Zebularine对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨新型DNA甲基转移酶抑制剂Zebularine对肝癌细胞系Hep G2细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养Hep G2细胞,用不同浓度的Zebularine(25~400μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对Hep G2细胞增殖的影响;Zebularine(100、200、400μmol/L)处理Hep G2细胞48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Rho123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase9表达,并检测RUNX3基因表达情况。结果 Zebularine能抑制Hep G2细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;Zebularine(浓度分别为50、100、200μmol/L)作用Hep G2细胞48 h后,细胞凋亡率分别为12.4%、23.4%、35.4%,对照组凋亡率仅为3.3%;线粒体膜电位降低;凋亡相关蛋白Bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,Pro-Caspase-3、Pro-Caspase-9表达减弱,而Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9表达增强,呈浓度依赖性;RUNX3表达上调,也呈剂量依赖性。结论 Zebularine能抑制Hep G2细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调RUNX3表达,进而增加细胞Casepase-3、Casepase-9活性,下调Bcl-2基因的表达及上调Bax基因有关。     

Genistein对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察金雀异黄素(Genistein)对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将HT-29细胞分别加入6.25、12.5、25、50、100μg/mL的Genistein进行培养,观察其生长、增殖、凋亡情况并检测其中的Bcl-2、Bax蛋白。结果 25、50μg/mL的Genistein作用48 h后,HT-29细胞的生长受抑制,凋亡率上升(P均<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.01),Bax蛋白表达上升(P均<0.01),呈剂量依赖性(P<0.05)。各浓度的Genistein作用48 h后对HT-29细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性(P均<0.05)。结论 Genistein既可以抑制HT-29细胞的生长及增殖,又可以诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调HT-29细胞Bax蛋白以及下调Bcl-2蛋白的表达有关。     

过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

川芎嗪抗β淀粉样蛋白25～35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡作用的机制

目的探讨川芎嗪是否作用PI3K/Akt通路抗β淀粉样蛋白(Aβ)25~35诱导的细胞凋亡。方法 Aβ25~35作用SH-SY5Y细胞建立AD细胞模型,MTT法检测细胞的生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹检测p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达。结果川芎嗪能够抑制Aβ25~35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡和促进其存活;川芎嗪可抑制Aβ25~35引起的p-Akt/Akt、Bcl-2表达降低和Bax、caspase-3的表达增加。PI3K/Akt通路抑制剂LY294002能够抑制川芎嗪对Aβ25~35诱导的细胞凋亡的保护作用,抑制川芎嗪诱导的p-Akt/Akt、Bcl-2表达上调及Bax、caspase-3表达下调。结论川芎嗪拮抗Aβ25~35诱导的细胞凋亡与作用PI3K/Akt通路,调节Bcl-2、Bax、caspase-3的表达有关。     

黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用观察

目的研究黄芩苷对人肝癌HepG-2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以不同浓度的黄芩苷与人肝癌HepG-2细胞共同培养,采用MTT法测定细胞增殖抑制率;采用Hoechst33258/PI染色法在荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;采用TUNEL法检测细胞凋亡率;采用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果在25~100μg/ml的药物浓度作用下,细胞增殖被抑制。药物浓度在50μg/ml下作用48h,细胞抑制率达50.63%,药物浓度在75μg/ml下作用48h细胞,抑制率达77.62%。抑制率呈浓度和时间依赖性;药物浓度在50μg/ml时作用48h,可见HepG-2细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型的凋亡改变;随着黄芩苷作用浓度的增加,细胞凋亡率增高(P<0.05);随药物浓度的增加,Caspase-9和Caspase-3蛋白表达量呈增加趋势,而Bcl-2表达减少。结论黄芩苷能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肝癌细胞增殖,其诱导凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

