高糖对体外培养肾小球及肾小球系膜细胞分泌TNF的影响

采用酶联免疫吸附实验观察两种不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠肾小球及ＧＭＣ分泌ＴＮＦ的影响，结果表明：分别２４，１６小时后，与对照组相比肾小球与ＧＭＣ分泌ＧＮＦ明显增加，Ｐ〈０．０１。不同浓度的葡萄糖环境对肾小球与ＧＭＳ分泌ＴＮＦ的影响无明显差异，Ｐ〉０．０５。     

血管紧张素-（1-7）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞表型转化的影响

目的观察血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]对高糖诱导的体外培养大鼠肾系膜细胞表型转化的影响。方法将35株体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株EC（HB2Y-1）随机分为对照组9株,低糖组6株,高糖组7株,高糖＋Ang-（1-7）10-6mol/L组6株及高糖＋Ang-（1-7）10^-7mol/L组7株。采用免疫化学染色检测各组α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果高糖组细胞α-SMA表达明显高于对照组（P〈0.01）;与高糖组相比,高糖＋Ang-（1-7）10^-6mol/L组及高糖＋Ang-（1-7）10^-7mol/L组α-SMA阳性细胞率明显下降（P〈0.01）,但高糖＋Ang-（1-7）10^-7mol/L组下调幅度较低。结论Amg-（1-7）呈剂量依赖性抑制高糖诱导的体外培养大鼠肾系膜细胞表型转化。     

丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应的影响

目的探讨丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞损伤的影响。方法该研究于 2021年 3月至 2022年 3月进行。体外培养人肾小球系膜细胞,采用 30 mol/L葡萄糖诱导建立人肾小球系膜细胞细胞损伤模型,用丙泊酚浓度 10、20、40 μmol/L处理细胞,细胞分为对照组、高糖组、高糖 +低、中、高剂量丙泊酚组。酶联免疫吸附测定( ELISA)检测超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-PX)、丙二醛、活性氧、白细胞介素( IL)-10、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)IL-1β表达;蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶( iNOS)、细胞间黏附分子 -1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白 -1(MCP-1)、 IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达。结果高糖组的丙二醛［( 16.7±1.7)mmol/L比( 3.8±0.4)mmol/L］、活性氧［( 9.6±0.9)μg/L比( 3.5±0.3)μg/L］、 IL-10［( 65.3±6.9)ng/L比(26.9±3.2)ng/L］、 TNF-α［( 105.6±10.9)ng/L比( 42.8±4.8)ng/L］和 IL-1β［( 79.7±8.2)ng/L比( 31.2±3.6)ng/L］明显高于对照组; iNOS、ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显高于对照组; SOD、GSH-Px明显低于对照组,均 P<0.05。高糖 +低剂量丙泊酚组、高糖 +中剂量丙泊酚组、高糖 +高剂量丙泊酚组的丙二醛、活性氧、 IL-10、TNF-α和 IL-1β明显低于高糖组; iNOS、 ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显低于高糖组,均 P<0.05;SOD、GSH-Px明显高于高糖组,均 P<0.05。结论丙泊酚能减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应,发挥保护肾脏的作用。     

丹皮酚激活CKIP-1对高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化的影响

目的观察丹皮酚通过激活CKIP-1,活化Nrf2抗氧化应激通路,进而抵抗高糖诱导的肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMCs)中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和细胞间黏附分子1(intercellular cell adhension molecule-1,ICAM-1)表达增加的作用。方法采用高糖刺激的GMCs体外模型,观察丹皮酚对模型细胞FN、ICAM-1等炎性纤维化成分表达及CKIP-1、Nrf2抗氧化通路的影响;采用小分子RNA干扰GMCs CKIP-1的蛋白表达,免疫印迹法检测GMCs内Nrf2、HO-1、SOD1蛋白表达,DHE荧光探针技术检测细胞内超氧化物含量。结果在高糖诱导的GMCs,丹皮酚能上调CKIP-1蛋白的表达,增加Nrf2的水平,以及Nrf2信号通路下游靶因子HO-1、SOD1的表达,有效减少胞内超氧化物和H_2O_2含量,最终逆转FN、ICAM-1表达的增加。在干扰CKIP-1表达后,丹皮酚升高Nrf2及HO-1、SOD1的作用明显减弱,不能有效减少胞内活性氧水平,最终不能下调FN、ICAM-1的蛋白表达。结论激活CKIP-1,活化Nrf2信号通路,可能是丹皮酚抑制高糖引起的FN、ICAM-1上调的分子机制之一。     

