UVA1对人工皮肤成纤维细胞光损伤的影响

目的探讨不同UVA1照射剂量对人工皮肤真皮细胞形态及细胞活性的影响,为建立人工皮肤光损伤模型提供依据。方法以不同剂量UVA1（0J／cm^2-80J／cm^2）照射人工皮肤,通过HE染色,从形态学上观察经UVA1照射后真皮成纤维细胞数量的变化,通过MTT法检测真皮成纤维细胞的活性。结果HE染色示真皮成纤维细胞的数量随UVA1剂量的增大而减少,于真皮浅层较为明显;MTT法示与0J／cm^2组相比,20J／cm^2和30J／cm^2UVA1照射人工皮肤时成纤维细胞活性未受到明显的抑制（P〉0．05）．UVA1剂量大于40J／cm^2时细胞活性下降明显（P〈0．05,P〈0．001）,呈剂量依赖性。结论UVA1照射剂量大于40J／cm^2是造成人工皮肤真皮成纤维细胞光损伤的始剂量。     

UVA致人皮肤成纤维细胞急性和慢性光损伤模型的建立

目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法。方法:体外培养原代人皮肤成纤维细胞,选取第4~8代的细胞进行实验。用长波紫外线(UVA)单次照射建立HDFs急性光损伤模型,荧光倒置显微镜观察不同剂量UVA照射后第1、2、3天HDFs的形态变化;CCK-8法检测照射后HDFs的增殖活性。慢性光损伤HDFs模型采用8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育细胞24h,随后以含8-MOP的磷酸盐缓冲液(PBS)置换培养基,行9J/cm~2 UVA照射,照射完成后换Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(含10%胎牛血清)避光传代培养,21d后显微镜下观察HDFs形态;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法计算衰老细胞率。结果:单次UVA照射导致HDFs增殖率下降,与UVA剂量呈正相关。UVA在剂量为≤10J/cm~2时,细胞存活率保持在85%;而UVA剂量≥15J/cm~2时细胞存活率明显降低;≥20 J/cm~2时存活率为50%左右,至25 J/cm~2时仅为约25%。慢性光损伤HDFs诱导组(即UVA+MOP组)几乎所有细胞均出现体积变大、细胞颗粒增加等细胞老化的特征性改变;SA-β-Gal染色细胞的阳性率95%。结论:UVA单次照射可成功建立HDFs急性光损伤模型,UVA联合8-MOP构建HDFs慢性光损伤模型。     

长波紫外线照射对人皮肤成纤维细胞表达一氧化氮合成酶和一氧化氮的影响

目的 通过检测UVA照射后人皮肤成纤维细胞的细胞形态及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS) 和一氧化氮(NO)表达,初步探讨UVA引起成纤维细胞光损伤的发病机制.方法 以1J/cm2,5J/cm2和10J/cm2 UVA分别照射人成纤维细胞后24h,用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR )和化学细胞免疫方法检测iNOSmRNA和蛋白表达情况,Griess 法检测NO的含量,MTT试验检测细胞增殖能力,倒置显微镜和HE染色观察细胞形态变化.结果 10J/cm2UVA照射人成纤维细胞后24h出现皱缩最为明显,其细胞增殖能力(MTT)(OD值,0.2472±0.0328)与其他三组比较明显减退(P均<0.05),且iNOSmRNA(1.0568±0.0778)和iNOS蛋白表达强于1J/cm2和5J/cm2(P均<0.05),同时NO的含量(51.11±2.2760)nmol/mL高于1J/cm2的(32.44±3.1620)nmol/mL和5J/cm2的(41.32±2.4460)nmol/mL(P均<0.05).结论 人成纤维细胞iNOS和NO的表达与UVA照射呈剂量依赖.成纤维细胞的光损伤与iNOS和NO产生有关.     

