NS-398对HGF诱导的HepG2细胞增殖及MMP-2、TIMP-2 mRNA表达的影响

目的研究选择性COX-2抑制剂对HGF诱导的肝癌细胞株增殖及MMP-2、TIMP-2 mRNA表达的影响,探讨药物与肿瘤转移之间的关系.方法肿瘤细胞培养于不含有和含有30ng/ml HGF的2?S DMEM培养基中,MTT法检测NS-398对肝癌细胞株增殖的影响,RT-PCR法检测NS-398对肝癌细胞株MMP-2、TIMP-2 mRNA表达的影响.结果在含有30ng/ml HGF的2?S DMEM培养基中肿瘤细胞出现数量增多.浓度低于60μmol/L的NS-398不影响HGF诱导的肝癌细胞株的增殖,但抑制细胞内MMP-2、TIMP-2 mRNA表达.浓度高于90μmol/L的NS-398抑制肝癌细胞株的增殖.结论选择性COX-2抑制剂能够上调肝癌细胞株内TIMP-2/MMP-2的mRNA比值,并可能具有降低肿瘤细胞运动性的潜在作用,且具有抑制肿瘤细胞增殖的作用.     

NS-398诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的 探讨NS-398诱导肝癌细胞HepG2凋亡的分子机制.方法 采用MTT法测定COX-2选择性抑制剂NS-398对HepG2细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测凋亡;原位细胞凋亡检测法观察细胞凋亡形态学变化;免疫细胞化学分析COX-2、cIAP-1、XIAP、Survivin蛋白变化.结果 NS-398对HepG2细胞株有增殖抑制作用,流式细胞仪检测用药组凋亡率明显高于对照组.TUNEL染色可见典型的凋亡形态学特征.免疫细胞化学分析表明使用NS-398后,COX-2、cIAP-1、XIAP、Survivin蛋白表达降低.结论 COX-2选择性抑制剂NS-398对人肝癌细胞株HepG2有诱导凋亡作用,其机制可能通过抑制COX-2,下调cIAP-1、 XIAP、 Survivin的表达而诱导凋亡.     

NS-398和罗格列酮协同对胰腺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398和过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPAR)γ激动剂罗格列酮对人胰腺癌细胞株SW 1990增殖的调控作用及其机制。方法SW 1990细胞接种于含10%胎牛血清的DMEM液中,常规培养24 h后加NS-398(150μmol.L-1)和(或)罗格列酮(50μmol.L-1),连续培养48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuc lear antigen,PCNA)以评价SW 1990细胞的增殖状态。结果NS-398组、罗格列酮组和联合用药组的细胞存活率分别为(68.1±8.6)%、(67.5±8.5)%和(35.2±6.4)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组的细胞存活率明显低于单一用药组(P<0.05)。NS-398和罗格列酮可显著抑制PCNA在SW 1990细胞的表达(P<0.05)。结论NS-398、罗格列酮可抑制胰腺癌细胞增殖,两者具有协同作用。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398体外抑制结肠癌细胞增殖和侵袭

目的:观察环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响,探讨COX一2作为结肠癌治疗靶标的可行性.方法:用RT-PCR和Western印迹法检测结肠癌细胞CW-2、COLO-320中COX-2基因及蛋白的表达.MTT法观察NS-398对COLO-320细胞增殖的抑制作用;体外细胞侵袭试验检测NS-398对细胞侵袭能力的影响;Western印迹检测NS-398对基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响.结果:结肠癌细胞株CW-2、COLO-320中COX-2均有阳性表达.NS-398能抑制结肠癌细胞株COLO-320的生长,抑制作用具有时间、浓度依赖性.细胞侵袭试验表明,NS-398体外能抑制结肠癌细胞株COLO-320的侵袭.Western印迹结果表明NS-398可以抑制COLO-320中MMP-2的表达.结论:COX-2抑制剂NS-398体外可显著抑制结肠癌细胞的生长、侵袭,COX-2可作为结肠癌治疗的靶点.     

