维生素E琥珀酸酯对人胃癌细胞中核因子及抗凋亡基因的影响

目的本研究以人胃癌SGC-7901细胞为肿瘤模型,在体外探讨维生素E琥珀酸酯(VES)在抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡过程中对NF-κB组成性激活及抗凋亡基因在转录水平上的调控作用。方法采用MTT法和AnnexinV法分别检测不同浓度水平VES处理人胃癌SGC-7901细胞后细胞的生长和凋亡情况。采用细胞成分分离法获得细胞核总蛋白,然后以Westernblot法测定VES处理后核因子蛋白p65在细胞核总蛋白中的含量。用RT-PCR方法检测VES对SGC-7901细胞中抗凋亡基因c-IAP1、c-IAP-2、NAPI、survivin、XIAP的转录调节作用。结果12.5～50.0μmolVES作用24h后,SGC-7901细胞的生长被明显抑制。50μmolVES作用于细胞12h后可诱导细胞发生凋亡,且作用48h后其凋亡诱导作用更明显。Westernblot结果发现,VES处理SGC-7901细胞后使细胞核内NF-κBp65蛋白的含量下降,即抑制了NF-κBp65向细胞核内的迁移。RT-PCR结果提示,VES处理胃癌细胞后可以在基因水平上抑制抗凋亡基因NAIP和survivin转录,对其他IAPs家族成员-c-IAP1、c-IAP-2、XIAP的转录无下调作用。结论VES对SGC-7901细胞内NF-κB组成性激活的调控作用及对抗凋亡基因在转录水平上的抑制作用可能是其抑制SGC-7901细胞生长、诱导细胞发生凋亡的机制之一。     

Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯(RRR-α-tocopheryl succinate,α-TOS;vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡线粒体途径中的作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50值);吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;Mito Tracker Red CMXRos染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)的改变;Western Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞Bid、Bax、Bcl-2蛋白表达和细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白表达与定位的影响。结果:VES对SGC-7901细胞的IC50值为101.45μg/ml;VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡和线粒体膜电位下降;并引起Cyt C蛋白在细胞内重新定位、Bid蛋白剪切活化、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论:VES可抑制SGC-7901细胞的生长,并通过线粒体途径诱导凋亡,其机制可能是通过剪切活化Bid蛋白、上调Bax/Bcl-2相对水平来实现的。     

FADD在VES诱导人胃腺癌细胞凋亡中的作用

目的 了解带有死亡结构构成的Fas相关蛋白（FADD）在维生素E琥珀酸酯（VES）诱导胃腺癌细胞凋亡过程中的作用。方法 以人胃腺癌SGC－7901细胞作为靶细胞，采用WesternBlot法、Lipofect转染、DAPI染色法探讨FADD在VES诱导SGC－790细胞凋亡过程中的作用。结果 经不同剂量VES处理后，SGC－7901细胞中FADD蛋白表达增加，呈剂量－效应关系；该细胞经FADD反义寡核苷酸转染与正我寡核苷酸杂上比，VES处理的细胞中FADD蛋白表达下降；用FADD反义寡核苷酸转染SGC－7901细胞后，降低了VES诱导的细胞凋亡率。结论 FADD在VES诱导SGC－7901细胞凋亡过程中起着重要的作用。     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞分化的作用

目的研究维生素E琥珀酸酯(VES)对胃癌细胞的诱导分化作用。方法5，10μg／ml维生素E琥珀酸酯处理人胃癌SGE-7901细胞，分别采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生长；^3H-TdR掺入法测定DNA合成速率；流式细胞术检测细胞周期的分布；分光光度法检测分化标志酶的活性。结果VES可使细胞形态学改变；抑制SGC-7901细胞的生长。降低DNA的合成速率；使细胞出现G0／G1期停滞；分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低。结论VES可诱导SGC-7901细胞分化并抑制其恶性生长。     

