一种新型膜表达报道基因载体

报道基因载体是研究真核基因调控的常用工具。现有的报道基因载体多以间接方式检测报道基因的表达,有的还需要借助放射性同位素。本文作者构建了一种可以快速克隆的新型膜表达报道基因载体。     

JIP——一种新型的胞浆抑制蛋白

JIP(JNK相互作用蛋白)是JNK的一种特异性胞浆抑制因子,引起JNK在胞质中滞留,阻止c-Jun、ATF-2、ElK等转录因子的活化,抑制受JNK调控的下游基因的表达.另外,JIP作为支架蛋白在MAPK信号途径发挥重要作用,现在JIP已作为一种新型的生物分子工具应用于JNK/SAPK/MAPK的研究.在哺乳动物中,发现了JIP的同源基因IBl,JIP参与了Glut2和胰岛素基因的表达.JIP作为肿瘤治疗候选的分子药物,可能在肿瘤治疗中发挥重要作用.     

一种新型炎症诱导型腺病毒表达系统的功能研究

目的 构建一种新型炎症诱导型重组腺病毒载体用于生理调控型基因治疗。方法 构建携带IL-1β增强子（-3690／-2720）／IL-6启动子（-590／＋2）重组体（IL1／IL6）的荧光素酶报告质粒和重组腺病毒载体，体外转染HepG2和RAW264．7细胞，观察各种细胞外刺激对IL1／IL6启动子活性调控的变化，并以动物实验观察炎症因子能否在体内通过调控IL1／IL6的启动活性而控制目的基因的表达。结果经荧光素酶分析显示IL1／IL6的本底启动活性较低，可经多种细胞外刺激而诱导活化，且具有较广泛的活性诱导范围；在体内，它可随炎症反应程度的变化而自主地调控外源基因的表达。结论携带IL1／IL6重组体启动子的重组腺病毒载体可作为生理反应调控型基因治疗载体用于全身性炎症、自身免疫性疾病等的治疗与研究。     

一种新型慢病毒载体制备体系的改进

目的完善已初步建立的以痘病毒为辅助病毒的慢病毒载体（LV）瞬时制备体系。方法通过同源重组质粒pZIPPY-NEO/GUS,将vTF7-3痘病毒D13L基因的ORF通过同源重组被新霉素基因（neo）以及可视性筛选基因（GUS）替代,制备D13L缺陷性痘病毒（vTF7-3-ΔD13L）。结果经RT-PCR鉴定,D13L基因被完全敲除。制备体系中将vTF7-3-ΔD13L代替vTF7-3后,制备体系培养上清经RT-PCR、Western blotting分别检测到慢病毒载体特异性RNA序列以及特征性p24蛋白的存在,提示系统可以正常制备出慢病毒载体颗粒,并进一步评价了慢病毒载体的感染性。此外,对此系统的动力学特征也进行了初步分析。结论 vTF7-3-ΔD13L制备成功,通过此系统可制备出没有复制性痘病毒污染的慢病毒载体,本研究为该系统的大规模应用奠定了客观基础。     

一种新型纳米基因载体的制备及体外实验

本实验以聚乳酸和O-羧甲基壳聚糖为基质材料，采用超声波法制备了聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米微球，并用环境扫描电镜和XPS对其进行了表征，将聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米微球携带寡核苷酸转染TJ905人脑胶质瘤细胞，并通过RT-PCR方法对细胞的转染情况作了一系列的体外检测，结果表明，携带寡核苷酸的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米微球能有效地转染TJ905人脑胶质瘤细胞，同时也能有效地抑制胶质瘤细胞中端粒酶RNA，端粒酶催化亚基RNA的表达和端粒酶的活性，从而抑制人脑胶质瘤细胞生长，达到基因治疗的目的。     

新型药物载体——聚

从分子水平设计，以具有营养和药理功能的精、赖和天冬氨基酸为单体，合成聚合和     

分离的泛素系统——一种新型的膜蛋白酵母双杂交系统

酵母双杂交系统是研究蛋白质问相互作用的重要遗传学方法之一，然而传统的酵母双杂交技术在实际应用中存在着一定的局限性。分离的泛素系统(split-ubiquitin system)作为一种新型的不依赖转录激活机制的酵母双杂交系统，原理是通过待检测蛋白质之间的相互作用将突变的、分离的泛素分子N端和C端部分融合，通过泛素专一的蛋白酶UBP的识别使报告蛋白解离入核，激活报告基因表达。该系统被研究的蛋白质问的相互作用不在局限于核内，更适合于发生在胞膜或胞质中的相互作用研究，是一种非常值得推广的遗传学方法。     

一种高效表达小干扰RNA载体的构建研究

目的：用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体。方法：通过基因合成的方法，将mir30前体骨架进行全长基因合成，并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆，然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中。将针对绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的小干扰RNA克隆到以上表达载体中，通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率。结果：同目前常用的含polⅢ的小干扰RNA表达载体相比较，用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达。结论：用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA。     

一种新的真核细胞表达载体pEF—BOS的应用

采用一种新的真核细胞表达载体ｐＥＦ－ＢＯＳ在ＣＯＳ细胞内表达了ｇｐ１３０和ＧＡＭ两种分子，并利用免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ观察了表达结果，发现应用ｐＥＦ－ＢＯＳ表达载体可在ＣＯＳ细胞内获得上述两种分子的较高表达，优于一般常用的ｐＳＶ表达载体。     

