子宫内膜异位症中子宫内膜间质细胞血管生成能力的研究

目的:研究子宫内膜异位症(EMs)患者子宫内膜间质细胞环氧化酶2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白分泌及m RNA表达。方法:收集EMs患者的在位及异位病灶子宫内膜组织和子宫肌瘤患者在位内膜组织,原代消化培养子宫内膜细胞,取纯化的子宫内膜间质细胞进行研究,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白的分泌,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测COX-2、PGE2和VEGF的m RNA的表达。结果:EMs和子宫肌瘤患者分泌期在位子宫内膜间质细胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白分泌及m RNA表达与增殖期比较差异均无统计学意义(P0.05);EMs患者在位及异位的子宫内膜间质细胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白分泌及m RNA表达比子宫肌瘤患者在位细胞均升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);EMs患者异位的子宫内膜间质细胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白分泌及m RNA表达比其在位细胞均升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:EMs患者在位及异位子宫内膜间质细胞COX-2、PGE2、VEGF的蛋白分泌及m RNA表达均升高,且异位病灶间质细胞升高更明显,提示在EMs发病中异位病灶子宫内膜间质细胞血管生成能力更强。     

TWEAK在子宫内膜异位症在位和异位内膜上的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)在子宫内膜异位症(EMs)发病的关系。方法:采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)和免疫组化、Western Blot方法检测EMs患者在位内膜、异位病灶中TWEAK mRNA和蛋白的表达,并与正常对照子宫内膜比较。结果:TWEAK蛋白表达于子宫内膜的腺上皮细胞和间质细胞的胞浆内。与正常对照组内膜和在位组内膜相比,TWEAK mRNA和蛋白在异位内膜上表达量下调(P<0.05),且无论是EMs在位内膜还是对照组内膜,其增生期TWEAK mRNA表达明显低于分泌期(P<0.05)。结论:TWEAK在子宫内膜中表达,表达量在分泌期明显升高。EMs患者异位子宫内膜TWEAK表达降低,可能导致子宫内膜细胞的凋亡水平下降,参与EMs的发生发展过程。     

VEGF在子宫内膜异位症发病机制中的作用

目的:探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)组织中的表达及其在EMs发生发展中的作用。方法:采用ELISA法检测30例EMs患者(研究组)和16例子宫肌瘤患者(对照组)血清和腹腔液中的VEGF水平,免疫组化和RT-PCR检测并比较VEGF蛋白、VEGF mRNA在EMs异位内膜、在位内膜和对照组正常内膜的表达及其相关性。结果:EMs患者腹腔液、异位内膜、在位内膜VEGF蛋白及mRNA均明显高于对照组(P<0.05),但与EMs临床分期无关。EMs患者血清VEGF与对照组相比无明显的差异(P>0.05)。EMs患者异位内膜和在位内膜的微血管密度(MVD)明显高于对照组内膜(P<0.05)。结论:VEGF在EMs患者的高表达,说明其通过促血管生成在该病发生发展中起着重要作用。     

半乳糖凝集素-1在子宫内膜异位症大鼠模型异位及在位内膜中的表达

目的:研究半乳糖凝集素-1(gal-1)在大鼠子宫内膜异位症(EMs)模型异位及在位组织中的表达。方法:选取12只性成熟雌性未孕Wistar大鼠,取一侧宫角子宫内膜,采用自体移植法建立EMs大鼠模型。术后28天再次开腹,将建模成功的大鼠作为自身对照,取其异位病灶与在位子宫内膜,苏木精-伊红(HE)染色鉴定组织学特征。免疫组织化学(IHC)法、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测异位病灶与在位内膜中gal-1表达。结果:肉眼观异位病灶呈椭圆形囊泡状,内含清亮或咖啡色液体,表面及周围有新生血管。组织学证实为异位内膜。造模成功率为83.33%。IHC显示,gal-1表达于异位及在位子宫内膜基质;QRT-PCR定量分析表明,异位内膜gal-1 mRNA表达量高于在位内膜(P0.05);Western blot结果示,异位内膜gal-1蛋白水平升高(P0.05)。结论:大鼠EMs异位内膜中gal-1表达高于在位内膜,为该靶点参与EMs的机制及治疗的研究打下基础。     