环氧合酶-2抑制剂联用姜黄素对肝星状细胞增殖抑制作用的观察

目的观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398与姜黄素联用对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）增殖的影响。方法体外培养肝星状细胞株HSC-T6，接种96孔板，分别加入终浓度为20μmol／L的NS-398和姜黄素，两药物单独或联合应用与HsC共同培养，以M＇IT法检测NS-398、姜黄素单用或联用24h（n=4）对HSC生长的抑制情况。LDH法检测NS-398、姜黄素对HSC的毒性作用。结果NS-398、姜黄素及联合应用两药对HSC的增殖的抑制率分别为6．0％，20．5％，44．0％，与细胞对照组比较差异有显著性（P〈0．01），联合用药组优于单用药组（P〈0．05）。与对照组比较，各浓度组培养上清液中LDH活力差异无显著性（P〉0．05）。结论NS-398与姜黄素均可以抑制HSC增殖，联合用药的效果明显优于任一药物单用。     

顺铂联合COX-2选择性抑制剂NS-398对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的 体外观察顺铂(diamminedichloroplatinum, DDP)以及DDP联合环氧合酶-2(cyclooxygenase, COX-2)选择性抑制剂NS-398对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,比较单独应用DDP与DDP联合NS-398应用于食管癌Eca-109细胞的抗肿瘤效应.方法 CCK-8法检测不同浓度的DDP(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 mg/L)单独作用及DDP联合NS-398(1.00、10.00 μmol/L)作用Eca-109细胞24 h的细胞增殖抑制率.琼脂糖凝胶电泳技术检测DDP(1.25、2.50、5.00 mg/L)单用及联合NS-398(1.00、10.00、80.00 μmol/L)作用Eca-109细胞24 h和48 h的DNA Ladder出现情况.透射电镜观察DDP单用以及联合NS-398作用于Eca-109细胞24 h超微结构的变化.药物未处理组作为对照组.结果 细胞增殖抑制实验表明顺铂、NS-398对Ec-109细胞有剂量依赖性抑制增殖作用(P<0.05).顺铂联合NS-398用药组细胞增殖抑制率明显高于同浓度顺铂单用组,且随添加的NS-398的剂量的增加而增加,DDP联合NS-398用药组对Ec-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应明显高于DDP单药组,二者具有协同效应.结论 与DDP单用相比,添加低剂量NS-398能够增强DDP对Eca-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应.     

NS-398抑制SKOV3细胞恶性生物学特性的机制

目的探讨环氧合酶2( COX2)抑制剂NS-398对卵巢癌细胞恶性生物学特性的影响。方法以卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,根据 NS-398的处理分为对照组、实验组。利用MTS法和免疫组化法检测Ki-67蛋白表达,从而监测NS-398对SKOV3细胞增殖的影响;采用划痕实验和侵袭实验分别观察细胞迁移和侵袭能力的变化,采用RT-PCR法检测基质金属蛋白酶( MMP ) mRNA的表达情况;采用实时荧光定量PCR及Western blot检测上皮间质转化( EMT)相关分子表达情况。结果① MTS增殖实验表明NS-398对SKOV3细胞增殖作用无影响,免疫组化结果与之一致;②划痕实验和侵袭实验分别显示,NS-398显著下调SKOV3细胞的迁移和侵袭能力,差异有统计学意义(P<0.05)。 RT-PCR检测结果表明NS-398抑制MMP的mRNA表达;③ Western blot结果表明NS-398上调 SKOV3细胞 E-cadherin的表达,下调Vimentin、Slug、Snail的表达。结论 COX2抑制剂通过阻止MMP 的表达和EMT的发生,从而下调SKOV3细胞的迁移、侵袭能力。     

