人发角蛋白神经导管诱导兔胫神经修复时NGF和p75的表达及分布

目的研究人发角蛋白(HHK)神经导管诱导兔胫神经缺损再生修复时神经生长因子(NGF)及其低亲和受体p75的表达及分布。方法取正常胫神经、缝线连接的胫神经和HHK导管桥接的胫神经术后不同时期的切口部位及相邻组织制作石蜡切片,用免疫组化法对切片进行染色。结果正常胫神经组织中无NGF阳性染色。术后76 d,HHK周围的新生组织中NGF免疫组化染色表现为强阳性,而缝线周围的组织中无阳性着色。术后100 d,与正常胫神经组织无显著差异。正常胫神经组织中无p75阳性染色。术后76 d,导管组HHK周围较成熟的神经组织中p75免疫组化染色为弱阳性,而新生组织中为强阳性。术后100 d,导管组的p75免疫组化染色与正常神经组织无显著差别。结论HHK及其降解产物能诱导NGF和p75的产生,为神经再生创造良好的微环境;而缝线无此诱导作用。在新生神经组织中NGF和p75含量多,较成熟的神经组织中含量少。     

NGF及其受体在涎腺腺样囊性癌中的表达及与神经周侵袭关系的探讨

目的：探讨涎腺腺样囊性癌（SACC）浸润性生长和神经周侵袭之间的关系.方法：应用免疫组织化学方法检测21例涎腺腺样囊性癌及8例正常涎腺组织标本中神经生长因子（NGF）及其受体酪氨酸激酶（TrkA）和p75NTR的表达情况.结果：正常涎腺组织的腺泡细胞中未见NGF,p75和TrkA阳性染色,在导管细胞中NGF75%阳性染色.在SACC肿瘤细胞胞浆中NGF81%阳性染色,p75NTR76%阳性染色,未见TrkA阳性染色.在癌周组织及神经纤维中发现NGF的阳性表达.NGF和p75NTR在腺样囊性癌的各病理分型中表达无明显差异.结论：NGF和p75NTR的分泌在SACC肿瘤细胞的浸润性生长和神经周侵袭的过程中扮演重要的角色.     

人发角蛋白导管修复周围神经缺损的实验研究

目的探索用人发角蛋白（HHK）制成的导管对大段缺损的周围神经的修复效果。方法将25只新西兰兔分成3组,对照组不接受手术;另2组切除胫神经10mm,分别用缝合线（无HHK组）和HHK导管（HHK组）连接神经两断端,术后不同时间分别进行神经电生理检查、解剖和组织学观察。结果术后92d经电生理检查,HHK组较无HHK组功能恢复快。解剖观察发现,神经两断端之间以及HHK导管的腔隙被白色新生组织充满,人发部分消失,残余的人发易脆易断。在光镜下可见人发周围大量再生的雪旺细胞和较幼稚的神经纤维,神经纤维无序排列,人发被初步降解。术后1年,人发被完全降解,神经缺损部位修复完好。结论 HHK导管可诱导神经纤维再生,跨过10mm的缺损间隙,从而修复神经缺损。HHK是制作神经导管的较为理想的材料。     

人发角蛋白导管修复周围神经缺损的实验研究

目的 探索用人发角蛋白（HHK）制成的导管对大段缺损的周围神经的修复效果。方法 将25只新西兰兔分成3组，对照组不接受手术；另2组切除胫神10mm，分别用缝合线（无HHK组）和HHK导管（HHK组）连接神经两断功能恢复快，解剖观察发现，神经两断端之间以及HHK导管的腔隙被白色新生组织充满，人发部分消失，残余的人发易脆易断。在光镜下可见人发周围大量再生的雪旺细胞和较幼稚的神经纤维，神经纤维无序 排列，人发被初步降解，术后1年，人发被完全降解。神经缺损部位修复完好。结论 HHK导管可诱导神经纤维再生，跨过10mm的缺损间隙，从而修复神经缺损，HHK是制作神经导管的较为理想的材料。     

维甲酸诱导神经管畸形发生过程中神经干细胞的变化研究

目的：了解维甲酸（Retinoic acid,RA）诱导神经管缺陷（Neural tube defect,NTD）小鼠神经发育过程中神经干细胞的变化规律。方法：分别取不同胚胎时段及新生、成年的正常及NTD小鼠的神经组织，采用神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白（Nestin）间接免疫荧光抗体标记和DNA定量荧光染色，以流式细胞术检测。结果：①正常小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数目在E8．5d时呈高峰，此后逐步下降，新生期仍保持较高水平；NTD小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数在胚胎各期均低于正常小鼠，尤以E8．5d下降显著；出生后与正常组无显著差别。②NTD小鼠胚胎期神经组织G0／G1期细胞数百分比明显高于正常组，S期细胞数百分比则明显低于正常组。结论：胚胎早期神经干细胞的数目减少及神经细胞增殖受抑制与RA致NTD的发生有密切关系。     

