miR-148a促进人诱导性多能干细胞向心肌样细胞的分化

文题释义：人诱导性多能干细胞来源的心肌样细胞：在体外直接将人诱导性多能干细胞定向诱导分化为心肌样细胞具有供者个体基因的特异性,不仅可以进行发病机制的深入研究,还可以进行个体化药物治疗测试,为精准个性化治疗带来希望。来自于患者自身体细胞的心肌细胞扩增速度快,没有免疫排斥和伦理问题,但目前的主要问题是来自于人诱导性多能干细胞的心肌样细胞成熟程度不佳,分化的细胞不具备成人心肌细胞的电生理活动,且纯化有一定困难。 微小RNA的调节作用：微小RNA是一类内源性的非编码单链RNA,通常含有19-22个核苷酸,可通过靶向结合mRNA而使其降解或抑制其翻译,发挥对靶基因的转录后调控作用。近年来,基于芯片分析技术发现有多个miRNA在心肌分化发育或干细胞向心肌样细胞定向分化过程中发挥调控作用,有正向调控也有负向调控。 背景：研究发现,miR-148a可以促进人骨髓间充质干细胞定向分化为成熟心肌样细胞,但关于miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响则未见报道。 目的：探讨miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响。 方法：将人诱导性多能干细胞分为3组向心肌样细胞诱导分化,对照组细胞不做处理,低表达组细胞用miR-148a抑制物处理28 d,高表达组细胞用miR-148a模拟物处理28 d;另取常规培养28 d的人诱导性多能干细胞为空白对照组。CCK-8检测细胞增殖活力,qRT-PCR检测miR-148a mRNA的表达,免疫荧光染色和Western blot检测MHC和cTnT蛋白的表达。 结果与结论：①低表达组细胞内miR-148a mRNA表达、细胞增殖活力低于空白对照组和对照组,高表达组高于其他3组(P < 0.01);②空白对照组无MHC和cTnT的阳性表达,对照组、低表达组和高表达组均有MHC和cTnT的阳性表达;③低表达组细胞MHC和cTnT蛋白表达低于对照组,高表达组高于其他3组(P < 0.01);④以上结果提示,miR-148a可促进人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化。 ORCID: 0000-0003-1698-4393(毛庆) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

建立并鉴定一种基于人诱导多能干细胞的肝脏细胞定向分化实验方案北大核心

背景:人诱导多能干细胞是一种与胚胎干细胞特性高度类似的多能干细胞类型,具备三胚层分化潜能和持续自我更新能力。将人诱导多能干细胞定向分化成具备功能的肝脏细胞对临床肝脏替代治疗意义重大。目的:建立一种高效的基于人诱导多能干细胞的肝脏细胞定向分化实验方案。方法:利用明场显微镜、免疫荧光对人诱导多能干细胞特性进行鉴定。通过转录因子重组蛋白手段时序性调控不同信号通路,即在第0,5,10,15天顺序加入激活素A、成纤维细胞生长因子4/骨形态发生蛋白4、肝细胞生长因子、肿瘤抑制因子M,使多能干细胞经历终末内皮层、肝内胚层、肝母细胞(肝脏前体细胞)最终分化成为有功能的肝脏细胞。利用明场显微镜、实时定量PCR(qPCR)、ELISA动态观察不同阶段形态特征和分子标记物。结果与结论:①所使用的人诱导多能干细胞具备经典的诱导多能干细胞形态特征并且高表达诱导多能干细胞特异标记蛋白(SSEA4、SOX2、OCT4);②人诱导多能干细胞发生了终末内胚层、幼稚肝细胞、肝脏细胞不同阶段形态转变;③qPCR结果显示,随着肝细胞分化进展,诱导多能干细胞特异标记物(OCT4)显著下调,终末内胚层(GCS、CXCR4)和肝脏内胚层标记物(HNF4α、HNF1β)则呈现先升高再下调趋势,而肝脏细胞标记物(CYP34A、ALB)则呈现出逐渐递增趋势;④ELISA结果进一步显示,诱导15 d以后的肝脏细胞开始具备肝特异蛋白(白蛋白、尿素)分泌功能,并且随着时间延长其分泌功能进一步增加;⑤上述结果提示,成功建立人诱导多能干细胞向肝脏细胞定向分化的实验方案,为未来临床肝脏细胞替代治疗提供实验基础。     