NS-398依赖Apaf-1,Caspase3路径和影响VEGF分泌诱导骨髓瘤细胞凋亡

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在人类多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和PCM6中的表达及其抑制剂NS-398对骨髓瘤细胞的凋亡诱导及其作用机制。方法体外培养人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和PCM6细胞,通过Western-blot法检测骨髓瘤细胞株中COX-1和COX-2蛋白质的表达。NS-398作用各细胞不同时间后,利用MTT比色法检测对细胞增殖的影响;通过流式细胞仪分析法检测RPMI8226细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)的变化;采用Western-blot法检测了凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic protease-activating factor-1,Apaf-1)表达,采用比色法和ELISA法检测半胱氨酸酶3(Caspase3)、前列腺素E2(PGE2)和血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平的变化。结果①两种骨髓瘤细胞株中均有COX-1和COX-2蛋白质的表达;②NS-398对RPMI8226和PCM6细胞增殖均具有抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0·05),对RPMI8226细胞的增殖抑制作用较PCM6明显;③经NS-398处理48h后,RPMI8226和PCM6细胞均出现凋亡,对RPMI8226的凋亡影响较PCM6明显,在NS-398浓度为10,25,50μmol/L时,RPMI8226低膜电位细胞比例分别为19·6%,29·1%和41·8%(对照组为16·3%)(P<0·05);④RPMI8226细胞经NS-398处理48h后,Apaf-1蛋白表达和Caspase3的活性显著增加的同时,PGE2和VEGF的分泌水平明显下降。结论NS-398诱导骨髓瘤细胞株发生凋亡,其抗肿瘤作用机制可能是通过拮抗COX-2的活性进而耗散细胞线粒体跨膜电位和活化存在于线粒体信号传导通路下游的Apaf-1和Caspase3凋亡因子,并且抑制骨髓瘤细胞分泌PGE2和VEGF途径诱导细胞凋亡。NS-398将来可能成为作为多发性骨髓瘤(MM)治疗和化疗的重要工具。     

COX-2选择性抑制剂联合奥沙利铂对结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS-398联合奥沙利铂(L-OHP)对结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响,比较NS-398联合L-OHP与单独应用L-OHP对结肠癌HCT-8细胞的杀伤效应。方法 CCK-8法检测不同浓度的L-OHP(1.25、2.50、5.00、10.00及20.00μmol/L)单独作用及L-OHP联合NS-398(20.00及80.00μmol/L)作用HCT-8细胞24 h的细胞增殖抑制率。分别应用流式细胞术检测细胞早期凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学改变;分光光度法检测Caspase-3的活性。结果细胞增殖抑制实验表明L-OHP、NS-398对HCT-8细胞有剂量依赖性抑制增殖作用(P<0.05)。NS-398联合L-OHP用药组细胞增殖抑制率明显高于同浓度L-OHP单用组,且随着添加的NS-398剂量的增加而增加,联合用药组对HCT-8细胞的诱导凋亡效应明显高于L-OHP单药组,二者具有协同效应。两药均能提高Caspase-3的活性,联合用药组中Caspase-3的活性显著高于L-OHP组和NS-398组(P<0.01)。结论 NS-398和L-OHP均能抑制HCT-8细胞的增殖及诱导凋亡,NS-398能够显著增强L-OHP的癌细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398与卡铂在宫颈癌治疗中的协同作用.方法:用NS-398、卡铂及两者联合作用人宫颈癌Hela细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测NS-398、卡铂及两者联合对宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪PI染色法分析NS-398、卡铂处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果:NS-398、卡铂对人宫颈癌hela细胞的增殖具有抑制作用.卡铂联合NS-398对人宫颈癌hela细胞的增殖抑制作用显著增加,其联合抑制率近似于NS-398和卡铂单药抑制率之和,也近似于2倍卡铂剂量时的增殖抑制率.流式细胞仪检测发现,与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显增加,而S期细胞明显减少,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而卡铂处理组G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,两组比较有统计学意义(P＜0.05).NS-398(200 μmol/L)作用Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测发现,NS-398处理组凋亡率为3.43%±0.02%,对照组凋亡率为1.48%±0.03%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).而卡铂(80 mg/L)处理组凋亡率为9.32%±0.02%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的增殖具有抑制作用.NS-398对宫颈癌细胞的作用可能与凋亡无关.NS-398与卡铂在宫颈癌化疗中具有叠加作用.     

