HIV抗体不确定结果的特征与鉴别方法研究

目的 分析HIV抗体不确定的血清学特征及预示HIV感染的意义,评价3种实验方法鉴别HIV抗体不确定的效果.方法 收集394例HIV抗体不确定标本,分析免疫印迹确认的条带类型.2对97例HIV抗体不确定病例进行随访,观察HIV抗体的发展和变化.3对67例随访病例的首次标本进行病毒载量、条带免疫印迹和HIV-1 p24抗原检测,以随访的结果为金标准,判断3种方法鉴别不确定的效果.结果 394例不确定标本共有38种带型,env类不确定的构成比例是37.54%;pol不确定占4.04%;gag类不确定占的比例最大,为58.37%.97例接受随访的HIV抗体不确定病例中,5例发生HIV抗体阳转,均为env类不确定.阳转病例的HIV抗体发展很快,约2周就可以看出变化.病毒载量检测鉴别HIV抗体不确定的敏感性最好.结论 针对gag蛋白的不确定反应最为常见,但基本上都是非特异反应.env类不确定预示HIV感染的意义较大,特别是gp160p24和gp160.HIV抗体不确定如为早期HIV感染,血清抗体发展的速度很快,大约2周抗体就有发展.病毒载量检测可有效鉴别不确定结果.     

HIV-2 DNA疫苗免疫小鼠的免疫反应观察

目的：用构建的HIV－2外膜蛋白gp105和核心蛋白gag基因的DNA疫苗免疫小鼠，评价其免疫效果。方法：将HIV－2型gp 105和gag基因克隆到表达载体pIRES1neo中，构建重组DNA疫苗质粒。间接免疫荧光试验证明，构建的DNA疫苗在真核细胞中表达了gp105或／和gag.构建的疫苗免疫小鼠后，用流式细胞仪测定CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞亚类数，并用HIV－2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV－2抗体水平。结果：构建了3种HIV－2 DNA疫苗pIRES1gag、pIRSE1gp105和pIRES1gag-gp105，转染BHK细胞后均能表达抗原蛋白，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抗HIV－2特异性抗体，其中pIRES1gag-gp105免疫鼠中，淋巴细胞增殖最显著，而pIRES1gp105免疫鼠中HIV－2特异性抗体水平最高。结论：构建的DNA疫苗均能诱导机体产生免疫反应，其中pIRES1gp105诱导的体液免疫应答最显著，而pIRES1gag-gp105 诱导的细胞免疫响应最显著。     

人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究

目的　检测HIV 2核心蛋白DNA疫苗诱导Balb c小鼠免疫应答的能力。方法　将表达HIV 2核心蛋白DNA疫苗质粒pVAXIgag肌注Balb c小鼠 ,分析CD4 、CD8 T淋巴细胞的数量、脾特异性CTL反应、血清中HIV 2的特异性抗体水平。结果　重组质粒pVAXI gag免疫组与空载体pVAXI及PBS对照组相比较差异显著 ,血清抗体滴度及淋巴细胞杀伤效应为P <0 .0 1,脾T细胞亚群的数量为P <0 .0 5。结论　HIV 2核心蛋白DNA疫苗能诱导Balb c小鼠产生特异性细胞免疫应答和体液免疫应答     

人类免疫缺陷病毒基因组结构和基因表达

本文系统地描述了 HIV 的形态、基因组结构及基因表达的特点。HIV 是艾滋病的病原体,由于它的入侵,破坏了人体的免疫系统,使机体丧失对传染病和肿瘤的抵御能力而发病。HIV 是一种逆病毒,其基因组结构和基因表达不仅与其他逆病毒有相似之处,而且具有自身独特之点。gag 和 poi 基因编码病毒颗粒的内部蛋白;sor 基因产物是分子量为2.3KD的蛋白,它对生活在非淋巴细胞中的病毒复制是重要的;env 基因产物是外膜蛋白 gp120和转运膜蛋白 gP41;3′-orf 基因产物可能是 HIV 复制的抑制剂;tat 是蛋白反式激活的基因,其产物作用于转录后水平,它可活化 gag 和 env 基因的转录。     