子宫内膜异位症在位内膜及裸鼠模型异位病灶芳香化酶的表达及意义

目的:探讨芳香化酶在子宫内膜异位症(EMs)在位内膜及其裸鼠模型异位病灶中的表达意义。方法:征集EMs组及非异位症(NEMs)组各24例,应用其分泌晚期子宫内膜,建立EMs裸鼠模型,取建模后5d、15d、30d裸鼠异位病灶,RT-PCR及免疫组化方法检测两组在位内膜和异位病灶芳香化酶mRNA及蛋白表达。结果:芳香化酶mRNA表达,EMs组异位病灶(0.894±0.23)表达强于在位内膜(0.685±0.15),P<0.05;阳性表达率(87.50%,83.33%)无差异。NEMs组异位病灶表达强度和阳性表达率(0.920±0.24,95.83%)均高于在位内膜(0.612±0.15,62.50%),P<0.05。两组在位内膜比较,EMs组阳性表达率高于NEMs组,P<0.05。两组异位病灶及各组不同时期异位病灶(EMs组,5d:0.889±0.23;15d:0.990±0.19;30d:0.880±0.29;NEMs组,5d:0.889±0.23;15d:0.905±0.23;30d:0.918±0.22)比较,芳香化酶mRNA表达无差异。芳香化酶蛋白阳性表达率,EMs组异位病灶(95.83%)与在位内膜(91.67%)比较,差异不显著。NEMs组异位病灶(95.83%)高于在位内膜(70.83%),P<0.05。EMs组在位内膜高于NEMs组,P<0.05;两组异位病灶比较,差异不显著。结论:局部雌激素合成增强在EMs发病机理中起重要作用。芳香化酶是EMs等雌激素依赖性疾病在子宫内膜特异性表达标记物。     

RANTES在子宫内膜异位症在位内膜及异位内膜的表达及其意义

目的:探讨调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(RANTES)在子宫内膜异位症在位内膜及异位内膜的表达及在子宫内膜异位症发病中的作用.方法:以2010年1～10月因子宫内膜异位症在我院行手术治疗的30例患者的在位内膜及异位内膜为研究组,以同期在我院就诊取IUD的30例患者的正常子宫内膜作为对照组,检测3组标本中RANTES mRNA表达及蛋白水平.并检测3组培养上清液对单核细胞趋化活性的影响.结果:①IL-1β刺激48小时,异位内膜组细胞RANTES mRNA表达及蛋白水平均增加,与在位内膜组和正常内膜组细胞比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).IL-1β刺激72小时,异位内膜组、在位内膜组细胞RAN-TES mRNA表达及蛋白水平均增加,异位内膜组细胞与在位内膜组和正常内膜组细胞比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);在位内膜组细胞与正常内膜组细胞比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).②异位内膜组及在位内膜组单核细胞趋化指数明显高于正常内膜组(P＜0.05).结论:子宫内膜异位症患者的在位内膜及异位内膜RANTES mRNA表达及蛋白水平均增加.RANTES通过促进单核细胞的趋化活性,可能在子宫内膜异位症的发病中发挥作用.     

端粒酶逆转录酶在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:研究端粒酶逆转录酶(hTERT)在子宫内膜异位症(EMs)在位内膜及异位内膜组织中的表达,探讨hTERT在EMs发生过程中的作用。方法:应用免疫组化SP法检测54例EMs患者及15例正常子宫内膜中hTERT的表达情况,应用显微镜及相关软件评估hTERT在EMs患者在位内膜及异位内膜组织中的表达,以及其随着月经周期变化的表达情况。分析子宫内膜异位病灶组织中hTERT表达与CA125、月经周期、r-AFs分期及年龄之间的相关关系。结果:EMs异位内膜病灶处hTERT表达水平显著高于在位内膜、正常子宫内膜(P0.05);EMs在位内膜显著高于正常子宫内膜(P0.05)。正常内膜和EMs在位内膜中,月经周期变化对hTERT的表达无明显影响。EMs病灶处hTERT的表达水平与血清中CA125水平呈正相关(r=0.367,P0.05),而与月经周期、r-AFs分期和年龄呈无明显相关性。结论:hTERT在EMs中异常表达,表明hTERT在EMs的发生过程中起着一定的作用。     

