葛根素对大鼠肝缺血再灌注后Caspase-3和Bcl-2表达的影响

目的：探讨葛根素对肝缺血再灌注损伤Caspase-3、Bcl-2表达及肝细胞凋亡的影响。方法：建立大鼠肝脏部分缺血再灌注模型,以葛根素预处理,免疫组化法检测Caspase-3和Bcl-2表达,透射电镜观察肝细胞凋亡的超微结构改变。结果：肝缺血再灌注后发生了显著的细胞凋亡现象,Caspase-3表达升高,Bcl-2蛋白表达减少,6h恢复正常,其后逐渐升高。葛根素预处理使细胞凋亡明显减轻,Caspase-3表达明显下降,Bcl-2持续高表达。结论：葛根素可上调Bcl-2的表达,抑制Caspase-3的表达,减少肝细胞凋亡,对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用。     

大鼠肢体缺血再灌注对脊髓神经元细胞凋亡的影响及机制探讨

目的：观察在大鼠肢体缺血再灌注脊髓神经元损伤的过程中,细胞凋亡以及Bcl-2、Caspase-3蛋白质表达的变化。方法：复制实验性大鼠肢体缺血再灌注损伤模型,观察脊髓L1-5节段的病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组化检测脊髓神经元Bcl-2、Caspase-3蛋白质表达的变化。结果：肢体缺血再灌注后Bcl-2、Caspase-3表达明显增多,Bcl-2在12h达高峰,之后下降;Caspase-3在24h达高峰,24h的凋亡细胞数最多,Caspase-3的表达与凋亡细胞数呈正相关关系,r=0．946。结论：肢体缺血再灌注后出现脊髓神经元损伤,并有细胞凋亡发生。     

葛根素对肝脏缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的 探讨葛根素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法雄性SD大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组（HIR）和HIR-葛根素预处理组。肝脏缺血再灌注后,通过Westernblot方法,分析大鼠肝脏组织中P21蛋白表达的变化,同时利用Annexin V/PI双染色流式细胞仪,检测肝脏缺血再灌注损伤后肝细胞凋亡率的变化。结果 与假手术组相比,大鼠肝脏缺血再灌注损伤后,肝脏组织中P21蛋白表达水平显著升高,肝细胞凋亡率增加;而经过葛根素预处理后,模型组动物肝脏组织中P21蛋白表达水平显著降低,同时肝细胞凋亡率下降。结论葛根素可能通过调节P21蛋白的表达,抑制肝细胞的凋亡,发挥对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。     

葛根素对脑缺血再灌注大鼠海马组织P-STAT3、P53表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织磷酸化的转录激活蛋白3(STAT3)、凋亡因子P53表达的影响及其保护机制。方法采用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,利用葛根素干预,分别于缺血2 h再灌注6 h、24 h、72 h 3个不同时间点采用Longa评分法进行神经功能缺损评分、TUNEL法检测凋亡细胞数,免疫组织化学法检测海马组织磷酸化的STAT3(P-STAT3)及细胞凋亡因子P53的表达。结果与假手术组比较,葛根素组与缺血再灌注组的神经功能缺损加重,凋亡细胞数增多,P-STAT3和P53表达增高,差异均具有统计学意义(P0.05);与缺血再灌注组比较,葛根素组神经功能缺损评分明显下降,凋亡阳性细胞数均见明显减少,P-STAT3和P53表达显著降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论脑缺血再灌注损伤后STAT3被异常激活,其磷酸化水平显著增高;葛根素可能是通过抑制STAT3的磷酸化水平,降低P53的表达起到抗神经细胞凋亡作用,从而改善大鼠脑组织的缺血性损伤。     

细胞色素c在再灌注肺损伤中的作用及葛根素对其的干预

目的：探讨细胞色素c（cyt-c）在肺缺血再灌注损伤中的作用及葛根素对其的影响。方法：采用大鼠单肺缺血再灌注损伤模型。30只wistar大鼠,随机分为三组：对照组（C组）、缺血再灌注组（IR组）和葛根素干预组（Pur组）。采用原位缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡,免疫组化SP法检测cyt-c和caspase-3蛋白的表达。结果：①IR组肺组织细胞cyt-c和caspase-3蛋白表达较C组明显增强,细胞凋亡指数显著升高（P〈0.01）;葛根素干预后,cyt-c、caspase-3及细胞凋亡指数均明显下调（P〈0.01）。②cyt-c表达水平与caspase-3和细胞凋亡指数均呈显著正相关（P〈0.01）。结论：cyt-c参与肺缺血再灌注损伤的病理过程,葛根素可能通过抑制cyt-c通路保护肺组织。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对急性高眼压大鼠视网膜损伤的保护作用