泻心汤有效成分对高糖诱导的肾小球系膜细胞的保护作用

目的研究泻心汤有效成分对高糖诱导的肾小球系膜细胞模型的影响。方法体外高糖（30mmol·L-1）培养肾小球系膜细胞,分别加入不同浓度的小檗碱、黄芩苷和大黄提取物,孵育24h后收集细胞上清液,采用MTr法测定细胞相对活力,ELISA测定Ⅵ型胶原及单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的浓度,利用比色法检测丙二醛（尬A）的含量及超氧化物歧化酶（soD）活力。结果小檗碱、黄芩苷和大黄提取物均可剂量依赖性抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及MCP-1的分泌,提高SOD的酶活力和减少MDA的产生。结论在高糖诱导的肾小球系膜细胞中,泻心汤有效成分具有独立于降糖调脂的直接肾小球系膜保护作用。     

肝素衍生物结构与抑制高糖引起人系膜细胞增殖的关系研究

目的考察肝素结构与抑制高糖引起人肾小球系膜细胞增殖活性之间的关系。方法采用化学修饰的方法制备2,3-O-脱硫酸肝素、6-O-脱硫酸肝素、N-脱硫酸肝素、高碘酸氧化/硼氢化钠还原肝素、羧基还原肝素和多硫酸化肝素,通过比浊法测得硫酸基团含量,核磁图谱分析肝素修饰物;MTT法比较这些肝素修饰物对高糖引起人肾小球系膜细胞增殖的抑制活性。结果多硫酸化肝素抑制活性显著增加,羧基还原肝素、高碘酸氧化/硼氢化钠还原肝素抑制活性相对肝素没有明显改变,而2,3-O-脱硫酸肝素、6-O-脱硫酸肝素和N-脱硫酸化肝素抑制活性显著降低。结论抑制活性大小的顺序和硫酸基团含量大小顺序一致,说明肝素中硫酸基团的含量是影响肝素抑制高糖引起人肾小球系膜细胞增殖的主要因素。     

舒洛地特对高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用研究

目的：观察舒洛地特对高糖培养基中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用,探讨舒洛地特对肾脏的保护作用。方法：培养大鼠肾小球系膜细胞24 h后,将培养的细胞分为对照组（C组,普通培养基,含5.6 mmol·L-1葡萄糖）,甘露醇组（M组,24.2 mmol·L-1甘露醇＋C组）,高糖组（H组,30 mmol·L-1高糖MEM培养基）、舒洛地特干预组（S组,H组＋1.0 LRU·ml-1舒洛地特）。培养24 h后,RT-PCR和Western blotting法检测各组CD36 mRNA及蛋白的表达。结果：对照组和甘露醇组CD36mRNA（0.24±0.07和0.21±0.06）及蛋白（0.26±0.08和0.22±0.07）的表达差异无统计学意义（P〉0.05）,高糖组CD36 mRNA（0.62±0.11和0.24±0.07）及蛋白（0.83±0.23和0.26±0.08）表达显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,舒洛地特干预组CD36 mRNA（0.36±0.13和0.62±0.11）及蛋白（0.42±0.15和0.83±0.23）表达显著低于高糖组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：舒洛地特可抑制高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原的表达,可能是舒洛地特发挥肾脏保护作用的机制之一。     

二甲双胍联合辛伐他汀对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的:观察二甲双胍联合辛伐他汀对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖的抑制作用.方法:采用肾小球系膜细胞体外培养技术,筛选最佳葡萄糖浓度,在此浓度下,诱导肾小球系膜细胞增殖,在不同浓度二甲双胍联合辛伐他汀浓度,通过MTT法检测并观察不同时间,不同浓度下系膜细胞增殖情况.结果:与其他剂量比较,0.6g·L-1葡萄糖在48、72 h对肾小球系膜细胞增殖刺激作用较强,差异有统计学意义(P＜0.01),选0.6 g·L-1葡萄糖为最佳浓度.与高糖组比较,二甲双胍联合辛伐他汀高、中及低剂量组,均在48、72 h抑制肾小球系膜细胞生长(P＜0.05);其中二甲双胍联合辛伐他汀高剂量组的抑制较强,但与二甲双胍联合辛伐他汀中剂量组、低剂量组比较,差异不显著(P＞0.05).结论:二甲双胍联合辛伐他汀具有抑制肾小球系膜细胞增殖作用,联合用药可治疗糖尿病肾病.     