含HIV-1 gag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒免疫效果研究

目的探讨含HIV-1 gag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒(rAd5/F35)在BALB/c小鼠中的免疫效果。方法PCR,间接免疫荧光鉴定HIV-1gag基因在重组腺病毒(rAd5/F35-mod.gag)的正确插入和体外细胞水平的表达,用rAd5/F35-mod.gag以不同的方式免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中的p24特异性抗体,细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。结果重组腺病毒rAd5/F35-mod.gag在体外细胞水平可以很好的表达目的基因gag;在小鼠体内重组腺病毒rAd5/F35-mod.gag可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应,用rAd5/F35单独免疫2次,所诱发的CTL和血清IgG反应最强。但Ad5初次感染后,产生的抗Ad5抗体可以抑制rAd5/F35疫苗的特异性免疫反应。结论重组腺病毒rAd5/F35-mod.gag单独免疫可在小鼠体内诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应。只改变Ad5纤突蛋白Fiber,不能避免抗Ad5抗体的抑制作用。     

同时检测HIV抗体及p24抗原快速诊断试剂的研制

目的：研制可同时检测HIV－1、HIV－2抗体及p24抗原的胶体金快速诊断试剂。方法：利用重组杆状病毒－昆虫细胞系统进行HIV－1 gp41及HIV－2 gp36抗原的高效表达，以免疫亲和层析法纯化抗原。抗－HIV p24单克隆抗体杂交瘤细胞株，并制备抗－HIV p24单克隆抗体。以硝酸基纤维膜为载体，以纯化的HIV－1 gp41、HIV－2 gp36抗原及抗p24抗体点膜，20nm胶体金颗粒／抗人IgG和抗－HIV p24单克隆抗体进行标记，对33份已知HIV感染者阳性血清及6份阴性血清进行检测。结果：通过重组杆状病毒－昆虫细胞系统进行HIV－1 gp41及HIV－2 gp36抗原的表达，可获取浓度为2．0mg/L的纯化抗原。从抗p24单克隆抗体杂交瘤细胞株中培养上清液，通过葡萄球菌蛋白A免疫亲和层析柱可得到1．5mg/L的纯化抗体。利用纯化的抗原抗体进行标记，对39份已知血清进行检测，与荷兰Organon公司HIV1＋2抗体、p24抗原、ELISA诊断试剂同时检测结果进行比较，证实有较强的特异性及敏感性。结论：同时检测HIV－1、HIV－2抗体及p24抗原快速诊断试剂的问世，可为HIV感染的诊断提供一个简便、可靠、敏感的方法。     

IL-18和HIV-1 gag-gp120嵌合基因DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答

目的 :探讨IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 :构建含IL 18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 :联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平均显著高于单独免疫组 (P <0 .0 5 ) ,空白质粒对照组 (P <0 .0 1)和PBS对照组 (P <0 .0 1)。结论 :IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫 ,且IL 18发挥了免疫佐剂的作用。     

2012—2021年北京市海淀区HIV抗体不确定结果分析

目的对2012—2021年北京市海淀区HIV筛查阳性样本的确证试验中HIV抗体不确定结果进行分析。方法对HIV筛查实验室上送的8 454例次筛查阳性样本进行免疫印迹试验(western blot, WB), 分析不确定样本的带型特点和随访情况, 并用SPSS 24.0软件进行统计分析。结果在8 454例次筛查阳性样本中, HIV抗体不确定样本1 895例次, 占比22.4%, 主要来自医疗机构(50.5%), 其次是血液中心(47.8%)。WB条带出现率最高是gag蛋白中的p24(78.7%)和env蛋白中的gp160(17.7%)。在完成随访的211例样本中, 其中35例(16.6%)转为阳性, 79例(37.4%)转为阴性。18～44岁年龄组的男性, 尤其是有男男性行为的转阳率较高。条带越多转阳率越高。结论北京市海淀区HIV抗体不确定结果存在较高假阳性。尽管病例随访率低, 但是仍发现一些急性期阳转病例。应加大随访力度, 做到早发现早诊断早治疗。     