 目的探讨Rho 激酶抑制剂Y-27632 对急性高眼压大鼠视网膜损伤的保护作用。方法50 只SD大鼠随机分为正常对
照组（ n=10）、生理盐水对照组（ n=20,玻璃体腔内注射生理盐水）和Y-27632 治疗组（ n=20,玻璃体腔内注射100 nmol
Y-27632）,选取右眼做为实验眼。正常对照组直接处死取材。生理盐水对照组及Y-27632 治疗组分别用前房加压灌注法建立大
鼠急性高眼压损伤模型,并于损伤后24 和168 h取标本。HE 染色观察视网膜组织病理学的改变,测量视网膜厚度;TUNEL 染
色检测细胞凋亡情况,计算凋亡指数;Western blot 检测Caspase-3 蛋白表达的变化。结果急性高眼压损伤24 h后,Y-27632
治疗组视网膜凋亡细胞数量和Caspase-3 蛋白表达水平均低于生理盐水对照组（ P< 0.01）。损伤168 h后Y-27632 治疗组视网
膜厚度大于生理盐水对照组（ P< 0.01）。结论Y-27632 可以减轻大鼠急性高眼压引起的视网膜损伤,具有神经保护作用。     

葛根素对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的：观察缺血再灌注对大鼠心肌细胞凋亡的影响及葛根素对其保护作用，并探讨其可能机制。方法：采用原位末端标记（TUNEL）技术、流式细胞仪方法观察心肌缺血再灌注损伤前后以及使用葛根素后细胞凋亡的情况；用免疫组化方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况，并在光镜及电镜下观察细胞形态学变化。结果：（1）心肌缺血再灌注损伤后TUNEL阳性细胞数、流式细胞仪中凋亡指数较假手术组增高（P〈0．05），使用葛根素后下降（P〈0.05）；（2）缺血再灌注组Bax、Bcl-2蛋白表达较假手术组增高，加用葛根素后Bcl-2表达增高，而Bax表达则降低。结论：葛根素能抑制心肌缺血再灌注损伤中的细胞凋亡，增加Bcl-2、降低Bax的表达。     

葛根素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中细胞间黏附分子-1表达的影响及意义

目的探讨葛根素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的抑制及对视网膜的保护作用。方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型,分缺血再灌注组、缺血再灌注 葛根素组和对照组。每组按再灌注时间的不同分为缺血再灌注1、6、12、24、48和72h组。以免疫组织化学法检测各期视网膜中ICAM-1的表达,同时记录各期大鼠ERGa、b波波幅,通过透射电镜观察各期视网膜的超微结构。结果在缺血再灌注组,ICAM-1在再灌注6h后开始表达,24h表达最强,以后逐渐下降。在缺血再灌注 葛根素组,在再灌注6h可见ICAM-1微弱表达,再灌注12h后开始表达较为明显,24h表达最强,但明显低于缺血再灌注未处理组同期ICAM-1的表达。对照组中未见明显的ICAM-1的表达。同时,缺血再灌注 葛根素组各时期ERGa、b波波幅高于缺血再灌注组而低于对照组。视网膜超微结构显示缺血再灌注 葛根素组细胞受损情况明显好于缺血再灌注组。结论葛根素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中ICAM-1的表达具有抑制作用,从而对视网膜缺血再灌注损伤有保护作用     

大鼠视网膜缺血再灌注损伤中细胞凋亡的动态表达

目的研究大鼠视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）后视网膜细胞凋亡的动态变化。方法42只大鼠随机分为两组,对照组6只;实验组按照缺血时间段1h、6h、12h、24h、48h、72h随机分为6组,每组6只,通过结扎大鼠劲总动脉1h后再灌注．检测各组大鼠视网膜内凋亡细胞。结果再灌注后,细胞凋亡主要在内核层和外核层表达。大鼠视网膜缺血再灌注6h逐渐出现细胞凋亡,24h细胞凋亡达到高峰,然后细胞凋亡逐渐减少。结论细胞凋亡在视网膜缺血再灌注损伤中发挥着重要作用。     