细菌衍生黑素对长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞凋亡和坏死的保护

目的:探讨细菌衍生黑素(b-melanin)对长波紫外线(UVA)诱导人成纤维细胞凋亡和坏死产生的光保护作用,为今后将其用作皮肤光保护剂提供依据.方法:正常人成纤维细胞(NL-FB)和着色性干皮病患者成纤维细胞(XP-FB)经UVA照射12 h后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Hoechst33258染色法观察早期凋亡细胞核形态学变化.二氯荧光素二酯(DCFH-DA)标记法测定细胞内活性氧基(ROS)水平.结果:UVA照射诱导细胞的半数致死剂量,XP-FB大约为30 J/cm2,而NL-FB＞40 J/cm2.为了观察不同浓度(0,25,50,100,200,400,和800 μg/mL)的b-melanin是否对细胞存在光保护作用,给予半数致死剂量(30 J/cm2)UVA照射后,经100～400 μg/mL b-melanin处理的XP-FB的细胞存活率均较未处理组明显增高(P＜0.01),而NL-FB的细胞存活率变化不明显.细胞内ROS测定结果显示100、400 μg/mL的b-melanin能明显清除UVA诱导产生的ROS.100 μg/mL b-melanin即能阻止非致死剂量(16 J/cm2)UVA照射诱导的早期凋亡细胞核改变.结论:b-melanin能对UVA诱导人成纤维细胞凋亡和坏死提供有效的光保护,这一作用很可能关系到b-melanin对ROS的清除.本研究还首次提出核酸切除修复机制缺陷的XP-FB是一敏感的可用于测试UVA光损伤作用的体外细胞模型.     

组织蛋白酶B在急性光损伤皮肤成纤维细胞中的表达及意义北大核心CSCD

目的 探讨组织蛋白酶B（CatB）在急性光损伤人皮肤成纤维细胞（HDF）中的表达变化及意义.方法 体外培养原代HDF,选取第4～8代细胞进行实验.实验设长波紫外线（UVA）照射组和不照射的对照组.CCK8法分别检测5、10、15、20和25 J/cm2 UVA照射后HDF的增殖率.用10 J/cm2 UVA单次照射致HDF急性光损伤,Western印迹及实时定量逆转录（RT）-PCR分别检测急性光损伤组HDF及对照组HDF照射后24、48、72 h CatB蛋白及mRNA表达;另外分别用10、15、20、25 J/cm2 UVA照射HDF,Western印迹及实时定量RT-PCR分别检测急性光损伤组及对照组HDF照射后48 h CatB蛋白及基因表达.数据采用SPSS 13.0统计软件行方差分析,两组间比较采用最小显著差异法（LSD）.结果 UVA照射导致HDF增殖率下降;当UVA剂量≤10 J/cm2时,细胞存活率均保持在85％以上,各照光组分别与对照组24、48、72 h时比较,均P＜0.05.Western印迹结果显示,急性光损伤组（10 J/cm2 UVA照射）CatB蛋白灰度值在照射后24 h（0.76±0.14）、48 h（1.34±0.38）、72 h（0.82±0.09）均较对照组（分别为0.35±0.01、0.45±0.12、0.61±0.06）升高（均P＜0.05）.实时定量RT-PCR显示,在急性光损伤组CatB的mRNA表达在照射后24 h（0.149±0.009）、48 h（0.173±0.009）、72 h（0.185±0.158）也较对照组（分别为0.089±0.015、0.091±0.010、0.111±0.017）上调（均P＜0.05）.10、15、20、25 J/cm2 UVA照射HDF后48 h,CatB的蛋白灰度值分别为0.99±0.07、1.49±0.14、1.89±0.08、2.07±0.06,均较对照组（0.60±0.05）升高（均P＜0.05）,CatB的mRNA表达也较对照组升高.结论 UVA致急性光损伤的皮肤成纤维细胞中CatB蛋白及mRNA表达均上调.     

8-MOP/UVA诱导培养真皮成纤维细胞衰老的作用

目的　探讨以 8 MOP/UVA作用于培养真皮成纤维细胞建立皮肤光老化模型的可行性。方法　采用光镜、电镜、流式细胞仪、酶组织化学、免疫组织化学等方法检测 8 MOP/UVA对培养真皮成纤维细胞多项细胞衰老相关指标的影响。结果　 8 MOP/UVA作用后 ,培养真皮成纤维细胞迅速出现细胞衰老特征性的形态学及生物学特性改变 :细胞由分裂表型转化为无分裂活性表型 ,SA β Gal表达增加、p16蛋白表达增加。结论　 8 MOP/UVA可诱导培养真皮成纤维细胞迅速出现具有细胞衰老特征性的形态学及生物学特性改变 ,以 8 MOP/UVA作用于培养真皮成纤维细胞建立皮肤光老化模型是可行的     

