单克隆重抗体与血卟啉衍生物交联物抗胃癌作用的实验研究

为了提高血卟啉衍生物HPD的光敏效应,减低副作用,将其与抗胃癌McAb3G9和3H11交联.体外实验中,3G9～HPD交联物+照光比单用HPD对胃癌细胞株BGC823的细胞毒效应提高17倍,3H11-HPD交联物提高8.6倍.将两种交联物进行不同比例组合,组合后的杀伤效应未见进一步增高.两种交联物对荷瘤裸鼠的抑瘤效应明显高于各对照组,并且能显著延长荷瘤小鼠的生存期.表明McAb对HPD有导向作用.     

抗人胸腺细胞球蛋白与柔红霉素交联方法及其偶联物体外抗肿瘤作用

分别用12.5％、25.0％、50.0％、75.0％和100.0％氧化的Dex T_(10)作为交联剂交联抗人胸腺细胞球蛋白(AHTG)和柔红霉素(DNR)形成免疫偶联物(AHTG-Dex-DNR),其中以25.0％氧化的DexT10作为交联剂最佳。它既提高了偶联物的交联度,又降低了硼氢化钠对AH-TG和DNR活性的损伤。偶联物对靶细胞CEM 24h细胞毒试验LD_(50)为10.68μg/ml。对非靶细胞K562仅有轻微杀伤作用,10min细胞毒试验为特异的杀灭肿瘤细胞试验,对CEM的LD_(50)为14.79μg/ml,对K562几乎无细胞毒作用,表明免疫偶联物有特异性细胞毒作用。     

HPD对人胃癌细胞不同周期时相的光敏杀伤效应观察

体外培养的人胃癌细胞于高压N_2O下培养及过量TdR的阻断与释放,分刖制备出同步的G_1、s、G_2、M期细胞。观察各期细胞对HPD的摄取和杀伤效应关系。表明不同周期时相的细胞对HPD的摄取和杀伤效应呈正相关,S期细胞对HPD的摄取量最高,杀伤作用最强,M期细胞对HPD的摄取量最低,杀伤作用最弱。此外,还研究了Hu、Fu—o—G与HPD联合应用的协同杀伤作用,其杀伤率均高于单纯加药组与单纯HPD加光照组。     

胃癌单克隆抗体-蓖麻毒素A链结合物的制备及其对肿瘤靶细胞的杀伤作用

作者报道胃癌McAb MGb_2(本室制备)与蓖麻毒素A链(RTA)交联物的制备。交联物对胃癌细胞具有强大的选择性杀伤怍用,胃癌McAbMGb_2对RAT具有导向能力。     

中华眼镜蛇膜毒素与McAb偶联物对白血病细胞的杀伤作用

用中华眼镜蛇膜毒素(CT)与抗人T细胞McAb Wu71偶联制备免疫毒素Wu71:CT。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫双扩散和间接免疫荧光检测,证实结合物中McAb和CT均保持活性。在无Ca~(2+)、Mg~(2+)的培养基中将人白血病T淋巴细胞系CEM细胞与Wu71:CT共同孵育,先加入Ca~(2+)以抑制CT的溶细胞作用,而不影响McAb与靶细胞的结合;一定时间后用Mg~(2+)和金属螯合剂EGTA恢复CT的溶胞作用,结果在Wu71:CT 0.5×10~(-6)mol/L浓度下靶细胞CEM 82.4％被杀伤,而抗原阴性的非靶细胞Raji仅死亡23.3％,表明Wu71:CT有较好的特异性杀伤作用。扫描电镜显示,免疫毒素作用下的CEM细胞膜破裂、萎缩、崩溃,而非靶细胞大部分保持完整。提示McAb与CT偶合物在白血病和肿瘤的导向治疗中可能具有潜在价值。     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体导向药物的选择性细胞毒作用

采用DextranT-40桥联法将抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ-39与抗肿瘤药物阿霉素进行化学交联,制备成免疫交联物。SZ-39单抗和阿霉素的摩尔结合比为1:48。~3H-TdR掺入细胞毒性试验表明,免疫交联物对靶细胞SHG-44的细胞毒作用显著优于游离药物、游离抗体及药物和抗体的混合物。其半数抑制剂量IC_(50)为1.75×10~(-8)mol/L。免疫交联物对非靶细胞SP_2/O的细胞毒作用不及游离药物。实验显示免疫交联物有良好的靶选择性细胞毒作用。     