葛根素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中细胞间黏附分子一1表达的影响及意义

目的 探讨葛根素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的抑制及对视网膜的保护作用.方法 建立大鼠视网膜缺血再灌注模型,分缺血再灌注组、缺血再灌注 葛根素组和对照组.每组按再灌注时间的不同分为缺血再灌注1、6、12、24、48和72 h组.以免疫组织化学法检测各期视网膜中ICAM-1的表达,同时记录各期大鼠ERGa、b波波幅,通过透射电镜观察各期视网膜的超微结构.结果 在缺血再灌注组,ICAM-1在再灌注6h后开始表达,24h表达最强,以后逐渐下降.在缺血再灌注 葛根素组,在再灌注6h可见ICAM-1微弱表达,再灌注12 h后开始表达较为明显,24 h表达最强,但明显低于缺血再灌注未处理组同期ICAM-1的表达.对照组中未见明显的ICAM-1的表达.同时,缺血再灌注 葛根素组各时期ERGa、b波波幅高于缺血再灌注组而低于对照组.视网膜超微结构显示缺血再灌注 葛根素组细胞受损情况明显好于缺血再灌注组.结论 葛根素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中ICAM-1的表达具有抑制作用,从而对视网膜缺血再灌注损伤有保护作用     

肺缺血再灌注损伤时一氧化碳的变化及葛根素对其影响

目的:观察兔肺缺血再灌注损伤时一氧化碳的变化及葛根素对其的影响.方法:30只健康日本大耳白兔随机分成假手术对照组(C组)、肺缺血再灌注组(IR组)和葛根素组(Pur组).复制兔单侧肺缺血再灌注损伤模型,各组在缺血前、缺血1 h、再灌注1 h、3 h和5 h分别抽血,检测一氧化碳血红蛋白(COHb)浓度、环磷酸鸟苷(cGMP)含量.实验结束时取肺组织检测cGMP含量,电镜观察肺组织超微结构的改变.结果:血浆COHb浓度、cGMP含量和肺组织cGMP含量IR组、Pur组明显高于C组,以Pur组为著(P＜0.01).电镜显示IR组有明显的肺超微结构损伤,而Pur组损伤较轻.结论:葛根素可通过提高内源性C0水平,对缺血再灌注损伤肺组织发挥保护作用.     

葛根素对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究葛根素对兔脊髓缺血再灌注损伤的作用。方法：20只雄性新西兰大白兔随机分成缺血组（A组,n=10）及葛根素组（B组,n=10),夹闭腹主动脉肾下段20min,建立兔脊髓腰尾段血模型,B组于夹闭前10min静脉注射葛根素30mg.kg^-1,A组则静脉注射生理盐水,测定夹闭前、后及再灌注后血浆中丙二醛（MDA）浓度及超氧化物歧化酶（SOD)活性,再灌注4,8,12,24及48h分别对动物后肢运动功能评分;再灌注48h后,处死动物,制作切片,观察其组织病理变化。结果缺血及再灌注后B组MDA值明显低于A组（P＜0．05）,而OD活性明显高于A组（P＜0．05）;再灌注后4,8,12,24及48h时的神经功能评分B组明显高于A组（P＜0．05）;光镜下,与A组相比,B组脊髓组织损伤显著减轻,形态基本正常的前角细胞较多。结论葛根素对兔脊髓缺血再灌注损伤有显著的保护作用。     

葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马 CA1区神经元损伤的影响及其机制

目的：探讨葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马 CA1区神经元损伤的保护作用及其机制。方法雄性 SD 大鼠30只,随机均等分为假手术组、模型组、葛根素预处理组。采用线栓法阻断大鼠大脑中动脉血供,60 min 后拔出栓线造成局部脑缺血再灌注损伤。葛根素预处理组在缺血前1 h 腹腔注射葛根素（100 mg/ kg ）。脑缺血再灌注后第5天,HE 染色法观察海马 CA1区神经元的组织形态学变化,免疫组化法检测海马 CA1区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）的表达。结果 HE 染色结果显示,与模型组相比较,葛根素预处理明显减少脑缺血再灌注引起的海马 CA1区神经元损伤（P<0.05）;免疫组化结果显示,与模型组相比,葛根素预处理使海马 CA1区 Caspase-3、Caspase-9的表达明显降低（ P <0.05）。结论缺血前1 h 葛根素预处理对局灶性脑缺血大鼠海马 CA1区神经元损伤有保护作用,其主要机制可能与抑制凋亡相关蛋白 Caspase-3、Caspase-9的表达有关。     