α-生育酚琥珀酸酯的合成及抑制肿瘤作用

目的合成α-生育酚琥珀酸酯(α-Tocopherol succinate，α-TOS)，验证其对人胃癌细胸SGC-7901的生长抑制作用，并研究其发挥作用的分子形式。方法利用α-生育酚(α-Tocopherol，α-TOH)和琥珀酸酐在催化剂的作用下合成α-TOS，用噻唑蓝[3-(4，5-dimethyl—thiazol-2-y1)-2，5-diphenyl tetrazolium bromide MTT]法观察其对SGC-7901细胞增殖的影响，应用琼脂糖凝胶电泳检测α-TOS对SGC-7901细胞洲亡的诱导作用．并利用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)法检测α-TOS抑制癌细胞生长的作用形式。结果经红外光谱和质谱分析鉴定，本研究合成的α-TOS与标准品一致；与对照组相比，10和20μg／ml剂量组的α-TOS对SGC-7901细胞增殖的抑制作用明显，处理第6d时，癌细胞的生存率分别降至21．7％和7．7％；10和20μg／ml的α-TOS处理SGC-7901细胞48h后，琼脂糖凝胶电泳检测到细胞发生凋亡时DNA降解形成梯形分子条带；在生长受到抑制的SGC-7901细胞及其培养体系中，利用HPLC法仪检测到α-TOS，均未检测到其水解产物α-TOH。结论α-TOS合成品对SGC-7901细咆具有明显剂量依赖的抑制增殖和诱导凋亡作用，且α-TOS以不分解的整体分子形式抑制肿瘤细胞生长。     

肌醇激酶1在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞发生自噬过程中的作用

目的 研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)诱导人胃癌细胞自噬过程中肌醇激酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)发挥的作用。方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,设置溶剂对照组(0.1%无水乙醇)、不同剂量(5、10、15、20μg/mL)VES组、4μ8C组(4μ8C为IRE1抑制剂)和VES+4μ8C组。Western blot检测对照组、不同剂量VES组内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP),自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein1 light chain 3, LC3)、Beclin-1,未折叠蛋白反应分支通路肌醇激酶1(inositol-requiring enzyme 1, IRE1)、X-盒结合蛋白1 (X box-binding protein 1, XBP1)、c-Jun氨基末端激酶(c-J...     

c-myc在植酸诱导人胃癌细胞凋亡中的作用研究

目的研究植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法采用MTT实验法观察植酸对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜下观察植酸对细胞形态的改变;免疫组化法和Westernblot法检测凋亡调控基因c-myc的表达。结果MTT实验结果显示,植酸对SGC-7901细胞具有生长抑制作用,并呈现剂量与时间的效应关系;倒置显微镜下的形态学观察表明加药组细胞的生长受到抑制;植酸组细胞中c-myc蛋白比对照组表达降低,且呈现剂量-反应关系。结论植酸对人胃癌SGC-7901细胞具有诱导凋亡作用,c-myc参与了植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用机制。     

植酸对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

目的了解植酸对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法MTT法检测植酸在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;AO/EB荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;免疫组化法检测凋亡调控基因P53蛋白的表达。结果植酸在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡。免疫组化实验结果表明,植酸可以抑制SGC-7901细胞中凋亡相关P53蛋白的表达。结论植酸在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于P53蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

DHA复合物诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的实验研究

[目的]研究DHA复合物抗肿瘤作用机理。[方法]以人胃癌细胞SGC-7901为模型,利用吖啶橙染色,荧光显微镜观察人胃癌细胞SGC-7901经DHA复合物治疗前后的形态,研究DHA复合物诱导人胃癌细胞SGC-7901的凋亡作用。[结果]实验发现:经DHA复合物治疗后,人胃癌细胞SGC-7901细胞核出现明显的凋亡核形态。[结论]DHA复合物具有明显诱导人胃癌细胞SGC-7901发生凋亡的作用。     

两种类胡萝卜素提取物对胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡作用的比较研究

目的比较红心鸭蛋与普通鸭蛋类胡萝卜素提取物对胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡的作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、免疫组化法。结果红心鸭蛋类胡萝卜素提取物对SGC-7901细胞增殖抑制作用、凋亡诱导作用及上调促凋亡基因bcl-2、下调抑制凋亡基因Bax表达的作用显著强于普通鸭蛋类胡萝卜素提取物。结论红心鸭蛋类胡萝卜素提取物对SGC-7901细胞增殖抑制与凋亡诱导作用均显著强于普通红心鸭蛋类胡萝卜素提取物。     

维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡

目的 探讨维生素E琥珀酸酯(VES)诱导人胃癌SGC-790l细胞凋亡执行阶段的机制。方法 分别将对照组0．1％无水乙醇和5，10，20μg／m1 VES加入培养液中，24h后通过荧光染色观察细胞核形态和线粒体跨膜电位(△ψm)改变，并用Westem蛋白印记检测凋亡诱导因子在线粒体和细胞质中的重新分布。结果 VES可明显诱导人胃癌SGC-790l细胞凋亡，20vg／m1 VES可使细胞凋亡率达到49．7％，伴有△ψm的明显降低，并有凋亡诱导因子自线粒体中的释放。结论 VES可能是通过使线粒体通透性改变，降低△ψm并释放线粒体中的凋亡诱导因子，诱导SGC-790l细胞凋亡。     