螺内酯对高糖及醛固酮诱导的肾小球系膜细胞CTGF表达的影响

目的通过研究螺内酯(SPI)对高糖(HG)和醛固酮(ALD)刺激的体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MsC)结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达的影响,探讨SPI的肾脏保护机制。方法将大鼠MsC分为:A组,正常对照组(5.6 mmol.L-1)、B组,高糖组(30 mmol.L-1)、C组,HG+SPI干预组(10-9,10-8,10-7mol.L-1)、D组,ALD组(5.6 mmol.L-1葡萄糖+10-7mol.L-1ALD)、E组,ALD+SPI干预组(10-9,10-8,10-7mol.L-1)。酶联免疫法检测上清液中CTGF蛋白的含量,RT-RCR法检测MsC CTGFmRNA表达。结果①正常糖浓度的培养基中可测到MsCCTGF mRNA和蛋白表达;②与A组比较,B组和D组MsCCTGF mRNA表达和上清液CTGF水平明显升高,差异有显著性;③与B组比较,C组中经10-8,10-7mol.L-1SPI干预MsC CTGF mRNA表达和上清液CTGF水平明显降低,P<0.05,但10-9mol.L-1SPI干预MsC CTGF mRNA表达和上清液CTGF水平无变化,P>0.05;④与D组比较,E组MsCCTGFmRNA表达和上清液CTGF水平明显降低,P<0.05。结论 SPI可抑制HG和ALD刺激的大鼠MsC CTGFmRNA表达和蛋白合成,该作用可能是其抗纤维化和防治肾损害的机制之一。     

白花丹提取物对高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化及miR-155/SOSC1轴的影响

摘要：目的:探讨白花丹提取物对高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化及mir-155/SOSC1轴的影响。方法:设大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1对照组（不含D-葡萄糖）、高糖组(25 mmol·L-1D-葡萄糖)、白花丹提取物低、中、高剂量组(25 mmol·L-1D-葡萄糖并分别加入白花丹提取物,使白花丹提取物终浓度为10.0,100.0,1 000.0μg·ml-1),以上各组置于CO2培养箱（37℃、5%CO2、2%O2、93%N2）,各组每孔设6个平行样,培养72 h。各组细胞培养结束后,MTT法测定各组细胞活力,膜联蛋白VFITC/PI染色测定各组细胞凋亡水平,流式细胞仪分析各组细胞周期水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法及免疫印迹（Western-Blot）法测定mir-155、SOSC1基因及SOSC1蛋白水平。结果:高糖组吸光度（A）值、存活率水平、G1期、mir-155、SOSC1 mRNA、SOSC1蛋白表达水平显著高于对照组（P<0.05）,细胞凋亡率显著低于对照组（P<0.05）;白花丹提取物各剂量组A值、存活率水平、G1期、mir-155、SOSC1 mRNA、SOSC1蛋白表达水平显著低于高糖组（P<0.05）,细胞凋亡率显著高于高糖组（P<0.05）;随着白花丹提取物剂量逐渐增加,白花丹提取物各剂量组A值、存活率、G1期、mir-155、SOSC1 mRNA、SOSC1蛋白表达水平逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高（P<0.05）。结论:白花丹提取物能抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化,其机制与白花丹提取物通过抑制mir-155/SOSC1/NLRP3炎症途径的激活有关。     

糖尿病大鼠骨折愈合过程中 VEGF、BMP-2及BMP-7的动态观察

目的：动态观察糖尿病模型大鼠骨折愈合过程中的血管内皮细胞生长因子（ VEGF）、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的变化趋势,探索影响糖尿病骨折愈合的机制。方法选取Wester 雄性大鼠70只,采用随机数字表法分为糖尿病组[（腹腔注射链脲佐菌素（ STZ）造模]和对照组,每组35只。采用线锯锯断2组大鼠的左侧胫骨,采用外固定复位处理,观察2组大鼠术后第1、3、5、7周的血清及骨痂中VEGF、BMP-2、BMP-7的表达变化。结果糖尿病组大鼠术后第1周、术后第3周的VEGF、BMP-2、BMP-7的表达水平均显著低于对照组（ P＜0构．05）,术后第5、第7周2组大鼠骨痂组织中的VEGF、BMP-2、BMP-7的表达水平差异无统计学意义（ P ＞0．05）。糖尿病组与对照组大鼠的血清中VEGF、BMP-2、BMP-7在术后第1～7周差异无统计学意义（ P ＞0．05）,糖尿病大鼠术后第1、第3周BMP-7的表达水平显著低于对照组大鼠,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论糖尿病大鼠血清、骨痂组织中BMP-7、BMP-2及VEGF表达减少可能是其延迟愈合的一个重要原因。     