家兔脊髓缺血再灌注损伤后内皮细胞功能和血小板活化状态的动态研究

目的 探讨内皮细胞功能和血小板活化状态在脊髓缺血再灌注损伤(SCI/RI)中的意义.方法 采用Zivin法建立家兔SCI/RI模型,动态观察SCI/RI前后血浆一氧化氮(NO)和血小板a颗粒膜蛋白140(GMP140)的变化.结果 NO在I/R组缺血末期显著上升(P<0.01),I/R 2h达到峰值,与sham组比较有显著意义(P<0.01);I/R6h下降但仍有显著差异(P<0.05);GMP-140在sham组无显著变化,在I/R组缺血末期显著升高(P<0.01),I/R2h后逐渐下降到正常水平.结论 血浆NO和GMP140在SCI/RI后显著升高,表明内皮细胞受刺激/损伤和血小板过度活化参与了脊髓I/R损伤与修复病理过程.

Abstract：

Objective To study the changes of vascular endothelial cell function and platelet activation in rabbit spinal cord following ischemia-reperfusion (I/R) injury and their roles in the spinal cord injury. Methods Rabbit spinal cord I/R injury models were established using Zivin method, and the changes in plasma NO and GMP140 levels were dynamically monitored after the injury. Results Plasma NO level increased significantly in the I/R group at the end of the ischemia, and reached the peak level at 2 h of reperfusion as compared to that in sham-operated group (P<0.01). Plasma NO level decreased at 6 h of reperfusion, but still significantly higher than the level in the sham-operated group (P<0.05). Plasma GMP140 underwent no significant changes in the sham-operated group, but significantly increased in the I/R group at the end of the ischemia,followed by gradual declination to the normal level at 2 h of reperfusion. Conclusion Spinal cord I/R injury causes overexpressions of NO and GMP140, suggesting the involvement of endothelial cell injury and platelet overactivation in the pathological process and repair of spinal cord I/R injury.     

Protective effects and mechanism of puerarin on learning-memory disorder after global cerebral ischemia-reperfusion injury in rats

Objective:To observe the effect of puerarin on the learning-memory disorder after global cerebral ischemia-reperfusion injury in rats,and to explore its mechanism of action.Methods:The global cerebral ischemia-reperfusion injury model was established using the modified Pulsinelli four-vessel occlusion in Sprague-Dawley rats.Rats were intraperitoneally injected with puerarin(100 mg/kg) 1 h before ischemia and once every 6 h afterwards.The learning-memory ability was evaluated by the passive avoidance test...     

腺苷预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的通过观察腺苷对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白-78（GRP-78）和半胱氨酸天冬氨酸特异性
蛋白酶12（caspase 12）表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用。方法通过阻断大鼠肾动脉水平的腹主动脉90 min建立大
鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。27只成年健康雄性SD大鼠随机分成3组：假手术组（A组）;缺血再灌注损伤组（B组）;腺苷预处
理组（C组）。于再灌注6、12、24 h观察大鼠并对其后肢运动功能进行评分,取再灌注24 h大鼠的L2-L5节段脊髓组织作HE染
色及TUNEL 染色,Western blot检测GRP-78和caspase 12蛋白的表达。结果HE染色结果显示：C组细胞水肿等组织形态学变
化较B组轻;TUNEL染色结果显示：与A组比较,B组的凋亡细胞数量显著增加;与B组相比,C组凋亡细胞数量较少。WB检
测结果显示：相较于B组,C组GRP-78蛋白表达增多（P<0.01）,caspase 12蛋白表达减少（P<0.01）。结论腺苷通过上调GRP-78
的表达,下调caspase 12的表达,抑制细胞凋亡而发挥其保护作用。     