PTN和MK在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:探讨pleiotrophin(PTN)和midkine(MK)mRNA在子宫内膜异位症(EMs)中的表达及意义。方法:采用病例对照研究方法,以35例EMs患者在位和异位子宫内膜(研究组)以及25例非EMs妇女子宫内膜(对照组)为样本,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PTN、MK mRNA的表达。结果:研究组在位内膜中PTN和MK表达均明显高于对照组(P<0.01);异位内膜PTN mRNA表达高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。EMs在位内膜中PTN、MK mRNA表达与内异症的临床期别呈正相关。无论增殖期或分泌期,EMs在位内膜中PTN、MK表达均高于对照组(均P<0.05)。结论:EMs患者在位子宫内膜组织中PTN和MK表达的变化可能与子宫内膜异位症的发生、发展有关。     

IL-10、IL-12在子宫内膜异位症组织中的表达

目的:检测IL-10、IL-12在子宫内膜异位症(EMs)患者在位内膜、异位内膜组织中的表达,为EMs发生发展机制的研究和临床靶向化治疗提供实验依据。方法:选取30例卵巢子宫内膜异位囊肿患者,取其异位内膜组织(EMs异位内膜组)和在位内膜组织(EMs在位内膜组)。选取同期在华北理工大学附属医院因其他原因行宫腹腔镜手术的30例患者的正常子宫内膜组织(对照组)。应用免疫组化法和Western blot法检测3组内膜组织中IL-10、IL-12表达。结果:与对照组比较,EMs组中IL-10表达升高,IL-12表达降低,差异均有统计学意义(P0.01)。EMs在位内膜中IL-10表达低于EMs异位内膜,IL-12表达高于EMs异位内膜,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:EMs子宫内膜局部及种植部位中IL-12表达降低和IL-10表达升高与EMs的发生、发展有一定的相关性。     

Meis1在子宫内膜异位症不孕患者子宫内膜中的表达研究

目的:初步探索HOXA10的辅因子(Meis1)与子宫内膜异位症(EMs)患者不孕和发病的相关性。方法:采用免疫组织化学方法进行组织学定位并进行半定量分析,采用Westernblot-ting方法在蛋白水平上进行定量分析,检测EMs不孕患者异位和在位子宫内膜中Meis1的表达水平。结果:免疫组织化学结果显示,Meis1在异位内膜和在位内膜中仅有弱表达,而在正常同期内膜中呈较明显的阳性表达,差异显著(P<0.01);比较Meis1在分泌中期在位内膜与正常内膜中的表达,差异亦有显著性(P<0.01)。Westernblotting显示,Meis1在分泌中期在位内膜中仅有弱表达,而在同期正常内膜中呈高表达(P<0.001)。结论:Meis1在EMs患者分泌中期在位内膜中低表达,可能是影响子宫内膜容受性的建立,从而影响胚胎着床导致不孕的重要因素之一。同时,Meis1在异位内膜中的低表达说明异位内膜可能对体内雌、孕激素正常调控具有抵抗性,异位内膜细胞具备了对抗凋亡的能力,提示Meis1可能参与了EMs的发生与发展。     

