模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的 探讨模拟调强放射治疗(IMRT)对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响.方法 CNE-2分为急速照射(ART)组和模拟IMRT组,两组分别给予6MV X线2、4、6和8 Gy 四个剂量点的照射;ART组的照射时间为1～3 min,模拟IMRT组的完成时间为35 min.另设空白对照组,不接受照射,其余条件相同.照射后12 h,流式细胞术分析细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平.结果 在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组,两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加.模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较,Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义(P均＞0.05);Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义(P均<0.05),且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组.结论 模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高.     

G0/G1期异时相Cyclin B1的表达对细胞凋亡的影响

目的 研究G0/G1期异时相细胞周期素B1(Cyclin B1)的大量表达对细胞凋亡的影响.方法 首先构建了四环素可诱导表达Cyclin B1的单克隆细胞株,其次,筛选出能最大程度阻滞细胞于G0/G1期的胸腺嘧啶核苷(Thymidine)浓度,最后,在阻滞的时间内加入四环素诱导Cyclin B1表达,并用免疫印迹和流式细胞仪检测证实后,用膜联蛋白/碘化丙啶(Annexin Ⅴ/PI)双染法和API法检测细胞凋亡.结果 终浓度为5 mmol/L的胸腺嘧啶核苷能阻滞单克隆细胞株在G0/G1期,并至少维持48 h;在细胞同步化期间加四环素诱导后,Cyclin B1表达增加,并且G0/G1期特异性细胞凋亡增加.结论 G0/G1期异时相Cyclin B1的表达能诱导细胞凋亡.     

全反式维甲酸对HL-60细胞NF-kB、 Cyclin D1表达的影响

目的探讨全反式雏甲酸（ATRA）对HL-60细胞周期、NF-kB和Cyclin D1表达的影响。方法采用不同浓度的ATRA作用于HL-60细胞，于48h后收集细胞，用流式细胞术分析HL-60细胞周期、NF-kB和Cyclin D1表达的变化。结果维甲酸纽HL-60细胞G1期细胞比值升高，S期细胞比例下降，NF-kB、Cyclin D1表达均下降，其中10^-7M、10^-6M浓度组与对照纽相比差异均有显著性（P〈0．05），而10^-8M浓度组却差异均无显著性（P〉0．05）；维甲酸10^-6M浓度组NF-kB、CyclinDI的表达呈显著正相关（r=0．55．P〈0．0l，n=12）。结论全反式维甲酸（ATRA）通过下调NF-KB抑制CyclinDl活性表达，可能是其阻滞细胞周期诱导HL-60细胞分化的机制。     

60Coγ射线对CNE-2细胞周期素B1和增殖细胞核抗原表达的影响

目的研究60Coγ射线分割照射对CNE-2周期素B1(cyclin B1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达和细胞周期分布的影响.方法采用PI单染,用流式细胞术检测细胞周期;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)结合半定量分析方法测定cyclin B1和PCNA mRNA的表达水平.结果 4.0、6.0、8.0 Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞不同时间可发生G1、S和G2期细胞比例增多.4.0、6.0、8.0 Gy照射第1天PCNA表达水平较对照组下降(P＜0.05),第3、5天PCNA表达水平较对照组无明显变化(P＞0.05).照射后cyclin B1表达水平较对照组下降(P＜0.05),但各照射组间cyclin B1表达水平无差别(P＞0.05).结论 60Coγ射线分割照射CNE-2细胞可诱发G1、S、G2期阻滞和抑制PCNA和cyclin B1的表达,但其抑制效应无剂量依赖性.     

