趋化因子在树突状细胞肿瘤疫苗研究中的进展

趋化因子是一类调节免疫细胞定向迁移的细胞因子,其与表达于细胞表面的趋化因子受体结合而发挥生物学功能.树突状细胞(DC)是重要的专职抗原递呈细胞,其主要的应用是制备成各种肿瘤疫苗,树突状细胞功能的行使与趋化因子及其受体介导的细胞迁移密切相关,趋化因子在树突状细胞游走与迁徙过程中始终发挥着调节、促进或抑制的作用,从而促使树突状细胞递呈抗原、激活初始T细胞,引起机体免疫反应,杀伤、消灭肿瘤细胞和炎性分子.     

趋化因子RANTES在腹主动脉瘤形成中的作用

目的探讨调节活化正常T细胞表达和趋化因子RANTES在腹主动脉瘤(AAA)形成中的作用。方法将Wistar大鼠56只随机分成7组,灌注法建立AAA模型。A组不灌注。E、F、G组腹腔注射吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)。分别在术后4、7、14d取标本。用苏木素伊红(HE)及免疫组织化学染色观察动脉壁炎性细胞浸润及RANTES的表达,并用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)观察RANTESmRNA的表达。结果术后7d,RANTES及RANTESmRNA的表达最高,分别为(44.73±6.81)%和(81.58±5.73)%。术后14d形成AAA,动脉扩张率为(113.73±5.75)%。在E、F、G组,RANTES的表达受到抑制(P<0.05),且术后14d没形成AAA。结论RANTES在AAA形成之前表达升高,促进了AAA的形成。     

趋化因子RANTES对人外周血单个核细胞的免疫活化作用

目的　探讨趋化因子RANTES刺激对人外周血单个核细胞 (PMNC)的免疫活化作用及其内在机制。方法　分离人外周血 ,应用不同终浓度的人重组RANTES(rhRANTES)以及抗CD3单克隆抗体 (抗CD3mAb)进行体外刺激 ,并对增殖反应显著者给予吡咯啉烷二甲基硫脲 (PDTC)或CTLA4Ig进行干预。采用3 H 胸腺嘧啶核苷掺入法检测PMNC增殖程度 ,流式细胞仪检测淋巴细胞表型的变化。结果　rhRANTES终浓度为 10 0ng/ml和 5 0 0 0ng/ml时 ,诱导PMNC增殖反应出现两次峰值 ;rhRANTES(10 0ng/ml)刺激产生的增殖反应显著高于抗CD3mAb(5 0ng/ml)的刺激 (P <0 .0 5 ) ,但两者无拮抗或协同作用 ;PDTC和CTLA4Ig对rhRANTES(10 0ng/ml)诱导的增殖反应均能产生抑制作用 ,并呈现剂量依赖性 ;rhRANTES刺激后 ,淋巴细胞CD2 5表达率显著增加 (P <0 .0 5 ) ,而人RANTES的受体CCR5表达率显著降低 (P <0 .0 5 ) ,CD2 8表达率及CD4 /CD8比值无明显改变(P >0 .0 5 )。结论　RANTES趋化信号具有不依赖于CD3信号的独特的诱导PMNC免疫活化的功能。     

RANTES、MIP-1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动的机制研究

目的探讨RANTES、MIP-1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动的机制。方法使用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察RANTES、MIP-1α刺激后人肝癌细胞聚合型肌动蛋白（F-actin）聚合的变化。采用明胶酶谱法分析RANTES、MIP-1α对人肝癌细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响。结果RAN-TES、MIP-1α可诱导人肝癌细胞内F-actin的聚合，并刺激细胞突起和伪足形成。明胶酶谱显示RANTES、MIP-1α刺激后人肝癌细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMPO等活性显著增加，降解基质能力增强。结论RANTES、MIP-1α趋化因子可以诱导F-actin聚合促进人肝癌细胞定向运动，并通过增加基质金属蛋白酶活性提高人肝癌细胞侵袭能力。     

DCs疫苗治疗原发性胆囊癌研究进展

病例,女,46岁,农民.因为右上腹痛伴畏冷、发热、黄疸8 d入院.10年前曾有胆囊切除及胆总管探查手术史.B超检查:提示胆总管下段异常回声伴肝内外胆管扩张,肝内胴管多发结石,脾脏肿大.入院诊断:(1)阻塞性黄疽;(2)肝胆管结石;(3)胆管炎.入院后保守治疗5 d,病情未见改善,遂在全麻下行胆总管切开取石.术中在胆总管下段取出直径2.0 cm橄榄形结石一枚.继续探查左右肝管见肝内胆管有较多结石.     

