冬虫夏草、虫草菌丝体及蛹虫草中核苷类成分的测定

目的:建立高效液相色谱法定量测定冬虫夏草、虫草菌丝体及蛹虫草中的腺嘌呤、腺苷、虫草素的含量,为冬虫夏草及其代用品的质量研究及开发利用提供科学依据。方法:采用资生堂MGⅡC18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水梯度洗脱,检测波长为260 nm,流速1.0 m L·min-1,外标法定量测定。结果:腺嘌呤、腺苷、虫草素分别在0.001239~0.3098 mg·m L-1、0.001241~0.3102 mg·m L-1、0.000813~0.2032 mg·m L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999);平均回收率(n=3)分别为97.9%、97.0%、95.8%。结论:本法简便准确,灵敏度高,通用性好,适用于冬虫夏草及其代用品中腺嘌呤、腺苷、虫草素的定量测定。     

虫草花与冬虫夏草腺苷成份的比较研究

目的 比较研究虫草花与冬虫夏草腺苷成份的含量.方法 采用高效液相色谱法测定腺苷的含量,色谱柱为岛津Shim-pack VP-ODS柱(200mm×4.6 mm,5μm);流动相为磷酸盐缓冲剂(pH=6.5)-甲醇(17:3);流速为1ml/min;检测波长为260nm.结果 腺苷的线性范围为0.078 35-0.399 88μg,呈现较好的线性关系,平均加样回收率为96.22%,RSD为0.21%(n=5).结论 虫草花的活性成份腺苷含量明显高于冬虫夏草腺苷含量,具有与冬虫夏草相似的滋补功效.     

冬虫夏草极细粉质量标准研究

目的:建立冬虫夏草极细粉质量标准。方法:冬虫夏草极细粉性状及显微鉴定,对冬虫夏草极细粉进行TLC鉴别;采用《中国药典》2010年版的方法测定不同批次冬虫夏草的水分并制定限度;采用高效液相色谱法测定冬虫夏草中腺苷的含量并制定限度。结果:性状、显微鉴定方法简便、准确,TLC鉴别专属性强;HPLC法测定腺苷含量,其线性范围为0.04μg～0.36μg,平均回收率为99.43%,RSD=0.78%。结论:建立了冬虫夏草极细粉质量标准,该标准方法简便可行,重现性好,可有效控制冬虫夏草极细粉的质量。     

冬虫夏草菌丝体的抗疲劳作用研究

目的研究冬虫夏草菌丝体的抗疲劳作用。方法采用雄性ICR小鼠每天灌胃给予冬虫夏草菌丝体,剂量分别为125,250,750 mg/kg,30 d后测定负重游泳时间、运动后血乳酸、肝糖原和尿素氮含量。结果冬虫夏草菌丝体能显著延长小鼠负重游泳时间(P<0.05),增加小鼠肝糖原储备量(P<0.01),降低运动后小鼠血乳酸含量(P<0.01)。结论冬虫夏草菌丝体具有抗疲劳作用。     

康力欣胶囊中冬虫夏草质量控制方法的研究

目的:为完善康力欣胶囊质量标准,增加该制剂中冬虫夏草的显微鉴别项、冬虫夏草主成分腺苷的含量测定.方法:显微观察冬虫夏草组织特征;以HPLC法测定腺苷的含量,色谱柱:Capcell C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相:磷酸盐缓冲液(pH6.5)[0.01mol·L-1磷酸二氢钠68.5mL与0.01mol·L-1磷酸氢二钠31.5mL,混合(pH6.5)]-醇(85:15),检测波长:260nm,柱温:30℃,流速:1.0mL·mim-1,进样:10μL.结果:冬虫夏草的主要显微特征体壁碎片、腹足趾碎片在制剂中易于检出;腺苷在8.06×10-3μg～16.1×10-2μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为99.2％,RSD为0.5％(n=6).结论:该分析方法科学可行,专属性、重复性、稳定性均符合要求,可作为康力欣胶囊中冬虫夏草的质量控制标准.     