一种新的真核细胞表达载体pEF－BOS的应用

采用一种新的真核细胞表达载体ｐＥＦ－ＢＯＳ在ＣＯＳ细胞内表达了ｇｐ１３０和ＧＡＭ两种分子，并利用免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ观察了表达结果。发现应用ｐＥＦ－ＢＯＳ表达载体可在ＣＯＳ细胞内获得上述两种分子的较高表达，优于一般常用的ｐＳＶ表达载体。     

一种新型V刀仿真校验系统

提出了一种新型的Ｘ刀仿真校验系统，该系统采用球对球窝的方法，代替尖对尖再尖换球的传统方法，从而具有准确度高，操作方便，迅速，重复性高的优点，是一种较理想的仿真校验设备。     

一种新型X刀仿真校验系统

提出了一种新型的Ｘ刀仿真校验系统。该系统采用球对球窝的方法，代替尖对尖再尖换球的传统方法，从而具有准确度高，操作方便、迅速，重复性高的优点，是一种较理想的仿真校验设备。     

大肠杆菌表达系统表达载体的类型及其研究进展

大肠杆菌表达系统是基因工程中不可缺少的工具。近年来,有关大肠杆菌表达载体的研究很多,本文就其种类及其进展作一综述。     

一种新型病毒基因表达载体:Sabin 1型脊髓灰质炎病毒

脊髓灰质炎病毒是人类脊髓灰质炎的致病原,其Sabin 1型减毒活疫苗用于预防人脊髓灰质炎,性能优良,生产和使用的历史较长。该疫苗的cDNA作为基因工程表达载体,有很多独特的优点。近年来,国内外一些实验室以此载体表达外源基因,进行嵌合病毒和嵌合疫苗的研究。本文简述脊髓灰质炎病毒Sabin 1型株的分子生物学及其作为表达载体的应用进展。     

羟基磷灰石纳米颗粒:一种新型基因转染载体材料

采用化学共沉淀-水热合成法制备羟基磷灰石纳米颗粒。将羟基磷灰石纳米颗粒与SGC-7901细胞混合培养,用MTT法测定细胞增殖率,显示在10~100μg/ml浓度范围内细胞贴壁生长良好,方差分析各组之间的OD值无明显差异(t>0.05),证明羟基磷灰石纳米颗粒与细胞有良好的生物相容性。琼脂糖凝胶电泳分析发现羟基磷灰石纳米颗粒在酸性与中性条件下能与质粒PEGFP-N1结合,用结合了PEGFP-N1的羟基磷灰石纳米颗粒转染胃癌SGC-7901细胞,荧光显微镜下观察发现其转染效率约为对照组脂质体的80%。用纳米颗粒及纳米颗粒-DNA复合体悬液分别尾静脉注射小白鼠,两周内动物无死亡或其它急性毒性反应,取动物的肝、肾和脑组织进行透射电镜和冰冻切片检查,发现上述组织器官有纳米颗粒分布和绿色荧光蛋白表达。实验证明,羟基磷灰石纳米颗粒是一种新型基因转染载体材料。     

咪喹莫特——一种新型免疫调节剂

免疫调节剂咪喹莫特 ,通过增强抗原递呈细胞活力 ,促进B淋巴细胞增殖和分化 ,增强T淋巴细胞免疫 ,调节Th1/Th2细胞因子产生 ,从而具有重要的抗病毒、抗增殖和抗肿瘤能力 ,在临床上应用于多种疾病的治疗均取得良好效果。近年来的研究资料提示咪喹莫特是一种疗效好、副作用小、有应用前景的免疫调节剂。     

咪喹莫特——一种新型免疫调节剂

免疫调节剂咪喹莫特，通过增强抗原递呈细胞活力，促进B淋巴细胞增殖和分化，增强T淋巴细胞免疫，调节Thl/Th2细胞因子产生，从而具有重要的抗病毒、抗增殖和抗肿瘤能力，在临床上应用于多种疾病的治疗均取得良好效果。近年来的研究资料提示咪喹莫特是一种疗效好、副作用小、有应用前景的免疫调节剂。     

脂质体——一种新型免疫增强剂

脂质体(Liposomes)是由人工制成具有单层或多层单位膜样结构的脂质小囊(Lipid Vesicles).对脂质体的研究始于六十年代,现已形成一个新的科学领域.脂质体除了作为模型膜系统及药物传送系统越来越引起重视外,近几年来已在免疫学的研究中得到广泛应用,其中包括:1)作为抗原载体和免疫佐剂;2)作为淋巴因子的载体;3)作为体外免疫诱导的工具;4)作为免疫反应的靶子;5)用以阐明补体激活的机制;6)用于研究抗体导向的"趋     

甲病毒表达载体系统的研究进展

甲病毒载体是一种新型的载体系统。近年来 ,关于该载体系统的研究很多 ,尤其是在蛋白质的表达、结构与功能的研究以及疫苗的研制方面。本文仅就甲病毒载体的构建及其应用作一简单介绍。     

一种新型智能输液监护系统的研制

我们构建了一套基于无线传输的新型输液监控系统,包括输液监控仪、无线传输单元和中心监控管理系统。系统具有实时监控输液滴速、输液状态和是否存在异常等功能。这种基于物流网的监护模块设计,保证了医护人员及时获得患者的输液信息,为输液过程提供了更好的安全保障,同时减轻了医护人员负担,提高了工作效率。