树突状细胞疫苗联合胸腺肽α1对人源化免疫重建裸鼠结肠癌生长的抑制效应

目的观察胸腺肽αl（Ted）联合结肠癌细胞裂解物致敏树突状细胞（LyDCs）对人源化免疫重建裸鼠结肠癌的免疫治疗效应。方法常规DCs负载结肠癌细胞裂解物制备LyDCs疫苗，流式细胞仪（FCM）检测Tαl体外刺激前、后的LyDCs表型。HT-29结肠癌裸鼠模型成瘤后，经尾静脉注射人外周血T淋巴细胞6×10^6个／只，2d后，FCM检测裸鼠外周血人源性CD4^＋、CD8^＋T细胞；将人源化免疫重建裸鼠分为3组，分别用LyDCs＋Tctl、LyDCs和生理盐水皮下免疫注射治疗；治疗后7d，体外观察各组裸鼠脾脏淋巴细胞的肿瘤杀伤作用及IFN-γ、IL4分泌水平，实验结束时，观察LyDCs联合Tctl对荷瘤裸鼠的体内抑瘤作用。结果LyDCs的表型HLA．DR、CD80、CD86、CD83较刺激前明显上调；免疫重建裸鼠均检测到人源性CD4^＋、CD8^＋T细胞；LyDCs＋Tctl组裸鼠脾脏T淋巴细胞的肿瘤杀伤作用与LyDCs组比较差异有统计学意义（P〈0．01），LyDCs＋Ted组T细胞的IFN-γ分泌水平与LyDCs组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；接种HT-29细胞58d后，LyDCs＋Tαl组、LyDCs组抑瘤率分别为60．41％、37．20％，两组之间抑瘤效应比较差异有统计学意义（P〈0．01），两组的抑瘤效应与对照组比较分别（P〈0．01）。结论Tαl能增强LyDCs诱导的CD4^＋，Th1细胞反应和CTLs杀伤效应，对DCs疫苗的抗癌免疫治疗功效具有明显的放大作用。     

肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞对结肠癌LoVo细胞的杀伤作用

目的 探讨肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞(DC)作为佐剂对结肠癌LoVo细胞系的杀伤作用.方法 反复冻融法裂解培养的结肠癌LoVo细胞,提取细胞抗原并致敏DC,然后将后者与自身T淋巴细胞共同培养,观察其对自身T淋巴细胞增殖的影响以及活化的T淋巴细胞对LoVo细胞的杀伤作用.结果 结肠癌LoVo细胞裂解物致敏的DC能明显促进T淋巴细胞的增殖,后者对LoVo细胞的杀伤作用明显增强.结论 肿瘤细胞裂解物提取方法简单,易于临床实施,其作为细胞抗原致敏DC制备的肿瘤疫苗能有效活化并产生肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞,将有很好的临床应用前景.     

白三烯C4增强小鼠骨髓来源树突状细胞迁移及肿瘤免疫治疗作用

目的应用白三烯C4（LTC4）调节体外培养DC表面CCR7表达，观察对其迁移能力和抗肿瘤免疫作用的影响。方法体外培养小鼠骨髓细胞来源DC，负载乳腺癌抗原后，加入LTC4培养。检测其表型、CCR7表达及其功能的变化。结果与对照组相比，LTC4组DC表达CD80、CD86增高，CCR7mRNA和蛋白表达上调（P〈0．05），但MLR和CTL活性不受影响。LTC4使DC对其配体CCL19反应性增强（P〈0．05）。在乳腺癌动物模型中，LTC4培养DC抑制肿瘤生长作用比对照组好。结论以LT巳培养可以通过增强DC表面CCR7表达，促进其在体内迁移能力，提高抗乳腺癌DC疫苗的功效。     

趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-1α动员的树突状细胞经基因修饰后抗胃癌效应

目的观察趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-1α（MIP-1α）体外动员的树突状细胞（DC）经基因修饰后在荷瘤小鼠体内的抗胃癌效应。方法615小鼠通过尾静脉注射MIP-1α，流式细胞仪分选出B220^- CD11c^＋细胞，加入鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子（mGM-CSF）、白细胞介素-4（IL-4）和鼠肿瘤坏死因子-1α（mTNF-1α）贯续培养进行诱导分化。通过细胞表型和混合淋巴细胞反应，检测细胞因子培养前后B220^- CD11c^＋细胞的异同。收集培养后的B220^- CD11c^＋细胞，加入编码黑色素瘤抗原基因-3（MAGE-3）的重组腺病毒进行转染，制备表达肿瘤抗原的DC疫苗。制备小鼠前胃癌（MFC）实体瘤模型，DC疫苗于MFC细胞接种后经皮下注射，观察小鼠瘤体生长和存活情况，研究DC疫苗的免疫治疗作用。结果MIP-1α注射8h后外周血中B220^- CD11c^＋细胞数量即升高，48h达到高峰，占外周血单个核细胞（MNCs）（13．68±0．95）％。新鲜分离的B220^- CD11c^＋细胞不具有成熟DC的特征，而经体外细胞因子诱导分化后则具有典型的DC表型，并具有极强的刺激T细胞增殖的能力。小鼠皮下接种MFC细胞后注射基因修饰的DC疫苗，小鼠瘤体生长缓慢，存活时间明显延长，与对照组之间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论注射趋化因子MIP-1α可快速动员B220^- CD11c^＋细胞进入小鼠外周血，并经细胞因子可诱导分化为成熟DC。MIP-1α动员的DC经基因转染制备的DC疫苗，在体内对荷瘤小鼠有明显的免疫治疗作用，且较荷载全肿瘤细胞抗原的DC疫苗作用明显增强。     

树突状细胞疫苗抗骨肉瘤免疫治疗

树突状细胞(dendritic cell, DC)是体内最重要、功能最强大的专职抗原递呈细胞(APC),且是机体内唯一能激活初始T淋巴细胞的APC,可有效触发诱导细胞毒性T细胞免疫应答。DC参与抗原摄取、加工处理和递呈。以DC为主特别DC疫苗的抗肿瘤疗法已取得令人鼓舞的进展。然而,DC疫苗目前还存在一定的局限性。骨肉瘤抗原异常表达、MHC-I分子下调以及肿瘤微环境中高浓度免疫抑制因子的存在等原因使得骨肉瘤发生免疫逃逸,限制了DC疫苗的应用。本文现就以DC疫苗及骨肉瘤相关免疫治疗基础进行综述。     

联合激动Toll样受体的树突细胞对小鼠结肠癌生长的影响

目的 观察联合激动Toll样受体(TLRs)的树突细胞对小鼠结肠癌的杀伤作用以及荷瘤小鼠的生存时间.方法 用转染人癌胚抗原(CEA)的MC38小鼠结肠癌细胞株(MC38-CEA)和MC38细胞株(1×106个/只)皮下注射人CEA转基因小鼠,7d后将不同的树突状细胞(DC)疫苗(1×106个/只)于对侧皮下注射小鼠,每周2次测量各组小鼠肿瘤的垂直直径,并记录小鼠的生存时间,绘制各组肿瘤生长曲线和小鼠生存曲线.结果 在预防性疫苗干预的MC38-CEA肿瘤模型中,第41天联合TLR且荷载CEA肽段的DC(TLR-DC+ CEA)组小鼠肿瘤平均体积(1091.20±226.12) mm3明显小于其余各组(P＜0.01),并且存活期明显优于其余各组(P＜0.01);在治疗性疫苗干预时,第41天TLR-DC+ CEA组小鼠肿瘤平均体积(6487.20±1024.47) mm3,小于磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(9361.20±2654.64) mm3(P＜0.05),而与其余对照组差异无统计学意义(P＞0.05);在小鼠MC38肿瘤模型中,各组肿瘤平均体积差异无统计学意义(P＞0.05),且各组小鼠存活期差异无统计学意义(P＞0.05).结论 联合激动TLR的DC疫苗能抑制表达CEA的小鼠结肠癌生长并延长小鼠生存期.     