芹菜素对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

目的:了解芹菜素对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:MTT法检测芹菜素在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞的周期分布;DAPI荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;Western blotting方法检测了凋亡相关信号分子caspase-3和Bcl-2的蛋白表达情况。结果:芹菜素在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡。Western blotting实验结果表明,芹菜素可以诱导SGC-7901细胞中凋亡相关信号分子caspase-3活化片段的产生并抑制Bcl-2蛋白的表达。结论:芹菜素在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于caspase-3的活化及Bcl-2蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

miR-18b对胃癌细胞凋亡的影响

目的 探讨微小RNA( microRNA,miRNA)-18b(miR-18b)对胃癌细胞系SGC-7901凋亡的影响,并对其机制进行初步研究.方法 miR-18b inhibitor对SGC-7901细胞进行转染;流式细胞仪进行细胞凋亡检测;Western blot检测P53、Bcl-2的表达变化.结果 在SGC-7901细胞中抑制miR-18b的表达,能够促进细胞凋亡,并能降低凋亡相关蛋白P53、Bcl-2的表达.结论 miR-18b在胃癌的发生、发展中起一定作用,其可能通过调节P53、Bcl-2的表达而影响细胞凋亡.     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中线粒体的作用

目的探讨在维生素E琥珀酸酯(vitaminEsuccinate,VES)诱导人胃腺癌SGC7901细胞凋亡过程中线粒体的作用。方法SGC7901细胞经5、10、20μgmlVES处理后,用荧光染色法观察线粒体跨膜电位(Δψm)改变,用WesternBlot法检测细胞质中细胞色素c的表达情况和caspase3的表达与激活。结果VES可使线粒体Δψm明显降低,有明显的剂量效应和时间效应关系。胞质中细胞色素c和caspase3表达增加,同时激活caspase3。结论VES可能是通过使线粒体通透性改变并释放细胞色素c,激活下游caspase3,从而诱导SGC7901细胞凋亡。     

柴胡皂苷D对SGC-7901细胞生长及迁移抑制作用

目的探讨柴胡皂苷D对胃癌SGC-7901细胞生长、迁移抑制作用及机制。方法实验设对照组、低、中、高剂量柴胡皂苷组(5、10、20μmol/L柴胡皂苷D);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞24、48和72 h细胞增殖情况;采用原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测各组细胞凋亡;Transwell检测各组细胞迁移能力;实时定量荧光PCR技术(real time PCR)检测各组细胞中norrin及livin表达;蛋白印迹法检测各组细胞norrin、livin、p57和cyclin E表达。结果 MTT结果显示,与对照组比较,低、中、高剂量柴胡皂苷组SGC-7901细胞增殖受到明显抑制,呈剂量效应关系(P<0.05);Transwell结果显示,与对照组[(190±7)个/视野]比较,低、中、高剂量柴胡皂苷组细胞迁移数量[分别为(114±9)、(87±6)、(38±4)个/视野]均减少(均P<0.05);与对照组(4.94±1.14)比较,低、中、高剂量柴胡皂苷组SGC-7901细胞凋亡指数[分别为(8.46±1.18)、(11.76±2.85)、(34.34±7.74)]均增加(均P<0.05);与对照组比较,中、高剂量柴胡皂苷组SGC-7901细胞中norrin、livin mRNA及蛋白表达均减少(均P<0.05),各剂量组SGC-7901细胞中cyclinE蛋白表达均明显减少,p57表达明显增加,且呈剂量效应关系(均P<0.05)。结论柴胡皂苷D对胃癌细胞生长、迁移具有抑制作用,其机制可能与柴胡皂苷D减少norrin、livin表达,延长细胞周期、促进细胞凋亡有关。     

维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞自噬对细胞抗氧化功能的影响

目的 探讨维生素E琥珀酸酯(VES)处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬对细胞抗氧化功能的影响。方法 不同剂量(0、5、10、15、20μg/ml) VES处理人胃癌SGC-7901细胞24h,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达情况,Real-time PCR检测细胞内抗氧化酶SOD、CAT和GPX mRNA的表达情况,ELISA检测GSH水平;RNA瞬时干扰阻断自噬关键基因BECN-1基因的表达后,以20μg/ml VES处理人胃癌SGC-7901细胞24h,Real-time PCR检测抗氧化酶SOD、CAT和GPX mRNA的表达情况,ELISA检测GSH水平。结果 与对照组相比,随着VES作用剂量的增加,Beclin-1蛋白表达逐渐增高,可观察到LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化增加;Real-time PCR检测显示SOD、CAT和GPX等抗氧化酶的mRNA表达减少,ELISA显示细胞内GSH水平降低。阻断自噬关键基因BECN-1基因后,SOD、CAT和GPX等抗氧化酶的mRNA表达进一步减少(P<0.05),ELISA显示GSH水平进一...     

