谷氨酰胺对RAW264.7细胞HSP 72表达和TNF-α释放的影响

目的探讨不同条件下谷氨酰胺（Gln）对小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264．7热休克蛋白（HSP）72表达和肿瘤坏死因子（TNF）-α释放的影响。方法将RAW264．7细胞与含Gin（0、0．5和8mmol／L）的培养液分别进行下列处理：①共同培养165min后,加入脂多糖（LPS）刺激0、1、4、12和24h;②共同培养的同时行热应激预处理45min,370C培养2h后加入LPS刺激4h;③共同培养的同时行DON预处理,165min后加入LPS刺激4h;④两者与含LPS的培养液共同培养1h,改用含0．5mmol／L Gln和LPS的培养液继续培养4h。ELISA法检测细胞上清液TNF-α的浓度,Western blotting检测细胞HSP 72蛋白表达。结果①LPS刺激后4h,RAW264．7细胞均有HSP 72表达,经8mmol／L Gln培养者较经0和0．5mmol／L Gln培养者HSP 72表达显著增加（P〈0．01）,而24h时三者HSP 72表达差异无统计学意义（P〉0．05）;Gln促进TNF-α释放,与Gln呈时间和浓度依赖关系。②热应激显著促进Gln诱导的HSP72表达（P〈0．01）,抑制Gln诱导的TNF—α释放,但TNF—α释放仍随Gln浓度增加而增加。③DON预处理不影响HSP 72的表达,但显著抑制TNF—α释放（P〈0．01）。④短时间不同浓度Gln处理,与0．5和8mmol／L Gln共同培养者较与0mmol／L Gln共同培养者HSP72表达显著增加（P〈0．01）;TNF—α的释放随Gln浓度增加有升高趋势,但三者间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Gln可诱导RAW264．7细胞表达HSP 72,但并不足以抑制其TNF—α释放。除诱导HSP 72表达外,Gln在脓毒症时调节机体炎症反应还可能存在其他机制。     

灯盏乙素对OX-LDL损伤的RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达的影响

目的 研究灯盏乙素(scutellarin)对OX-LDL诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7脂质吞噬能力及对PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达调控的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,复制OX-LDL诱导损伤模型,通过油红O染色检测脂质吞噬及试剂盒检测细胞损伤模型胆固醇酯的含量.Western blot和RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达变化.结果(1)油红O结果显示:与正常对照组比较,模型组细胞红染程度明显高于正常对照组;与模型组比较,辛伐他汀组、灯盏乙素50和100μmol/L组细胞红染程度均低于模型组;(2)胆固醇酯含量检测显示:与正常对照组比较,各时间点模型组细胞CE/TC值均明显升高;与模型组比较,各时间点用药组细胞CE/TC值均降低.(3)WB和RT-PCR结果显示:与正常对照组比较,模型组PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达升高;与模型组比较,辛伐他汀组(simvastatin)PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达降低,且灯盏乙素组呈浓度依赖性下调PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达.结论(1)灯盏乙素能明显抑制OX-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞脂质吞噬能力.(2)灯盏乙素能够明显下调OX-LDL诱导损伤的RAW264.7中PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达水平.     

灯盏乙素对OX-LDL损伤的RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达的影响

目的 研究灯盏乙素(scutellarin)对OX-LDL诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7脂质吞噬能力及对PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达调控的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,复制OX-LDL诱导损伤模型,通过油红O染色检测脂质吞噬及试剂盒检测细胞损伤模型胆固醇酯的含量.Western blot和RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达变化.结果(1)油红O结果显示:与正常对照组比较,模型组细胞红染程度明显高于正常对照组;与模型组比较,辛伐他汀组、灯盏乙素50和100μmol/L组细胞红染程度均低于模型组;(2)胆固醇酯含量检测显示:与正常对照组比较,各时间点模型组细胞CE/TC值均明显升高;与模型组比较,各时间点用药组细胞CE/TC值均降低.(3)WB和RT-PCR结果显示:与正常对照组比较,模型组PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达升高;与模型组比较,辛伐他汀组(simvastatin)PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达降低,且灯盏乙素组呈浓度依赖性下调PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达.结论(1)灯盏乙素能明显抑制OX-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞脂质吞噬能力.(2)灯盏乙素能够明显下调OX-LDL诱导损伤的RAW264.7中PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达水平.     