CpG寡聚脱氧核苷酸增强树突状细胞疫苗诱导的特异性抗前列腺癌作用

目的 观察CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)对截短的人前列腺特异性膜抗原(tPSMA)基因修饰的树突状细胞(DCs)诱导的抗前列腺癌效应.方法 利用复制缺陷性腺病毒AdEasy-1系统,通过基因重组技术构建Ad-tPSMA及Ad-eGFP.将Ad-tPSMA和Ad-eGFP感染鼠源性DCs,用含10μg/L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素(IL)-4和含10%胎牛血清(FCS)的RPMI 1640培养基诱导培养6 d后,然后再添加1 mg/L的CpG-ODN体外培养1 d,最后添加1 mg/L的脂多糖(LPS)继续培养1 d,使其成熟.流式细胞仪检测DCs细胞表型,CCK-8法检测混合淋巴细胞反应T细胞增殖能力,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测T细胞分泌细胞因子[IL-2、干扰素(INF)-γ]的影响,CCK-8试剂检测T细胞特性杀伤靶细胞活性.结果 CpG-ODN促进Ad-tPSMA感染的DCs(CpG/DCs-Ad-tPSMA)高表达MHC Ⅱ(83.8±3.7)%、CD80(79.8±5.6)%和CD86(78.3 ±2.8)%,且刺激同种异体T细胞增殖能力明显高于DCs-Ad-tPSMA组、DCs-Ad-eGFP组和未转染的DCs组(P＜0.05);培养上清中细胞因子IL-2(179.64±2.72)ng/L和INF-γ(1581.75±28.61)ng/L,表达水平均明显高于DCs-Ad-tPSMA组、DCs-Ad-eGFP组和未转染的DCs组(P＜0.05);CpG/DCs-Ad-tPSMA组诱导RM-1-tPSMA细胞特异性杀伤率为(55.3±1.2)%,明显高于DCs-Ad-tPSMA组(40.7±1.4)%、DCs-Ad-eGFP组(12.7±1.2)%和未转染的DCs组(10.8±1.7)%(P＜0.05).结论 CpG-ODN能增强PSMA基因修饰的DCs疫苗诱导的特异性抗前列腺癌效应.

Abstract：

Objective To observe cytosine-phosphorothioate-guanine oligodeoxynucleotides (CpG-ODN) for the anti-prostate cancer effect induced by dendritic cells (DCs) transduced with recombinant adenovirus vector bearing truncated human prostate specific membrane antigen (tPSMA) gene. Methods Replication deficient adenovirus AdEasy-1 system was used to construct recombination adenovirus Ad-tPSMA and Ad-eGFP. Mouse derived DCs were transduced with Ad-tPSMA and Ad-eGFP, and cultured for 6 days in the presence of 10 μg/L GM-CSF and IL4 in RPMI 1640 containing 10% FCS. After culture with 1 mg/L CpG-ODN for 1 day, DCs were further matured with lipopolysaccharide (LPS) at a concentration of 1μg/L for 1 day. The phenotype of DCs was analyzed by using flow cytometry. T cells proliferation stimulated by DCs in allogeneic mixed lymphocyte reactions and the level of interleukin (IL)-2, interferon (IFN)-γ were detected by ELISA kit, and cytotoxic CTL activity induced by DCs was tested by CCK-8 assay. Results CpG-ODN up-regulated the expression of MHCⅡ (83. 8 ±3. 7)% , CD80 (79. 8 ±5. 6)% and CD86 (78. 3 ±2. 8)% in Ad-tPSMA-tranduced DCs (CpG/DCs-Ad-tPSMA). T cells proliferation stimulated by CpG/DCs-Ad-tPSMA was significantly higher than that in DCs control group, DCs-Ad-tPSMA group and DCs-Ad-eGFP group (P ＜0.05). CpG/DCs-Ad-tPSMA induced increased IL-2 (179. 64 ±2. 72) ng/L, and INF-7 (1581.75 ±28. 61) ng/L expression levels as compared to DCs control group, DCs-Ad-tPSMA group, and DCs-Ad-eGFP group (P＜0. 05), and induced more outstanding RM-1-tPSMA cell specific cytotoxic rate (40.7 ±1.4)%than DCs control group (10. 8 ± 1.7) % , DCs-Ad-tPSMA group (40.7 ± 1.4)% , and DCs-Ad-eGFP group (12.7 ± 1. 2)% (P＜0.05). Conclusion CpG-ODN can promote specific anti-prostate cancer induced by DCs modified with recombinant adenovirus vector bearing tPSMA gene.     