低剂量长波紫外线诱导培养人皮肤角质形成细胞适应性反应观察

目的:观察低剂量长波紫外线(UVA)诱导培养人皮肤角质形成细胞适应性反应的程度及特点,探讨其对皮肤可能的保护作用。方法:以具有致死作用的86.4J/cm2UVA照射经7.2J/cm2低剂量UVA单次或多次预照射培养的人皮肤角质形成细胞,并在光镜、电镜下观察细胞形态学变化,用流式细胞仪检测细胞凋亡的比例,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的程度。结果:单次或多次7.2J/cm2UVA预照射处理后的培养人皮肤角质形成细胞,对随后86.4J/cm2UVA照射诱导的相应细胞在形态学上的毒性反应减轻,细胞凋亡的比例下降、DNA链断裂减少及修复加快,和未经预处理的86.4J/cm2UVA照射的相应细胞比较差异均有显著性(P<0.01或P<0.001);单次7.2J/cm2的UVA预照射诱导培养的人皮肤角质形成细胞的适应性反应在预照射12h后消失,而当低剂量UVA预照射的累积剂量>28.8J/cm2时,预照射的培养细胞即使是14d后,对86.4J/cm2UVA照射仍有明显的防护作用。结论:低剂量UVA照射可诱导培养的人皮肤角质形成细胞出现对随后高剂量UVA照射的适应性反应,其滞留期及强度与低剂量UVA预照射的累积剂量有关。     

长波紫外线对皮肤成纤维细胞表达和分泌组织蛋白酶G的影响

目的 研究长波紫外线（UVA）照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶G（CatG）表达和分泌的影响。 方法 原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮,10代以内的细胞行后续实验。①以10 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,24、48、72 h后提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA,并收集细胞上清液;②分别以10、20、30 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,24 h后收集细胞和上清液。用RT-PCR 和Western印迹分别检测各组细胞CatG mRNA及蛋白的表达,ELISA检测细胞上清液CatG的含量。 结果 10 J/cm2 UVA照射后24、48、72 h,照射组细胞CatG mRNA表达分别为0.376 ± 0.014、0.308 ± 0.022和0.296 ± 0.032,对照组分别为0.183 ± 0.003、0.185 ± 0.005、0.182 ± 0.004;照射组细胞CatG蛋白灰度值分别为1.80 ± 0.12、1.41 ± 0.17和1.27 ± 0.09,对照组分别为0.96 ± 0.06、0.95 ± 0.22、1.00 ± 0.14;照射组细胞CatG mRNA、蛋白表达及细胞上清液CatG含量较相应的对照组升高（均P < 0.05）,且以照射后24 h表达最高。10、20、30 J/cm2 UVA照射后24 h,皮肤成纤维细胞CatG mRNA表达分别为对照组的1.90、2.51、3.04倍,细胞CatG蛋白表达分别为对照组的1.88、3.97、4.72倍,细胞上清液CatG含量分别为对照组的1.36、1.50、1.66倍,均随UVA剂量的升高而增加,其差异有统计学意义（均P < 0.01）。 结论 急性UVA照射促进皮肤成纤维细胞表达和分泌CatG。     

UVA对成纤维细胞和HaCaT细胞形态及诱导型一氧化氮合成酶产生水平的影响

目的 比较5 J/cm2长波紫外线（UVA）照射对人皮肤成纤维细胞和HaCaT细胞形态、数目和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）产生的影响。方法 5 J/cm2 UVA分别照射人成纤维细胞和HaCaT细胞后24 h，48 h和72 h，倒置相差显微镜下观察细胞形态和数目变化，并用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和细胞免疫组化方法检测两种细胞iNOS mRNA和蛋白表达的情况。结果 人成纤维细胞在照射后3个时间点细胞均出现皱缩，24 h细胞数目即明显低于照射前（P < 0.05），iNOS mRNA和蛋白在照射后24 h有高峰表达；HaCaT细胞在3个时间点细胞形态未见明显改变，细胞数目在照射后48 h才明显低于照射前（P < 0.05），且iNOS mRNA和蛋白在照射后48 h有高峰表达。结论 5 J/cm2 UVA照射后人成纤维细胞比HaCaT细胞更易受到损伤，iNOS高峰表达出现更早，且持续时间更长。     