谷氨酰胺对脓毒血症大鼠肠淋巴液抑制RAW264.7细胞分泌功能作用的影响

目的 研究静脉注射谷氨酰胺(Gln)对脓毒血症大鼠肠淋巴液抑制RAW264.7细胞分泌功能作用的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、脓毒血症组(CLP)和Gln组,每组10只.取CLP组和Gln组大鼠,以盲肠结扎穿孔法制备脓毒血症模型,术后10 min内Gln组经尾静脉注射Gln 0.75 g/kg,Sham组和CLP组注射等量生理盐水.各组分别取5只大鼠引流肠淋巴液,另5只于术后6h时采集血样.将各组淋巴液分别与RAW264.7细胞共孵育4h,收集培养上清液.ELISA法测定肠淋巴液和细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的浓度,比色法检测肠淋巴液Gln及血浆D-乳酸浓度.结果 CLP组和Gln组肠淋巴液中TNF-α和IL-6的含量均明显高于Sham组(P＜0.05);CLP组细胞培养上清液中TNF-α和IL-6的浓度显著低于Sham组(P＜0.05),而Gln组细胞培养上清液中TNF-α浓度显著高于CLP组(P＜0.05).三组肠淋巴液中Gln浓度比较差异均无统计学意义(P＞0.05).Gln组血浆中D-乳酸浓度明显低于CLP组(P＜0.05).结论 脓毒血症大鼠肠淋巴液对LPS激活后的RAW264.7细胞分泌功能有明显抑制作用,Gln能部分减轻该抑制作用.     

谷氨酰胺对肝硬化患者血清TNF-α和IL-6水平的影响

目的探讨谷氨酰胺(Gln)对肝硬化患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平的影响及临床意义。方法将44例肝硬化患者随机分为两组,对照组给予常规治疗,试验组在此基础上还给予口服L-2谷氨酰胺呱仑酸钠颗粒,治疗时间8周。对比两组患者治疗前后血清TNF-α和IL-6水平、肝功能变化及自发性腹膜炎发生率。结果试验组用Gln后血清TNF-α和IL-6水平明显降低,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),肝功能有所改善,自发性腹膜炎发生率降低,但与对照组相比,差异无统计学意义。结论谷氨酰胺可以显著降低肝硬化患者血清TNF-α和IL-6水平,有利于改善肝硬化患者的肝损害及降低并发症的发生。     

HSP70对大鼠TNF-α性发热及下丘脑中PGE2含量的影响

目的探讨HSP70是否参与热限作用及可能的机制。方法通过热应激刺激大鼠HSP70表达,观察HSP70对TNF-α性发热时的体温的影响,并用放射免疫法检测下丘脑中PGE2含量的变化。结果HS TNF-α组的体温变化最大值△Tmax(0.78±0.45)℃、TRI8为4.86±2.15、下丘脑PGE2含量为(595.1±143.56)分别低于TNF-α组的△Tmax(1.85±0.46)℃、TRI8(10.41±2.66)、下丘脑PGE2含量(816.99±105.44)。两组相比上述各指标差异均有显著(P<0.01)。结论HSP70的高水平表达可降低TNF-α性发热程度,此作用可能与抑制下丘脑PGE2的生成有关。     

抑制UPS对缺血再灌注大鼠心肌Hsp27和TNF-α的影响

目的研究泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin—proteasomesystem，UPS）对心肌缺血再灌注大鼠热休克蛋白27（heatshockprotein，Hsp27）的影响及与肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的关系，探讨抑制UPS后可能的心肌保护作用机制，为降低心肌缺血再灌注损伤提供新的干预途径。方法64只SD大鼠结扎左冠状动脉前降支30min制作心肌缺血再灌注模型。缺血再灌注＋治疗（I／R＋T）组于再灌注前5min静脉注射蛋白酶体抑制剂MG-1320．75mg/kg，缺血再灌注（I／R）组、缺血（I）组及假手术（Sham）组注射与之相同容积的生理盐水。观察各组心肌梗死范围、再灌注6h后各组大鼠心肌组织Hsp27及TNF—α的表达。结果与I／R组相比，I／R＋T组大鼠心肌梗死范围明显减少（P〈0．05），Hsp27表达显著增加[mRNA水平分别为（95．37&#177;18．38）和（68．14&#177;17．58），P〈0．01；蛋白质积分光密度值分别为（82．57&#177;6．39）和（39．96&#177;7．28），P〈0．001]。TNF—α表达降低[mRNA分别为（45．53&#177;10．65）和（76．52&#177;19．12），P〈0．01；蛋白质积分光密度值分别为（60．12&#177;9．32）和（42．33&#177;5．95），P〈0．01]。结论适当抑制UPS能够显著升高Hsp27的水平，抑制TNF-α表达，减少心肌梗死范围，具有心肌保护作用。     