光动力疗法中不同激光条件癌肿杀伤效果的比较

本文报告应用两种不同波长激光为 PDT(光动疗法)的激光源,对小鼠移植肿瘤进行杀伤实验。结果表明:在相同光剂量下,HPD—氩离子泵浦的染料激光(波长6 300(?))对肿瘤杀伤的效果强于 HPD—氩离子激光(波长5 145(?))(P<0.01);同一波长激光在光剂量相同时,采用不同的瞬间功率,对肿瘤杀伤的效果相同(P>0.20)。     

不同肿瘤细胞系对HPD的摄取及光敏杀伤效应的观察

由于血卟啉衍生物(HPD)能选择性地蓄积在癌细胞内,当被光激活后具有杀伤肿瘤的性能,而起到治疗作用。本实验采用荧光分光光度法研究了3株人癌细胞系在相同剂量和相同药物作用时间摄取HPD的情况,以及对HPD加红光照射后的光敏杀伤效应。材料和方法1.细胞:体外培养的人胃低分化粘液腺癌细胞系MGc 80-3,人鼻咽癌细胞系CNF     

血卟啉-红光照射对人肝癌细胞和横纹肌肉瘤细胞的杀伤效应观察

本文报道用细胞培养方法观察HPD和普通宽谱红光照射对人肝癌细胞及横纹肌肉瘤细胞的杀伤效应,结果表明,HPD和红光照射对两株细胞均有明显的杀伤作用,与对照组比较相差显著(P<0.05)而两种不同组织起源的恶性肿瘤细胞的光敏杀伤效应无明显差异(P>0.05),在不同浓度的HPD组,其杀伤效应无明显差异(P>0.05)。实验组细胞内DNA,RNA较对照组数量减少,分布不均,初步表明,光敏治癌的机制可能与光敏作用致使细胞内代谢紊乱,进而抑制了瘤细胞的DNA、RNA合成有关。     

柔红霉素-抗胃癌单克隆抗体结合物的制备及其对肿瘤细胞的杀伤作用

作者将胃癌McAb MG11与柔红霉素交联,提高其对肿瘤细胞的选择性,从而改变柔红霉素体内的自然分布状态。经体外初步观察,制成的交联物对胃癌细胞具有较强的选择性杀伤作用。 首先用等量的乌头酸酐处理柔红霉素得到柔红霉素衍生物,通过酸沉淀法将柔红霉素衍生物     

The specific photodynamic effect of monoclonal antibodies conjugated with hematoporphyrin derivative on gastric cancer in vitro and in vivo

A murine monoclonal antibody (MoAb) BB4.3 raised against human gastric cancer cell line BGC823 was purified with Protein A-Sepharose CL-4B affinity chromatography and identified as IgG2a. The MoAb BB 4.3 was conjugated with hematoporphyrin derivative (HPD) by using carbodiimide. The conjugate HPD-BB4.3 retained both antibody activity and photochemical activity of HPD. In vitro the phototoxic effect of HPD-BB4.3 conjugate on target cells was about 15 times higher than that of free HPD. The target-selective photocytotoxicity of HPD-BB 4.3 was verified by the fact that this conjugate showed greater cytotoxicity than the corresponding normal mouse IgG (NIgG) conjugated with HPD, and that it showed less cytotoxicity to BB4.3 negative reaction cell line B-80 than to BGC 823; and moreover, its cytotoxicity to BGC823 cells could be blocked specifically by excess BB4.3 antibody. In an in vivo study, nude mice inoculated with 2 X 10(5) BGC823 cells were administered HPD-BB4.3, HPD, HPD-NIgG, HPD plus BB4.3 and PBS respectively; and were then exposed to light. Out of six animals treated with HPD-BB4.3 conjugate, four remained tumor-free for a long time. There was significant difference between HPD-BB 4.3 treated group and all control groups. The HPD-BB4.3 conjugate was also shown more than 40% inhibition of growth of established tumors in comparison with the control groups.     