骨髓间充质干细胞及其向肝样细胞分化的潜能

背景：研究表明,在一定条件下骨髓间充质干细胞可诱导分化为肝样细胞,为治疗急性肝衰竭等终末期肝病提供了新的思路。 目的：对骨髓间充质干细胞的发现、分离培养、诱导分化及应用前景等方面做一综述。 方法：计算机检索中国期刊网全文数据库以及PubMed数据库1999至2014年期间有关骨髓间充质干细胞及其向肝样细胞分化的文章。检索词分别为“肝样细胞,骨髓间充质干细胞,细胞分化”和“hepatocyte-like cells,bone marrow mesenchymal stem cells,differentiation”。最后选择52篇文章纳入结果分析。 结果与结论：目前,肝组织工程的首要问题是寻找性状稳定具有肝特异性功能的种子细胞,成熟肝细胞获取难度较大,并具有产生免疫排斥反应、体外培养困难等缺陷,严重限制了肝移植的开展。骨髓间充质干细胞具有多向分化、自我更新快、易于扩增及培养等优点,被认为是最有前途的细胞来源。已有研究表明骨髓间充质干细胞在体内外均可分化为肝细胞,并具有肝细胞的合成和分泌功能。但如何大量扩增此类细胞的同时又能保持其良好的分化潜能、体外培养的最佳条件、诱导分化机制和临床应用的安全性等尚需进一步研究和探讨。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

骨髓间充质干细胞向肝样细胞的诱导及分化

背景：研究表明,在体外提供肝细胞及成纤维细胞生长因子等多种因子可诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化,但对其诱导的最佳环境还处于摸索阶段。 目的：观察体外应用肝细胞生长因子和成纤维生长因子4等多种因子联合诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞的分化能力。 方法：采用全骨髓贴壁培养法分离、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,培养第3代时用肝细胞生长因子、成纤维生长因子4、胰岛素铁硒传递蛋白及地塞米松等联合诱导其向肝样细胞的分化。于诱导7,14,21 d后观察细胞形态变化,RT-PCR检测细胞白蛋白、甲胎蛋白、细胞角蛋白的mRNA表达;于诱导14,21 d行PAS糖原染色检测,并采用免疫细胞荧光法检测细胞白蛋白表达。 结果与结论：随着诱导时间的延长,骨髓间充质干细胞表现为肝细胞样,并呈集落生长,肝细胞特异性标志物逐渐出现和成熟。细胞诱导至7 d出现甲胎蛋白mRNA表达,14 d表达增高,21 d时表达下降;14 d时细胞角蛋白18、白蛋白 mRNA和糖原出现表达,并随时间延长表达逐渐增加。细胞诱导14 d时,胞浆白蛋白出现表达,至21 d时表达增强。证实骨髓间充质干细胞在肝细胞生长因子、成纤维生长因子4等多种因子诱导作用下,具有强大的向肝细胞分化能力。     