乌头汤对DPN大鼠NGF受体TrkA、p75NTR表达的影响

[目的] 通过观察乌头汤对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠胫神经神经生长因子（NGF）受体、酪氨酸蛋白激酶A（TrkA）和p75神经营养因子受体（p75NTR）表达及血清NGF含量的影响,探索该方改善DPN的可能机制。[方法] Wistar大鼠腹腔注射链尿佐菌素（STZ）建立糖尿病模型,观察乌头汤对胫神经纤维组织TrkA、p75NTR及血清NGF的影响。[结果] 干预前后模型组和乌头汤组均较空白组FBG显着升高（P<0.01）,各组内FBG在干预前后无统计学差异（P>0.05）;与模型组比较,乌头汤组血清NGF含量明显升高（P<0.05）,神经组织p75NTR明显降低（P<0.05）.乌头汤组p75NTR免疫组化染色阳性表达程度较模型组明显降低。[结论] 乌头汤改善DPN的作用可能与其能够调节神经纤维p75NTR含量和血清NGF含量有关。     

神经生长因子在腺样囊性癌中的表达

目的:通过检测神经生长因子(NGF)在体外体内腺样囊性癌(ACC)中的表达探讨NGF与ACC神经侵袭的关系.方法:采用Western印迹技术检测体外培养增殖期ACC-M中NGF的表达.采用免疫组化的方法检测14 d ACC眶下神经侵袭的裸鼠模型中ACC-M癌组织和眶下神经的NGF表达;比较邻近神经的ACC癌组织与远离神经的癌组织中NGF阳性表达细胞的密度;比较侵袭侧与非侵袭侧眶下神经NGF阳性染色的灰度值.结果:NGF在体内、体外ACC细胞中均有表达. NGF阳性表达细胞的密度在邻近神经的ACC中为30.67±5.91,远离神经的ACC中为9.33±2.81,两者相差显著(P<0.01).受侵袭侧与非侵袭侧眶下神经NGF阳性染色的灰度值分别为46.79±2.91和47.01±2.56,无显著差异(P＝0.299).结论:NGF参与ACC细胞的增殖,ACC中NGF表达增强与神经侵袭显著相关.     

外源基因在周围神经吻合口中的表达

目的　应用外源基因缝线行周围神经吻合 ,探讨神经吻合口直接转基因并使外源基因在吻合口得以表达的可行性。方法　构建含有大肠杆菌 (Escherichiacoli,E coli ) β 半乳糖苷酶 (β galactosidase,β Gal)的结构基因(lacZ基因 )及人类巨细胞病毒 (cytomegalovirus,CMV)启动子的PCMVβ质粒。应用通过浸泡处理的 8 0医用尼龙无创缝线行兔坐骨神经外膜缝合。对照组应用浸泡过蔗糖PBS溶液的缝线 ,实验组应用浸泡过PCMVβ质粒溶液的缝线进行神经缝合。分期取出神经吻合部 ,进行 β 半乳糖苷酶组织化学染色及 β 半乳糖苷酶活性检测。结果　组织化学染色显示对照组术后各期的所有吻合部神经组织均无蓝染阳性细胞 ,而实验组术后各期的所有吻合部神经组织均有蓝染的阳性细胞 ;对照组术后各期吻合部神经组织中均未检测到 β 半乳糖苷酶活性 ,实验组吻合部神经组织从术后 2d到 30d都可检测到 β 半乳糖苷酶活性。 结论　应用外源基因缝线可使外源基因转移至周围神经吻合口中并表达出具有生物活性的外源基因表达产物 ,为应用基因治疗促进神经功能的恢复提供了可行途径。     

应用游离肌肉束修复神经缺损的实验研究

修复神经损伤的关键在于吻合口对合精确和无张办、我们应用自体游离肌肉束修复10只兔子的实验性腓总神经缺损，术后120d至150d，取下肌肉束和神经标本行病理学检查，在标本的常规染色和特异染色的切片上，均示再生轴突在肌肉束中生长良好，呈集群定向生长；轴宪的髓鞘完整，无明显纤维组织增生；同侧胫前肌无明显萎缩，因此，我们认为应用自体游离肌肉束修复周围神经缺损是一个可取的方法。     