高效液相色谱法测定至灵胶囊中腺苷的含量

至灵胶囊系由冬虫夏草幼虫分离得到的蝙蝠蛾孢霉属真菌(Mortierella sp)经人工培养发酵得到的菌丝体加工而成,具有补肺益肾的功效[1].原标准以总氮量(以N计)测定作为质控方法,专属性、重现性差.腺苷作为质控指标,其含量测定方法,文献报道有薄层展开后紫外光度法[2]、薄层扫描法[3]、高效液相色谱法[4,5].为了有效控制该药品质量,本文采用高效液相色谱法,建立了专属性较强的含量测定方法.     

冬虫夏草含片质量评价研究

目的 对冬虫夏草含片进行质量评价研究。方法 采用直观法测定感官、HPLC法和PCR法鉴别真伪;HPLC法测定腺苷含量;硫酸-苯酚法测定多糖含量。结果 3批冬虫夏草含片感官符合产品特征,无杂质;HPLC特征图谱中呈现与冬虫夏草一致的6个特征峰;PCR鉴别中冬虫夏草含片均在220 bp和146 bp左右位置出现了与冬虫夏草一致的目标条带;腺苷含量分别为0.098%、0.097%及0.097%;多糖含量分别为10.24%、10.54%及10.53%。结论 感官、特征图谱、腺苷含量均符合T/SZZX 008-2021《冬虫夏草含片》中的要求,特征图谱和PCR鉴别证实冬虫夏草含片中的原料为正品冬虫夏草,腺苷与多糖含量高于冬虫夏草原料,该结果为冬虫夏草含片质量评价提供了科学依据。     

HPLC法测定冬虫夏草胶囊中腺苷含量

目的建立冬虫夏草胶囊中腺苷的含量测定方法。方法色谱柱采用AgilentTC—C18（4．6mm×250mm,5um）,流动相：乙腈-0．01mol／L磷酸二氢钾溶液（8：92）,流速为1．0ml／min,检测波长为254nm;柱温为30℃,外标法测定。结果腺苷浓度在0．4024～60．36ug／ml（r=1）范围内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率（n=6）为98．04％,RSD为0．63％。结论本法简便可靠,可用于冬虫夏草胶囊中腺苷的质量控制。     

皖产古尼虫草中核苷和碱基成分的HPLC分析

目的:建立高效液相色谱法测定皖产古尼虫草中核苷和碱基成分(尿嘧啶、虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿苷、次黄嘌呤、肌苷和鸟苷)的含量,并比较其与天然冬虫夏草核苷和碱基成分的异同。方法:采用Zorbax SB-Aq(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL.min-1,检测波长260 nm,柱温20℃。结果:尿嘧啶、虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿苷、次黄嘌呤、肌苷和鸟苷进样浓度分别在0.38～191.08,0.37～188.48,0.37～189.72,0.37～190.92,0.37～188.55,0.50～168.55,0.37～190.36,0.24～125.00μg.mL-1范围内线性关系良好,R2为0.9998～0.9999;加样回收率分别为102.1%,102.1%,95.3%,96.2%,96.9%,94.1%,108.7%,101.8%,RSD未超过2.8%。皖产古尼虫草和冬虫夏草均含有核苷和碱基成分,其中:皖产古尼虫草含有较高的尿嘧啶、尿苷、腺苷,而冬虫夏草中肌苷含量较高;二者的次黄嘌呤、鸟苷、腺嘌呤的含量相近;在该检测限下,两者均未测得虫草素。结论:初步认...     

人工冬虫夏草发酵培养基的优化研究

采用正交试验法对冬虫夏草子实体发酵培养基实施优化,使菌丝体干重收率达2%以上,化学主成分虫草酸含量不低于12%,腺苷含量不少于14%,且成本降低,发酵周期缩短。     

RP-HPLC法测定青海不同产地冬虫夏草中核苷类成分的含量

目的:测定青海不同产地冬虫夏草中主要核苷类成分的含量并比较其差异。方法:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定不同产地的9份样品中尿苷、鸟苷、肌苷、腺苷、虫草素的含量。色谱柱为Symmetry ShieldTMRp18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.2～1.2mL·min-1,检测波长为260nm,柱温为30℃。结果:5种成分的进样量分别在0.331～1.796、0.375～2.046、0.256～1.389、0.338～1.844、0.384～2.110mg范围与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.9999、0.9999、0.9998、0.9997、0.9998);平均回收率分别为98.72%、101.48%、99.74%、98.46%、98.09%,RSD分别为1.96%、1.68%、1.82%、1.57%、2.74%(n均为6)。青海不同产地间冬虫夏草主要核苷类成分含量有差异。结论:本方法能有效鉴别天然冬虫夏草中的核苷类成分,而冬虫夏草化学成分与生态因子的相关性还需要进一步研究。     