人脂肪干细胞来源外泌体对四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠的治疗作用

文题释义： 脂肪干细胞：是指从脂肪组织中分离得到的一种间充质干细胞,不但具有跨胚层多向分化潜能,在不同培养条件下可以分化成肌肉、软骨、脂肪组织、神经组织或肝脏组织,而且具备取材方便、来源广阔、增殖能力强、免疫原性低等优点,近年来成为干细胞治疗的热点。 外泌体：是一种细胞主动分泌的大小均一、直径为50-150 nm的脂质双分子层结构囊泡,可由树突细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、间充质干细胞和肿瘤细胞等多种不同细胞类型释放。 背景：肝纤维化具有较高的发病率和死亡率,肝星状细胞的活化和增殖是肝纤维化进程中的关键环节。目前还没有针对单一环节或靶点的有效抗纤维化药物。 目的：分析人脂肪干细胞来源外泌体对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的影响。 方法：①通过酶溶解法获取健康人群来源脂肪中干细胞,体外培养获取一定数量细胞后通过多重超滤法获取外泌体。体外培养的肝星状细胞经转化生长因子β1活化后利用不同浓度外泌体进行处理,通过定量PCR检测细胞内α-平滑肌动蛋白的表达明确其活化程度,以及分别使用CCK-8及流式细胞术检测各组外泌体处理后活化肝星状细胞的生长率及凋亡率。②通过腹腔注射四氯化碳构建肝纤维化大鼠动物模型,尾静脉注射外泌体进行治疗。检测各组动物的肝功能及血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原,肝组织Ishak评分及肝纤维化半定量,以及通过免疫荧光法检测肝组织内基质金属蛋白酶组织抑制剂1、基质金属蛋白酶9及α-平滑肌动蛋白的表达。实验方案于2017年1月经同济大学动物实验伦理委员会以及医学伦理学委员会批准。 结果与结论：人脂肪干细胞来源外泌体可抑制活化的肝星状细胞增殖,其可能的机制为抑制活化巨噬细胞的增殖,减少胶原纤维、α-平滑肌动蛋白及基质金属蛋白酶组织抑制剂1的表达,并促进基质金属蛋白酶9的表达。提示外泌体可治疗四氯化碳诱导肝纤维化。 orcid: 0000-0002-7141-8135 (Li Hongchao) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

成人骨髓来源的多系分化持续应激细胞的培养及鉴定

目的:建立一套简便可靠的多系分化持续应激细胞(Muse)体外分离、培养和鉴定体系。方法:利用密度梯度离心法从健康成人骨髓中分离出人骨髓基质干细胞(hBMSCs),流式细胞仪对其进行鉴定;应用长时间胰酶应激法从hBMSCs中分离出Muse细胞;免疫荧光细胞化学法对其进行鉴定,并检测其多能干细胞特性及向三胚层分化的能力。结果:hBMSCs呈CD45~-/CD11b~-/CD90~+;长时间胰酶应激法成功分离出Muse细胞,悬浮呈球状生长;Muse细胞表达SSEA3~+/CD105~+,Nanog、Oct4、Sox2等多能干细胞标记物表达阳性,贴壁分化后表达三胚层标记物α-SMA、AFP和NF-M。结论:从成人骨髓中成功分离Muse细胞,Muse细胞具有多能干细胞特性及向三胚层分化的能力。     

成人骨髓多能成体祖细胞生物学性状及向成软骨样细胞的诱导分化

背景：骨髓多能成体祖细胞具有比骨髓间充质干细胞更强的分化潜能和扩增能力并具有胚胎干细胞样的多向分化潜能,但分化为成软骨样细胞的研究目前少见报道。 目的：观察成人骨髓成体多能祖细胞的体外培养条件、生物学特性及其向成软骨样细胞分化的可能性。 方法：观察体外培养成人骨髓成体多能祖细胞的形态、生长情况,并鉴定;以分化培养基诱导成人骨髓成体多能祖细胞向无软骨细胞分化。 结果与结论：光学显微镜下观察培养的成人骨髓多能成体祖细胞体积偏大,长多角型,数个细长伪足,细胞核大,细胞质丰富,细胞增殖能力旺盛;可见转录因子4、阶段特异性胚胎表面抗原1表达,未见T细胞表面黏附分子CD44,CD45,CD133和主要组织相容性抗原系统Ⅱ的表达;诱导分化后,分化细胞经甲苯胺蓝染色后呈异染性,可表达Ⅱ型胶原。证实,实验成功体外培养了成人骨髓多能成体祖细胞,骨髓多能成体祖细胞在一定诱导条件下具有向成软骨样细胞分化的潜能。     