亚硒酸钠调控AMPK/mTOR信号通路对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制

目的探讨亚硒酸钠调控AMPK/mTOR信号通路对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法培养人结直肠癌细胞株HT-29、SW620和HCT116,用1.25、2.5、5、10、20μmol/L的亚硒酸钠处理细胞48 h,CCK8试验检测不同浓度亚硒酸钠对细胞增殖的影响;10、20μmol/L的亚硒酸钠作用于人结直肠癌细胞株HT-29 12、24、48、72 h后,CCK8试验检测亚硒酸钠作用不同时间对细胞增殖的影响;10、20μmol/L的亚硒酸钠作用于人结直肠癌细胞株HT-29 48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡率并用Western印迹检测蛋白表达。结果随着亚硒酸钠浓度的增加,人结直肠癌细胞株HT-29、SW620和HCT116的抑制率增大,具有浓度依赖性,亚硒酸钠对人结直肠癌细胞株HT-29、SW620和HCT116的IC50分别为(5.060±1.01)、(6.701±1.21)、(7.471±1.47)μmol/L,后期选择人结直肠癌细胞株HT-29为研究对象;10和20μmol/L的亚硒酸钠对细胞的抑制率在各个时间点都显著高于0 h抑制率(P<0.01),且随着时间的延长抑制率增加;10、20μmol/L的亚硒酸钠处理后细胞的凋亡率均显著高于0μmol/L,具有浓度依赖性(P<0.01),细胞中p-AMPK和Bax的蛋白表达显著高于0μmol/L组,p-mTOR和Bcl-2的蛋白表达显著低于0μmol/L组且具有浓度依赖性(P<0.01)。结论亚硒酸钠能抑制人结直肠癌细胞株HT-29的增殖,促进细胞的凋亡,使Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升,可能与AMPK/mTOR信号通路调控有关。     

丹皮酚对人大肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

目的:探讨丹皮酚(paeonol, Pae)对人大肠癌HT-29细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用及可能的作用机制. 方法:应用MTT法、荧光显微镜及透射电镜技术、TUNEL法和流式细胞仪技术观察不同浓度的Pae对HT-29细胞增殖的抑制及凋亡的诱导作用; 应用免疫细胞化学技术检测用药前后凋亡相关基因Bcl-2, Bax及P53表达的变化. 结果: HT-29细胞经Pae(浓度范围7.81-250 mg/L)作用后细胞生长明显受到抑制, 呈明显的剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系; 荧光显微镜及透射电镜观察到Pae作用后HT-29细胞出现典型的细胞凋亡形态; Pae在15.63, 62.5, 250 mg/L 3种浓度下作用48 h均可诱导HT-29细胞凋亡, TUNEL法显示凋亡指数与Pae浓度呈正相依赖关系; 流式细胞仪技术检测其凋亡率分别为7.6%, 16.2%和34.5%, 也有明显的剂量效应关系, 同时Pae使细胞周期分布发生明显变化, 表现为S期细胞比例上升, G0/G1期和G2/M期细胞比例下降; 免疫细胞化学结果显示Pae作用后HT-29细胞Bcl-2及P53蛋白表达显著降低, Bax蛋白表达无显著改变. 结论:Pae能抑制HT-29细胞增殖并诱导其凋亡, 呈现明显的剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系. 其作用可能与影响癌细胞的细胞周期、下调Bcl-2/Bax的比例及P53蛋白的表达有关.     

科罗索酸对SMMC-7721细胞生长抑制作用的初步研究

目的研究中药猫人参中提取的三萜化合物科罗索酸（CRA）对人肝癌SMCC-7721细胞生长的影响。方法 MTT法检测不同浓度下细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MitoCapture染色观察CRA作用后细胞线粒体膜电位的改变,并进一步用Western blot法检测线粒体对细胞色素C释放情况及Bax、Bcl-2表达情况的影响。结果 35μmol/L的CRA可明显抑制SMMC-7721细胞存活并具有凋亡诱导作用;CRA可使线粒体膜电位耗散,使细胞色素C由线粒体内释放入胞质;CRA可增加Bax表达而对Bcl-2表达无明显影响。结论猫人参提取物CRA可能经由线粒体途径及上调Bax表达、增加Bax/Bcl-2比率诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡。     

蛇床子素通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导K562细胞凋亡和增殖抑制

目的:研究蛇床子素对人慢性髓系白血病细胞K562增殖和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:培养髓系白血病细胞K562,分别用不同浓度的蛇床子素处理(0、5、10、20μg/ml)。细胞培养48h后,利用MTT法检测K562细胞增殖;流式检测K562细胞凋亡;Western blot法检测PI3K、p-AKT、AKT、Bax、Bcl-2和Cleavage-Caspase3表达。结果:蛇床子素可以呈浓度依赖性的诱导K562细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和Cleavage-Caspase3表达,下调PI3K、p-AKT和Bcl-2,对AKT表达无明显影响。结论:蛇床子素可通过抑制PI3K/AKT信号通路而诱导K562细胞增殖抑制和凋亡。     