UVA照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达的影响

目的 探讨皮肤成纤维细胞中组织蛋白酶K(Cathepsin K,CatK)的表达随UVA照射后时间及其剂量的变化.方法 原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮,10代以内的细胞行后续实验.先以10 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后24、48、72 h提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA.再以10 J/cm2、20 J/cm2、30 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后48 h收集细胞.用RT-PCR和Western印迹法分别检测各组间CatK mRNA、蛋白的表达的差异.结果 10 J/cm2 UVA照射后1、2、3d,照射组CatKmRNA表达分别为0.351±0.038(对照组0.177±0.006)、0.510±0.017(对照组0.176±0.002)、0.313±0.012(对照组0.173±0.002).照射组CatK蛋白灰度值分别为1.76±0.27(对照组0.82±0.45)、2.97±0.36(对照组1.58±0.15)、2.23±0.14(对照组1.29±0.32),照射组CatKmRNA、蛋白表达均较对照组升高(P＜0.05),且以照射后第2天表达最高.10、20、30 J/cm2UVA照射后,48 h皮肤成纤维细胞中CatK mRNA表达分别为对照组的2.34、2.91、3.18倍,CatK蛋白表达分别为对照组的1.77、2.82、3.64倍,均随UVA剂量的升高而增加,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CatK在UVA照射后皮肤成纤维细胞中的表达升高.     

连续长波紫外线照射对人皮肤成纤维细胞胞吞、降解弹性蛋白的影响

目的 研究连续长波紫外线（UVA）照射对人皮肤成纤维细胞胞吞和胞内降解细胞外弹性蛋白能力的影响,探讨光老化皮肤弹性蛋白堆积的机制。 方法 将人皮肤成纤维细胞分为空白对照组和连续UVA照射组,连续UVA照射组予连续7 d每天9.9 J/cm2 UVA照射以构建人皮肤成纤维细胞慢性光损伤模型。用流式细胞仪和衰老相关β半乳糖苷酶染色法分别检测细胞周期和细胞老化程度以验证模型。用荧光示踪技术和共轭淬灭技术,比较两组细胞对培养基中弹性蛋白的胞吞情况和对胞吞进入细胞的弹性蛋白的降解情况差异。 结果 与空白对照组相比,连续UVA照射组G1期细胞比例和衰老细胞比例明显增高,人皮肤成纤维细胞慢性光损伤模型构建成功。空白对照组人皮肤成纤维细胞在与弹性蛋白共孵育24、48、72 h后对弹性蛋白的胞吞率依次为（10.0 ± 1.4）%、（27.8 ± 4.2）%、（39.9 ± 4.1）%,连续UVA照射组人皮肤成纤维细胞在对应时间点的胞吞率依次为（9.9 ± 1.6）%、（28.3 ± 5.1）%、（42.0 ± 5.7）%,在相同时间点两组细胞对弹性蛋白的胞吞率差异均无统计学意义（均P > 0.05）。空白对照组人皮肤成纤维细胞在与弹性蛋白共孵育24、48、72 h后,胞内降解内吞入胞的弹性蛋白的细胞百分率依次为（7.7 ± 0.9）%、（22.8 ± 1.8）%、（33.9 ± 3.1）%,而连续UVA照射组人皮肤成纤维细胞在对应时间点依次为（4.2 ± 1.1）%、（16.5 ± 2.4）%、（26.7 ± 2.6）%,均较对照组显著降低（均P < 0.05）。 结论 连续7 d每日9.9 J/cm2 UVA照射对人皮肤成纤维细胞胞吞弹性蛋白的能力没有明显影响,却使细胞对胞吞的弹性蛋白的胞内降解能力下降。     

