏疏螺旋体感染。     

广西乐业县林区莱姆病螺旋体分离及鉴定

为查明广西地区莱姆病的传播媒介以及是否存在B.valaisiana之外基因型莱姆病螺旋体,于2004年在乐业县林区进行了调查,现将调查结果报道如下.     

六盘山地区蜱中莱姆病螺旋体检测及分型

目的 了解宁夏部分地区蜱中莱姆病螺旋体感染及基因型别情况。方法 选择宁夏六盘山地区为调查点,采集当地蜱类,用巢式PCR法进行检测,阳性产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,确定莱姆病螺旋体的基因型。结果 共检测4个蜱种206只蜱,阳性37只,阳性率17.96%;其中以青海血蜱阳性率最高,达59.37%;RFLP分析表明,蜱中莱姆病螺旋体均为B.garinii基因型,但型内存在一定差别,其中有29份标本属B.garinii基因型Ⅰ群,有8份标本属B.garinii基因型Ⅱ群。结论 证实在宁夏六盘山地区蜱中存在莱姆病螺旋体,并发现其属于B.garinii基因型。     

大兴安岭林区莱姆病人群患病状况调查

目的了解大兴安岭林区莱姆病人群患病状况。方法经IFA检测IgG抗体。结果共调查755人,其中一般人群671人,精神异常者84人(现患)。一般人群中发现292人具有蜱咬史,叮咬率为43.52%,经IFA检测疑似病例96人,IgG抗体阳性70人,阳性率为72.92%,患病率为10.43%。84例精神异常者IgG抗体阳性28人,阳性率为33.33%。结论该病各年龄组均有发生,主要集中在10～至50～组,以30～组最高。不同性别间没有差别,不同职业间叮咬机会以工人和学生为高危人群,患病率以工人和干部为高。阳性病例的临床表现以慢性游走性红斑、类感冒样症状、关节炎等出现率高。林区莱姆病Ⅰ期以ECM和类感冒症状为主;Ⅱ期以心脏异常、面神经麻痹为主;III期以关节炎、精神异常为主要表现。     

一组长角血蜱中检出莱姆病螺旋体和斑点热群立克次体复合感染

目的 了解浙江省山区野生动物和蜱中莱姆病、斑点热、埃立克体病(无形体病)的感染情况.方法 采用巢式PCR对采集的鼠、蜱标本进行莱姆病伯氏疏螺旋体、斑点热群立克次体、埃立克体(无形体)特异性核酸片段检测分析.结果 从121份鼠标本和105组蜱标本中检出阳性结果 14份.鼠标本中检出伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段1份和埃立克体(无形体)16SrDNA 5'端片段2份.蜱标本中检出阳性11份,包括伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段3份和斑点热群立克次体外膜蛋白OmpA基因5'端片段8份.其中1组长角血蜱成虫标本为伯氏疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染,5S～23S rRNA基因间隔区和ompA基因片段均阳性,分别与伯氏疏螺旋体法雷氏基因型和马赛立克次体株等关系较近.结论 在同一组长角血蜱成虫中同时检出莱姆病疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染.     

从粒形硬蜱和社鼠分离出4株莱姆病病原体

从福建省北部莱姆病感染率较高的林区捕获一批野鼠,从鼠体收集到部分粒形硬蜱,取蜱类中肠和社鼠肾脏接种BSKII培养基,结果分离出4株莱姆病病原体—伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)。从粒形硬蜱和社鼠分离出莱姆病病原体,在国内外属首次报告。     

黑龙江林区野鼠伯氏疏螺旋体核酸检测与序列分析

伯氏疏螺旋体共有13个基因种,国内分离到的菌株包括5个基因种[1-3],本研究对黑龙江地区啮齿动物中伯氏疏螺旋体进行分子流行病学调查和分析. 1.材料与方法: (1)样本采集、处理及DNA提取:2009-2011年4-7月从黑龙江林区采用夹夜法采集野鼠,每样点100×2夹次,按5m距离布放鼠夹,晚放晨收.现场鉴定鼠种后,将捕获的鼠放入鼠袋内,乙醚麻醉后,消毒,无菌取脾脏低温保存.采用天根生化科技(北京)有限公司血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取脾脏DNA,-20℃贮存备用.     