Celecoxib对SHG-44细胞株的放射增敏作用

目的评价Celecoxib联合放射作用对SHG-44细胞周期时相分布的影响,探讨Celecoxib调控细胞周期可能的信号通路机制。方法体外培养胶质瘤SHG-44细胞,以不同浓度Celecoxib（0μmol/L、30μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）设立药物组（D组）,不同剂量（0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy）6MV-X线照射设立放射组（R组）,二者交互设立药物＋放射组（D＋R组）,流式细胞术（FCM）检测细胞周期时相分布,逆转录PCR及实时PCR检测Cy-clinB1mRNA表达及水平。结果 FCM周期分析显示,细胞周期各时相分布在D组、R组及D＋R组中均有差异。其中D＋R组50μmol/LCelecoxib时,各照射剂量下与R组比较,G2/M期阻滞均进一步增强（P〈0.05）,但30μmol/L时各照射剂量下的G2/M期阻滞较R组均无明显增加（P〉0.05）。逆转录PCR显示各实验组Cyclin B1均表达;实时定量PCR进一步检测发现,D组30、50、100μmol/L时Cyclin B1表达均较空白对照（0μmol/L）明显降低（P〈0.05）,其中50μmol/L较0和30μmol/L下降明显（P〈0.05）,但50μmol/L和100μmol/L之间差异无统计学意义（P〉0.05）;D＋R组仅在100μmol/L时Cyclin B1表达较D组明显下降,其余浓度（0、30、50μmol/L）D＋R组较D组无明显下降（P〉0.05）。结论 Celecoxib在一定浓度下使SHG-44细胞发生G2/M期阻滞,并可进一步增强放射作用后的G2/M期阻滞,其放射增敏效应可能与下调细胞周期信号传导通路中的下游靶基因Cyclin B1有关。     

Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌中表达的免疫组织化学研究

目的为探讨Cyclin D1和CyclinB1在鼻咽癌中的表达、相关性及临床意义.方法用免疫组化SP法分别检测Cyclin D1和Cyclin B1在58例鼻咽癌组织标本中的表达.结果Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为58.6%(34/58)和60.3%(35/58);Cyclin D1和Cyclin B1 阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期存在显著性差异(P＜0.05);鼻咽癌组织中Cyclin D1和Cyclin B1的表达一致率为60.3%(35/58),无显著相关.结论Cyclin D1和Cyclin B1表达均可以反映鼻咽癌的生存情况,在鼻咽癌预后预测中有重要意义.     

大鼠脑缺血后神经元凋亡的细胞周期特异性和相关基因表达

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的细胞周期特异性分布以及相关基因表达之间的内在关系。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,利用流式细胞分选和原位末端标记及RT-PCR技术,检测正常组和缺血后大鼠脑组织中的神经元凋亡的细胞周期特征,及其Cyclin D1和Cyclin B1基因的表达规律。结果:神经元凋亡可以发生在细胞周期的各个时相,细胞凋亡多发生在G0/G1期,而且神经元也可在S期甚至到达G2期发生凋亡。正常脑组织中神经元表达Cyclin D1,缺血后表达增加;Cyclin B1在正常脑组织的神经元中不表达,缺血后呈现弱表达。结论:脑缺血后神经元可以重新进入细胞周期,其细胞凋亡是多点启动的,可发生在细胞周期的各个时相。Cyclin D1和Cyclin B1的异常激活可能参与了缺血后神经元凋亡的细胞周期调控过程。     

利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白

目的 利用已经构建好的四环素诱导细胞周期素B1 (Cyclin B1)表达的单克隆细胞株,探索可能与Cyclin B1相互作用的蛋白.方法 加入四环素的单克隆细胞株能表达带有Myc和His标签的Cyclin B1.将未诱导和用四环素诱导48 h的细胞裂解后,分别加入10μg Myc的单克隆抗体,用免疫沉淀法(immune precipitation,IP)沉淀可能和Cyclin B1相作用的蛋白,将蛋白混合物行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色法和银染法明确差异蛋白,再用质谱(mass spectrometry,MASS)行蛋白鉴定.结果 用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cyclin-dependent kinase 1,CDK1),细胞周期素依赖蛋白激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2),有丝分裂阻滞缺失样蛋白1(Mitotic arrest deficient-like protein 1,MAD1-like 1,MAD1L1)和热休克蛋白8(heat shock 70kD protein 8 isoform 1).结论 除Cyclin B1和CDK1直接相互作用外,Cyclin B1与CDK2、MAD1L1和热休克蛋白8都可能有直接或间接的相互作用.     