染料木素对UVA诱导成纤维细胞急性光损伤的防护作用

目的：明确染料木素对UVA诱导成纤维细胞急性光损伤的防护作用。方法：将体外培养的成纤维细胞分为空白对照组,UVA照射对照组及UVA+染料木素（0.01,0.1,1,10,100umol/L）组。采用CCK8法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况, RT-PCR检测Sirt1mRNA的表达水平。结果：与UVA组比较,UVA+0.01,0.1,1,10 μmol/L染料木素组细胞增值活性及Sirt1mRNA表达明显升高,细胞凋亡率降低（均P<0.05）;而UVA+100μmol/L染料木素,细胞凋亡率无明显差异（P>0.05）;结论：0.01～10μmol/L染料木素对UVA诱导成纤维细胞的急性光损伤有防护作用。     

低剂量长波紫外线诱导培养的人皮肤黑素细胞适应性反应观察

目的 探讨低剂量长波紫外线(UVA)诱导培养人皮肤黑素细胞适应性反应的程度及特点。方法 以具有致死作用的86.4J/cm²UVA照射经7.2J/cm²低剂量UVA单次或多次预照射的培养人皮肤黑素细胞.光镜、电镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的比例,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的程度。结果 单次或多次7.2J/cm²UVA预照射处理后的培养皮肤黑素细胞使随后86.4J/cm²UVA照射诱导的形态学上的毒性反应减轻,细胞凋亡的比例下降,DNA链断裂减少及修复加快,与未经预处理86.4J/cm²UVA照射的相应细胞比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);单次7.2J/cm²UVA预照射诱导培养皮肤黑素细胞的适应性反应在预照射12h后消失,而当低剂量UVA预照射的累积剂量达到28.8J/cm²以上时,预照射的培养细胞即使是14d后对86.4J/cm²UVA照射仍有明显的防护作用。结论 低剂量UVA照射可诱导培养的皮肤黑素细胞出现对随后高剂量UVA照射的适应性反应,其效应滞留期及强度与低剂量UVA的累积剂量有关。     

紫檀芪对长波紫外线辐射所致人成纤维细胞急性光损伤的保护作用

目的探讨紫檀芪(pterostilbene)对长波紫外线(UVA)辐射所致的人成纤维细胞急性损伤的保护作用,初步分析其分子机制。方法 MTT法测定紫檀芪对人皮肤成纤维细胞活力的影响,紫檀芪与人皮肤成纤维细胞共培养24h后,以20J/cm2的UVA剂量进行照射,然后采用乳酸脱氢酶释放法测定细胞活力,DCFH-DA测定胞内活性氧(cellular reactive oxygen species,ROS)水平,彗星实验检测DNA损伤,Western印迹检测核因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor2,Nrf2)蛋白细胞定位以及siRNA沉默Nrf2。结果与对照相比,UVA照射后乳酸脱氢酶相对释放率增加为164.53%(P0.001)。而UVA照射前4μmol/L和8μmol/L紫檀芪预处理细胞24h,则细胞乳酸脱氢酶相对释放率分别恢复到对照组的100.11%(P0.05)和98.69%(P0.05)。流式细胞术分析显示,经UVA辐照后,其ROS水平上升至对照细胞的264.4%(P0.001),UVA照射前4μmol/L紫檀芪预处理细胞24h,则活性氧(ROS)水平恢复至对照细胞的113.50%(P0.05)。彗星实验结果显示,空白对照组细胞的尾部DNA百分比为(1.795±2.147)%,UVA辐照组为(65.50±12.418)%,与空白对照组相比DNA损伤显著增加(t=40.68,P0.000 1);而紫檀芪预处理后再接受UVA辐照组为(13.53±8.152)%,与UVA辐照组相比其DNA损伤显著减轻(t=27.85,P0.000 1)。紫檀芪处理提高了细胞核中的Nrf2蛋白水平。转染siRNA-Nrf2后,细胞活性与对照细胞差异无统计学意义(P0.05),但经UVA照射,紫檀芪的预处理细胞活性为对照组的35.32%(P0.000 1),紫檀芪的保护作用显著降低。结论紫檀芪能有效防御UVA所致成纤维细胞急性光损伤。这种保护作用可能与紫檀芪激活Nrf2信号通路相关。     