诱导间充质干细胞向心肌样细胞的分化*

背景：目前很多体内外实验都已表明间充质干细胞具有向心肌样细胞或心肌细胞分化的能力,这使间充质干细胞治疗心脏疾病成为可能。 目的：比较诱导间充质干细胞向心肌样细胞分化实验方法的异同及存在的问题。 方法：以“mesenchymal stem cells,cardiomyocyte, differentiation;间充质干细胞,心肌细胞,诱导;分化”为检索词,应用计算机检索2000-12/2010-12 PubMed 数据库与万方数据库,与间充质干细胞诱导分化为心肌细胞相关的文章。 结果与结论：间充质干细胞向心肌细胞分化的方法主要有：①心肌细胞条件培养液：间充质干细胞在体外经药物诱导或模拟体内心肌微环境能定向诱导分化为心肌样细胞。②与希望诱导成的目的细胞共同培养：间充质干细胞可经药物诱导诱导分化为心肌细胞,也可不经任何诱导在心肌微环境中分化为心肌细胞。虽然间充质干细胞在体外心脏病理条件下可分化为心肌细胞,使间充质干细胞治疗心脏疾病成为可能,但其研究有待进一步完善。关键词：诱导;分化;间充质干细胞;心肌样细胞;干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.035     

人诱导性多潜能干细胞系的建立

背景：诱导性多潜能干细胞与肿瘤干细胞的发生过程极其相似,而且具有的干细胞特性极其接近人胚胎干细胞。因此,研究诱导性多潜能干细胞有利于人们进一步认识并了解人类发育以及肿瘤的发生过程。 目的：掌握建立人诱导性多潜能干细胞系的技术,以便为特异性疾病细胞的重编程建立技术平台,从而利用重编程技术研究疾病的发病机制。 方法：将含有Oct4、Sox2、Klf-4和c-Myc 4个转录因子的反转录病毒感染人皮肤成纤维细胞(HS27细胞),在人胚胎干细胞培养条件下诱导产生人胚胎干细胞样的克隆。挑取并进一步扩增,通过克隆形态、碱性磷酸酶活性、免疫荧光检测是否有人胚胎干细胞标记物Oct4、Sox2、c-Myc、Klf-4的表达,悬滴法检测HS27细胞来源的克隆形成畸胎瘤的能力和验证向3个胚层的分化能力。 结果与结论：经病毒感染诱导产生的胚胎干细胞样克隆呈绿色荧光蛋白阴性,克隆在细胞形态方面与人胚胎干细胞克隆相似,进一步扩增经碱性磷酸酶检测克隆呈阳性,免疫荧光检测克隆表达Oct4、Sox2、c-Myc、Klf-4,并且HS27细胞来源的克隆注入免疫缺陷小鼠体内可以形成畸胎瘤并经苏木精-伊红染色显示具有向三胚层分化能力。实验成功构建了人诱导性多潜能干细胞系,为下一步开展疾病细胞特异性重编程研究奠定了良好的实验基础。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

无血清单层细胞诱导法培养猪诱导多能性干细胞定向分化为血管内皮细胞

背景:诱导多能性干细胞是一种新型的干细胞来源,具有多向分化潜能。猪作为人类心血管及代谢性疾病研究的良好模型,对其多能性细胞向血管内皮细胞定向分化体系的建立,将为创建心血管疾病模型提供保障。目的:建立一种无血清单层诱导分化方法,使猪诱导多能性干细胞定向分化为CD31阳性血管内皮细胞,并对获得的内皮细胞进行鉴定。方法:使用CHIR99021、骨形态发生蛋白4、碱性成纤维生长因子、血管内皮生长因子等对猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞进行单层细胞诱导分化,使干细胞经历3个分化阶段最终成为血管内皮细胞,检测并比较分化过程中2种干细胞的胚层标记基因的表达,对流式分选后获得的血管内皮细胞进行鉴定。结果与结论:①通过无血清单层细胞诱导法从猪诱导多能性干细胞定向诱导分化获得的内皮细胞具有与猪永生化主动脉血管内皮细胞类似的基因表达模式及生物学功能——能够吸收低密度脂蛋白并在Matrigel上形成微血管样结构;②该诱导体系下,猪诱导多能性干细胞的分化效率高于人胚胎干细胞的分化效率,这可能与诱导过程中2种细胞谱系基因表达模式上的差异相关。     