睾酮对小鼠RAW264.7巨噬细胞肿瘤坏死因子-α和单核细胞趋化蛋白-1表达的影响及其分子机制

目的 探讨雄激素对RAW264.7巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1表达的影响及其分子机制.方法 (1)用不同浓度睾酮处理小鼠RAW264.7巨噬细胞不同时间,分别用RT-PCR和ELISA法检测细胞TNF-α和MCP-1 mRNA和培养上清液中的表达;(2)10-7 mol/L睾酮处理细胞0、10、30、60、180、360 min后,Western印迹检测磷酸化NF-κB(p-NF-κB)的表达.(3)NF-κB的抑制剂PDTC处理细胞1 h后再用不同浓度睾酮处理,用RT-PCR和ELISA法检测TNF-α和MCP-1的表达.结果 (1)①10-9和10-7 mol/L睾酮处理细胞6 h后,TNF-α mRNA表达分别增加1.78倍和1.87倍(均P<0.05),MCP-1 mRNA的表达也显著增加(均P<0.01);②睾酮处理6 h后TNF-α和MCP-1的分泌量的变化差异均无统计学意义;睾酮处理24 h后,TNF-α和MCP-1的分泌量显著增加(均P<0.05);10-7 mol/L睾酮处理组的分泌量显著高于10-9 mol/L睾酮处理组(均P<0.05).(2)随着睾酮处理时间的增加,p-NF-κB的表达增加,60 min达峰值(2.49±0.40)倍,P<0.05,以后逐渐降低.(3)PDTC预处理后再用睾酮处理6 h,TNF-α和MCP-1 mRNA的表达均低于同浓度单纯睾酮处理组(均P<0.05),但仍高于空白对照组(均P<0.05).PDTC预处理后再用睾酮处理24 h,TNF-α和MCP-1的分泌量均低于同浓度单纯睾酮处理组(除10-9mol/L睾酮组外,均P<0.05),但仍高于空白对照组(均P<0.05).结论 睾酮能促进离体的小鼠RAW264.7巨噬细胞TNF-α和MCP-1表达.NF-κB的活化是介导睾酮这一效应的分子机制之一.     

大鼠创伤性休克早期血液单个核细胞释放HSP70的变化及甘氨酸的影响

目的 研究观察血液单个核细胞(blood mononudear cells,BMCs)释放HSP70、TNF-α和IL-6水平的动态变化及甘氨酸的干预影响.方法 建立创伤性休克动物模型,88只Wistar大鼠随机分成3组:治疗组(T组)、休克组(S组)和对照组(C组).在复苏开始时,T组大鼠经颈静脉输入甘氨酸液0.5mL(甘氨酸浓度为100mg/kg的生理盐水);S组输以相同体积的生理盐水;C组仅行腹腔麻醉.分别于复苏后3、6、12和24 h共4个时相点活杀大鼠.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测BMCs释放HSP70、TNF-α和IL-6的水平.结果 S组大鼠复苏后3h BMCs释放HSP70、TNF-α和IL-6水平均出现升高,复苏后6h达高峰.与s组相比,T组大鼠各个时间点BMCs释放HSP70水平均明显增高,而释放TNF-α和IL-6水平均明显降低(均P<0.01).结论 甘氨酸可促进BMCs释放HPS70、抑制BMCs释放TNF-α、IL-6,可望起到防治创伤性休克后SIRS及MODS的作用.     

当归补血汤对RAW264.7细胞的TNF-α、ICAM-1表达的作用

目的探讨当归补血汤抗动脉粥样硬化(As)损伤作用的机制。方法制备当归补血汤含药血清,台盼蓝染色法检测细胞活性,免疫印迹法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白活性变化。结果RAW264.7细胞培养3 d后,台盼蓝染色细胞活力95%。免疫印迹法检测结果显示,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激RAW264.7细胞后TNF-α蛋白活性明显增强,当归补血汤含药血清组与ox-LDL组比较有差异(P0.05);ox-LDL刺激RAW264.7细胞后ICAM-1蛋白活性明显增强,当归补血汤含药血清组与ox-LDL组比较有差异(P0.05)。结论当归补血汤含药血清一定程度上能减少TNF-α、ICAM-1的蛋白表达,减少TNF-α、ICAM-1的表达可能是当归补血汤抗As损伤作用的机制之一。     