大鼠胰腺癌微环境诱导未成熟树突状细胞功能的变化

目的 观察胰腺癌微环境对树突状细胞(DC)成熟的影响及功能变化并探讨胰腺肿瘤细胞免疫逃逸的机制.方法 培养树突状细胞,加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)40μg/L、白细胞介素(IL)-4 40μg/L,培养到第6天时得到大量的未成熟树突状细胞(imDC),加入大鼠胰腺癌细胞(AR42J cell)培养上清液诱导,流式细胞术检测DC的表面分子CD86、CD80的表达(n=6),观察能否延缓或阻断imDC的成熟及其在脂多糖(LPS)刺激后这种作用能否被逆转.并观察AR42J细胞培养上清诱导的Dc对同种异体混合淋巴细胞增殖.结果 加入胰腺癌癌细胞上清液培养的DC,与正常成熟的DC比较,CD80+CD86+阳性率由(70.88±3.60)%降至(7.15±0.71)%,LPS刺激后DC细胞的表面分子CD80+CD86+表达仍然较低(7.43±1.05)%,表明胰腺癌细胞培养上清液对DC的成熟有阻断作用.AR42J细胞上清诱导培养的imDC组刺激同种异体混合淋巴细胞增殖的强度显著低于正常培养的imDC组刺激同种异体混合淋巴细胞增殖的强度.结论 体外大鼠胰腺癌细胞培养上清液可以诱导DC处于不成熟状态,且这种不成熟状态不容易被逆转.     

超抗原SEA联合树突状细胞诱导特异性抗膀胱肿瘤研究

目的 观察超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合树突状细胞(Dc)诱导CTL对膀胱肿瘤高效特异性的免疫杀伤作用和对肿瘤局部免疫提呈功能的改善情况.方法 用GM-CSF和IL-4联合刺激诱导外周血单个核细胞分化为DC.将Dc与同源淋巴细胞(DC-L组)、超抗原SEA淋巴细胞(DC-SEA-L组)共培养,用FCS分析DC供刺激分子表型,酶联免疫吸附测定法检测细胞因子IL-2,MTT法测定激活的CTL对膀胱癌E-J细胞的体外杀伤效应.结果 在体外,DCSEA-L对膀胱癌细胞具有相对特异的杀伤作用,SEA-L和Dc-L则无明显特异性.结论 SEA和Dc联合应用可诱导产生高效并具有相对特异性的抗膀胱癌效应,并改善膀胱癌组织局部的DC抗原提呈功能.     

双特异性单链抗体介导的CIK细胞对结肠癌的体内杀伤作用

目的 观察双特异性单链抗体介导的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞在体内杀伤结肠癌细胞的作用.方法 将SW1116细胞种植裸鼠后,建立裸鼠结肠癌模型,分为3组分别经尾静脉注入生理盐水、CIK细胞及CIK细胞+双特异性抗体,每周治疗1次,共4周,取出肿瘤组织称重,并计算出各组的抑瘤率.结果 在体内,CIK组和CIK+双抗组均可抑制肿瘤生长,抑瘤率分别为29.70%和65.02%,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CIK组和CIK+双抗组的瘤体积、瘤重、抑瘤率比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CIK细胞本身可以抑制肿瘤细胞的生长,在加入抗CD3抗癌胚抗原(CEA)双特异性单链抗体后抑瘤作用明显增强.