小鼠诱导型多潜能干细胞定向分化为功能性肝细胞

目的:探讨在体外诱导型多潜能干细胞(IPS)能否遵循正常肝脏发育途径定向分化为具备良好生理功能的肝细胞。方法:根据正常肝脏体内发育的规律,序贯应用肝脏发育所需的生长因子,设计特色培养基,诱导IPS细胞遵循正常发育途径定向高效分化为肝细胞:首先将IPS细胞定向分化为前层确定性内胚层细胞(ADE),再进一步分化为肝细胞。结果:在本研究中IPS细胞在体外可循正常发育通路定向诱导为肝细胞:先分化为前层内胚层细胞,再继续分化为肝细胞。分化的各时段实时定量RT-PCR检测显示:在mRNA表达的水平,IPS细胞经历了肝细胞在体内从胚胎干细胞的发育过程,内胚层细胞特异性RNA如CXCR4、Sox17和FOXA2在分化的早期明显升高,而早期肝细胞特异性RNA如HNF4和AFP在分化的中期开始升高,肝细胞成熟特异性RNA如白蛋白在分化的晚期才达高峰,同时IPS细胞的未分化标记RNA如OCT4在早期就明显下调。同mRNA表达一致,在分化的第20d,大部分的肝脏细胞表达甲胎蛋白和白蛋白(阳性率80%)。更为重要的是IPS来源肝细胞在体外具有典型成熟肝细胞的功能,能够摄取和释放靛青绿(ICG)并具有药物代谢酶细胞色素P450酶的活性。结论:IPS细胞在体外能够遵循正常肝脏发育通路,序贯表达肝脏发育各阶段的特色基因和蛋白,能够高效分化为有功能的肝细胞,本研究可能为临床终末期肝病进行细胞治疗提供肝细胞。     

骨髓间充质干细胞诱导分化为肝细胞的方法及机制研究与进展

BACKGROUND:A number of studies have shown that there are many inducible methods by which bone marrow mesenchymal stem cells can differentiate into hepatocytes, but the specific molecular mechanism is unclear yet. OBJECTIVE:To review the programs and underlying mechanisms by which bone marrow mesenchymal stem cells differentiate into hepatocytes. METHODS:A computer-based online search of CNKI, VIP, WanFang and PubMed databases was performed to retrieve articles about directional differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into hepatocytes published between 2004 and 2015. The key words were “hepatocyte (-like) cells, bone marrow mesenchymal stem cells, differentiation” in Chinese and English, respectively. Finally, 62 articles were included in result analysis. RESULTS AND CONCLUSION:There are many programs for hepatic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells, but the specific molecular mechanism is still unclear. Many studies mainly focus on Notch signaling pathway, Wnt/β-catenin signaling pathway, P38 signal pathway, miR-122 and effect of calcium ions. Bone marrow mesenchymal stem cells that can be induced to differentiate into mature hepatocytes provide an ideal cellular source for hepatocyte transplantation and artificial liver, which is proposed to be a new strategy for clinical treatment of end-stage liver disease.     

Enhanced Functions of Human Embryonic Stem Cell-derived Hepatocyte-like Cells on Three-dimensional Nanofibrillar Surfaces

Human embryonic stem cell (hESC)-derived hepatocytes provide a promising unlimited resource for the treatment of liver disease. However, current protocols for the generation of mature and functional hepatocytes are inefficient. Therefore, in order to better differentiate and maintain the function of differentiating hESCs, we have hypothesized that hESCs undergo better differentiation into hepatocyte-like cells (HLCs) when induced on three-dimensional nanofibrillar surfaces. We have demonstrated that, during stepwise differentiation of induction, the markers of hepatic lineage expressed and finally lead to the generation of functional mature cells. In the presence of an ultraweb nanofiber, HLCs produced lower AFP, greater urea, glycogen storage, metabolic PROD activity, uptake of LDL and organic anion ICG, all of which are indicative of the differentiation of HLCs. These results show that topographically treated hESCs at the nano level have a distinct hepatic functionality profile which has implications for cell therapies.     