血卟啉衍生物脂质体瘤内注射给药在荷瘤鼠体组织中的药物分布

的：研究血卟啉衍生物不同剂型及不同给药方法对血卟啉衍生物在肿瘤及各种组织中分布的影响。方法：采用反相蒸发法制备大单层血卟啉衍生物脂质体,经荷瘤小鼠瘤体内给药,结合对照,不同时间,血、肝、脾、肿瘤及皮肤组织采样,荧光法测定各种组织中血卟啉衍生物（HPD）的浓度。结果：脂质体药物包裹率为52.6% ,72 h内药物渗漏率小于7.6％。两种剂型、两种方式给药后各个时间段的瘤体内药物浓度,L-HPD i.t.组明显高于L-HPD i.p.组和HPD i.t.组,皮肤中HPD浓度则明显降低;此结果在给药12～24 h内,L-HPD和游离HPD瘤内给药比较时更为明显。结论：与L-HPD i.p.和HPD i.t.比较,L-HPD经i.t.给药可显著提高肿瘤组织内HPD浓度,同时降低了皮肤中HPD含量。     

维持性血液透析患者血清和透析液对脂肪细胞凋亡的影响

目的观察维持性血液透析（HD）患者血清及其与常规透析液（CD）或高纯透析液（HPD）联合干预对脂肪细胞凋亡的影响。方法采集20例HD患者（CD和HPD治疗各10例）血样并分离血清,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。分别以HD患者血清（HDPS组）、HD患者血清联合CD（HDPS＋CD组）和HD患者血清联合HPD（HDPS＋HPD组）对经体外诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞进行干预,48 h后收集细胞。Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞形态学改变;Annexin-V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡。PCR检测CD和HPD中细菌DNA片段表达。结果 ELISA法检测结果显示,与HPD治疗HD患者比较,CD治疗HD患者血清TNF-α水平显著升高（P〈0.05）。在HDPS组和HDPS＋CD组,荧光显微镜观察可见呈典型凋亡形态学改变的细胞增多,两组细胞凋亡率均显著高于HDPS＋HPD组（P〈0.05）。PCR检测显示,CD和HPD中细菌DNA表达分别为902.79±60.57和454.87±32.22,两者差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 HDPS可诱导3T3-L1脂肪细胞凋亡,可能与患者血清TNF-α水平升高有关。与HD患者血清联合CD干预比较,联合HPD干预诱导的脂肪细胞凋亡率较低且HPD中细菌DNA表达较少。     

维持性血液透析患者血清和透析液对脂肪细胞凋亡的影响

目的 观察维持性血液透析（HD）患者血清及其与常规透析液（CD）或高纯透析液（HPD）联合干预对脂肪细胞凋亡的影响。方法 采集20例HD患者（CD和HPD治疗各10例）血样并分离血清,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α) 水平。分别以HD患者血清（HDPS组）、HD患者血清联合CD（HDPS+CD组）和HD患者血清联合HPD（HDPS+ HPD组）对经体外诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞进行干预,48 h后收集细胞。Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞形态学改变;Annexin-V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡。PCR检测CD和HPD中细菌DNA片段表达。结果 ELISA法检测结果显示,与HPD治疗HD患者比较,CD治疗HD患者血清TNFα水平显著升高（P<0.05）。在HDPS组和HDPS+CD组,荧光显微镜观察可见呈典型凋亡形态学改变的细胞增多,两组细胞凋亡率均显著高于HDPS+HPD组（P<0.05）。PCR检测显示,CD和HPD中细菌DNA表达分别为902.79±60.57和454.87±32.22,两者差异有统计学意义（P<0.05）。结论 HDPS可诱导3T3-L1脂肪细胞凋亡,可能与患者血清TNF-α水平升高有关。与HD患者血清联合CD干预比较,联合HPD干预诱导的脂肪细胞凋亡率较低且HPD中细菌DNA表达较少。     

血卟啉衍生物的电子光谱研究

为了解血卟啉衍生物(HPD)荧光敏化诊治癌症的光动力学机制,本工作对HPD的电子光谱进行了初步的研究。讨论了HPD荧光随着环境条件变化的规律,并用发光理论分析了Hp值。溶剂的极性,HPD的浓度对其发射光谱的影响。归纳整理了其实验规律并进行了定性的解释。     