依那西普对大鼠切口痛和脊髓TNF-α表达的影响

目的 观察依那西普对切口疼痛模型大鼠疼痛程度、痛阈和脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 雄性 SD 大鼠 60 只随机分为模型对照组(C组)和依那西普组(E组),按术后-I(术前1 h)、4、8、16和 24 h 随机分配大鼠,每组每时间点 6 只.戊巴比妥钠麻醉大鼠后,对大鼠左足底实施手术刺激;C组大鼠鞘内注射生理盐水10 μl,E组大鼠鞘内注射可溶性 TNF-α受体依那西普 100 μg(10 μ1).用 Dynamic Plantar Aesthesiometer 和 Plantar test 7375 分别测定大鼠机械性痛阈和热痛阈;用RT-PCR方法测定腰脊髓 TNF-α mRNA的表达,用 Western blot 方法测定脊髓TNF-α蛋白的表达.结果 ①术后两组大鼠累积疼痛评分(CPS)均升高(P<0.01),E组术后各时间点 CPS 低于 C 组(P<0.05或<0.01).②术后两组大鼠机械性痛阈(HWMT)和热痛阈(HWTL)明显下降(P<0.01),术后各时间点 E组大鼠 HWMT、HWTL 均明显高于 C 组(P<0.05或P<0.01).③术后两组大鼠脊髓 TNF-αmRNA及蛋白表达均上调(P<0.01),术后各时间点 E 组大鼠脊髓 TNF-αmRNA 及蛋白表达水平均明显低于 C 组(P<0.05或P<0.01).结论 大鼠脊髓 TNF-α参与了手术后疼痛的产生和维持,可溶性 TNF-α受体依那西普可抑制大鼠切口痛和脊髓 TNF-αmRNA 及蛋白表达.     

谷氨酰胺对肝移植大鼠肠黏膜NF-κB、ICAM-1、TNF-α表达的影响

目的 研究谷氨酰胺(Glutamine,Gln)对原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT)大鼠肠黏膜内核转录因子-κB(NF-κB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 选择健康雄性Wistar大鼠70只,按随机数字表法分为对照组(n=10)、原位肝移植组(OLT组,n=30)和原位肝移植+Gln组(EEN组,n=30);对照组只分离肝十二指肠韧带,OLT组和EEN组按改良的两袖套法进行原位肝移植.EEN组受体在术前3d、术后3h开始给予肠内营养混悬液能全力+谷氨酰胺灌胃,OLT组及对照组受体仅给予肠内营养混悬液.对照组分离肝十二指肠韧带12 h后,OLT组和EEN组肝移植后12、24、72 h分别取回肠肠壁组织免疫组化测定肠组织NF-κB与ICAM-1的表达,荧光定量PCR(fluorescence quantitive-polymerase chain reaction,FQ-PCR)测定肠黏膜TNF-α mRNA表达、HE染色观察回肠组织的病理改变,测定微绒毛长度.结果 与对照组比较OLT组和EEN组肝移植后12、24、72 h,NF-κB、ICAM-1、TNF-αmRNA表达明显升高,肠黏膜损害明显加重,差异有统计学意义(P＜0.01);而肝移植后12、24、72 h EEN组与OLT组比较,NF-κB、ICAM-1、TNF-α mRNA表达明显下降,肠黏膜损害明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 大鼠原位肝移植可引起肠组织中NF-κB活化,ICAM-1、TNF-α表达上调导致肠黏膜屏障损伤,Gln能抑制肝移植大鼠肠黏膜NF-κB活性,减少ICAM-1、TNF-α的表达而起到肠黏膜保护作用.     

谷氨酰胺对急性腹膜炎大鼠IL-1、IL-6和TNF-α表达的影响

目的 探讨谷氨酰胺对急性腹膜炎大鼠IL-1、IL-6和TNF-α表达的影响.方法 90只Wistar大鼠随机分为 CLP组(n=30)、GLN组(n=30)和对照组(n=30),CLP组和GLN组均采用大鼠盲肠结扎加穿孔(CLP)制作急性腹膜炎模型;GLN组术后于腹腔注射谷氨酰胺(500mg/kg·d),CLP组术后注...     