Cyclin D1和CDK4在哮喘大鼠气道重塑中的表达和盐酸氨嗅索的干预研究

目的探讨哮喘大鼠气道重塑的机制和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）在哮喘气道重塑中的表达以及盐酸氨嗅索的干预效果。方法应用卵蛋白激发大鼠建立哮喘气道重塑模型。60只SD大鼠分为3组：正常组,哮喘组和干预组,每组20只。采用免疫组化技术和计算机图象分析系统对大鼠气道Cyclin D1、CDK4的表达和气道重塑进行研究。结果哮喘纽气道壁均可见明显炎症细胞浸润,气道壁厚度增加,Cyclin D1、CDK4阳性表达增加,与正常组和干预组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论Cyclin D1、CDK4参与哮喘气道重塑的发生,盐酸氨嗅索可减少气道壁炎症细胞浸润,预防气道重塑。     

Cyclin D1调控U87胶质瘤细胞周期研究

目的探讨细胞周期蛋白D1（Cyclin D1,CCND1）在U87胶质瘤细胞周期调控中的作用。方法根据NCBI GenBank中cyclin D1序列设计双链siRNA,利用Western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND1对U87胶质瘤细胞周期进程的影响。结果经Western blotting检测,成功抑制了CCND1的表达。并且抑制CCND1后,U87细胞周期停滞在G1期,抑制了U87细胞的G1／S期转换。结论U87细胞中抑制CCND1可以显著抑制细胞周期进程,使细胞周期停滞在G0／G1期,为进一步研究胶质瘤的靶向治疗奠定了理论基础。     

舌鳞癌组织中Cyclin D1的表达与临床病理相关性

目的: 探讨细胞周期素D1(Cyclin D1)在舌癌中的表达及临床病理相关性. 方法: 采用免疫组化ABC法检测42例舌鳞状细胞癌、19例良性肿瘤石蜡包埋标本的Cyclin D1表达. 结果: Cyclin D1在舌癌细胞核中呈阳性表达,阳性表达率55%,与组织学分级及淋巴结转移呈明显正相关(r=0.388, P<0.05). 生存分析资料显示Cyclin D1( )、(-)两组5 a相对复发危险度(RRR) u=1.959(P>0.05),Kaplan-Meier生存曲线示两组5 a累积无复发生存期(RFS)无显著差异(P>0.05). 结论: Cyclin D1在舌癌中异常表达,其表达可能与肿瘤分化及发展相关,Cyclin D1的表达与预后无关.     

Effects of Cyclin D1 Antisense Oligodeoxyneucleotides on the Growth and Expression of G_1 Phase Regulators in Gastric Carcinoma Cells

CyclinDisinvolvedintheregulationofG1phrasecellcycle ,andithasthreesubtypes (D1,D2 ,D3) .CyclinD1islocatedin 11q13,withitscDNAbeing 4 .3kb .Itisidentifiedastheproto oncogengandisfoundtobeoverexpressedinbreast,esophageal,andhepaticcarcinoma .ItwasreportedthatthepositiverateforCyclinD1ingastriccarcino mawas 2 3.7% - 47% [1,2 ] .CyclinD1mRNAoverexpressionwasfoundin 2 2 %ofgastriccancertissues,andwascorrelatedwithinvasionoftu mors[3] .WetransfectedgastriccarcinomacellswithCyclinD1antisenseo…     