HPLC法测定虫草被孢菌胶囊中腺苷的含量

目的 建立虫草被孢菌胶囊中腺苷含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法测定虫草被胞菌胶囊中腺苷的含量.采用Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:磷酸二氢钾溶液(0.05 mol·L-1)-甲醇(85∶15)为流动相,流速1.0 mL· min-1,检测波长为260hm.结果 腺苷在1.011～ 50.55μg·mL-1范围内线性关系良好,线性方程为:A=60901C-2347.7,r=1;平均回收率为100.49％(n=6,RSD=1.1％).结论 本法操作简便,不受杂质干扰,精密度好,结果准确可靠,可用于虫草被孢菌胶囊的质量控制.     

白木香茎、叶蛋白质组研究初探

采用三氯乙酸／丙酮沉淀法分别对白木香茎和叶进行蛋白质提取,利用一、两次水化法分别对所获蛋白进行溶解,并通过研究蛋白得率、比较蛋白浓度及经SDS－PAGE单向电泳所获条带的清晰度,分析白木香茎、叶蛋白制备与 SDS－PAGE 单向电泳条件的优劣。结果表明：白木香茎、叶蛋白得率分别是73mg· g－1与52mg· g－1;一次水化法得到的茎、叶样品蛋白终浓度分别为3．62μg·μL －1,4．17μg·μL －1,两次水化法所获得茎、叶蛋白终浓度为1．53μg·μL－1,2．12μg·μL －1。两种方法所获蛋白样品的 SDS－PAGE 条带均较模糊,但后者的单向电泳条带杂质较少,究其原因可能是蛋白制备、电泳条件的某些方面仍需改进。该研究为进一步从分子生物学的角度研究白木香结香机制提供了技术的基础。     

冬虫夏草及其菌丝体药理作用研究概况

目的 探讨冬虫夏草及其菌丝体的药理作用的研究概况.方法 检索近几年来有关冬虫夏草及其菌丝体的药理作用的研究资料,对其药理作用进行归纳和总结.结果与结论 对冬虫夏草及其菌丝体的药理作用及其机制方面的研究,主要集中在心血管、血液、肾脏、肝脏、呼吸系统以及抗肿瘤等方面,其药理作用较为确切.     

反相高效液相色谱法同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素、肌苷含量方法的研究

目的建立同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素、肌苷的HPLC方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱：Agilent C18柱（250 nm×4.6 mm,5μm）,甲醇与水梯度洗脱,柱温：30℃,流速：1.0 mL.min-1,检测波长：260 nm。结果腺苷进样量在0.200 8~1.004μg与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=2 876X＋0.458 8,r=0.998 7,平均加样回收率为100.5%,RSD为2.33%;虫草素进样量在0.202 2~1.011μg与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=2 018X＋8.726,r=0.999 2,平均加样回收率为99.3%,RSD为2.03%;肌苷进样量在0.201 4~1.007μg与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=5 845X-5.685,r=0.999 4,平均加样回收率为100.2%,RSD为1.44%。结论本方法简便、准确,重复性好,可用于同时检测冬虫夏草中的腺苷、虫草素及肌苷的含量测定。     

九州虫草中金属硫蛋白的诱导、提纯及性质研究

目的以生物发酵工程为手段,探寻一种经济,高效,简易的金属硫蛋白生产工艺,并用正交试验法优选出最适的生产提取条件及验证所提取的金属硫蛋白性质。方法以经过基因工程改良的九州虫草真菌为菌种,采用液态深层发酵增殖菌丝体并用ZnSO4刺激诱导其合成金属硫蛋白,后经细胞破碎,粗提取和层析等步骤,得到锌金属硫蛋白,同时初步研究硫酸锌诱导虫草金属硫蛋白的最佳条件,提纯后所得金属硫蛋白的相对分子质量,巯基含量及金属锌的含量。结果较传统动物肝脏提取方法,九州虫草菌株发酵法可快速高效的制得金属硫蛋白,发酵过程中培养基中锌原子浓度达15 g.L-1时金属硫蛋白达到最高产率,可达10.86 mg.g-1菌丝体(湿重)。该种锌金属硫蛋白分子量约为7 kD,每分子金属硫蛋白含有由21个半胱氨酸和7个锌原子。结论通过蛋白柱层析图谱,紫外光扫描图谱分析,证明所提取蛋白符合金属硫蛋白的相应特征。     