国产乙酰血卟啉和血卟啉二钠盐在体内外吸收和分布的研究

作者对国产AHP、HPD在体内外的吸收及分布进行了研究。观察到正常肝、肾,恶性肿瘤细胞均能吸收AHP、及HPD。将AHP、HPD分别注入小鼠体内后,进行6～216小时动态观察,以生化方法测其含量,最高吸收峰在6～12小时,以肝脏及恶性肿瘤含量最高,恶性肿瘤组织储留可达216小时。     

单克隆抗体与链黑菌素偶联物的抗肝癌BEL-7402细胞活性

采用活化酯法制备链黑菌素与抗人肝癌单克隆抗体(McAb)3A5的免疫偶联物,该偶联物兼有二者的生物活性和紫外吸收特征。抗体与链黑菌素偶联分子比为1:2～6,蛋白回收率为76％,链黑菌素保留原活性的12.5％,抗体活性基本上完全保持。但随着药物分子偶联数目的增加,抗体活性减小。偶联物在体外细胞克隆生成试验中,对肝癌BEL-7402细胞的抑制作用为游离链黑菌素的63倍,而对与抗原性无关的人咽上皮癌KB细胞的作用则较游离的链黑菌素弱11倍。以上结果表明,该免疫偶联物对靶细胞显示选择性杀伤作用。     

超声激活血卟啉杀伤肿瘤细胞的定量测定

线粒体是细胞的能量供应站，MTT（溴化-3-（4．5－二甲基-2-噻唑基）－2．5-二苯基四氮唑）试剂可以定性并定量测定细胞线粒体中呼吸链的标记酶NADH2和NADPH2活性。FDA（成形二甲基酰胺）试剂可以对细胞中酯酶活性定量测定．运用MTT及FDA进行可见光及荧光光谱分析可客观反应肿瘤细胞活力，实验表明超声加血卟啉对肿瘤细胞有显著杀伤作用，单独血卟啉有一定作用．本实验探讨了正常离体条件下，超声功率，血卟啉浓度与杀伤效应之间的关系，为临床医学提供一定的参考资料．     

力达霉素构建的小型化单克隆抗体免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的研制一种具有高效、小型化特点的抗肿瘤单克隆抗体(单抗)免疫偶联物.方法以化学偶联法制备抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)与单抗Fab＇片段的偶联物Fab＇LDM.以非还原型SDS-PAGE法确定偶联物的相对分子质量;ELISA法、四氮唑蓝(MTT)法、克隆形成法及小鼠移植性结肠癌26(C26)模型观察Fab＇-LDM偶联物的抗肿瘤作用.结果 Fab＇-LDM偶联物的相对分子质量(Mr)约为65 000,Fab＇与LDM的偶联分子比为11;偶联物与BEL-7402及C26细胞均呈免疫学阳性反应,但与KB细胞无反应;Fab＇-LDM对靶细胞BEL-7402的杀伤作用比游离LDM强13倍,对C26细胞的杀伤作用比LDM强5.5倍,但对非靶细胞KB的作用与LDM相当.动物试验结果表明,0.05 mg/kg、0.1 mg/kg和0.2 mg/kg剂量Fab＇-LDM偶联物对小鼠移植性结肠癌26的抑瘤率分别达80%、92%和94%,而0.1 mg/kg剂量游离LDM的抑瘤率为77%;同时偶联物治疗组动物生存时间较对照组延长.偶联物的抑瘤作用强于等剂量游离LDM(P＜0.01).结论以高效抗肿瘤抗生素LDM为"弹头"药物,可与单抗活性片段构建成具有良好抗肿瘤作用的小型化单抗导向药物.     

ANTITUMOR ACTIVITY OF IMMUNOCONJUGATES COMPOSED OF BOANMYCIN AND MONOCLONAL ANTIBODY

ＡＮＴＩＴＵＭＯＲＡＣＴＩＶＩＴＹＯＦＩＭＭＵＮＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳＣＯＭＰＯＳＥＤＯＦＢＯＡＮＭＹＣＩＮＡＮＤＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＹ￥ＺｈｅｎＹｏｎｇｓｕ；（甄永苏）；ＰｅｎｇＺｅ（彭泽）；ＤｅｎｇＹｏｎｇｃｈｕａｎ；（邓甬川）Ｘｕ...