丙型肝炎病毒F蛋白的原核表达及初步应用

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F基因的原核表达载体,并在大肠杆菌TG1中进行表达,用以检测丙肝患者体内抗体,并制备抗血清。方法提取患者血清中的HCVRNA,并进行基因分型。取鉴定为HCV1b型的病毒,用RT-PCR扩增HCVF蛋白基因的序列。将扩增产物插入pGEM-T载体中,测序正确后,用EcoRI、BamHI双酶切后,再插入表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌TG1,在IPTG诱导下表达GST-F蛋白。用亲和层析法纯化GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清。并用纯化的GST-F蛋白进行ELISA法检测丙肝患者血清抗F蛋白抗体。结果在细菌裂解液中检测到重组的融合蛋白,经GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-F融合蛋白。应用Westernblot方法检测证实,用纯化的GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠得到了特异性的抗体。用纯化的GST-F蛋白进行ELISA检测120例丙肝患者血清抗F蛋白抗体,82例呈阳性。结论通过上述方法制备的融合蛋白纯度较高,免疫小鼠获得的抗体具有良好的特异性。用纯化的目的蛋白检测丙肝患者血清抗F蛋白的抗体的阳性率为68%,与国外的报道接近,说明在HCV感染的自然病程中有F蛋白的产生,为研究HCVF蛋白及与HCV相关疾病的诊断和治疗提供了条件。     

胞外高迁移率组蛋白1对HTLV-1感染的T细胞中病毒复制的影响

目的 探讨胞外的高迁移率组蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)对人T淋巴细胞白血病病毒1型(human T-cell leuk HTLV-1)感染的T细胞中病毒复制的影响.方法 ELISA检测HTLV-1病毒阴性T细胞系Jurkat、MOLT4细胞及HTLV-1病毒阳性的T细胞系MT2、MT4细胞培养上清中的HMGB1水平;将HTLV-1的长末端重复序列荧光素酶报告基因pHTLV-1-LTR-luc转染病毒阳性细胞MT2,随后加入终浓度为0.25、0.50、0.75 μg/ml的HMGB1多克隆抗体(PcAb)及其同型对照抗体,30、100、300 ng/ml的重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1)及其对照PBS,48 h后检测荧光素酶活性;在病毒阳性细胞MT2中加入终浓度为0.25μg/ml的HMGB1 PcAb及同型对照抗体,300ng/ml的rhHMGB1及对照PBS,real-time PCR检测病毒编码基因tax、pol1、pol2、p19、gag、env.结果 HTLV-1病毒阴性T细胞系和HTLV-1病毒阳性细胞系培养上清中的HMGB1水平无明显差异;0.25μg/ml的HMGB1 PcAb可明显抑制HTLV-1-LTR的转录活性,而300 ng/ml的rhHMGB1可明显促进HTLV-1-LTR的转录活性;real-time PCR检测显示0.25 μg/ml的HMGB1 PcAb可明显抑制病毒编码基因pol1、pol2、gag、env的表达,300 ng/ml的rhHMGB1可明显促进pol1、pol2、gag、env的表达.结论 胞外的HMGB1可促进HTLV-1病毒感染T细胞的病毒复制.     