中国六省蜱中莱姆病螺旋体分离与鉴定

目的 了解中国6省蜱中莱姆病螺旋体携带情况.方法 在6省各选取2个采样点捕蜱,采用病原分离培养和巢式PCR方法对蜱进行莱姆病螺旋体检测,通过基因测序确定分型.结果 6省共采集到2200余只蜱,约1000只蜱用于病原分离培养,从吉林省长白县全沟硬蜱标本中分离到13株螺旋体,从贵州省道真粒形硬蜱标本中分离到9株螺旋体.1255只蜱用于PCR检测,从6省的蜱标本中检测到莱姆病螺旋体特异片段,其中吉林省(长白县27.08%、通化县20.41%)、青海省(互助县25.06%、黄南县21.11%)和贵州省(道真县25.63%)蜱中莱姆病螺旋体阳性率较高,山西省(垣曲县4.72%、交城县3.64%)蜱中莱姆病螺旋体阳性率较低.通过序列同源性分析确定吉林、青海、甘肃和山西省蜱中莱姆病螺旋体基因型均为Borrelia garinii.贵州、湖南省的基因型均为Borrelia valaisiana.结论 6省蜱中均带有莱姆病螺旋体,且带菌率有差异;山西省蜱中存在Borrelia ganmi型莱姆病螺旋体,湖南省蜱中存在Borrelia valaisiana型莱姆病螺旋体.     

10株中国莱姆病螺旋体超微结构的研究

目的：与美国Ｂ３１菌株比较，观察研究中国莱姆病螺旋体的超微结构。方法：选取１０株不同来源的中国莱姆病螺旋体，用戊二醛、锇酸双固定，６１８树脂包埋，铀铅双重染色，Ｈ－６００Ａ电镜观察。结果：发现其菌体长度大多数在１００～１８．０μｍ之间，螺旋波形长度一般为１８～２８μｍ，菌体宽度在２０～２５μｍ之间；依据鞭毛数的不同，１０株中国菌株均含有两种或两种以上的菌体，其中所有菌株均含有一种７根鞭毛的菌体，含有１２根鞭毛菌体的菌株占９０％（９／１０），含有８根鞭毛菌体的菌株占３０％（３／１０），含有１５根鞭毛的菌体者仅１个菌株。结论：中国莱姆病螺旋体与北美的莱姆病螺旋体之间存在着明显的差异。首次证实中国莱姆病螺旋体的菌体长度、螺旋波形长度、菌体宽度等含有一定的多态性，主要具有７和１２根鞭毛两种类型的菌体     

浙江省在鼠形动物中检测到伯氏疏螺旋体

目的了解鼠形动物中自然感染伯氏疏螺旋体的状况。方法用巢式聚合酶链反应扩增鼠中的伯氏疏螺旋体5S--23SrRNA间隔区片段，对阳性产物进行测序。结果在浙江省金华市金东区捕获鼠形动物128只，在黄毛鼠、姬鼠、臭鼬鼯中共检测到阳性12份，阳性率分别为9．68％、14．28％和25．00％，并对其中2份进行测序分析，与伯氏疏螺旋体的法雷斯疏螺旋体相同，基因区间序列号分别为AB091447BvalaiOS115和DQ188933BvalaiQX13P25，相似率达100％。结论初步认为浙江省存在伯氏疏螺旋体病原。黄毛鼠、姬鼠、臭鼠句鼯可能为伯氏疏螺旋体的法雷斯疏螺旋体宿主，尚需进一步调查。     

Tick zoonoses in the southern part of Switzerland (Canton Ticino): occurrence of Borrelia burgdorferi sensu lato and Rickettsia sp.

The diversity and the distribution of tick species and their infection rates by the pathogenic micro-organism Borrelia burgdorferi sensu lato, the etiologic agent of Lyme borreliosis, and Rickettsia sp., were studied in Canton Ticino (the southern part of Switzerland). Ticks specimens collected from animals and humans were classified and analysed for the presence of both pathogens. In particular, PCR analysis was performed for the detection of Borrelia spirochetes in Ixodes ricinus and Ixodes hexagonus, and the hemolymph test was done on Rhipicephalus sanguineus for the detection of Rickettsia sp. PCR assays, performed on 424 of the 989 collected ticks, revealed a low rate of infection (around 2%) of both vectors I. ricinus and I. hexagonus by B. burgdorferi sensu lato. These results are in agreement with the modest number of Lyme borreliosis cases yearly recorded in Ticino. Further, through analysis of DNA sequences, the strains carried by the infected ticks were identified as belonging to the genomic group VS116. The widespread finding of the Mediterranean species Rhipicephalus sanguineus in different locations from July 1994 to October 1995 demonstrates its establishment in Ticino. Of the 210 specimens collected, 70 were analysed and one was infected by Rickettsia sp.     