葛根素对实验性缺血性脑血管病保护作用的细胞分子机理研究

目的探讨葛根素对大鼠缺血性脑细胞损伤的保护作用,以HSP70蛋白、Fas蛋白表达水平、神经细胞死亡情况等指标阐明其作用机制.方法采用闭夹大脑中动脉制作局部特定区域急性脑缺血大鼠模型,闭夹和重新开放大脑中动脉引起再灌注损伤制作缺血再灌注损伤模型,并在损伤前给予葛根素进行干预.对实验标本作HE染色,及用免疫组化SP法测定HSP70和Fas表达情况,光镜观察脑组织损伤程度.结果①在急性脑缺血期,葛根素干预组的HSP70蛋白表达明显强于单纯缺血组(P＜0.01),两组间Fas表达比较则无统计学意义(P＞0.05);葛根素干预组的神经细胞死亡率明显少于单纯缺血组,葛根素干预暴露因素与神经细胞死亡呈显著负相关(P＜0.01).②在脑缺血再灌注期,葛根素保护组的HSP70蛋白表达明显强于非保护组(P＜0.01),而Fas蛋白表达明显弱于非保护组(P＜0.01),葛根素保护组的神经细胞死亡率明显少于非保护组,葛根素干预暴露因素与神经细胞死亡呈显著负相关(P＜0.01).结论葛根素对急性脑缺血及缺血再灌注所致的脑细胞损伤均有保护作用,对急性缺血性损伤的保护作用可能主要通过上调HSP70蛋白的表达而实现的,而与Fas蛋白的表达相关不强;对脑缺血再灌注损伤的保护作用除上调HSP70表达外,还可能与下调Fas蛋白的表达、减少细胞凋亡有关.     

重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤时糖调节蛋白78表达的影响

目的探讨重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护中糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响。方法雄性SD大鼠36只,体重250～300g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12)假手术组(S组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和重复高压氧预处理(HOP组)。HOP组采用高压氧预处理[1000ml/L O2,2.5 atmosphere absolute(ATA),1h/d,5天],最后一次处理后24h,I/R组和HOP组采用Zivin法制备脊髓缺血再灌注模型(缺血15min,再灌注1h),24、48、72h后分别评价后肢运动功能,然后处死大鼠,取L5～7节段脊髓组织,测定GRP78的mRNA及其蛋白表达水平,光镜下观察病理学结果。结果与S组比较,I/R组和HOP组后肢运动功能和脊髓前角正常运动神经元计数降低,脊髓组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.05);与I/R组比较,HOP组后肢运动功能和脊髓前角正常运动神经元计数升高,脊髓组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.05)。HOP组脊髓组织病理学损伤程度轻于I/R组。结论重复高压氧预处理可上调大鼠脊髓缺血再灌注时GRP78表达,从而减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤。     

兔脊髓缺血再灌注损伤后线粒体凋亡途径的变化及灯盏细辛预处理的干预作用

目的：探讨兔脊髓缺血再灌注损伤后线粒体凋亡途径机制及灯盏细辛（Herba Erigerontis Breviscapi）注射液预处理的干预作用。 方法：日本大耳白兔60只随机分为假手术组、缺血组、再灌注组（1、6、24、48 h）和灯盏细辛组（1、6、24、48 h）。采用腹主动脉阻断法复制兔脊髓缺血再灌注损伤模型,缺血组缺血50 min,再灌注组缺血50 min后分别再灌注1、6、24、48 h。灯盏细辛组在缺血前30 min应用灯盏细辛9 mg/kg。用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用酶联免疫吸附测定法检测脊髓神经细胞细胞质及血清的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶9（caspase-9）和凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor,AIF）的含量。 结果：与假手术组和缺血组比较,再灌注组脊髓细胞凋亡率和细胞质中AIF和caspase-9含量增加,血清AIF和caspase-9含量于再灌注1 h和6 h下降,但于24 h和48 h升高。与缺血再灌注组比较,灯盏细辛可以降低脊髓细胞的凋亡率及血清和脊髓神经细胞细胞质中AIF与caspase-9的含量。 结论：脊髓缺血再灌注后神经细胞的凋亡与线粒体途径有关,灯盏细辛可通过此途径抑制脊髓神经细胞凋亡。