FTY720对乳腺癌MCF-7细胞增殖及Bax/Bcl-2基因表达的影响

目的探讨FTY720对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及Bax/Bcl-2基因表达的影响。方法 FTY720作用人乳腺癌细胞29 h,观察细胞形态,应用Western印迹检测细胞Bax/Bcl-2基因表达;FTY720作用人乳腺癌细胞48 h,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,通过流式细胞术(FCM)检测细胞周期、凋亡率。结果镜下可见FTY720作用组细胞生长不良;MTT法检测到该细胞的增殖受到不同程度的抑制,当FTY720浓度为6 400 ng/ml时,体外培养MCF-7细胞抑制率为62.0%,抑制率呈浓度依赖性(P0.05);流式细胞术检测分析显示,FTY720可将该细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率也较对照组明显增加(P0.05);Western印迹法检测分析显示,实验组细胞中Bax/Bcl-2蛋白表达水平比值均较对照组明显增高(P0.01)。结论一定浓度的FTY720可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,诱导其发生凋亡,激活细胞凋亡基因Bax、抑制原癌基因Bcl-2表达。     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过PI3K/AKT信号通路抑制人肝癌细胞株HepG2增殖和促进凋亡

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG),对人肝癌细胞株HepG2的作用及其机制.方法:对数生长期的HepG2细胞分别用不同浓度的EGCG处理(0、10、20、40冚g/mL).细胞培养48 h后,利用MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和膜电位,免疫印迹法检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、p-AKT、BCL-2、Bax、proCaspase3、clevage-Caspase3、多聚ADP-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polyrnerase,PARP]、Clevage-PARP和细胞色素C(cytochrome C,CytC)表达.结果:EGCG可以成浓度依赖诱导HepG2细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax,pro-Caspase3,PARP和CytC表达,下调PI3K,p-AKT,Cleavage-PARP,Cleavage-Caspase3和Bcl-2的表达和细胞膜电位,但对AKT表达无明显影响.结论:EGCG可通过抑制PI3K/AKT信号通路而诱导HepG2细胞增殖抑制和凋亡.     

花姜酮对胰腺癌PANC1细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨花姜酮对胰腺癌PANC1细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 应用3.75、7.5、15、30、60μg/ml的花姜酮处理PANC1细胞,以未处理细胞作为对照.CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Hoechst33342染色观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞磷酸化STAT1(p-STAT1)、Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 花姜酮呈时间-剂量依赖性抑制PANC1细胞的生长,15 μg/ml花姜酮作用48 h后,细胞增殖抑制率达(72.8±2.72)%,并可观察到典型的细胞凋亡形态学改变,细胞凋亡率达14.2%;同时,PANC1细胞p-STAT1和Bax蛋白表达明显增加(0.654±0.048对0.074±0.011,0.577±0.044对0.218±0.027,P＜0.05),Bcl-2蛋白表达明显下降(0.162±0.029对0.459±0.034,P＜0.05).结论 花姜酮可能通过上调STAT1活性,升高Bax/Bcl-2比率,从而诱导PANC1细胞的凋亡和抑制细胞增殖.     