胃泌素受体拮抗剂与环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺与特异性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞株MKN-45增殖、凋亡的调控作用。方法MKN-45细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,细胞长至亚单层后加丙谷胺(终浓度5.0mmol/L)和/或NS-398(10.0μmol/L),连续培养48h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析检查细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测凋亡抑制基因bcl-2mRNA及蛋白表达。结果丙谷胺和NS-398协同抑制MKN-45细胞增殖;丙谷胺组、NS-398组和联合用药组的细胞凋亡率分别为24.7%±3.2%,26.7%±3.4%和36.1%±4.6%,显著高于对照组的1.6%±0.6%(均P<0.01);联合用药组的细胞凋亡率明显高于单一用药组(P<0.05)。丙谷胺和NS-398显著下调bcl-2mRNA及蛋白表达(均P<0.05)。结论丙谷胺、NS-398抑制MKN-45细胞增殖,通过下调bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,两者联合具有协同抗癌作用。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法不同浓度NS-398处理体外培养的人宫颈癌细胞系Hela细胞后，采用噻唑蓝（MTT）法检测处理48h、72h后hela细胞的增殖活性，流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果50、100、200umol／LNS-398处理hela细胞48h，72h后，细胞增殖明显受到抑制，呈时间和剂量依赖性特点。200umol／LNS-398处理hela细胞48h后，流式细胞仪细胞周期分析表明，NS-398处理组G1期细胞明显增加，S期细胞明显减少。而细胞凋亡指数无明显变化。结论体外实验表明，NS-398能有效抑制宫颈癌细胞生长，其机制可能与其阻滞细胞周期有关。     

NS398诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡及对bcl-2蛋白表达的影响

目的研究环加氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂NS398抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖及诱导其凋亡的效应和机制。方法MTT比色法观察NS398的细胞毒性作用及其浓度依赖性；透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成。流式细胞仪检测细胞凋亡率及与NS398作用时间的关系；Western blot测定bcl-2蛋白表达。结果不同浓度（0.1～100μmol／L）NS398均可使细胞生长受到抑制；电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学变化；琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成；流式细胞术检测证实细胞凋亡率与NS398作用时间呈明显相关。Western blot检测显示随着NS398作用时间延长，可不同程度地降低bcl-2蛋白表达。结论NS398能抑制人MG-63细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调控bcl-2蛋白表达有关。     

环氧合酶2抑制剂NS-398对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与凋亡的影响

目的：分析环氧合酶2(COX-2)抑制剂NS-398对人肝癌细胞SMMC-7721形态、细胞周期、增殖和凋亡等的影响,探讨NS-398影响肿瘤细胞生长的机制。方法：应用不同浓度NS-398（25、50、75、100和150 μmol/L）分别作用于SMMC-7721细胞（24、48和72 h）,并设正常对照组,观察各组SMMC-7721细胞形态学,流式细胞术分析各组细胞周期变化和细胞凋亡率,MTT方法分析各组肝癌细胞生长抑制率。结果：随着NS-398浓度和作用时间的增加,细胞逐渐不能贴壁生长,部分漂浮于培养液中,培养液浑浊。与正常对照组比较,不同浓度NS-398组SMMC-7721细胞G0/G1期比例降低、G2/M期比例增高。正常对照组SMMC-7721细胞无凋亡峰,50 μmol/L NS-398组SMMC-7721细胞作用24 h后可见凋亡峰出现,作用72 h后细胞凋亡水平增高明显。NS-398各组细胞生长抑制率呈浓度和时间依赖性升高。结论：COX-2抑制剂NS-398能够抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并诱导细胞凋亡,该过程具有明显的时间和剂量依赖性。     

Effect of NS398 on inducing apoptosis and down-regulating Bcl-2 protein in human osteosarcoma cell MG-63 line

Objective： This study investigated the effect of NS398 on anti-proliferation and the mechanism of inducing apoptosis of human osteosarcoma cell MG-63 line in vitro. Methods： Growth suppression was detected by MTT method. Special morphological changes of apoptosis were observed by transmission electron microscopy （TEM） and DNA fragments electrophoresis. The apoptotic rates were quantified by flow cytometry （FCM）. And Bcl-2 protein level were detected by Western Blotting assay. Results： Different concentration NS398 inhibited the cell growth. Through TEM and DNA electrophoresis, the special morphological changes were observed after 24, 48 and 72 h treatment with NS398. The apoptotic rates of MG-63 cells treated with NS398 were respectively, significantly higher than that of the control group（ P 〈0.01 ）. Western blot assay showed that NS398 reduced Bcl-2 protein expression. Conclusion： NS398 suppressed the proliferation of human osteosarcoma cell MG-63 line and induced apoptosis. The mechanism may be associated with down-regulation expression level of bcl-2 protein.     