VEGF及其受体KDR在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:通过检测血管内皮生长因子(VEGF)、激酶插入区受体(KDR)在子宫内膜异位症(EMs)患者异位内膜、在位内膜及血清和腹腔液中的表达,探讨VEGF及KDR在EMs发病机制中的作用。方法:应用免疫组化SP法检测并比较EMs异位内膜、在位内膜及对照组子宫内膜组织中VEGF及KDR的表达水平。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测并比较EMs组及对照组血清和腹腔液中VEGF及KDR的含量。结果:VEGF和KDR在EMs组异位内膜的表达明显高于在位内膜和正常内膜组(P<0.05),VEGF和KDR在在位内膜的表达明显高于正常对照组(P<0.05),且两者在EMs异位内膜的表达呈正相关(r=0.971,P<0.05)。EMs患者血清和腹腔液中VEGF及KDR含量明显高于对照组(P<0.01),临床分期较早(Ⅰ～Ⅱ)的EMs患者的血清和腹腔液中VEGF及KDR水平明显高于临床分期较晚(Ⅲ～Ⅳ)的患者(P<0.05)。EMs组腹腔液中VEGF及KDR浓度显著高于其血清中浓度(P<0.05)。结论:VEGF及KDR可能在EMs发生、发展过程中发挥了重要的作用,检测血清VEGF及KDR水平为EMs的早期诊断提供了一种新的可能方法,也为通过VEGF-VEGFR双靶向阻断血管来治疗EMs奠定了理论基础。     

子宫内膜异位症间质细胞中miRNA-150的表达及其对CXCR4的影响

目的:探讨子宫内膜异位症(EMT)间质细胞微小RNA-150(miRNA-150)的表达情况,并分析是否通过调控趋化因子受体4(CXCR4)的表达参与EMT的发生、发展。方法:选取2015年7月至2016年10月因EMT在天津市中心妇产科医院进行腹腔镜手术患者65例,因卵巢单纯囊肿行腹腔镜手术患者70例。留取EMT患者的宫腔内膜组织和病灶异位内膜组织及卵巢单纯囊肿患者宫腔内膜。消化组织培养内膜细胞,免疫荧光染色鉴定异位内膜间质细胞,实时荧光定量PCR(RTPCR)检测细胞中miRNA-150的相对表达量;内膜细胞用脂质体2000(lipofectamine2000)转染miRNA-150类似物(miRNA-150mimics)及抑制物(miRNA-150 inhibitor)。转染48小时后RT-PCR检测miRNA-150及CXCR4 mRNA相对表达量,并用流式细胞术检测CXCR4阳性细胞表达百分数。结果:miRNA-150在异位内膜细胞与在位内膜细胞内表达显著降低(P0.01)。转染miRNA-150mimics 48小时后RT-PCR结果提示CXCR4 mRNA表达增加(P0.01),流式细胞结果提示CXCR4阳性细胞百分比增加(P0.05);转染miRNA-150inhibitor后CXCR4mRNA低表达(P0.01),CXCR4阳性细胞百分比减少(P0.05)。结论:miRNA-150在EMT组织中低表达,并可能通过调控CXCR4的表达参与EMT的发生、发展。     

激活素A对子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞的调节作用

目的:探讨激活素A(activin A)对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)活性的调节作用。方法:分别用RT-PCR和Real-timePCR的方法检测5例正常、45例EMs在位、异位组织中激活素AβA亚基和芳香化酶CYP19A1mRNA的表达。分离培养5例正常、5例EMs在位、异位组织ESCs,用不同剂量的激活素A刺激EMs在位ESCs不同时间后,应用免疫电化学发光法检测ESCs分泌雌二醇(E2)的水平,MTT检测ESCs活性,流式细胞仪检测ESCs凋亡和细胞周期。结果:激活素AβA亚基在EMs异位ESCs的表达明显高于正常对照ESCs和EMs在位ESCs。经25 ng/ml激活素A刺激24 h后,与正常对照组相比,在位ESCs的E2分泌和芳香化酶CYP19A1mRNA的表达均显著升高。但激活素A未引起ESCs增殖活性的显著变化,对细胞凋亡和细胞周期亦无影响。结论:激活素A可能通过促进芳香化酶表达而增加ESCs的E2分泌,这可能是EMs异位灶存活和病理发生的机制之一。     