人参皂苷诱导黑色素瘤细胞B16-BL6凋亡的机制

目的探讨人参皂苷诱导黑色素瘤细胞B16-BL6凋亡的机制。方法培养黑色素瘤细胞B16-BL6,5、10、20、40μg/ml的人参皂苷作用于黑色素瘤细胞B16-BL6 0、12、24、48、72 h,胆囊收缩素(CCK)8试验检测人参皂苷对细胞增殖的影响;10、20、40μg/ml的人参皂苷作用于黑色素瘤细胞B16-BL6 48 h后,流式细胞仪检测人参皂苷对细胞凋亡的影响;Western印迹检测与凋亡相关蛋白的表达。结果随着时间的延长和浓度的增加,人参皂苷对细胞的抑制率增加,表现出时间和浓度的依赖性。72 h后,人参皂苷对细胞的抑制率到了平台期,用5μg/ml的人参皂苷处理黑色素瘤B16-BL6细胞,细胞的抑制率较低,因此后期选择10、20、40μg/ml的人参皂苷为研究对象,用10、20、40μg/ml的人参皂苷作用于黑色素瘤细胞B16-BL6 48 h后,各浓度组早期凋亡和晚期凋亡的细胞显著高于对照组,且呈剂量依赖性(P<0.01)。随着人参皂苷浓度的增加,Bax蛋白表达量增加,而Bcl-2蛋白表达量减少,两者之间的比例增加,而且呈剂量依赖性。随着人参皂苷浓度的增加,细胞色素(Cyt)C和细胞凋亡诱导因子(AIF)含量增加,且呈剂量依赖性。结论人参皂苷抑制黑色素瘤细胞B16-BL6增殖,促进细胞凋亡,其凋亡机制可能与Bcl-2家族Bcl-2和Bax两者之间的比例改变、线粒体膜通透性改变、促使一些凋亡因子的释放有关。     

华蟾毒精抑制人肝癌细胞株增殖、促凋亡作用及机制探讨

目的:观察华蟾毒精对人肝癌细胞株增殖抑制及促凋亡作用,并探讨其机制。方法:选取人肝癌细胞HepG2进行培养,取对数生长期HepG2细胞分为实验组1(浓度为25μmol/L华蟾毒精处理)、实验组2(浓度为50μmol/L华蟾毒精处理)、实验组3(浓度为100μmol/L华蟾毒精处理)和对照组(加等体积的生理盐水),培养24h、48h后采用MTT法和流式细胞术检测对照组和实验组肝癌细胞HepG2增殖抑制率和凋亡率。培养48h后荧光定量PCR检测AKT、mTOR、Caspase3、Bax和Bcl-2 m RNA表达量,免疫印迹法检测Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:培养24h、48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞增殖抑制率均显著高于对照组(P0.05),且实验组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05);培养24h、48h实验组1、实验组2和实验组3细胞凋亡率均显著高于对照组(P0.05),实验组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05);培养48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞AKT、mTOR、Bcl-2 m RNA表达量与对照组相比均显著降低(P0.05),Bax和Caspase-3 m RNA表达量均显著增加(P0.05),且实验组Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达与m RNA表达结果趋势一致。结论:华蟾毒精能够抑制肝癌细胞HepG2增殖,并促进其凋亡,作用机制可能与通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,调控AKT/mTOR信号通路有关。     

沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990体外增殖及凋亡的影响

目的 观察沙利度胺(THD)体外抑制人胰腺癌细胞株SW1990增殖及诱导其凋亡的作用.方法 应用不同浓度的THD(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400μg/ml)处理胰腺癌SW1990细胞24、48、72 h,用MTT法测定细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V/PI检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 THD呈浓度和时间依赖性抑制胰腺癌细胞SW1990的生长.200μg/ml的THD干预使SW1990细胞G0/G1期比例从(41.15±2.23)％上升到(58.83 ±2.33)％;细胞凋亡率从2.6％增加到28.0％;细胞Bax蛋白表达量从0.17±0.03上调到0.33±0.04,Bcl-2蛋白表达量从0.35±0.02下调到0.17±0.01,Bcl-2/Bax比值从2.17±0.44下降到0.52±0.07.结论 THD可以抑制SW1990细胞增殖,其机制可能与上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

葛根素对乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

目的探讨葛根素对乳腺癌细胞株(MCF-7)细胞增殖及凋亡的影响。方法采用终浓度为0、20、50、100、200μg/ml葛根素处理对数生长期的MCF-7细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各浓度的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术及Hoechst染色检测细胞早晚期凋亡率及凋亡指数,碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3的表达。结果葛根素可提高MCF-7细胞的增殖抑制率,此效应呈现剂量和时间依赖性,且除24 h 20μg/ml外,其余浓度及作用时间的增殖抑制率均高于0μg/ml(P0.05);不同浓度葛根素处理48 h后的早期、晚期凋亡率、细胞凋亡指数、G0/G1期细胞比例、凋亡促进基因Bax和Cleaved caspase-3水平升高,而S期、G2/M期细胞比例、凋亡抑制基因Bcl-2水平降低(P0.05)。结论葛根素可抑制乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖,促进其凋亡和细胞周期阻滞,该作用可能与提高凋亡促进蛋白表达、降低凋亡抑制蛋白表达有关。     