NF-kBP_(65)及Bcl-2蛋白在植酸诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法:采用AO/EB荧光染色法、彗星实验观察植酸对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用,Western blot法检测凋亡调控基因Bcl-2及NF-kBP65的表达。结果:荧光染色可见植酸组细胞核染色质成固缩状、串珠状或出现凋亡小体等典型的凋亡细胞形态;植酸组细胞出现了具有凋亡特征的彗星样改变,彗星细胞拖尾率随着植酸浓度的增加呈递增趋势。植酸组细胞中Bcl-2、NF-kB蛋白比对照组表达下降,且呈现剂量-反应关系。结论:植酸对SGC-7901细胞具有诱导凋亡作用,对NF-kB途径的抑制作用可能是其抗癌的机制之一。     

维生素E琥珀酸酯增加阿霉素在人胃癌细胞中的蓄积

目的 研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对阿霉素(doxorubicin,DOXO)在人胃癌细胞中蓄积量的影响.方法 使用VES与DOXO单独或联合作用于人胃癌细胞株SGC-7901,收集含0.1％乙醇培养液,和用10 μmol/L VES,1.5 μmol/L DOXO,10μmol/L VES+1.5 μmol/L DOXO处理24 h后的细胞,将含0.1％乙醇培养液的溶剂对照组和10μmol/L VES处理组细胞混合作为对照;采用肉眼观察法,流式细胞仪法,高效液相色谱法分别检测DOXO在人胃癌细胞中的蓄积情况.结果 肉眼观察可见对照组细胞沉淀为白色,1.5 μmol/LDOXO处理24 h后,细胞沉淀呈浅红色,VES与DOXO联合作用后,细胞沉淀量深红色.联合用药组细胞荧光强度明显高于DOXO单独处理组.VES与DOXO联合作用后,DOXO在人胃癌细胞中的蓄积相比DOXO单独作用时增加( P＜0.001).结论 VES可增加DOXO在人胃癌细胞内的蓄积.     

敲低过氧化物酶4通过β-连环蛋白通路抑制胃癌细胞侵袭的实验研究

目的探讨敲低过氧化物酶4(PRDX4)抑制胃癌细胞侵袭的作用及β-连环蛋白(β-catenin)通路机制。方法培养永分化胃上皮细胞系GES-1及胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901、AGS并检测PRDX4的表达水平;SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-PRDX4组、si-PRDX4+SKL2001组,western blot检测MMP2、N-cadherin、E-cadherin、β-catenin、TCF4的表达水平,Transwell检测细胞侵袭数目。结果与GES-1比较,胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901、AGS中PRDX4的表达上调(P0.05)且SGC-7901细胞中PRDX4表达上调最显著;与对照组及si-NC组比较,si-PRDX4组SGC-7901细胞的侵袭数目减少,细胞中MMP2、N-cadherin、β-catenin、TCF4的表达下调,E-cadherin的表达上调(P0.05);与si-PRDX4组比较,si-PRDX4+SKL2001组SGC-7901细胞的侵袭数目增加,细胞中MMP2、N-cadherin、β-catenin、TCF4的表达上调,E-cadherin的表达下调(P0.05)。结论敲低PRDX4能够抑制胃癌细胞侵袭,抑制β-catenin通路是可能的分子机制。     

植酸对SGC-7901细胞凋亡相关蛋白Fas、Bax及Caspase-3表达的影响

目的:研究植酸对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法:采用MTT实验法观察植酸对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;DNA琼脂糖凝胶电泳实验(DNA Ladder)观察植酸对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用;Western blotting检测凋亡相关蛋白Fas、Bax及caspase-3的表达。结果:MTT实验结果显示,植酸对SGC-7901细胞具有生长抑制作用,并呈现剂量与时间的效应关系;经3.5mmol/L植酸处理72h的细胞出现了典型的DNA片断的梯形条带;植酸能够诱导caspase-3的活化,植酸处理组细胞中Fas、Bax蛋白比对照组表达增加,且呈现剂量-反应关系。结论:植酸对SGC-7901细胞具有诱导凋亡作用,Fas、Bax及caspase-3参与了植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用机制。