人脐带间充质干细胞与肝细胞共培养可分化为肝样细胞

背景：文献报道,从骨髓与脐带中分离获得的间充质干细胞可在体外连续传代培养,仍保持干细胞的特性,并在多种细胞因子的“鸡尾酒式”诱导下分化为肝细胞样细胞。 目的：进一步验证人脐带间充质干细胞在体外正常人肝细胞共培养体系下是否可分化为肝细胞并探讨其分化方法。 方法：采用贴壁法,从脐带中分离培养间充质干细胞,流式细胞仪检测脐带间充质干细胞表面标志。人肝细胞LO2细胞与人脐带间充质干细胞建立共培养体系,不添加外源诱导因子,分别于第7,14,21天,通过RT-PCR 法检测肝细胞特异标志物甲胎蛋白、白蛋白、人细胞角蛋白19 mRNA的表达,糖原染色进行功能鉴定。 结果与结论：从人脐带中可分离得到贴壁生长的间充质干细胞,其中CD29⁺细胞比例为96.02%,CD105⁺细胞比例为96.6%,CD34^-细胞比例为99.65%,CD105⁺CD29⁺双阳性细胞比例为94.84%。与LO2细胞共培养后第7天仅有甲胎蛋白阳性表达;第14天表达白蛋白、人细胞角蛋白19,第21天时,LO2与人脐带间充质干细胞共培养组未出现甲胎蛋白表达;人细胞角蛋白19和白蛋白的表达比第14天略有增强。共培养21 d后,糖原染色呈阳性。结果证实,无需额外添加外源诱导因子,脐带间充质干细胞可在人正常肝细胞共培养的微环境中,向正常肝细胞分化。     

诱导性多能干细胞与心血管疾病

BACKGROUND:Induced pluripotent stem cells have great prospects in tissue repair, due to the characteristic of self-renewal, multi-directional differentiation, no immunological rejection and ethics controversy. OBJECTIVE:To summarize the differentiation of induced pluripotent stem cells towards cardiomyocytes and endothelial cells, and their applications in the cardiovascular diseases. METHODS:The first author performed a data retrieval of PubMed and CNKI databases from 2000 to 2015 to search articles addressing the differentiation of induced pluripotent stem cells towards cardiomyocytes and endothelial cells, and reviewed the literatures systematically. Finally, 78 articles were chosen for further analysis. RESULTS AND CONCLUSION:Induced pluripotent stem cells can differentiate into cardiovascular cells through a variety of methods. Factors such as cyclosporin A and ascorbic acid C may improve myocardial differentiation of induced pluripotent stem cells, while vascular endothelial growth factor and basic fibroblast growth factor may improve the endothelial differentiation of induced pluripotent stem cells. Cardiovascular cells derived from induced pluripotent stem cells can be applied to build disease models in vitro, transplantation in vivo and drug screening.     

诱导多功能干细胞治疗脊髓损伤的现状及思考

背景：目前对脊髓损伤的治疗方法有激素冲击治疗,急诊手术减压及最新发展的干细胞治疗等方法。已有大量工作聚焦于干细胞治疗脊髓损伤的研究方面,并已成为热点。 目的：综述诱导多功能干细胞治疗脊髓损伤的相关研究现状及未来发展趋势。 方法：应用计算机检索PubMed 数据库1980年1月至2012年12 月期间的相关文章,检索关键词为“spine injury,induced pluripotent stem cells,IPS”。 结果与结论：共纳入35篇文章,均就诱导多能干细胞治疗脊髓损伤持赞同或支持态度。结果表明,诱导多功能干细胞直接来源于自体分离得到,解决了干细胞移植中伦理以及道德等问题,同时避免了异体排斥反应也为移植提供了大量的细胞来源。对于脊髓损伤的治疗方面目前只有动物实验及少量临床实验支持,但其在动物实验中效果良好,安全性较高。诱导多功能干细胞治疗脊髓损伤现存的问题主要是诱导多功能干细胞的诱导分化方法不成熟,并发症也较多。因此,诱导多功能干细胞的诱导分化及使用安全性将成为研究关键。     