Suppression of lncRNA Snhg1 inhibits high glucose-induced inflammation and proliferation in mouse mesangial cells

Diabetic nephropathy (DN) is the direct cause of end-stage renal disease, and nephritic inflammation plays a role in its growth and advancement. Aberrant expression of long non-coding RNAs (lncRNAs) correlates with many diseases, including DN. In this study, we investigated whether lncRNA small nucleolar RNA host gene 1 (Snhg1) was mechanistically involved in inflammation and mesangial cell (MC) proliferation in DN. We found that Snhg1 was significantly upregulated in DN renal tissues and high glucose (HG)-treated MCs. Overexpression of Snhg1 promoted inflammatory cytokine expression in MCs and MC proliferation under low-glucose conditions; meanwhile, Snhg1 knockdown suppressed inflammatory cytokine production and MC proliferation under HG conditions. Mechanistically, Snhg1 was found to directly bind miR-27b, thereby preventing the miRNA from binding its target KDM6B mRNA. Furthermore, miR-27b overexpression recapitulated the inhibitory effects of Snhg1 knockdown, whereas restoration of Snhg1 expression attenuated the function of miR-27b in MCs under HG conditions. Taken together, these results indicate that suppression of Snhg1 inhibited HG-induced inflammation and proliferation of MCs by regulating the miR-27b/KDM6B axis.     

Daphnetin inhibits high glucose-induced extracellular matrix accumulation,oxidative stress and inflammation in human glomerular mesangial cells

Diabetic nephropathy (DN) is one of the most common causes of end-stage renal disease (ESRD). Oxidative stress and inflammation have been documented to play important roles in the pathogenesis of DN. Daphnetin, a natural coumarin compound, possesses antioxidant and anti-inflammatory activities. However, the role of daphnetin in DN has not yet been investigated. The aim of the present study was to explore the function of daphnetin in DN and the underlying mechanism in vitro. Our results demonstrated that daphnetin alleviated cell proliferation induced by high glucose (HG) in human mesangial cells (MCs). Daphnetin strikingly reduced reactive oxygen species (ROS) and malonaldehyde (MDA) levels, and induced the superoxide dismutase (SOD) activity in HG-stimulated MCs. Besides, the production of TNF-α, IL-1β, IL-6, fibronectin (FN) and collagen IV (Col IV) was also inhibited by daphnetin in HG-stimulated MCs. In addition, daphnetin enhanced the expression of nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) and inhibited the levels of p-Akt and p-p65 in HG-stimulated MCs. The results indicated that daphnetin inhibited HG-induced oxidative stress, inflammatory response, and ECM accumulation in human MCs. The effect is partially mediated by Nrf2/keap1 and Akt/NF-κB pathways. The findings suggested that daphnetin might be a therapeutic or preventive agent for DN.     

骨形成蛋白7及骨形成蛋白受体IA在脑胶质瘤中的表达

目的 探讨骨形成蛋白7（BMP-7）及骨形成蛋白受体IA（BMPR-IA）在胶质瘤中的表达及其与预后的相关性。方法 应用免疫组织化学方法检测60例脑胶质瘤标本（Ⅰ型8例、Ⅱ型24例、Ⅲ型16例、Ⅳ型12例）和5例正常脑组织标本BMP-7和BMPRIA表达情况,对表达丰度进行半定量差异分析。结果 BMP-7和BMPR-IA在脑胶质瘤中表达丰度均随肿瘤恶性程度增加而增加。肿瘤1年生存率与BMP-7和BMPR-IA表达旱负相关。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型组的1年生存率分别为100．0％、66．6％、43．7％和25．0％。结论 BMP-7和BMPRIA在脑胶质瘤中表达丰度随着恶性程度增加而增加,且与预后呈负相关,提示BMP-7和BMPR-IA与脑胶质瘤的形成、生物学行为相关。     

骨形成蛋白7(BMP-7)的成骨作用

1990年,美国哈福大学和英国剑桥大学分别获得了BMP - 7(bonemorphorgenicprotein 7)的cDNA。作为骨形成蛋白家族的一员,大量研究表明,BMP - 7是一种具有强大骨诱导活性的成骨因子。随着研究的深入,应用前景也越来越广阔,BMP - 7有望在多种骨科疾病的治疗中发挥重要的作用。下面将BMP - 7的成骨作用作一概述     