Experimental Studies on Cyclooxygenase-2 Inhibitor Induced Cervical Cancer Hela Cell Apoptosis and Its Molecular Mechanism

Objective To investigate the Hela cells growth inhibition and apoptosis possible molecular mechanisms. Methods Hela cells were treated with various concentrations (100 μmol/L,200 μmol/L, 300 μmol/L,400 μmol/L) of NS-398 (selective for COX-2 inhibition). Cell growth was measured by MTT (Thiazolyl blue). Apoptosis was detected by double staining flow cytometry (FCM). Levels of PGE2 were measured by radioimmunoassay. The expres- sions of COX-2 protein were also examined by Western blot analysis. Results After treated with different concentrations of NS-398, the growth of Hela cells was suppressed significantly in a dose-and time-dependent manner (P<0.01). The NS-398 can induce apoptosis with the apoptosis rates at 8.53%-43.46% by FCM in a dose-dependent manner. The release of PGE2 was reduced in Hela cells with the values of 69.26 ± 2.13, 47.46 ± 2.18, 28.15 ± 1.64 and 17.01 ± 1.12, respectively, there was significant difference compared with control group (83.78 ± 1.11) (P<0.01). The NS-398 could inhibit the activity and expression of COX-2 in a dose- dependent manner and down-regulated the expression of COX-2 protein greatly. Conclusion NS-398 could inhibit the proliferation and increase apoptosis in human Hela cells. These effects may be depended on the inhibition of the expression of COX-2 and PGE2 by NS-398.     

选择性环氧化酶-2抑制剂NS-398抗结肠癌机制及对5-氟尿嘧啶化疗的辅助作用

目的 研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398的抗结肠癌作用机制及其在5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗中的辅助作用。方法 (1)用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测结肠癌HT-29、SW480细胞COX-2 mRNA表达后,将NS-398作用于两株细胞,用ELISA法测定前列腺素E2(PGE2)水平。(2)将NS-398、5-Fu、NS-398 5-Fu分别作用于两株细胞,24、48和72h后用MTT法检测细胞增殖状态。以流式细胞技术观察药物对细胞凋亡的影响。结果 (1)HT-29细胞中COX-2 mRNA呈高表达,NS-398作用后PGE2表达水平明显降低;SW480细胞中COX-2 mRNA表达呈阴性,NS-398作用后PGE2水平无明显变化。(2)NS-398、5-Fu呈剂量依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡;NS-398 5-Fu抗增殖的作用较单一用药时更明显,而凋亡诱导作用与单一用药差异无显著意义。结论 选择性COX-2抑制剂NS-398具有抗结肠癌作用;NS-398抗结肠癌作用可能不依赖于COX-2和PGE2的表达水平;NS-398与5-Fu具有协同的抗增殖作用。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用

目的:探讨NS-398对人食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用。方法:采用3H-TdR掺入法检测不同浓度(0、10、20、50、100μmol/L)和作用24、48、72、96h的NS-398对细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞术(FCM)及DNA片段分析法检测NS-398诱导的细胞凋亡情况。结果:EC9706经不同浓度的NS-398处理后,实验组3H-TdR掺入量明显减少,具有时间和剂量依赖关系,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.001)。FCM检测发现实验组在G1期前出现亚倍体凋亡峰,细胞凋亡率达(45.23±1.08)%,并出现典型的细胞凋亡梯带;而对照组无凋亡峰出现,细胞凋亡率为(2.14±0.28)%,两组比较有显著性差异(P<0.001)。结论:NS398对食管癌细胞株EC9706细胞具有增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用。     

选择性环氧化酶抑制剂对肾癌细胞BCL-2表达的影响

目的：探讨环氧化酶抑制剂NS398对肾癌786—0细胞生长及bcl-2基因和蛋白表达的影响。方法：用不同浓崩的NS398（0、50、100、150μmol／L）处理肾癌786—0细胞不同时间,采用MTr比色法分析细胞生长抑制率。用不同浓度NS398到理肾癌786—0细胞24h,RT—PCR检测bcl-2mRNA表达的变化,Westernblot检测bcl-2蛋白表达的变化。结果：随着NS398《浓度及处理时间的增加,肾癌786—0细胞生长抑制率升高;随着NS398剂量的增加,bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平逐渐减少。结论：NS398可呈剂量和时间依赖性抑制肾癌786—0细胞的生长,呈浓度依赖性减少bcl-2 mRNA及蛋白的表达。NS398可崩通过抑制bcl-2的表达,抑制肾癌786—0细胞的生长。