谷氨酰胺对大鼠眼挫伤后视网膜HSP27和NF-κB表达的影响

目的制备大鼠视网膜挫伤模型,探讨谷氨酰胺对眼挫伤大鼠视网膜HSP27和NF-κB表达的调节作用。方法SD雄性大鼠45只,5只用于正常对照组,余下40只仿Allen’s重击法制作视网膜挫伤模型。将模型制备成功大鼠随机分为两组:模型组和Gln治疗组。每组又分12h,24h,3d,7d四个时间点,每个时间点大鼠5只。各组于给药给水停止后第2天取材,制备石蜡切片。应用免疫组织化学方法检测视网膜组织中HSP27和NF-κB蛋白的表达变化。结果正常组大鼠视网膜内均有HSP27和NF-κB蛋白表达;眼挫伤后HSP27蛋白表达逐渐下降,至3d时表达降至低谷。除12h外,模型组HSP27蛋白表达均比正常对照组低;而NF-κB蛋白表达在眼挫伤后逐渐上升,3d达峰值。除12h外,其余各组NF-κB蛋白表达均比正常对照组高;在Gln组,HSP27蛋白表达均比模型组高,而NF-κB蛋白表达均比模型组低。结论 HSP27和NF-κB参与了眼挫伤视网膜病变过程;谷氨酰胺上调了挫伤视网膜HSP27蛋白表达,下调了NF-κB蛋白表达,这可能是谷氨酰胺对眼挫伤视网膜病变产生保护作用的机理之一。     

HSR对TNF-α诱导的肺癌细胞凋亡的拮抗作用

目的 研究热休克反应（HSR）在肺癌细胞GLC-82增殖及凋亡过程中的作用,为肺癌的临床治疗提供实验参考。方法 用体外培养的肺癌细胞GLC-82细胞分为热休克（HS）组和非热休克（NHS）组,每组分为对照组和TNF-α组,TNF-α的浓度分别为25μg／L、50μg／L和100μg／L（T1～T3）,采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡指数（AI）;噻唑蓝比色法（MTT、）检测肿瘤细胞的细胞增殖情况;以3H-TdR掺入试验检测肿瘤细胞的DNA合成情况。结果 HS组细胞凋亡百分率明显减少;MTT显示HSR可以使细胞GLC-82抵抗TNF-α的细胞毒作用明显增强,促进细胞增殖;DNA合成明显增加;且与TNF-α呈剂量依赖效应。结论 HSR在肺癌细胞GLC-82生长增殖过程中起促进作用,而对细胞凋亡起拮抗作用。     

谷氨酰胺对脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子分泌的影响

目的 研究谷氨酰胺(Gln)体内作用对脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子分泌的影响.方法 昆明小鼠60只,随机分为假手术组(Sham组,n=20)、手术对照组(Con组,n=20)、术后Gin处理组(Gln组,n=20).Gln组和Con组小鼠采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型,建模后即刻经尾静脉分别注射Gln 0.75 g/kg和等量生理盐水;Sham组小鼠仅开腹翻动盲肠,术后处理同Con组.三组均于6 h后采血收集血清,腹腔灌洗分离巨噬细胞;ELISA法测定巨噬细胞裂解液及血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-10的水平;RT-PCR测定巨噬细胞TNF-α mRNA表达;Western blotting检测巨噬细胞热休克蛋白72(HSP72)表达.结果 Gln组腹腔巨噬细胞裂解液中TNF-α和IL-6水平明显低于Con组(P＜0.01或0.05),而与Sham组相比无显著差异(P＞0.05).Gln组血清中TNF-α水平明显低于Con组(P＜0.05),但两组TNF-α、IL-6和IL-10水平均高于Sham组.Gln组小鼠腹腔巨噬细胞HSP 72表达较Con组和Sham组显著升高(P＜0.01).Con与Gln组巨噬细胞TNF-α mRNA表达无显著差异,但均明显高于Sham组(P＜0.01).结论 Gin体内作用可以抑制脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,同时增加其HSP 72的表达.     

丙种球蛋白对川崎病患儿血清TNF-α表达的影响

目的:探讨丙种球蛋白对川崎病(KD)患儿血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达变化的影响.方法:选择我院确诊为KD的患儿46例,按有无冠状动脉损伤分为损伤组20例和无损伤组26例;另外随机选择30例年龄相仿的健康儿童作为对照组.采用酶联免疫吸附法分别检测经丙种球蛋白治疗前后的KD患儿及对照组患儿血清TNF-α表达变化.结果:治疗前,KD患儿急性期血清TNF-α表达水平显著高于对照组(P<0.05);与无损伤组比较,损伤组血清TNF-α表达水平升高更显著(P<0.05);与治疗前相比,治疗后KD患儿血清TNF-α表达水平显著降低 (P<0.05).结论:血清TNF-α表达水平在儿童KD急性期、尤其伴有冠状动脉损伤时显著升高,NF-α水平动态变化可用于评价川崎病患儿病情及其预后.     