黑龙江省东部边境口岸莱姆病生物媒介调查及病原分型研究

目的调查黑龙江省东部中俄边境口岸蜱的种类、分布、携带莱姆病螺旋体情况及病原基因型。方法捕蜱采用布旗法;蜱带莱姆病螺旋体率采用直接荧光法检查;病原体分离培养采用BSKⅡ培养基,对分离到的螺旋体用单克隆抗体(H_(5332)、H_(6831)、H_(9724))、SDS-PAGE蛋白图谱分析、PCR-RFLP分析以及基因测序等方法进行表型和基因分型研究。结果黑龙江省东部7个中俄边境口岸蜱的种类为1科3属4种,即硬蜱科硬蜱属全沟硬蜱,革蜱属森林革蜱,血蜱属嗜群血蜱和日本血蜱。不同生态环境中蜱的分布不同,各口岸优势蜱种不同。全沟硬蜱带莱姆病螺旋体率较高,平均为31.4%,森林革蜱和嗜群血蜱的带菌率较低,平均为2.2%和3.8%,日本血蜱中未检出阳性者。首次在中俄边境口岸——东宁、同江采集的全沟硬蜱中分离到伯氏疏螺旋体并鉴定为B.garinii基因型。结论黑龙江省东部边境口岸为莱姆病的自然疫源地。     

Detection and molecular typing of Borrelia burgdorferi sensu lato in Ixodes ricinus ticks and in different patient samples from southwest Germany

The prevalence of different genospecies of Borrelia burgdorferi sensu lato in infected ticks could be a determinant for the risk of acquiring Lyme borreliosis (LB) and its clinical presentation. A total of 7373 ticks and 2761 samples from LB patients from the same area in southwest Germany were analyzed by PCR to assess the frequency of the occurrence of LB-associated genospecies. Fifteen percent of the tick samples and 19% of the human samples were found positive for the presence of B. burgdorferi sensu lato. Further identification of 1106 B. burgdorferi sensu lato positive tick samples by reverse line blotting and 125 positive patient samples by nested PCR using species-specific primers revealed the occurrence of B. afzelii, B. burgdorferi sensu stricto, B. garinii and B. valaisiana. Both single-species and mixed infections were noted and a similar distribution of the different genospecies was found in ticks compared with human samples. It was also the purpose of this study to obtain more information about a possible correlation between the distribution of Borrelia species and clinical syndromes of LB. Skin biopsies of 59 patients with acrodermatitis chronica atrophicans and cerebrospinal fluid samples from 78 patients with possible neuroborreliosis were analyzed. In conclusion, the distribution of the different genospecies in ticks is the decisive factor for the occurrence of the different Borrelia genospecies in samples from LB patients. Borrelia afzelii is the predominant genospecies in all kind of samples from the observed area and there seems to be no association of particular Borrelia genospecies with distinct clinical manifestations of LB.     

Genetic diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato isolates obtained from Ixodes ricinus ticks collected in Slovakia

In Europe, Borrelia burgdorferi sensu lato is diverse, including B.burgdorferi s.s., B.garinii, B.afzelii, B.valaisiana and B.lusitaniae. In this study, we focused on the distribution of the different B.burgdorferi species among Ixodes ricinus adult ticks collected in an endemic area within Slovakia. We compared results of prevalence of B.burgdorferi infection in ticks obtained by immunofluorescence (IF) and by isolation. Isolates were characterized by restriction fragment length polymorphism (RFLP) of the rrf-rrl intergenic spacer genes using MseI. Using immunofluorescence we observed that 56/114 (49%) ticks were infected by B.burgdorferi s.l. Males were found to be more often infected (32/57, 56%) than females (24/57, 42%) but the difference was not significant (p=0.1895). From the same 114 ticks a total of 37 isolates were obtained: 19 from males (33%) and 18 from females (32%). The RFLP identification revealed 25 B.afzelii (68%), 5 B.garinii (14%), 5 B.valaisiana (14%) and 2 B.lusitaniae (5%). The infection in ticks was more often detected by IF than by isolation (p=0.0153) and isolation success was higher when the infection degree in ticks was high (p=0.0397). The infection prevalence observed in this area is among the highest observed in Europe.     

吉林省珲春地区蜱中伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体复合感染研究

目的了解吉林省珲春地区伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的复合感染情况.方法运用PCR方法对吉林省珲春地区采集的蜱标本,进行伯氏疏螺旋体5S～23S rRNA间隔区基因与斑点热群立克次体外膜蛋白A（ompA）基因的检测.测序并用PHYLIP软件进行序列分析.结果全沟硬蜱中伯氏疏螺旋体感染率为36.0%,在全沟硬蜱中检测到了斑点热群立克次体的感染,其感染率为2 0%.二者的复合感染率为2.0%;森林革蜱中伯氏疏螺旋体感染率30.9%,斑点热群立克次体感染率29.1%,二者的复合感染率16.8%.伯氏疏螺旋体的序列分析显示吉林地区的伯氏疏螺旋体都属于B.garinii基因型,同源性较高.对斑点热阳性片段序列分析表明新测序列与斯洛伐克新发现的IRS3株和IRS4株核苷酸序列同源性为97%.结论吉林省珲春地区全沟硬蜱及森林革蜱中检测到伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的感染,并检测到2种病原体的复合感染情况.