皮肤光老化动物模型的建立和超微结构观察

目的:构建光敏剂结合UVA诱导的小鼠皮肤光老化模型。方法:ICR小鼠分为3组:模-型组外用1%甲氧沙林溶液(8-MOP)后进行UVA照射、单纯UVA照射组和空白对照组。照射后观察皮肤外观表现、病理学变化和超微结构特点,确定各组诱导皮肤光老化进程的累积照射剂量和时间。结果:单纯UVA照射组在第45天,UVA剂量约720 J/cm~2时,肉眼观察皮肤外观、组织病理方面和-超微结构都呈现比较典型的光老化表现;模型组(8 MOP/UVA)小鼠在第3天,UVA累积剂量约47 J/cm~2时,透射电镜下可见角质形成细胞和基底层黑素细胞的显著凋亡(核固缩);第5天,UVA累积剂量约78 J/cm2时,病理示:真皮层部分弹性纤维变性;随着照射剂量的增加,第6天UVA累积剂量达95 J/cm~2时,出现典型的光老化表现,透射电镜下可清晰观察到弹性纤维和胶原蛋白束的病理改变。结论:8-MOP/UVA可以快速诱导小鼠皮肤光老化模型的建立。     

葡萄籽原花青素及UVA照射对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的 观察葡萄籽原花青素（GSPE）和长波紫外线（UVA）对人角质形成细胞（HaCaT细胞）增殖的影响,以探讨GSPE有无光保护作用。方法 MTT法分别测定不同浓度GSPE以及不同剂量UVA对HaCaT细胞增殖活性的影响。结果 GSPE浓度为5-200μg/m L时,对HaCaT细胞增殖影响不明显,浓度为500μg/m L及以上时抑制细胞生长,且有统计学意义;UVA剂量超过10 J/cm2有抑制作用且随剂量增高抑制作用越明显,且有统计学意义,25 J/cm2时其抑制率达37.65%;浓度为50、100μg/mL的GSPE对25 J/cm2 UVA照射后的HaCaT细胞的增殖有明显促进作用。结论25 J/cm2的UVA对HaCaT细胞的增殖有明显抑制作用,而合适浓度的GSPE对HaCaT细胞增殖活性有光保护作用。     

UVA对成纤维细胞和HaCaT细胞形态及诱导型一氧化氮合酶产生水平的影响

目的 比较5 J/cm²长波紫外线(UVA)照射对人皮肤成纤维细胞和HaCaT细胞形态、数目和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生的影响.方法 5 J/cm² UVA分别照射人成纤维细胞和HaCaT细胞后24 h,48 h和72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态和数目变化,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞免疫组化方法检测两种细胞iNOS mRNA和蛋白表达的情况.结果 人成纤维细胞在照射后3个时间点细胞均出现皱缩,24 h细胞数目即明显低于照射前(P<0.05),iNOS mRNA和蛋白在照射后24 h有高峰表达;HaCaT细胞在3个时间点细胞形态未见明显改变,细胞数目在照射后48 h才明显低于照射前(P<0.05),且iNOS mRNA和蛋白在照射后48 h有高峰表达.结论 5 J/cm² UVA照射后人成纤维细胞比HaCaT细胞更易受到损伤,iNOS高峰表达出现更早,且持续时间更长.     