川芎嗪对大鼠腹膜粘连及TNF-α表达的影响

目的探讨川芎嗪在TNF-α蛋白表达及大鼠腹膜粘连形成中的作用。方法采用盲肠刮擦及切除右侧壁腹膜和腹膜下一层肌肉的方法制作S-D大鼠腹膜粘连模型;关腹前注射川芎嗪注射液(约为50mg/kg)和生理盐水;术后7d行二次开腹手术,取粘连组织,光镜下观察粘连组织病理变化。链霉亲和素免疫组化法(SABC法)检测粘连组织中TNF-α蛋白的表达量。放免法检测血液中TNF-α的浓度。结果川芎嗪组粘连面积明显减少,川芎嗪组粘连评分结果(2.10±0.99)明显低于模型组(3.80±0.42)和生理盐水组(3.60±0.70)(P<0.05),模型组和生理盐水组的TNF-α呈较一致的阳性反应,川芎嗪组的TNF-α呈现较弱阳性的反应或不表达,其染色强度评分(0.08±0.14)明显低于模型组(1.39±0.61)和生理盐水组(1.32±0.55)(P<0.05)。血液中的TNF-α浓度值在模型组(2.24±0.47)、生理盐水组(2.58±0.38)和川芎嗪组(2.51±0.42)三组之间差异无显著性(P>0.05)。结论川芎嗪通过抑制粘连组织中TNF-α的表达来减低大鼠腹膜粘连的程度,但对血液中的TNF-α含量无影响。     

谷氨酰胺对脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子分泌的影响

目的研究谷氨酰胺(Gln)体内作用对脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子分泌的影响。方法昆明小鼠60只,随机分为假手术组(Sham组,n=20)、手术对照组(Con组,n=20)、术后Gln处理组(Gln组,n=20)。Gln组和Con组小鼠采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型,建模后即刻经尾静脉分别注射Gln 0.75 g/kg和等量生理盐水;Sham组小鼠仅开腹翻动盲肠,术后处理同Con组。三组均于6 h后采血收集血清,腹腔灌洗分离巨噬细胞;ELISA法测定巨噬细胞裂解液及血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-10的水平;RT-PCR测定巨噬细胞TNF-αmRNA表达;Western blotting检测巨噬细胞热休克蛋白72(HSP72)表达。结果Gln组腹腔巨噬细胞裂解液中TNF-α和IL-6水平明显低于Con组(P<0.01或0.05),而与Sham组相比无显著差异(P>0.05)。Gln组血清中TNF-α水平明显低于Con组(P<0.05),但两组TNF-α、IL-6和IL-10水平均高于Sham组。Gln组小鼠腹腔巨噬细胞HSP 72表达较Con组和Sham组显著升高(P<0.01)。Con与Gln组巨噬细胞TNF-αmRNA表达无显著差异,但均明显高于Sham组(P<0.01)。结论Gln体内作用可以抑制脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,同时增加其HSP 72的表达。     

炎调方对巨噬细胞中HSP70表达及其效应的影响

目的:观察炎调方药物血清对离体巨噬细胞中热休克蛋白70(HSP70)及其他相关细胞因子的调控效应,以验证炎调方治疗脓毒症的作用途径和位点。方法:培养大鼠巨噬细胞RAW 264.7,将培养后的巨噬细胞RAW 264.7分为空白对照组(RAW 264.7+培养液)、正常血清组(RAW 264.7+正常大鼠血清)、炎调方药物血清组(RAW 264.7+炎调方药物血清),每组设4个平行孔。采用MTT比色法测定细胞增殖,确定炎调方药物血清的无毒性剂量范围;采用qRT-PCR方法检测细胞HSP70、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-8的mRNA表达;采用Western blot方法检测细胞HSP70、NF-κB蛋白表达,以ELISA方法检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-8蛋白表达。结果:炎调方药物血清的无毒性浓度范围包括10%~30%,故后续实验选取20%浓度的炎调方药物血清进行。正常血清组的各项指标与空白对照组比较,其差异均无统计学意义(P0.05);与空白对照组和正常血清组比较,炎调方药物血清组RAW 264.7细胞的HSP70 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.01),NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-8的mRNA和蛋白表达均明显降低(P0.01)。结论:炎调方治疗脓毒症的作用机制可能是上调HSP70的表达,进而抑制NF-κB的活化和相关细胞因子的表达。