曲尼司特对环孢素A致慢性肾毒性大鼠骨形成蛋白、转化生长因子β1表达的影响

目的观察曲尼司特对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠模型肾脏病理改变和BMP-7、TGF-β1表达的影响,以探讨曲尼司特防护CsA慢性肾毒性的可能机制。方法给进低盐饮食SD大鼠灌胃20 mg·kg-1·d-1剂量的CsA制作大鼠CsA肾毒性模型,同时以400 mg·kg-1·d-1剂量的曲尼司特喂饲以预防肾毒性,以10 mg·kg-1·d-1剂量的伊贝沙坦作对照,于治疗第4周测定有关指标。结果曲尼司特能明显减少肾小管上皮细胞空泡变性和细胞坏死,减少间质炎细胞浸润及间质纤维化,免疫组化显示TGF-β1表达下调, BMP-7表达增加,两者呈负相关(P<0．05)。结论曲尼司特能减少TGF-β1表达,增加BMP-7表达,减轻CsA所致的慢性肾脏病理变化。     

厄贝沙坦对高糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子及膜型基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂厄贝沙坦对高糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)和膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)表达的影响。方法体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和厄贝沙坦干预,采用RT-PCR及Western blot法分别检测CTGF和MT1-MMP的mRNA及蛋白的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中Ⅳ型胶原的含量。结果与对照组相比,高糖组各时间点系膜细胞CTGF表达明显上调,Ⅳ型胶原的分泌增加,且二者随时间持续增高;而MT1-MMP的表达则随时间呈明显下降趋势。厄贝沙坦能够抑制高糖引起的上述变化。结论高糖可诱导肾小球系膜细胞CTGF表达增加,抑制MT1-MMP的表达。厄贝沙坦抑制肾小球系膜细胞基质分泌的作用可能部分通过抑制CTGF,增加MT1-MMP的表达而实现。     

Knockdown of ALK7 inhibits high glucose-induced oxidative stress and apoptosis in retinal pigment epithelial cells

Diabetic retinopathy (DR) is one of the diabetic complications associated with hyperglycaemia-mediated oxidative stress. Activin receptor-like kinase 7 (ALK7) has been proven to be a potential therapeutic approach for diabetic cardiomyopathy, which is another diabetic complication. However, the role of ALK7 in DR remains unclear. In the current study, ALK7 was found to be up-regulated in clinical samples from DR patients and high glucose (HG)-induced human retinal pigment epithelial cells (ARPE-19). In vitro studies demonstrated that knockdown of ALK7 in ARPE-19 cells through transfection with siRNA-ALK7 (si-ALK7) improved cell viability in HG-induced ARPE-19 cells. Knockdown of ALK7 suppressed HG-induced reactive oxygen species (ROS) production, as well elevating the activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and glutathione (GSH) in ARPE-19 cells. The number of apoptotic cells was significantly decreased after transfection with si-ALK7. ALK7 knockdown also caused a significant decrease in bax expression and an increase in bcl-2 expression in HG-induced ARPE-19 cells. In addition, ALK7 knockdown resulted in remarkable increase in the expressions of nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (Nrf2) and heme oxygenase-1 (HO-1) in ARPE-19 cells in response to HG induction. Taken together, knockdown of ALK7 protected ARPE-19 cells from HG-induced oxidative injury, which might be mediated by the activation of the Nrf2/HO-1 signalling pathway.     

丹参多酚酸盐抑制培养大鼠系膜细胞增殖及内皮素释放

目的:研究丹参多酚酸盐对体外培养的大鼠系膜细胞增殖及内皮素释放的影响。方法：细胞增殖的测定用][^3H]-TdR掺入法;用放射免疫法测定细胞上清液中内皮素浓度的变化;细胞毒性的测定用MTT及LDH法。结果：LPS 10mg/L能诱导系膜细胞增殖及内皮素释放的增多。丹参多酚酸盐3、10及30mg/L与系膜细胞孵育4h,丹参多酚酸盐能浓度依赖性抑制由LPS诱导引起的系膜细胞增殖及内皮素释放的增多。丹参多酚酸盐30mg/L也能显著抑制系膜细胞4、8和12h时的增殖及内皮素的释放。丹参多酚酸盐对系膜细胞没有细胞毒作用。结论：丹参多酚酸盐能抑制大鼠系膜细胞的增殖,其机制可能与抑制内皮素的释放有关。