HIV感染的血清学检测技术与应用研究进展

HIV感染是全球公共卫生事业面临的严峻挑战。及时准确的早期诊断和尽早启动抗反转录病毒治疗, 能够有效遏制病毒传播并改善患者免疫功能, 从而改善患者预后, 降低患者的住院及死亡率。高效敏感的检测是实现HIV感染早期诊断的前提, 也是艾滋病疫情防控工作中的重点。血清学检测一直以来是应用最为广泛的HIV感染检测技术, 但由于传统的抗体检测技术难以及时准确的检测HIV急性感染, 限制了HIV感染的早期诊断。近年来, 新型HIV抗原抗体联合检测、生物传感器等多种新型检测技术灵敏度高, 显著缩短了HIV感染诊断的窗口期, 为HIV早期诊断带来新的希望。本文对HIV感染的血清学检测技术原理、适用范围及应用前景进行综述, 以期为发展HIV感染的新型检测策略提供参考。     

细胞内抗体抗HIV研究进展

细胞内抗体是一类在细胞内定位表达 ,并发挥作用的新型基因治疗抗体 ,主要指单链抗体。通过研究细胞内抗体对HIV 1结构蛋白、调节蛋白和酶蛋白的作用 ,证实它能有效抑制HIV早期和晚期复制 ,本文综述了细胞内抗体的抗HIV 1作用。     

建立一种用重组蛋白检测抗口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法

目的研究以重组蛋白作为包被抗原检测口蹄疫病毒（FMDV）感染后的动物血清中特异性抗体的可能性,为建立一种非病毒颗粒的ELISA检测试剂盒提供实验依据。方法利用自行构建表达的O型口蹄疫病毒VP1表位肽重组蛋白（VP1epi）作为包被抗原,采用间接ELISA方法确定抗原的最佳工作浓度和包被方法,优化各项实验条件,并以FMDV感染后的豚鼠血清作为标准阳性血清确定ELISA方法的特异性和灵敏度。结果FMDV感染后的阳性豚鼠血清可以很好地识别VP1epi重组蛋白,用此蛋白包被检测抗FMDV抗体的灵敏度可达1∶3200,并证明所检测的抗体是FMDV特异性的。结论VP1epi重组蛋白可以替代FMDV颗粒用于建立检测抗FMDV抗体的ELISA试剂盒。     

肺结核抗体检测联合CRP检测判断HIV合并肺结核杆菌感染的效果研究

目的 分析肺结核抗体检测联合C反应蛋白(CRP)检测判断HIV合并肺结核杆菌感染的应用价值.方法 采用试剂盒对46例HIV合并肺结核杆菌感染患者和40例HIV感染患者进行结合分枝杆菌抗体检测,并绘制受试者工作特征曲线(ROC),依据ROC曲线确定CRP诊断界点.结果 单纯肺结核抗体检测灵敏度为52.2％ (24/46),特异性为57.5％(23/40).CRP临界点为4.91 mg/L,灵敏度为78.3％(36/46),特异性为57.5％ (23/40).串联检测灵敏度和特异性分别为43.5％ (20/46)和70.0％ (28/40),并联检测灵敏度和特异性分别为87.0％ (40/46)和67.5％ (27/40).结论 肺结核抗体检测串联CRP检测判断HIV合并肺结核杆菌感染的效果更优,具有临床应用价值.     

病毒载量检测鉴别诊断HIV早期感染

目的 研究病毒载量检测在鉴别诊断HIV早期感染中的应用.方法 对13份HIV抗体检测结果高度提示为早期感染的样本进行病毒载量检测,并对这些个体进行随访和抗体检测以证实其感染状况.结果 13份样本中,有12份病毒载量阳性,随访确定1例HIV抗体阳性婴幼儿感染者,11例窗口期感染者;1例HIV抗体呈阳性的婴幼儿,病毒载量阴性,随访证实未感染.病毒载量检测结果与最终的感染状况相符.结论 通过病毒载量检测能够有效鉴别诊断早期感染中的婴幼儿感染(18个月以内抗体呈阳性)和窗口期感染者.病毒载量检测可以作为HIV感染早期不确定样本的诊断依据.     