Abstract：

Objective To investigate the killing effect of cytokine-induced killer cell (CIK) mediated by bispecific single-chain antibody in vivo on colon cancer cells. Methods The colon cancer model in nude mice was established with SW1116 cells. The mice were divided into 3 groups, which were injected with normal saline, CIK cells and CIK cells + bispecific antibody, respectively, once a week for 4 weeks. The tumors were removed and weighed, and the tumore inhibition rate in each group was calculated. Results The CIK cells and CIK cells with bispecific single-chain antibody could both inhibit tumor growth in vivowith the tumor inhibition rate being 29. 70% and 65.02% respectively ( P ＜ 0. 05 ). There was significant difference in tumor inhibition rate between CIK cells and CIK cells with bispecific single-chain antibody ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion CIK cells alone can inhibit tumor cell growth, CIK cells in combination with bispecific single-chain antibody can exert more significant antitumor effect.     

乳腺癌细胞抗原负载的自体树突状细胞体内诱导特异性T细胞应答

目的 以乳腺癌细胞抗原体外负载自体树突状细胞(DCs)对24例乳腺癌患者进行自身免疫,探讨其体内诱导特异性T细胞免疫应答的能力.方法 新鲜癌组织制备成热休克凋亡细胞抗原负载外周单核细胞来源DC,分别在采血后第1、2、4、6周于患者腹股沟淋巴结富集区进行皮内注射,细胞剂量为4×10+～6×106/次.结果 DC免疫治疗后患者血清抗瘤免疫因子水平明显上升:白细胞介素(IL)-2治疗前为(33.8±7.2)ng/L,治疗后为(68.5±12.4)ng/L;IL-12治疗前为(48.5±10.9)ng/L,治疗后为(118.2±31.5)ng/L;肿瘤坏死因子(TNF)-α治疗前为(18.7±5.3)ng/L,治疗后为(78.3±11.5)ng/L;干扰素(IFN)-γ治疗前为(20.5±6.3)ng/L,治疗后为(92.6±14.9)ng/L,治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.01);DTH试验阳性率为7/10;4/10例IFN-γ+CD8+T细胞频率较治疗前明显增加.随访发现:除1例患者在治疗后3个月内疾病进展(PD),其余患者病情稳定无复发与转移症状(SD).结论 以乳腺癌细胞为抗原负载自体DC免疫患者,能够有效提高患者非特异免疫水平,激发体内特异性T细胞免疫应答,是一种安全、副反应较小、有效的乳腺癌辅助治疗手段.     

手术联合树突状细胞治疗肾透明细胞癌的效果

目的 观察手术联合树突状细胞治疗肾透明细胞癌的临床效果,为肾癌治疗提供依据.方法 入组患者分为A、B两组,A组(n=33)为术后接受细胞治疗组,B组(n=37)为单纯手术治疗组.所有入组患者分别于手术治疗前8周及治疗后8周采外周血行流式细胞术检测T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4 +/CD8+比值),了解治疗前后机体免疫水平.结果 Ⅰ、Ⅱ期患者A、B组治疗前后T淋巴细胞亚群差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅲ期患者A组治疗前后T淋巴细胞亚群差异有统计学意义(P＜0.05),B组治疗前后T淋巴细胞亚群差异无统计学意义(P＞0.05).A组治疗前后T淋巴细胞亚群差异有统计学意义(P＜0.05),B组差异无统计学意义.结论 手术联合树突状细胞治疗可明显提高Ⅲ期肾透明细胞癌患者术后免疫功能,对肾癌治疗具有积极意义.     

共刺激人外周血淋巴细胞对大肠癌细胞的杀伤作用

目的探讨CD28单克隆抗体与CD80共刺激活化的人外周血淋巴细胞(PBLs)在体外对大肠癌细胞株HT-29杀伤强度及杀伤作用机制,为大肠癌的过继免疫治疗提供参考。方法获得PBLs；共刺激；检测活化细胞的体外淋巴细胞毒作用,并用电子显微镜观察效应细胞杀伤的大肠癌细胞超微结构,用流式细胞仪检测大肠癌细胞的凋亡指数。结果共刺激PBLs对肿瘤细胞杀伤作用较强,达到(69．35±1．17)%。电镜结果显示,效应细胞作用12h肿瘤细胞出现坏死,部分可见凋亡。流式细胞仪检测效应细胞凋亡指数为24 h 19．6%,48 h效应细胞凋亡指数为12．1%。结论活化的淋巴细胞杀伤大肠癌细胞是通过坏死及凋亡两条途径来实现的。