脑源性神经营养因子对神经干细胞的体外定向分化及体内移植的影响

目的 了解体外培养的大鼠脑神经干细胞植入正常成鼠脑内后的存活、迁移和分化情况，以及脑源性神经营养因子（BDNF）对其影响。方法 从出生2～3d的大鼠脑皮质分离培养神经干细胞，采用BDNF诱导分化后，用免疫荧光染色鉴定神经元的数量。将培养的神经干细胞经溴脱氧尿苷（BrdU）标记，或同时加用BDNF后，移植入成鼠大脑皮质，移植1个月后，应用抗BrdU和抗β-ptubulin Ⅲ双重免疫荧光染色，对脑切片中细胞分化和迁移情况进行分析。结果 植入的神经干细胞可在大脑皮质发生迁移，个别移植的细胞可分化成神经元。体外诱导分化实验中，神经干细胞经BDNF诱导3d后，其分化成神经元的数量约为对照组的5倍。在神经干细胞脑内移植时，加用BDNF发生迁移的神经干细胞的数量较未加BDNF的增多，但神经干细胞分化成神经元的数量与未加BDNF对比无明显差别。结论 体外培养的新生大鼠脑神经干细胞植入正常成鼠脑内后，能够存活、迁移及分化，BDNF有助于移植的神经干细胞的存活和迁移。     

Peripheral nerve repair by conduits made of human hair keratin：An experimental study

Objective: To explore the method to repair injured peripheral nerve using conduits made of human hair keratin (HHK). Methods: The tibial nerves of rabbits were transected leaving a gap 10 mm in length between the 2 severed ends, which were either routinely sutured or bridged using HHK nerve conduits. Electro-physiological , anatomical and histological examinations were performed at different time postoperatively. Results: Electrophysiological study showed more obvious improvement in the neural function recovery in rabbits with HHK conduits bridging as compared with that in rabbits with routine suture. In the former group, HHK conduits were gradually degraded and absorbed with large amount of myelinated nerve fibers and Schwann cells regenerated around HHK conduits. In the latter group, however, the nerve tissues around the suture were degenerated and replaced by connective tissues. Conclusion: HHK may induce the regeneration of the nerve fibers and provides an ideal approach to repair nerve damages.     

大鼠坐骨神经切除后人发角蛋白诱导的神经的再生机制

目的 观察人发角蛋白(HHK)诱导坐骨神经再生时的形态学变化,以揭示神经再生机制,方法制备坐骨神经损伤动物模型,植入HHK丝束桥接体,手术后2天、1、2、3、6、9、12周进行组织学观察.结果 术后第2天到2周,大量新生微血管长入HHK植入部位,切除后近远端的施万细胞发生去分化.去分化后的施万细胞沿着HHK丝束表面纵向分裂增殖.术后第3周人发开始降解,HHK周围可见很多巨噬细胞和多核巨细胞,大量增生的施万细胞有规则地排列于HHK丝间,有轴突和大量的微血管出现.术后第6周,在HHK丝周围可见大量新生的神经纤维,其间有微血管分布.术后第9周,人发角蛋白降解显著,再生神经纤维增多,有明显的神经外膜和束膜.术后第12周,实验组人发角蛋白基本完全降解,其部位被新的神经纤维所取代,并已贯通缺损部位,且外观形态接近正常神经.结论 1,HHK对缺损的坐骨神经修复具有良好的桥接作用.2、受损后高度分化的施万细胞通过去分化形成幼稚的施万细胞,其中胞质脱落起着关键作用.3、受损轴突立即发生保护性封闭、脱落.健康轴突形成膨大的带突起的生长锥,生长锥突起上伸出许多丝状生长芽.并与1到多个施万细胞嵌合,它们通过竞争性选择,最后只有一条生长芽可发育成完整的轴突.4、神经纤维屏障膜(神经外膜、束膜及内膜)是由最外侧的血管屏障膜中和束内的微血管间充质细胞演变而成的.总之,施万细胞、神经轴突、神经膜三者的再生模式是自身器官化过程所要求的,它们是同步进行的协调行为.     