HIV-1 B''亚型gag-env融合基因的DNA疫苗构建和免疫原性分析

目的 构建HIV-1 B′亚型中国流行株gag和env融合基因的DNA疫苗，对其免疫原性进行研究。方法 根据已报道的HIV-1 B′亚型RIA2分离株gag和env基因的氨基酸序列按哺乳动物密码子使用频率进行优化并人工合成基因，插入真核表达载体pDRVISV1．0中，构建表达RL42 gag-env，融合蛋白的DNA疫苗，pSVRL／GE。用Western blot和抗gag p55抗体细胞内染色的方法体外检测pSVRUGE的表达效率。DNA疫苗pSVRL/GE免疫BALB／c小鼠后，用ELISPOT检测小鼠的细胞免疫反应。结果 限制性内切酶鉴定表明融合基因已成功插入pDRVISV1．0载体中，Western blot证实融合基因可有效表达融合蛋白；细胞内染色结果表明，pSVRL/GE转染的293T细胞中49．8％表达gag p55，荧光强度均值为924；而空载体pDRVISV1．0转染的293T细胞中非特异背景染色只有0．5％。经免疫的小鼠脾细胞体外用H-2^d限制性表位肽AMQMIKET刺激后，ELISPOT检测显示，pSVRUGE免疫小鼠每10^6脾细胞形成226个斑点（SD=140），而空载对照组每1驴脾细胞形成29个斑点（SD=16）（P〈0．05）。结论 所构建的DNA疫苗pSVRL/GE可高效表达相应抗原蛋白，并可有效激活机体的细胞免疫反应。     

表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答

目的 :检测表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答效果。方法 :将真核表达质粒pVAXGE肌肉注射BALB C小鼠 ,观察免疫小鼠脾T淋巴细胞亚群的数量、特异性CTL杀伤率及小鼠免疫后不同时间点血清中IgG抗体滴度。结果 :重组质粒pVAXGE免疫组小鼠脾淋巴细胞进行了增殖 ,脾特异性CTL杀伤率显著高于对照组 (P <0 0 1) ;小鼠免疫后于第 8周血清抗体达到最高。结论 :表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗质粒可诱导BALB C小鼠发生免疫应答     

一株人单克隆抗体在快速竞争抗HIV ELISA中的应用

建立了直接检测抗HIV抗体的ELISA筛选技术。第一代测定法主要是根据夹心法的原理,利用从细胞培养中纯化的病毒,但这样会出现假阳性和假阴性的结果。先前应用的夹心法需要高倍稀释的血清和两步程序,而且只能检出IgG抗体。为了尽早地在感染后测定IgM抗体,以检出抗HIV的免疫应答,因此;利用吸附在固相的重组HIV囊膜蛋白和酶标人单克隆抗体,建立了一种竞争ELISA法。该法既可检测IgM又能检测IgG抗体,而且不需要预先释稀血清,1小时内可得出结果。     

ELISA检测血清S100B蛋白方法的建立与临床应用

建立了S10 0B蛋白双抗体夹心ELISA检测方法 ,为临床提供快速、可信的定量指标。采用抗S10 0B蛋白单克隆抗体为包被抗体 ,抗S10 0多克隆抗体为检测抗体 ,对正常人和神经系统病变患者血清中S10 0B蛋白进行了检测。该法线性范围广 ,灵敏度高 ,重复性好。血清参考范围 (0 0 6 8～ 0 72 8) μg/L。 14 2份临床血清标本总阳性率为脑梗塞 2 1 6 %、脑挫裂伤33 3%、脑出血 5 9%。该法对临床脑及相关疾病的诊断及预后判断有很好的应用前景     

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因疫苗的免疫原性

目的 :检测人免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)gag基因疫苗的免疫原性。方法 :分别以ELISA、荧光抗体染色和乳酸脱氢酶释放法 ,检测免疫小鼠血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量和淋巴细胞杀伤效应。结果 :血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及淋巴细胞杀伤效应 ,重组质粒pVAXGAG免疫组与空载体pVAX1对照组相比较差异显著(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结论 :HIV 1DNA疫苗质粒pVAXGAG在BALB/c小鼠中不仅可诱导特异性体液免疫 ,而且可诱导特异性细胞免疫。