石上柏颗粒对肝癌模型小鼠瘤组织中Cyclin D1、CKS表达的影响

目的:研究石上柏颗粒对肝癌模型小鼠瘤组织中Cyclin D1、CKS表达的影响。方法:选取48只肝癌模型小鼠,随机分为为模型组、氟尿嘧啶组、石上柏颗粒组、联合给药组,每组各12例。氟尿嘧啶组给予氟尿嘧啶20 mg·kg~(-1)灌胃,石上柏颗粒组给予石上柏颗粒120 mg·kg~(-1)灌胃,联合给药组同时灌胃氟尿嘧啶20 mg·kg~(-1)和石上柏颗粒120mg·kg~(-1),模型组小鼠给予同体积纯净水,各组小鼠连续灌胃不同药物4周,比较各组小鼠治疗期间肿瘤生长情况,采用RT-PRC法测定各组小鼠瘤组织中Cyclin D1 mRNA、CKS mRNA的表达,采用West-blot法测定瘤组织中Cyclin D1、CKS蛋白的表达。结果:(1)给药1周、2周、3周、4周时氟尿嘧啶组小鼠移植瘤体积均较模型组小鼠显著降低(P0.05),给药2周、3周、4周时石上柏颗粒组小鼠移植瘤体积均较模型组小鼠显著降低(P0.05),给药3周、4周时联合给药组移植瘤体积均较氟尿嘧啶组小鼠显著降低,差异有统计学意义(P0.05);(2)给药4周时氟尿嘧啶组、石上柏颗粒组和联合给药组小鼠瘤组织Cyclin D1 mRNA、CKS mRNA均较模型组显著降低(P0.05),而联合给药组小鼠瘤组织Cyclin D1mRNA、CKS mRNA较氟尿嘧啶组显著降低,差异有统计学意义(P0.05);(3)给药4周时,氟尿嘧啶组、石上柏颗粒组和联合给药组小鼠瘤组织Cyclin D1和CKS蛋白均较模型组显著降低(P0.05),而联合给药组小鼠瘤组织Cyclin D1和CKS蛋白较氟尿嘧啶组显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:石上柏颗粒有显著抗肝癌作用,且可以增强氟尿嘧啶的疗效,其抗肝癌作用可能与其抑制Cyclin D1和CKS表达有关。     

宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中Cyclin D1的表达与HPV感染相关性

目的 探讨细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)与HPV感染之间的相关性,了解Cyclin D1作为预测宫颈上皮内瘤变(CIN)顸后的指标之一.方法 选取深圳医院2003年1月-2008年6月病理确诊为CIN和宫颈鳞癌的患者176例(其中CIN Ⅰ 56例、CIN Ⅱ51例、CINⅢ39例、宫颈鳞癌30例),选取宫颈正...     

钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株Cyclin D1表达的影响

目的：研究钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株细胞周期蛋白（Cyclin）D1表达的影响,探讨钒化钠在细胞生长中的作用机制。方法：以体外培养小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株为研究对象,给予0、0．1、1．0、5．0、10．0、100．0、200．0μmol／L钒化钠,培养4小时后,用Western blot技术检测小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株Cyclin D1表达情况。结果：5．0、10．0μmol／L钒化钠组培养4小时后,Cyclin D1蛋白表达均增高;100．0、200．0μmol／L钒化钠组培养4小时后,Cyclin D1蛋白表达均降低。结论：钒化钠可通过上调和下调Cyclin D1的蛋白表达的双重作用,来影响细胞的生长。     

Galectin-3及CyclinD1在良恶性甲状腺肿块中的鉴别价值

目的探讨Galectin-3和CyclinD1在良、恶性甲状腺肿块中的表达及鉴别价值。方法用免疫组化（SP）法检测31例结节性甲状腺肿（A组）、65例甲状腺乳头癌（B组）及10例正常甲状腺组织（c组）石蜡标本中Galectin-3蛋白和CyclinD1蛋白的表达,并结合临床资料分析。结果B组中Galectin．3的阳性率为83．03％（54／65）,显著高于A组的19．35％（6／31）和C组（0％）,前2组比较差异有统计学意义（X^2=36．360,P〈0．05）;B组中CyclinD1的阳性率为72．30％（47／65）,显著高于A组12．90％（4／31）和C组（0％）,前2组比较差异有统计学意义（X^2=29．740,P〈0．05）;联合检测Galectin-3和CyclinD1在良、恶性甲状腺肿瘤中的表达,发现阳性表达差异有统计学意义（P〈0．01）,且Galectin-3和CyclinD1在B组中的表达也存在正相关（R=0．509,P〈0．05）。CyclinD1蛋白在有无淋巴结转移的甲状腺乳头癌中的阳性率分别为90％（18／20）和64．44％（29／45）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Galectin-3和CyclinD1在甲状腺乳头癌组织中的阳性表达存在正相关性,较结节性甲状腺肿和正常组织有强阳性表达,联合检测甲状腺组织中β-catenin及Galcetin-3的表达有助于甲状腺癌的诊断。