Degradation of human hair keratin scaffold material used to repair in-jured skeletal muscles of rabbits

Objective: To explore the mechanism of the degradation of human hair keratin (HHK) scaffold material implanted in damaged skeletal muscle tissues. Methods : Six New Zealand rabbits with HHK scaffold material implants (composed of 3 different types of HHK material with varied degradation speed) after mus-clectomy were divided into 3 groups (2 in each group) to observe the degradation of the material at 1, 3, 6 weeks after operation. Another rabbit without operation was used as the control group. The degradation of HHK was observed with light microscopy, histochemistry of ubiquitin and electron microscopy. Results: Light microscopy showed that human hair cuticles fell off from the HHK material and emerged, and the macrophagocytes and multinucleate giant cells were attached onto the surface of the material, which became homogeneous at the first postoperative week. The HHK scaffold material was degraded into particles that was phagocytosed by macrophagocytes and multinucleate giant cells at the third week. Ubiquitin enzymatic histochemistry showed that the macrophagocytes and the multinucleate giant cells were positive at the first week. Under electron microscope, HHK scaffold material was degraded into particles, and at the sixth week, part of HHK scaffold material was further degraded. Conclusion : Large mass of the HHK scaffold material is degraded via ubiquitin system, and the resultant particles are phagocytosed and degraded with the cooperation of lysosome and ubiquitin.     

人发角蛋白对脊髓损伤大鼠少突胶质细胞增殖分化效应的影响

目的探讨体内可降解生物材料人发角蛋白(HHK)植入急性冲击性损伤脊髓后,对神经再生过程中少突胶质细胞增殖分化效应的影响。方法采用改制Ⅱ型NYU装置,在建立大鼠急性冲击性脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠脊髓损伤部位,对植入后1、4、12、26周损伤脊髓组织进行光学和电镜结构观察。结果第1周时,损伤部位可见少突胶质细胞散在分布于大量浸润的炎症细胞中;第4周时,通过Mallory's磷乌酸苏木素染色,显示HHK周边呈层包绕的增生少突胶质细胞;第12和26周主要为神经再生和髓鞘重建过程,重建中的少突胶质细胞髓鞘内出现较大的空腔,髓鞘层状分离,并形成大小不一的髓鞘小体,重建髓鞘周边可见新生的少突胶质细胞。结论在急性冲击性脊髓损伤后神经再生过程中,HHK对少突胶质细胞的增殖分化及髓鞘再生修复有积极作用,为进一步综合研究HHK对脊髓损伤修复的作用提供了实验依据。     

Degradation of human hair keratin scaffold implanted for repairing injured skeletal muscles.

OBJECTIVE: To observe the in vivo degradation process of human hair keratin (HHK) scaffold after implantation in rabbits. METHODS: Seven New Zealand rabbits were divided into 4 groups including a control group and 3 operation groups. HHK scaffold was implanted, after partial resection of the skeletal muscles, in rabbits of the 3 operation groups, followed by observation 1, 3, and 6 weeks later respectively. Routine morphological observation, histochemistry with ubiquitin and electron microscopy were performed. HHK scaffold incorporated 3 types of HHK with different degradation speeds, respectively designated types F, B, and Z. RESULTS: Light microscopic observation revealed that human hair cuticles began to strip off at the first postoperative week, and the material was homogeneous on the surface of which macrophagocytes and multinuclear giant cells adhered. At the third week HHK scaffold was degraded into particles as seen under electron microscope and was phagocytosed by macrophagocytes and multinuclear giant cells. Ubiquitin enzymatic histochemistry demonstrated that macrophagocytes, multinuclear giant cells were positive at the first week. At sixth week, further degradation of HHK scaffold occurred when newly generated muscles were seen beside the HHK. CONCLUSIONS: HHK scaffold is initially degraded extracellularly by ubiquitin system into particles, which are phagocytosed by the cells and degraded by the cooperation of lysosome and ubiquitin; meanwhile the satellite cells are activated, beginning to proliferate and eventually fused into newly generated muscle fibers.     

人发角蛋白材料植入修复受损骨骼肌后降解过程的观察

目的阐明人发角蛋白(HHK)材料植入体内后的降解过程。方法7只新西兰兔随机分为术后1、3、6周实验组和正常对照组。实验组进行骨骼肌切除后植入HHK材料,按期进行常规形态学和泛肽组化观察。HHK材料由3种降解速度的F、B、Z组分混合编制而成。结果光镜形态学观察显示材料植入后第1周出现HHK材料毛小皮脱落,HHK材料呈均质状,表面附着巨噬细胞和多核巨细胞;到第3周时可见降解成颗粒的材料被巨噬细胞和多核巨细胞吞噬。泛肽酶组化显示第1周时HHK材料及其周围的巨噬细胞、多核巨细胞呈阳性反应;第6周时材料进一步降解,同时伴有新生肌肉。电镜形态学观察显示毛发被降解成小的颗粒状。结论HHK材料的降解过程中,泛肽系统首先在细胞外将大体积的HHK材料降解成颗粒,随后细胞内泛肽系统通路和溶酶体通路分别对吞入的材料颗粒进行降解,且具有协同作用;同时肌卫星细胞被活化形成新生肌组织。