抑癌基因PTEN、p27与子宫内膜异位症发病的关系

目的:探讨抑癌基因PTEN、p27在子宫内膜异位症(EMs)发生、发展中的作用。方法:采用免疫组化SP法检测32例EMs患者(EMs组)在位及异位子宫内膜PTEN和p27的表达,并与20例正常内膜对照组在位内膜进行比较。结果:PTEN、p27在EMs组异位和在位内膜的表达无显著差异(P>0.05),但二者均低于对照组水平(P<0.05);PTEN、p27在EMsⅠ-Ⅱ期的表达显著高于Ⅲ-Ⅳ期(P<0.05),并与EMsr-AFS分期呈负相关(P<0.05)。各组内膜PTEN和p27的表达均呈正相关(P<0.05)。对照组PTEN、p27分泌期的表达均高于增生期(P<0.05),而EMs组在位内膜的表达均无周期性改变(P>0.05),但其分泌期的表达显著低于对照组同期水平(P<0.05)。结论:抑癌基因PTEN、p27在EMs在位和异位内膜的低表达及二者的协同作用,可能与EMs的发生发展有密切关系。     

孕激素受体亚型在卵巢子宫内膜异位囊肿组织的表达

目的:探讨内异症治疗中“孕激素耐受”影响疗效的可能机制。方法:选取30例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的巧克力囊肿组织,其中6例同时行子宫切除术患者的在位内膜组织和13例正常内膜组织,采用RT-PCR技术半定量检测子宫内膜异位症(EMs)组织中孕激素受体亚型hPR-A+B和hPR-B的基因表达。结果:巧克力囊肿组织中总PR和PR-BmRNA表达明显低于正常内膜组织和EMs患者在位内膜组织,差异有统计学意义;巧克力囊肿组织中PR-B/PR-A+BmRNA的比值低于正常子宫内膜组织,差异有统计学意义。结论:PR和PR-B/PR-A+BmRNA的比值降低可能与EM治疗中“孕激素耐受”相关。     

uPA系统在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)及其受体(uPAR)和纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-1)在子宫内膜异位症中的表达和意义。方法:采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)分别检测30例子宫内膜异位症患者的异位内膜及其相应的在位内膜(研究组)以及30例正常子宫内膜(对照组)中uPA、uPAR、PAI-1的表达。结果:异位内膜和在位内膜及对照组子宫内膜组织中,uPA的表达分别为0.198、0.112、0.079;uPAR的表达分别为0.162、0.119、0.076;PAI-1的表达分别为0.230、0.158、0.080;异位内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1与在位内膜及对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);在位内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1与对照组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。无论是增殖期还是分泌期,异位内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1的表达均高于在位内膜及对照组(P<0.05,P<0.01),在位内膜中uPA、uPAR、PAI-1的表达高于对照组(P<0.05)。结论:异位和在位子宫内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1表达的变化可能与子宫内膜异位症的发生、发展有关。     

环氧合酶-2和前列腺素类物质在子宫内膜异位症的表达研究

目的:研究环氧合酶-2(Cox-2)、6-酮-前列腺素F1α(6-k-PGF1α)和血栓素B2(TXB2)与子宫内膜异位症(EMs)的发生及临床病理因素的关系。方法:采用免疫组织化学SABC法检测45例EMs和30例正常子宫内膜Cox-2蛋白的表达;采用放射免疫法检测组织液6-k-PGF1α和TXB2的含量。结果:Cox-2在腺上皮的胞浆中表达,EMs组Cox-2表达明显高于对照组(P<0.001);EMs的AFS分期、疼痛分级以及瘤体大小之间Cox-2表达差异无统计学意义(P>0.05)。EMs组TXB2和6-k-PGF1α的含量明显高于对照组(P<0.001);有症状组6-k-PGF1α的含量高于无症状组,差异有统计学意义(P<0.05);TXB2含量两组无差别。Cox-2蛋白的表达与6-k-PGF1α和TXB2的含量相关。结论:Cox-2、6-k-PGF1α及TXB2的高表达可能与EMs的发生相关。6-k-PGF1α可能与痛经相关。