干细胞诱导分化为肝细胞的鉴定方法

背景：目前关于干细胞体外诱导分化为肝细胞的各种方法较多,需要总结一套具有说服力的鉴定方法去验证。 目的：总结干细胞经诱导分化为肝细胞鉴定方法的研究进展,使之更安全的应用。 方法：应用计算机检索西方生物医学期刊及PubMed数据库1985-01/2010-06有关干细胞分离、培养及诱导分化为肝细胞的文章,检索词为“stem cells,induced,differentiation,hepatocytes,identification”等;同时检索中国期刊全文数据库2000-01/2010-06有关干细胞分离、培养诱导分化为肝细胞的文章,检索词为“干细胞,诱导,分化,肝细胞,鉴定”。共检索到文献43篇。 结果与结论：干细胞具有可塑性特性,通过体外刺激因子、体内利用特定的微环境均可诱导干细胞分化为肝前体细胞和成熟肝细胞,理论上可提供丰富的肝细胞来源,为人们提供种子细胞,可以进行实验研究、临床应用。但是经诱导后的细胞是否为所预期的种子细胞需要一套科学的、系统的检测方法,根据肝细胞的诸多特性,如表面标志、合成、代谢功能可以证明。     

诱导多能干细胞建系及体外造血祖细胞定向分化体系的建立

背景：目前,大量文献报道了诱导多能性干细胞系的建立,但大规模体外诱导分化造血祖细胞的研究还缺乏深入的探讨。 目的：建立诱导多能性干细胞体外定向诱导形成造血祖细胞的方法。 方法：采用慢病毒感染的方法将含有Oct4、Sox2、Nanog和Lin28全能性基因的慢病毒颗粒转导人皮肤成纤维细胞,获得了诱导多能性干细胞;在诱导分化体系中添加了Y-27632,克服干细胞扩增中的凋亡现象;运用OP9细胞产生的条件培养液建立诱导多能性干细胞体外定向分化形成造血祖细胞的分化体系。 结果与结论：①前3代细胞克隆传代时,诱导多能性干细胞发生凋亡的现象很多,很难大规模扩增培养。培养基中添加阻断ROCK活化的抑制剂,能够明显抑制胚胎干细胞的凋亡。②诱导多能性干细胞在OP9细胞条件培养液作用下,经过体外诱导分化,形成CD34+造血祖细胞。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Muse cells,newly found non‐tumorigenic pluripotent stem cells,reside in human mesenchymal tissues

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been presumed to include a subpopulation of pluripotent‐like cells as they differentiate not only into the same mesodermal‐lineage cells but also into ectodermal‐ and endodermal‐lineage cells and exert tissue regenerative effects in a wide variety of tissues. A novel type of pluripotent stem cell, Multilineage‐differentiating stress enduring (Muse) cells, was recently discovered in mesenchymal tissues such as the bone marrow, adipose tissue, dermis and connective tissue of organs, as well as in cultured fibroblasts and bone marrow‐MSCs. Muse cells are able to differentiate into all three germ layers from a single cell and to self‐renew, and yet exhibit non‐tumorigenic and low telomerase activities. They can migrate to and target damaged sites in vivo, spontaneously differentiate into cells compatible with the targeted tissue, and contribute to tissue repair. Thus, Muse cells may account for the wide variety of differentiation abilities and tissue repair effects that have been observed in MSCs. Muse cells are unique in that they are pluripotent stem cells that belong in the living body, and are thus assumed to play an important role in ‘regenerative homeostasis’ in vivo.