circIGF2BP3调控光老化皮肤成纤维细胞自噬水平的研究

【摘要】 目的 初步探究circIGF2BP3对光老化皮肤成纤维细胞自噬水平的影响。方法 取中山大学附属第三医院泌尿外科6例儿童包皮环切术后包皮组织,分离培养成纤维细胞,以每日10 J/cm2长波紫外线（UVA）连续照射14 d,建立UVA诱导的光老化成纤维细胞模型（UVA处理组）,未经处理的正常成纤维细胞作为对照组,β半乳糖苷酶染色、Western印迹法检测P21蛋白表达,CCK8法检测细胞活力验证建模是否成功。Western印迹法检测光老化成纤维细胞中自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ表达,qRT-PCR验证光老化与正常成纤维细胞间circIGF2BP3表达差异,并对其进行生物学注释。将原代成纤维细胞分为4组：空载组、UVA + 空载组,circIGF2BP3过表达组、UVA + circIGF2BP3过表达组,Western印迹法检测各组细胞中自噬相关蛋白表达水平。两独立样本均数的比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 UVA处理组β半乳糖苷酶染色阳性率（61.33% ± 5.78%）、P21蛋白表达（1.25 ± 0.03）均显著高于对照组（6.37% ± 0.32%、1.00 ± 0.05,t = 9.49、4.26,P < 0.01、< 0.05）,而细胞活力（74.33% ± 3.48%）显著低于对照组（100%,t = 7.38,P < 0.01）。UVA处理组P62蛋白表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值均显著高于对照组（均P < 0.05）。光老化成纤维细胞中circIGF2BP3的相对表达量为0.72 ± 0.04,显著低于对照组（1.00 ± 0.03）,t = 5.46,P < 0.01。circIGF2BP3过表达组P62蛋白表达（0.60 ± 0.01）及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值（0.71 ± 0.01）均显著低于空载组（1.00 ± 0.02、1.00 ± 0.01;t = 16.25、2.75,P < 0.01、P < 0.05）;UVA + circIGF2BP3过表达组P62蛋白表达（1.05 ± 0.02）及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值（2.04 ± 0.05）亦均显著低于UVA + 空载组（1.31 ± 0.02、2.72 ± 0.14;t = 10.49、6.47,均P < 0.01）。结论 circIGF2BP3可调控UVA诱导的光老化皮肤成纤维细胞自噬水平,为防治光老化提供了新的潜在治疗靶点。     

广州地区102例正常人紫外线最小红斑量测定

目的:测定广州地区正常人紫外线最小红斑量(MED)的正常值范围,探讨其与性别、年龄、皮肤日光类型的关系。方法:以SUV1000型日光紫外模拟器作为照射光源,测定102名健康志愿者腹部正常皮肤的MED值(Ⅲ型、Ⅳ型皮肤)。结果:102名受试者MED均值:UVA为50.0 J/cm2,UVB为43.0 m J/cm2。不同皮肤类型间,Ⅲ型皮肤MED均值:UVA为38.5 J/cm2,UVB为36.1 m J/cm2;Ⅳ型皮肤MED均值:UVA为50.0 J/cm2,UVB为47.0 m J/cm2,Ⅳ皮肤MED均值均明显大于Ⅲ型皮肤(P值均<0.01)。不同性别间,男性MED均值:UVA为50.0 J/cm2,UVB为43.0 m J/cm2;女性:UVA为50.0 J/cm2,UVB为43.0 m J/cm2,不同性别间差异均无统计学意义(P值均>0.05)。不同性别的不同年龄阶段间UVA、UVB MED均值差异均无统计学意义(P值均>0.05);UVA-MED的正常值范围为≥30 J/cm2,UVBMED的正常值范围为≥29.1 m J/cm2。结论:紫外线MED的影响因素与皮肤日光反应类型有关,Ⅲ型皮肤UVA-MED、UVB-MED均明显低于Ⅳ型皮肤(P<0.01)。本组受试者MED与性别和年龄无直接关系。     

UVA联合UVB照射对原代人角质形成细胞增殖的影响

目的 探讨95％长波紫外线(UVA)联合5％中波紫外线(UVB)照射对原代人表皮角质形成细胞(HEK)增殖的影响,为构建日光对人工皮肤光损伤模型提供实验依据.方法 用总剂量分别为0、2.5、5、10、20、30、40、60 J/cm2的紫外线(含95％UVA和5％UVB),分别照射体外培养的HEK,继续培养24 h后,用噻唑蓝(MTr)法检测细胞活力,用SPSS软件计算引起HEK半数损伤时的紫外线照射剂量.结果 8种剂量紫外线照射后,HEK相对抑制率分别为0、1.03％、6.60％、17.28％、31.28％、49.59％、59.67％、70.99％,当总照射剂量≥10 J/cm2时,HEK相对抑制率与对照组相比,差异有统计学意义(F=62.11,P＜0.05);HEK相对抑制率为50％时的紫外线照射总剂量为31.31 J/cm2.结论 随着紫外线照射剂量的加大,HEK增殖活力降低,31.31 J/cm2为HEK半数死亡的照射剂量.