黄连素对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响机制

目的探讨黄连素对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响机制。方法 MTT法检测各浓度黄连素作用后人结肠癌细胞KM12C、KM12SM、KM12L4A的抑制情况,20μg/ml黄连素作用于KM12L4A后24、48、72 h后细胞抑制情况;流式细胞仪检测20μg/ml黄连素作用于KM12L4A后48 h细胞凋亡情况;Western blot检测KM12L4A中Caspase-3、Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达情况。结果 KM12C、KM12SM、KM12L4A抑制率随着黄连素作用浓度的增加而增加,黄连素作用48 h与24 h细胞抑制率差异显著,72 h与48 h差异显著;与对照组相比细胞凋亡率明显增多,细胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达量明显下降,Caspase-3蛋白表达量明显增加。结论黄连素可抑制人结肠癌细胞的增殖分化,促进癌细胞凋亡,促凋亡机制与Bcl-2和Caspase级联反应有关。     

苦参碱对体外诱导人结肠HT29细胞凋亡作用的实验研究

[目的]研究苦参碱（matrine,MA）对体外诱导人结肠癌HT29细胞的凋亡作用及其机制。[方法]不同浓度MA（0-32mg／m1）作用HT29细胞24h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,线粒体跨膜电位检测试剂盒（3C-1）检测线粒体膜电位（Apm）变化,分光光度法检测caspase-3,9酶活性,Westernblot法检测线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl-2表达。[结果]MA显著诱导HT29细胞凋亡;16mg／mlMA作用HT29细胞24h后,caspase-9,-3酶活性明显升高;Westernblot结果显示：MA处理组促凋亡蛋白Pax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bcl2表达明显降低。[结论]MA具有促进结肠癌细胞凋亡的作用,且具有剂量依赖性,其机制与线粒体凋亡途径有关。     

藤黄酸对非小细胞肺癌凋亡迁移及p53、Bax、Bik、Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨藤黄酸对非小细胞肺癌凋亡迁移及p53、Bax、Bik、Bcl-2蛋白表达的影响。方法培养非小细胞肺癌细胞A549,加入终浓度为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0μmol/ml的藤黄酸处理细胞24、48、72 h,CCK8检测藤黄酸对细胞增殖的影响;2.5、5.0、10.0μmol/ml的藤黄酸处理细胞24 h,Transwell试验检测细胞迁移;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测蛋白的表达。结果随着时间和浓度的增加,2.5、5.0、10.0μmol/ml藤黄酸对A549抑制率显著高于对照组(P0.01);处理A549 24 h后,随着浓度的增加,细胞迁移数降低,凋亡率上升,细胞中p53、Bax、Bik蛋白表达量显著高于对照组(P0.01),Bcl-2表达量显著低于对照组(P0.01)。结论藤黄酸能抑制A549增殖,降低细胞迁移,促进细胞的凋亡,上调Bax、Bik的蛋白表达,下调Bcl-2的蛋白表达,其机制可能与p53信号通路的调控有关。     

谷氨酰胺体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞线粒体途径凋亡作用的研究

目的探讨谷氨酰胺对小鼠NCM460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法对数生长期NCM460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO_2培养箱培养24 h后,收集各组细胞,采用Western blotting检测各组细胞Bcl2、Bax及Cyt-c蛋白的表达量,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果 Western blotting检测脂多糖组细胞中Bax、Cyt-c蛋白的表达均明显升高(P均0.05),Bcl-2蛋白的表达较正常组低,Bcl-2/Bax值较正常组下降;而谷氨酰胺组肠组织中Bax、Cyt-c蛋白的表达均弱于脂多糖组(P均0.05),Bcl-2蛋白的表达较脂多糖组高(P0.05),Bcl-2/Bax值较脂多糖组升高。流式细胞仪检测三组细胞的凋亡率,显示脂多糖组细胞出现大量凋亡,其早期凋亡率及晚期凋亡率均明显高于正常组,差异有统计学意义(P0.05);谷氨酰胺组细胞的凋亡较脂多糖组减轻,其早期凋亡率及晚期凋亡率均低于脂多糖组,差异有统计学意义(P0.05)。结论谷氨酰胺能体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞凋亡,可能是通过抑制NCM460细胞线粒体凋亡途径来实现其保护作用。