高效液相色谱法定量分析冬虫夏草中尿苷和腺嘌呤

目的采用高效液相色谱法同时测定冬虫夏草中尿苷和腺嘌呤2个成分的含量。方法采用Kromasil C18柱(150mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(5:95)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长260nm。结果尿苷和腺嘌呤质量浓度质量浓度均在5～500μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9991),平均加样回收率分别为99.25%和99.43%,RSD分别为1.18%和1.52%(n=6)。结论该方法快速、准确、重现性好,可用于同时测定冬虫夏草中尿苷和腺嘌呤的含量。     

高效液相色谱法测定两种不同来源党参中党参炔苷的含量

目的建立党参中党参炔苷的含量测定方法,比较两种不同来源党参的质量。方法采用高效液相色谱法,色谱柱：Syncronis C18（250×4.6 mm,5μm）;流动相：乙腈-0.1%甲酸（24∶76）;流速：1.0mL·min-1;检测波长：269nm。结果党参炔苷在0.019～4.836μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9999）,平均回收率100.47%,RSD=1.17%（n=5）。应用该方法测得两种不同来源党参中党参炔苷的含量分别为0.33mg·g-1和0.37mg·g-1。结论所建立的方法操作简便、结果准确、重复性好,可以用于党参药材的质量评价。     

兔静脉注射及灌服莫昔沙星后眼内组织分布及其药动学比较研究

目的:比较莫昔沙星治疗眼内感染的2种给药途径的眼内组织分布及药动学情况。方法:选取54只家兔,分为静脉注射组和灌服组各27只,每组再随机分为9个亚组、每亚组3兔6眼,各组相应给予莫昔沙星24mg·kg-1后,用高效液相色谱法测定兔眼内各组织中的药物浓度,以3p97软件计算药动学参数。结果:灌服和静脉注射给药后在角膜、房水、虹膜-睫状体、晶体和玻璃体内Cmax分别为(7.09±4.708)、(2.55±0.382),(3.84±1.217)、(3.71±0.54),(5.87±1.93)、(2.72±0.662),(1.36±0.176)、(0.74±0.396),(1.87±0.586)、(0.87±0.073)μg·g-1,AUC0～t分别为(12.24±1.112)、(9.27±0.559),(4.71±0.082)、(2.33±0.399),(13.79±0.814)、(8.04±2.045),(5.83±0.309)、(3.61±0.41),(3.45±0.064)、(3.09±0.539)μg·h·g-1,灌服组均显著高于静脉注射组(P<0.05或P<0.01)。结论:兔莫昔沙星单剂量灌服给药后在眼内各组织吸收较静脉注射给药更好,并能达到更高的药物浓度。     

不同采收月份和不同炮制方法对女贞子中红景天苷和酪醇含量的影响

目的探讨不同月份不同炮制方法对长沙地区女贞子中活性成分红景天苷及其苷元酪醇含量的影响。方法采收长沙岳麓山上8、10、12月份产女贞子,去杂质洗净。一部分直接晾干生制;另一部分晾干后用黄酒蒸制。用HPLC法测定不同月份红景天苷及酪醇的含量。色谱柱：Hydro-RP80A,C18（4.6×250mm,5μm）、流动相为甲醇-水（26∶74,V/V）;流速1mL·min-1;检测波长278nm;柱温20℃;进样量10μL。评价月份及炮制方法对女贞子的影响。结果 8、10、12月份生品与制品中红景天苷的含量分别为3.213±2.235mg·g-1、2.784±0.719mg·g-1、0.941±0.510mg·g-1和4.159±2.042mg·g-1、3.596±1.773mg·g-1、2.164±0.986mg·g-1。酪醇的含量分别为0.457±0.323mg·g-1、0.828±0.549mg·g-1、0.414±0.348mg·g-1和0.505±0.298mg·g-1、1.954±1.218mg·g-1、0.702±0.690mg·g-1。结论月份及炮制方法对女贞子活性成分含量有影响,故在实际应用时应根据不同需要适时采收并加以炮制。